糖蛋白贮积症等的实验诊断及应用

溶酶体贮积症是由于溶酶体中某些酸性水解酶的遗传性缺陷,导致相应的底物降解障碍而贮积在溶酶体中,造成细胞结构和功能障碍,进而影响了整个器官结构和功能.按贮积物质的性质分类,有神经鞘脂贮积症(sphingolipidosis),粘多糖贮积症(mucopolysaccharidosis),糖蛋白贮积症(glycoproteinosis)及糖原贮积症(glycogenosis).我室在建立了三种神经鞘脂贮积症的实验诊断及产前诊断方向后,又建立了正常人白细胞、经培养的皮肤成纤维细胞及羊水细胞中α及β-葡糖苷酶,α-甘露糖苷酶及α-岩藻糖苷酶的活性测定。为诊断及产前诊断糖原贮积症亚型(Pompe氏病),神经鞘脂贮积症中的Gaucher氏病及糖蛋白贮积症中的α-甘露糖苷贮积症及α-岩藻糖苷贮积症打下基础。前两种病是溶酶体贮积症中较常见者,后两者是粘多糖贮积症鉴别诊断常涉及者。有关粘多糖贮积症的实验诊断方法见另文.     

广西883例轻型β地中海贫血基因型别分析及预测性产前诊断

目的:了解广西β地中海贫血(以下简称β地贫)基因型别特点,以通过产前诊断等措施有效杜绝重型地贫患儿出生。方法:应用聚合酶链反应(PCR)体外扩增联合DNA芯片反向点杂交技术检测对妊娠前和妊娠期经优生遗传科地贫初筛拟为轻型β地贫的夫妇双方883例血样标本进行基因分析。对夫妇双方同患β地贫的女方怀孕时取羊水或脐血对胎儿进行地贫基因分析(产前诊断)。结果:①883例轻型β地贫中检出7种突变类型,其中CD 41-42(-CTTT)占46.66%,CD 17(A-T)占24.24%,这两种基因型别占该7种类型的70.9%。②883例β地贫中检出复合α地贫23例,占2.60%。③883例中检出夫妇双方同患β地贫46对(92例),对46例孕妇的羊水或脐血进行产前诊断,共检出17例重型地贫的胎儿,基因型别以CD 41-42纯合子多见,其次是CD 41-42/CD 17双重杂合子和CD 41-42/IV S-2-654双重杂合子。结论:CD 41-42(-CTTT)是广西最常见的β地贫基因突变类型,产前诊断可有效杜绝17例重型地贫患儿出生。     

重组α—半乳糖苷酶A替代治疗法布里病的安全性和有效性

据《N Eng1 J Med》2001年345卷第1期报道 法布里(Fabry'S)病为溶酶体α-半乳糖苷酶A缺乏症,由于N-脂酰鞘氨醇三己糖苷(globotriaosylceramide)及相关的糖鞘脂(glycosphingolipids)进行性积聚而引起,受累病人有肾脏、心脏和脑微血管病变。美国纽约     

HPTLC法测定草药提取物与制剂中的反式白藜芦醇

西南鬼灯檠Rodgersia sambucifolia Hemsl作为传统中药用于治疗风湿、腹泻、抗炎、收敛等。作者从该植物根乙醇提取物中分离得到2个新的木脂素二糖苷:次叶下珠脂素-2a-O-β-呋喃芹菜糖基-(1→6)-O-β-吡喃葡糖苷(1)、8-甲氧基次叶下珠脂素-2a-O-β-呋喃芹菜糖基-(1→6)-O-β-吡     

毛叶合欢的化学成分

目的 研究毛叶合欢Albizia mollis的化学成分。方法 采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱及RP C-18柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对所分得化合物进行结构鉴定。结果 从毛叶合欢中分得了13个化合物,经波谱解析分别鉴定为白桦酸(1)、桉脂素(2)、麦角甾醇过氧化物(3)、金合欢酸内酯(4)、桦木醇(5)、表儿茶素(6)、(-)-表阿夫儿茶精(7)、β-香树酯醇(8)、ergosta-7,22-dien-3β--O-β-glycopyranoside(9)、3-吲哚甲酸(10)、1--O-十八烷酸甘油酯(11)、正二十七烷醇(12)、1-O-β-D-葡萄糖苷-(-2S,3R,4E,8E)-2-N-(2′-羟基-二十一碳酰基)-十八碳鞘氨醇-4,8-二烯(13)。结论 所有化合物均为首次从该植物中分得。     

糙叶败酱中木脂素成分的研究

目的　研究糙叶败酱Patrinia scabra中的木脂素类化学成分。方法　应用柱色谱和HPL C法分离纯化,通过光谱(IR、MS、1 H- NMR、1 3C- NMR、DEPT、HMQC和HMBC)鉴定其化学结构。结果　分离并鉴定了4个木脂素类化合物:松脂醇- 4 ,4′-二- O-β- D -葡萄糖苷( )、罗汉松脂酚- 4 ,4′-二- O-β- D -葡萄糖苷( )、落叶松脂醇- 4′- O-β-D-葡萄糖苷( )、落叶松脂醇- 4 - O- β- D-葡萄糖苷( )。结论　化合物 ～ 均为首次从该属植物中分得,并首次给出化合物 的核磁共振数据。     

大豆茎中两个新鞘脂类化合物

目的：解析两个新化合物的平面结构。方法：应用硅胶柱层析等分离技术分离化合物，根据理化性质及IR，MS，NMR等光谱数据鉴定结构。结果：鉴定两个化合物结构为N-2-(1，3，4-三羟基-十八烷基)-α-羟基-二十五烷酰胺(Ⅰ)，N-2-(1，3，4-三羟基-十八烷基)-α-羟基-二十四烷酰胺(Ⅱ)。结论：化合物Ⅰ，Ⅱ均为新化合物，分别命名为大豆鞘脂A和大豆鞘脂B。     

基因导入途径与脑内表达的关系研究

目的比较不同途径(股静脉、颈内动脉、侧脑室及鞘内)导入转铁蛋白靶向脂质体介导的LacZ基因(transferrintargeted LacZ gene pegylated liposomes,Tf-PLs)在大鼠脑内的表达,寻找出适合临床的安全有效的基因导入方法。方法 120只雄性SD大鼠随机分为静脉导入组、动脉导入组、侧脑室导入组、鞘内注射组和治疗组,其中治疗组分别将Tf-LacZ通过股静脉、颈内动脉、侧脑室立体定向及鞘内的方式注射入大鼠体内。术后24和48h分别取脑(每项检测指标每组随机选取8只大鼠),光学显微镜下观察LacZ基因编码的β-半乳糖苷酶(beta-gal)的表达,Real time-PCR比较不同组别LacZ mRNA的表达,试剂盒检测β-半乳糖苷酶的活性。结果免疫组化提示动脉导入组及静脉导入组可以实现β-半乳糖苷酶在脑内的广泛性表达,并且动脉导入组LacZ mRNA及β-半乳糖苷酶的表达高于静脉组(P<0.05)。侧脑室及鞘内注射组只能实现β-半乳糖苷酶的局限性表达,且LacZ mRNA及β-半乳糖苷酶的表达要低于动脉及静脉导入组(P<0.05)。结论动脉导入将外源基因转入大鼠脑内的效果最好,静脉导入的效果优于侧脑室注射和鞘内注射的方式。在可行性方面,经过静脉导入途径是较为方便、易行、有效。     

β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1,HE染色显示肝的显微结构,透射电镜观察肝超微结构。结果肝纤维化模型组、对照组和β-胡萝卜素干预组α-SMA和TGF-β1表达的平均灰度值比较均有显著性差异(P<0.01)。电镜结果显示,对照组肝星形细胞内充满脂滴,其周围无明显胶原纤维沉积;肝纤维化组肝星形细胞内的脂滴较对照组减少;肝纤维化β-胡萝卜素干预组肝星形细胞内脂滴的量介于对照组与肝纤维化组之间。结论β-胡萝卜素抑制α-SMA和TGF-β1的表达,能降低由CC l4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关。     

异常HbK复合β地中海贫血家系及其风险胎儿的产前诊断

目的 了解一种由β珠蛋白肽链合成异常的HbK复合轻型β地中海贫血的家系及其风险胎儿的产前诊断.方法 用美国Helena公司全自动快速电泳分析系统进行血红蛋白电泳各区带定量分析和反向点杂交-RDB法进行β地贫基因联合检测,对家系及风险胎儿进行产前诊断.结果 先证者为异常HbK复合B珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变双重杂合子,临床表型为中间型β地贫.父亲为β-珠蛋白基因ⅣS-Ⅱ-654突变杂合子,母亲为异常HbK杂合子,再次妊娠行产前诊断的胎儿为异常HbK杂合子,母亲和胎儿地贫基因型正常,建议保留胎儿.出生后8个月随访结果与产前诊断一致.结论 对β珠蛋白肽链合成异常和β地贫基因携带者的家庭进行遗传咨询和产前诊断,可预防中间型β地贫患儿出生.采用电泳技术联合β地贫基因检测技术,可在产前诊断中解决同类问题.     

鞘脂转运蛋白在疾病发生发展中的作用

鞘脂转运蛋白是鞘脂新陈代谢和发挥功能的关键成分，其以非囊泡运输方式介导细胞器或亚室之间的鞘脂转移。近年来，鞘脂转运蛋白的研究取得了显著进展，已发现多种鞘脂转运蛋白可转运神经酰胺、葡糖神经酰胺、1-磷酸—神经酰胺和糖鞘脂，从而调节鞘脂代谢，影响细胞炎症、自噬等多种细胞现象，参与肝细胞癌、结直肠癌、丙型肝炎等疾病的发生发展。因此，探究鞘脂转运蛋白在疾病发生发展中的作用和可能的机制，能为鞘脂及其代谢产物变化所导致的有关疾病的防治提供新策略。     

筒鞘蛇菰的化学成分研究

目的 研究筒鞘蛇菰Balanophora inuolucrata 的化学成分.方法 用硅胶柱色谱、高效液相色谱、NMR、ESl-MS、EI-MS和圆二色光谱等各种波谱和光谱方法对该植物醋酸乙酯萃取部位的化学成分进行分离鉴定.结果 共分离鉴定了10个单体化合物,包括1个异香豆素、2个苯丙烯酸葡萄糖苷和7个黄酮化合物.分别是(2R)-圣草酚-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、(2S)-圣草酚-5-0-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、根皮苷(Ⅱ)、3一羟基根皮苷(Ⅳ)、三叶苷(Ⅴ)、(反式)-3,4,2',4',6'-五羟基查尔酮-2'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅵ)、金鱼草素-4-O-βD-吡喃葡萄糖苷(Ⅵ)、(反式)-1-O-对香豆酰基-β-吡喃葡萄糖苷(Ⅶ)、(反式)-1-O-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅸ)、短叶苏木酚酸甲酯(X).结论 以上化合物均为首次从该植物中分离得到,其中化合物I为新化合物,命名为筒鞘蛇菰苷(baIaninvolin).     

基层医院普及MCV、血红蛋白电泳检测在出生缺陷干预中的意义探讨

目的 通过产前筛查,干预重型地贫缺陷儿出生,提高出生人口素质.方法 对11 150名孕妇及其配偶进行血细胞分析,红细胞平均体积(MCV)异常者(MCV＜80 fl)实施血红蛋白电泳检测,电泳异常者再进行基因诊断,如双方均确诊地贫者,送上级医院产前诊断.结果 11 150名受检者中,MCV异常1 349人(占12.1％);血红蛋白电泳检测异常者1 038人(占9.3％),基因确诊976人,其中α-地贫780人,β-地贫196人,α合并β地贫4人,产前诊断41对夫妇,经上级医院反馈,检出6例重型地贫,已全部实施终止妊娠.结论 在基层医院广泛开展地中海贫血筛查,对高危夫妇进行产前诊断,可杜绝重型地贫儿出生,达到优生优育的目的.     

妊娠对脂肪组织11β-HSD1和脂联素基因表达的影响及其临床意义

目的:探讨妊娠晚期妇女脂肪组织中11β-羟类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)及脂联素mRNA表达水平的变化及其临床意义。方法:取剖宫产妇女33例(正常妊娠22例,妊娠糖尿病11例)以及14例开腹手术的育龄期非妊娠妇女(非妊娠组)的皮下和网膜脂肪组织,应用实时定量PCR方法测定脂肪组织11β-HSD1和脂联素mRNA水平。结果:与非妊娠妇女比较,孕晚期正常妊娠和妊娠糖尿病妇女皮下和网膜组织11β-HSD1基因mRNA表达水平均明显增加(P<0.001),而脂联素基因mRNA表达水平均明显下降(P<0.01)。皮下和网膜配对比较显示,孕晚期正常妊娠和GDM妇女网膜脂肪组织11β-HSD1基因表达水平均明显高于皮下(P<0.05),而脂联素表达水平无显著部位差异(P=0.08)。相关分析显示,妊娠糖尿病妇女皮下脂联素表达与母血胆固醇(r=-0.779,P=0.003)、低密度脂蛋白(r=-0.664,P=0.029)负相关,而网膜11β-HSD1与孕期增加的BMI(r=0.323,P=0.043)及新生儿胰岛素抵抗指数呈正相关(r=0.618,P=0.032)。结论:妊娠晚期脂肪组织11β-HSD1mRNA表达增...     

β地中海贫血的产前诊断和一种新的TATA盒突变

应用聚合酶链式反应体外DNA放大和同位素或非同位素标记的探针在我国南方进行了β地中海贫血的产前诊断。对29例高风险胎儿的产前诊断显示,7例为β地中海贫血的纯合子。对206条染色体的基因分析表明,占总数95％以上的4种突变是:β41-42(-4bp),IVS-2-654(C→T),β17(A→T)和β-28(A→G).在产前诊断过程中,我们应用PCR后直接DNA测序技术发现一种以前未描述过的突变:β-30(T→C).     

肝癌大鼠各组织中的鞘糖脂图谱

作者应用微量法(Ladish法)对正常及肝癌大鼠肝、心、肺、肾、脾等组织的鞘糖脂图谱及脂结合唾液酸含量进行比较分析。肝癌大鼠上述各组织中,脂结合唾液酸含量大幅升高,单唾液神经节苷脂减少(GM_8减少,GM_2与GM_1稍有增多),而多唾液酸神经节苷脂(GD_8,GD_(1a))相对增多;中性鞘糖脂也有明显变化。研究结果表明,大鼠肝细胞癌变伴有肝外其他组织中鞘糖脂代谢的改变。     

甲基-β-环糊精对肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响

目的观察甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,MβCD)破坏小窝(caveolae)对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和TGF-β/Smad信号通路的影响.方法分离培养大鼠AECⅡ,免疫荧光双标检测小窝蛋白-1(caveolin-1)和TGF-β受体Ⅰ(TβR- Ⅰ)表达和分布关系.以MβCD(5 mmol/L)破坏AECⅡ细胞膜Caveolae,设空白对照组,非离子去污剂法提取脂筏检测TβR- Ⅰ与Caveolin-1在细胞膜上的分布;Western blot检测Caveolin-1和磷酸化Smad2(pSmad2)表达;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖能力.结果荧光双标和脂筏提取结果提示TβR- Ⅰ主要分布于Caveolae区域,MβCD破坏Caveolae后,TβR- Ⅰ重新分布于细胞膜上非脂筏区域;MβCD干扰组Caveolin-1蛋白表达(24.53±3.24)%较正常对照组(54.83±5.67)%显著下调(P<0.01),而TGF-β/Smad信号通路下游分子pSmad2蛋白表达(10.93±1.11)%较对照组(8.36±0.64)%上调(P<0.05);MβCD干扰组细胞增殖率(31.00±4.18)%较对照组(49.20±4.44)%显著降低(P<0.01).结论 MβCD破坏Caveolae结构可抑制AECⅡ增殖,其机制可能与TβR- Ⅰ在非脂筏区域的聚集和Caveolin-1下调导致的TGF-β/Smad信号通路增强有关.     

地中海贫血的快速产前基因诊断

本研究采用聚合酶链反应(PCR)技术,完成了20例重症β-地中海贫血(β-地贫)及2例重症α-地中海贫血(α-地贫)高危胎儿的产前基因诊断。20倒重症β-地贫高危胎儿中,双重杂合子及纯合子6例,杂合子10例,正常胎儿4例,其中10例已经正常分娩后或流产后基因分析验证,结果与产前诊断完全一致。讨论了三种取材方法及影响PCR的主要因素。PCR技术具有简便快速、早期取材、诊断率高及结果准确可靠等优点,便于推广使用。     

仙茅的酚苷和木脂素类成分的分离和鉴定

目的:分离鉴定仙茅Curculigo orchioides Gaertn.的酚苷和木脂素类成分.方法:利用硅胶和Sephadex LH-20凝胶柱层析,以及半制备HPLC方法分离化学成分,通过理化性质和光谱方法确定所分离化合物的结构.结果:仙茅乙醇提取物中得到5个酚苷类成分,1个木脂素类成分,1个甾醇类成分.经鉴定分别为2,6-二甲氧基苯甲酸(1)、仙茅苷(2)、仙茅苷乙(3)、仙茅素A(4)、2,4-二氯-5-羟基-3-甲基苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、3,3′,5,5′-四甲氧基-7,9′7′,9-二环氧木脂素-4,4′-二-O-β-D-葡萄糖苷(6)、β-谷甾醇(7).结论:从仙茅乙醇提取物中分离出7个化合物,其中化合物(5)为一新的含氯酚类成分,命名为仙茅素D.     

山栀茶化学成分的研究

目的:对山栀茶的化学成分进行研究.方法:应用正、反相硅胶和Sephadex LH-20等柱层析方法分离纯化山栀茶,根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果:从山栀茶中分离得到7个化合物,分别鉴定为(1)丁香脂素4,4'-双-O-β-D-葡萄糖苷、(2)紫丁香苷、(3)3,4,5-三甲氧基苯-1-O-β-D-呋喃芹糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷、(4)丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(5)异落叶松树脂醇-9'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(6)南烛木树脂酚-9'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(7)芥子醛葡萄糖苷.结论:化合物(2),(4),(5),(7)为首次从该植物中分离得到,为山栀茶质量控制指标性成分的选择提供了依据.