三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞周期的影响

目的：观察三羟异黄酮(genistein，Gen)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法：用噻唑蓝(MIT)法观察Gen对MDA—MB-435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察Gen处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应关系；吖啶橙／溴乙锭染色法(acridine orange/ethidium bromide staining)在荧光显微镜下观察Gen对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果：随剂量增大和作用时间延长，Gen对MDA—MB—435S细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随Gen剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论：Gen可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

莪术油通过诱导细胞凋亡抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

目的探讨莪术油对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的抑制作用。方法水蒸汽蒸馏法提取莪术油。不同浓度的莪术油处理MDA-MB-231细胞,MTT检测干预后细胞生长抑制率,LDH试剂盒检测LDH释放,Hoechst33342荧光染色测定细胞凋亡,Western Blotting测定抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达。结果莪术油可剂量依赖性的抑制MDA-MB-231细胞的增殖;增加细胞内LDH在细胞培养基的释放。Hoechst 33342染色显示莪术油诱导细胞凋亡,Western Blotting显示莪术油处理降低Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达。结论莪术油通过调节Bcl-2、Bax蛋白的表达诱导细胞株凋亡抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞株的增殖。     

槲皮素对乳腺癌细胞MDA-MB-435S抑制作用及其机制

目的探讨槲皮素抑制乳腺癌增殖的作用及其机制。方法MTT法检测槲皮素对ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435S生长的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR及免疫组化方法检测槲皮素作用后VEGF、p53mRNA及蛋白质的表达。结果(1)槲皮素可呈时间及浓度依赖性地抑制乳腺癌的生长和增殖,其IC50为17.59μM。(2)流式细胞仪分析发现,槲皮素作用48h后,细胞被阻滞于G0/G1期。(3)槲皮素作用后VEGF、p53mRNA及蛋白质的表达下调。结论(1)槲皮素具有抑制ER阴性乳腺癌细胞MDA-MB-435S生长的作用,并呈时间及浓度依赖性。(2)槲皮素抗乳腺癌增殖作用的可能机制槲皮素下调乳腺癌细胞VEGF mRNA和蛋白质的表达使肿瘤细胞的自分泌因子作用减弱;下调MTp53mRNA及蛋白质的表达从而将乳腺癌细胞阻滞于G0/G1期,不能继续增殖。     

GA对乳腺癌MDA-MB-435s细胞端粒酶活性的影响

目的：研究格尔德霉素（geldanamycin,GA）对乳腺癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法：培养人乳腺癌细胞株MDA—MB-435s,应用MTr法检测GA对MDA—MB-435s细胞的生长抑制作用,流式细胞术分析细胞周期,用TRAP—ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果：不同浓度GA对MDA—MB-435s细胞增殖有明显抑制作用,呈时效-量效依赖关系,GA作用后细胞呈现G2／M期阻滞,细胞端粒酶活性下降（P〈O．05）。结论：GA对人乳腺癌MDA—MB-435s细胞增殖具有明显抑制作用,抑制端粒酶活性可能是其发挥抗癌作用的机制之一。     

雷公藤红素对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的抑制作用研究

目的 研究雷公藤红素对MDA-MB-231乳腺癌细胞的抗肿瘤作用及其机制.方法 用MTT比色法检测雷公藤红素对MDA-MB-231生长的影响,并计算其半数抑制浓度(IC50).其机制研究的实验均分为两组:对照组和处理组.对照组细胞未经任何处理,处理组细胞用2.0μmol/L雷公藤红素作用后,Annexin V-FITC...     

siRNA沉默Annexin Ⅱ基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S的影响

目的 探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术沉默AnnexinⅡ基因表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学特性的影响. 方法 体外化学合成Annexin Ⅱ序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),脂质体介导转染人乳腺痛细胞株MDA-MB-435S,采用荧光显微镜观察转染效率.收集siRNA下扰的细胞,RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测Annexin Ⅱ mRNA和蛋白的抑制水平,并采用MTT法、流式细胞术测定细胞增殖能力和细胞周期的变化,Millicell小室测定细胞侵袭、迁移能力的变化.结果 Annexin Ⅱ-siRNA能有效抑制Annexin Ⅱ mRNA和蛋白的表达(P<0.05);经siRNA干扰后的细胞,细胞增殖能力显著减低(P<0.05);G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力明显降低(P<0.05). 结论 采用siRNA干扰Annexin Ⅱ mRNA和蛋白表达后,能有效逆转乳腺癌细胞的某些恶性生物学特点,表明AnnexinⅡ与乳腺癌的发生、发展及转移有一定的关系.     

反义人DNMT1基因对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖和细胞周期的影响

目的 构建表达人DNMT1基因(DNA methyltransferase 1,DNMT1)反义RNA的真核表达质粒,观察其对乳腺癌细胞MDA-MB-435s增殖的影响.方法 应用DNA重组技术,将人DNMT1基因的cDNA片段克隆至pcDNA3.1(-)载体中,构建DNMTl反义RNA真核表达质粒,测序验证,将其转染人人乳腺癌细胞系中,利用荧光定量PCR法检测转染前后细胞DN-MT1基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测转染后DNMT1蛋白表达变化;应用MTT法检测细胞生长状况,绘制细胞生长曲线;流式细胞术分析细胞周期的变化.结果 成功构建出能够表达DNMT1反义RNA的真核表达质粒.转染该质粒后,与未转染组和转染正义质粒组相比,MDA-MB-435s细胞中DNMT1基因mRNA和DNMT1蛋白表达量均显著下降;细胞生长变慢;细胞周期分析可见S期明显减少,而G1/G0期细胞显著增加.结论 反义DNMT1能够特异性下调该基因的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖,为乳腺癌基因治疗提供了新的靶标.     

三氧化二砷对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨三氧化二砷对人雌激素受体阴性乳腺癌细胞系MDA—MB-435s在裸鼠体内生长的影响及其作用机制。方法建立乳腺癌细胞系MDA—MB-435s的裸鼠体内移植瘤模型,将24只荷瘤裸鼠随机分成4组,即生理盐水（Ns）组、顺铂（DDP）组、低剂量三氧化二砷组（1．5mg／kg）、高剂量三氧化二砷组（3．0mg／kg）。比较各组的抑瘤作用及应用免疫组化技术分别检测PCNA、Caspase-3在各组之间表达情况。结果用药后不同剂量三氧化二砷组和顺铂组均能显著抑制人乳腺癌移植瘤在裸鼠体内的生长,移植瘤的大小和重量显著低于生理盐水组（P〈0．05）。免疫组化结果表明：生理盐水组移植瘤组织中PCNA蛋白大量表达,Caspase-3蛋白少量表达。经不同剂量三氧化二砷或顺铂处理后PCNA蛋白的表达下降,而Caspase3蛋白的表达上调,与生理盐水比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷可以通过抑制PCNA的增殖及增加Caspase-3的凋亡作用来抑制肿瘤生长,且呈剂量依赖性。     

生物酶制剂JA消融小鼠乳腺癌的治疗研究

目的:探讨生物酶制剂JA治疗小鼠乳腺癌的可行性和安全性,为临床应用提供实验依据。方法:用小鼠乳腺癌MA782细胞和组织悬液接种小鼠皮下的方法制成动物模型,共60只,随机分成3组(G1-G3),分别行瘤体内注射生理盐水、无水乙醇、制剂JA各0.2 ml,观察用药后肿瘤大小变化。于用药第1,10天每组各处死8只小鼠,采血检查肝肾功能并取肿块病检。结果:肿瘤消融效果G3>G2>G1,G2组出现ALT、AST持续升高,G3组ALT、AST仅表现为一过性升高,其它各组间各指标无显著性差异。结论:制剂JA对实验性小鼠乳腺癌(MA782肿瘤)有独特的消融效果,明显优于无水乙醇,是一种安全有效的生物酶消融制剂,具有潜在的临床应用前景。     

白藜芦醇对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响

目的 研究白藜芦醇对TRAIL诱导乳腺癌,MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞增殖;AnnexinV染色并流式细胞术检测细胞凋亡;分光光度法检测Caspse-8、Caspase-3相对活性;DAPI细胞核染色法观察细胞凋亡.结果 50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇分别与50 ng/mL TRAIL联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率为(62.43±2.07)%和(87.32±1.44)%;而细胞凋亡率分别为(53.59±1.44)%和(73.72±1.96)%,与单独应用相应浓度的白藜芦醇和TRAIL比较,差异均存在显著性(P＜0.01).50ng/mL TRAIL分别与50μmol/L和100μmol/L白藜芦醇联合作用后,Caspase-8、Caspase-3的相对活性为(0.282±0.008)、(0.386±0.013)及(0.437±0.05)、(0.521±0.03),与对照组及单用TRAIL、白藜芦醇比较均明显增强,差异显著(P＜0.01).结论 TRAIL与白藜芦醇联合可协同抑制MDA-MB-231细胞增殖并诱导其凋亡,白藜芦醇增强TRAIL诱导细胞凋亡的作用可能是通过促进Caspase-8和Caspase-3的表达来实现.     

促红细胞生成素对人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的:通过研究促红细胞生成素(EPO)对人乳腺癌细胞株MCF-7在生长和增殖方面是否有促进作用,从一个方面阐明对于肿瘤相关性贫血的患者使用EPO是否会对患者的预后造成不良影响。方法:以MTT法检测经EPO处理后的MCF-7及未经EPO处理的MCF-7的凋亡水平;用流式细胞仪(FCM)检测EPO处理后的MCF-7及未经EPO处理的MCF-7在细胞周期上的差异。结果:经EPO处理后的MCF-7及未经EPO处理的MCF-7在细胞凋亡的水平上没有统计学差异;EPO处理后的MCF-7及未经EPO处理的MCF-7在细胞周期上没有统计学差异。结论:EPO对于乳腺癌细胞株MCF-7在细胞生长和增殖方面没有明显的促进作用。     

乳腺癌细胞MDA-MB-435s中侧群细胞的分选及其与非侧群细胞的生物学特点比较

目的 分离乳腺癌细胞MDA-MB-435s中的侧群细胞(side population cells,SP),并比较侧群细胞和非侧群细胞(non-side population cells,NSP)的基本生物学特点.方法 经Hoechst33342染色后,利用流式细胞技术分选乳腺癌细胞MDA-MB-435s中SP和NSP 2个细胞亚群,比较2群细胞的形态、增殖和周期等特点.结果 分选得到的SP细胞约占5.2％,其增殖速度较NSP细胞快,且细胞形态较粗大.NSP细胞的G1期所占比例为73.63％,高于SP细胞的G1期所占比例为54.16％.结论 SP和NSP细胞的形态有差异,SP细胞的增殖速度快于NSP细胞,NSP细胞的周期阻滞在G1期,提示SP细胞可能在乳腺癌细胞的生长过程中具有重要的作用.     

金雀黄素和大豆黄酮对人乳腺癌细胞系体外增殖作用的影响

应用体外细胞培养和MTT比色法.研究大豆异黄酮类化合物金雀黄素和大豆黄酮对人乳腺癌细胞系体外增殖作用的影响.结果大豆异黄酮类化合物能明显抑制人乳腺癌细胞系MCF-7 和MDA-MB-231的体外增殖,且呈明显的剂量依赖性和时间依赖性.金雀黄素和大豆黄酮对MDA-MB-231细胞的抑制作用不如MCF-7明显,而金雀黄素的抑制作用优于大豆黄酮.说明金雀黄素和大豆黄酮对乳腺癌细胞系体外增殖具有明显的抑制作用,为进一步阐明其防癌抑癌作用机理奠定了实验基础.     

Cox-2抑制剂对骨肉瘤细胞及乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的:观察Cox-2抑制剂(塞来昔布、罗非昔布)对人骨肉瘤细胞株HOS-8603、乳腺癌细胞株MDA的作用。方法:采用MTT比色法测定体外培养的细胞株HOS-8603、MDA-MB-435S对不同浓度的罗非昔布和塞来昔布的敏感性。流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响。结果:选择性环氧化酶-2(Cox-2)抑制剂明显抑制HOS-8603、MDA-MB-435S的生长(P<0.05),抑制效应呈现浓度依赖型和时间依赖型,HOS-8603在Cox-2抑制剂作用下,细胞分裂阻滞在G2/M期,有一定的诱导细胞发生凋亡作用,塞来昔布强于罗非昔布对HOS-8603的作用。结论:选择性环氧化酶-2抑制剂对骨肉瘤细胞、乳腺癌细胞的生长可能起着十分重要的作用,有望成为成骨肉瘤治疗和抑制骨肉瘤转移的新药物。     

川芎嗪对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的:研究川芎嗪对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并探讨川芎嗪治疗肺癌的作用机制。方法:选用肺癌A549细胞体外培养,在不同浓度川芎嗪作用下,应用MTT法检测肺癌细胞的增殖抑制,应用流式细胞仪检测肺癌细胞的凋亡及细胞周期的分布,采用免疫细胞化学方法检测川芎嗪对肺癌A549细胞Bcl-2及Bax表达的影响。结果:川芎嗪对肺癌A549细胞增殖有明显抑制作用,且呈时间剂量依赖关系;川芎嗪能够使A549细胞G0/G1期、G2/M期细胞增多,与对照组比,差异显著(P<0.01);川芎嗪能够下调肺癌A549细胞Bcl-2的表达,对Bax无明显影响,使Bcl-2/Bax下降。结论:川芎嗪对肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,其机制可能与川芎嗪能够改变A549细胞周期分布,下调肺癌A549细胞Bcl-2表达,改变Bcl-2/Bax比例,促进肿瘤细胞凋亡等有关。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

2-甲氧基雌二醇对肝癌huh7细胞增殖与凋亡的作用及机制

目的:观察2-甲氧基雌二醇(2ME2)对肝癌huh7细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:采用不同浓度的2ME2作用于肝癌huh7细胞,以噻唑蓝(MTT)法测定其细胞毒作用;流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;Western blot观察血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2蛋白的表达。结果:2ME2可抑制肝癌细胞huh7的生长,具有浓度和时间依赖性;2ME2能抑制huh7细胞分裂,大部分细胞阻滞在G2/M期,S期细胞减少;2ME2能诱导huh7细胞凋亡,主要是诱导huh7细胞发生早期凋亡;免疫印迹检查结果显示,2ME2能下调VEGF及Bcl-2蛋白的表达。结论:2ME2能抑制肝癌细胞huh7的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与通过下调VEGF及Bcl-2表达有关。     

α干扰素诱导人鼻咽癌细胞凋亡及其机制探讨

目的:观察α干扰素对鼻咽癌细胞株CNE2的体外生长抑制和诱导凋亡作用,为其在抗肿瘤治疗方面的应用提供理论依据.方法:α干扰素治疗组和未治疗组分别采用免疫印记检测磷酸化AKT和caspase-3蛋白水平、XTT检测癌细胞生长和流式细胞术分析癌细胞凋亡.结果:a干扰素与CNE2细胞株共同培养48 h后,磷酸化AKT蛋白水平明显低于CNE2细胞组,而caspase-3蛋白水平明显高于CNE2组;XTT试验显示a干扰素明显抑制CNE2细胞系的的生长,这种抑制作用呈现时间和浓度依赖性;AnnexinV/PI双染流式细胞检测α干扰素与CNE2细胞系共育48 h后细胞的早期凋亡率23.42％,而对照组的早期凋亡率仅为4.5 ％(P＜0.05).结论:α干扰素诱导鼻咽癌细胞凋亡,从而抑制其体外生长增殖,具有抗肿瘤作用.     

白黎芦醇对人激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3 Survivin蛋白表达的影响

目的:探讨白藜芦醇(Res)对人激素非依赖性前列腺癌体外生长细胞PC-3的抑制作用及实现其抑制作用的可能途径。方法:按白藜芦醇浓度分为25,50,100和200 ttmoI/L 4个处理组和对照组(未加白藜芦醇),处理PC-3细胞不同时间后,倒置显微镜观察细胞形态;MTT法检测细胞的增殖抑制情况;免疫组化sP法分析Sur-vivin蛋白的表达。结果:与对照组比较,白藜芦醇处理组可使细胞明显变圆、体积缩小、脱壁细胞增多;MTT法检测显示,白藜芦醇对PC-3细胞的增殖有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性,其中24 h组细胞存活率分别为86.2%,77.15%,60.89%和35.76%,48 h组细胞存活率分别为65.24%,59.76%,46.47%和27.77%,白藜芦醇处理组随着浓度的增加和作用时间延长,对PC-3细胞的增殖抑制作用增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,Survivin蛋白在100 gmol/L白藜芦醇作用下较对照组表达明显减弱(P<0.01)。结论:白藜芦醇对体外生长的PC-3细胞有明显的抑制作用,下调Survivin蛋白表达而诱导前列腺癌细胞凋亡可能是其抑制肿瘤生长的机制之一。     

Bullatacin对ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响

目的测试番荔枝内酯单体Bullatacin,研究其对ER(-)人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响,为抗乳腺癌新药开发提供实验依据。方法 MTT法观察Bullatacin体外对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,并筛选出有效剂量和作用时间;流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。结果 Bullacatin对MDA-MB-231细胞增殖抑制有剂量和时间依赖性;能使G1期的细胞比率减少,S期的细胞比率增加,细胞周期明显阻滞在S期。结论 Bullatacin可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞周期阻滞在S期。