老龄肾阳虚证差异表达基因的筛选与鉴定

目的:筛选并鉴定与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。方法:从前期基因表达谱芯片初步获得的差异表达基因中筛选出25个基因,选取18例肾阳虚证患者和6例正常对照者,采用半定量RT-PCR检测其血液中这25个基因的表达情况,从中鉴定出与老龄肾阳虚证相关的差异表达基因。结果:有8个基因在18例老龄肾阳虚证患者和6例正常人间的表达水平存在明显差异,这8个基因主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫。结论:老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂过程,推测肾阳虚可能与肿瘤的发生存在某种程度的关联。     

肾阳虚证免疫功能相关基因筛选及其表达分析

目的以基因芯片技术从基因表达角度分析肾阳虚证与免疫功能的关联性。方法筛选出符合中医肾阳虚证诊断标准的患者4例,健康对照4例,提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,获得基因表达数据,通过SAM芯片数据分析软件筛选肾阳虚证显著表达基因。结果筛选到70条显著表达基因,其中与免疫相关的有18条。结论肾阳虚证患者存在免疫功能异常,免疫功能基因的异常表达是肾阳虚证发生的分子基础之一。     

老龄肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的 采用基因表达谱芯片技术,分析老龄肾阳虚证的发生与基因表达异常间的联系.方法 筛选肾阳虚证患者3名和正常对照者3名,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus 2.0基因表达谱芯片,通过组间比较,筛选出老龄肾阳虚患者差异表达基因.结果 芯片数据组间比较分析后获得34条差异表达基因,聚类分析得到6条有特征性地差异表达基因,主要涉及细胞周期和凋亡,肿瘤发生以及免疫.结论 老龄肾阳虚证的发生涉及一系列免疫紊乱的复杂的过程,可能与个体的衰老存在密切关联.     

骨关节炎肾阳虚证信号转导差异表达基因分析

目的:以基因芯片技术从差异基因表达角度分析骨关节炎肾阳虚证与信号转导相关差异表达基因。方法:先后筛选出符合西医膝骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者两组,每组8例,与8例正常对照组比较。两组病人均取血、提取mRNA,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程,分别混合与对照组杂交作两张基因芯片,最后对数据进行信息挖掘。结果:两张芯片各获得162和75条差异表达基因,其中与信号转导相关的分别为26条和11条;两张芯片共同差异表达基因6条,与信号相关的有3条,占总数的1/2。提示:信号转导是生命活动的一种最基本和最重要的方式。细胞间信号转导异常可能在肾阳虚证骨关节炎的发生、发展过程中起着重要作用。     

老龄肾阳虚证的差异表达基因谱研究的意义探讨

肾阳虚作为中医脏腑辨证的一个重要的基础证型,一直是中医界研究的重点,也取得了一定的成绩。在前期研究的基础上,运用宏观证候与微观基因表达谱的结合的方法,开展特定老龄人群生理性肾阳虚证的差异基因表达谱的差异特征研究,可以尽可能排除干扰,揭示老龄肾阳虚基因表达变化的规律,探讨亚健康状态(生理性肾阳虚证)与衰老的关系。从而可以使肾阳虚证的基因研究更加细致深入。     

肾阳虚证发生与免疫功能类基因的关联性研究

目的：利用基因表达谱芯片技术探讨肾阳虚证的发生与免疫功能类基因的关联性。方法：筛选肾阳虚证患者2名和正常对照2名,采用美国Affymetrix公司的HG—u133Plus 2．0基因表达谱芯片,筛选肾阳虚患者差异表达基因。结果：芯片数据两两比较分析后获得20条共同基因,基因功能注释后3个GO（基因本体）术语具有显著性,最富显著性的为GO：0002504（经由MHC-Ⅱ类分子的肽或多糖抗原的加工及提呈）。2条基因HLA—DQA1和HLA—DRB4被注释到其中的2个GO类。结论：免疫系统反应特别是MHC-Ⅱ类分子介导的抗原加工及提呈过程的异常可能是肾阳虚证发生的主要免疫机制。     

老龄冠心病心肾阳虚证的差异表达基因谱分析

目的:采用双通道基因表达谱芯片技术,分析老龄冠心病心肾阳虚证基因表达水平的异常。方法:采用病证结合的诊断标准,筛选老龄冠心病心肾阳虚证患者6名和同龄健康对照者6名,采血,分离白细胞,提取总RNA,做基因芯片检测。结果:经Microsoft excel和Microsoft office Access软件筛选,老龄冠心病心肾阳虚证与健康对照者比较,获得44条差异表达基因,主要涉及脂代谢、免疫、心血管病变的基因。结论:老龄冠心病心肾阳虚证的发生涉及一系列免疫和脂代谢紊乱的复杂的过程,与动脉硬化存在密切关联。     

青少年肾阳虚体质差异表达基因的筛选研究探析

目的:利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因,从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的形成机理.方法:利用体外转录方法,将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针,运用杂交互补原理筛选差异表达基因.结果:共筛选出127条符合标准的差异表达基因,其中63条呈上调表达,64条呈下调表达.结论:与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等.其中,CCNH基因与PSMB7基因的表达差异最大,提示这两条基因可能与青少年肾阳虚体质密切相关.     

用基因芯片技术研究青少年肾阳虚体质差异表达基因

利用基因芯片技术筛选、分析青少年肾阳虚体质者外周血白细胞的差异表达基因，从基因水平初步探究青少年肾阳虚体质的机理。利用体外转录方法，将青少年肾阳虚体质组与同年龄段的正常体质组外周血白细胞mRNA合成为标记有不同荧光的cDNA探针，运用杂交互补原理筛选差异表达基因。结果：共筛选出127条符合标准的差异表达基因，其中63条呈上调表达，64条呈下调表达。提示：与青少年肾阳虚体质相关的基因表达涉及到免疫相：关、发育相关、细胞生长、细胞受体、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成等。     

骨关节炎肾阳虚证个案的温针疗效及基因表达谱研究

目的　观察温针治疗骨关节炎肾阳虚证患者的临床疗效 ,并以基因芯片研究温针疗效的基因表达谱。方法　筛选出符合西医骨关节炎和中医肾阳虚证诊断标准的患者 1例 ,温针治疗 2周 ,治疗前后取血、提取mRNA ,经标记、杂交、清洗、芯片扫描、图像的采集与数据分析等过程 ,获得差异基因表达谱。结果　温针对此例患者的治疗作用达到显效 ,对基因表达的影响涉及免疫、基础代谢、肌肉运动、生长发育和信息传导等多个方面。结论　温针治疗肾阳虚型骨关节炎疗效确切 ;应用基因芯片技术能够同时半定量地研究数千条基因的表达状态 ,可以从微观基因水平研究针刺的整体机制 ,并从分子水平判定其疗效 ,为探讨针灸的作用机制开辟新途径。     

从下丘脑-垂体-甲状腺轴研究肾阳虚证的现状及思考

肾阳虚证下丘脑-垂体-靶腺(肾上腺、甲状腺、性腺及胸腺)轴的功能紊乱.文章从动物实验和临床研究两方面综述了肾阳虚证在下丘脑-垂体-甲状腺轴方面的研究进展,并针对下步研究肾阳虚证提出一些看法.     

以药测证对肾虚和肾阳虚大鼠基因表达谱的比较研究

目的在分子水平揭示肾虚和肾阳虚内涵的异同。方法肾虚证采用自然衰老大鼠模型,肾阳虚证采用皮质酮大鼠模型,均用淫羊藿总黄酮（epimedium flavonids,EF）以药测证,分别取下丘脑、垂体、肾上腺、淋巴细胞（HPAT）组织,采用Affymetrix公司的大鼠全基因组芯片,各两次重复基因表达谱研究。结果老年大鼠和皮质酮大鼠与青年大鼠比较,在HPAT轴上首先是众多的神经递质显著下调,接下来是生长激素类和性激素类都显著下调,其表达下调的模式呈高度一致,EF能逆转上述基因的表达;但EF在皮质酮大鼠显著上调热休克蛋白（HSP）和细胞色素P450以及促甲状腺激素（TSH）大幅度上调。结论两组大鼠均具有肾虚的内涵,但肾阳的主要物质基础是甲状腺激素促进能量代谢的氧化磷酸化过程。     

慢性阻塞性肺疾病肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞相关基因表达对比研究

目的利用基因芯片研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺气虚证和肺阴虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法采集肺气虚证、肺阴虚证患者和健康人的外周血作为实验血样和对照血样。用Ficoll技术分离外周血淋巴细胞,用分选式流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞,并采用一步法提取总RNA,逆转录合成双链cDNA后,体外转录合成生物素标记的cRNA,片断化后,采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交,扫描后筛选出差异表达基因。结果肺气虚证患者/健康人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条,其中上调41条,下调4条;肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因32条,其中上调19条,下调13条;肺气虚证组/健康人组和肺阴虚证组/健康人组均高表达的差异基因5条。结论基因芯片技术能有效地研究基因的表达谱,筛查出COPD肺气虚证、肺阴虚证患者T淋巴细胞相关差异基因。     

基于Bagging结合LASSO回归的规则集成方法对骨质疏松症患者肾阳虚证的辨识研究

目的：研究骨质疏松症（OP）患者的肾阳虚证辨识,形成中医临床辨证规则。方法：纳入982例OP患者的基本信息、病因病机、临床症状等特征信息,通过统计检验筛选数据中与肾阳虚证相关的变量。以决策树为基础模型,应用引导聚集算法（Bagging算法）建立OP肾阳虚证分类模型,生成大量规则并去除冗余;结合最小绝对值收敛和选择算子（LASSO）回归筛选关键规则并集成规则建立辨识模型,实现对OP患者肾阳虚证的辨识。结果：筛选出了18条关键辨识规则,其中11条规则的回归系数>0,对辨识为肾阳虚证具有正向影响,系数最高的规则为畏寒（“有”）&手足心热（“无”）;7条规则的回归系数<0,对辨识为肾阳虚证具有负向影响,系数最低的规则为舌红（“有”）&大便溏（“无”）&禀赋不足（“无”）。根据各关键规则的回归系数计算得到重要性>0.2的变量依次为畏寒、舌红、手足心热、肢冷、小便清、大便溏、禀赋不足、久病。辨识模型的偏依赖性分析结果显示,畏寒取值为“有”相较取值为“无”的OP患者,被辨识为肾阳虚证的概率高0.266 8,该变量对辨识为肾阳虚证具有最高影响。舌红取值为“有”...     

运用蛋白质组学方法研究肾阳虚异病同证的思路与方法

探讨运用蛋白质组学技术研究肾阳虚异病同证的思路与方法。分析蛋白质组学与证候的内在联系,采用双向电泳(2-DE) 质谱(MS) 数据库的蛋白质组解决方案及药理学实验方法,探求肾阳虚证的蛋白质学本质。     

2型糖尿病肾阴虚证患者差异lncRNA的筛选及分析

目的找出与2型糖尿病肾阴虚证发生、发展相关的lncRNA,并探讨其调控的作用机制。方法采用lncRNA/mRNA芯片对6例2型糖尿病肾阴虚证患者和4例健康成人外周血进行基因表达谱检测,两组数据对比得到差异lncRNA,再对差异lncRNA进行靶基因的预测,并将靶基因与差异mRNA联合分析,从中找出可能与2型糖尿病肾阴虚证发病相关的lncRNA。结果筛选出差异lncRNA 275条,其中上调lncRNA数为217条,下调lncRNA数为58条。采用顺式调控预测,相关的差异lncRNA有161条;采用反式调控预测,相关的差异lncRNA有107条。在与差异mRNA数据中对比发现,靶基因表达水平有改变的lncRNA 7条。结论 lncRNA AF116618、HMlincRNA880与2型糖尿病肾阴虚证的发生、发展可能有着密切的关系,有作为2型糖尿病肾阴虚证新的诊断标志物和药物靶点的可能。     

以药测证绘制肾虚证两大基因网络调控路线图谱

目的 研究肾虚证基因网络调控的路线和规律.方法 选择青年组（4月龄）、老年组（24月龄）、淫羊藿总黄酮（Epimedium Flavonoids,EF）治疗组SD大鼠,取全面反映肾虚的7个组织下丘脑、垂体、肾上腺、淋巴细胞、骨骼、肝脏、肾脏,采用Affymetrix公司的大鼠全基因组芯片再次重复肾虚证基因表达谱差异研究.结果 老年大鼠下丘脑、垂体、肾上腺（HPA轴）显示神经递质γ氨基丁酸（GABA）,促性腺激素释放激素（GnRH）,促甲状腺激素释放激素（TRH）与促甲状腺激素（TSH）,生长激素释放激素受体（GHRH）、胰岛素样生长因子及结合蛋白（IGF、IGFBP）;淋巴细胞显示与细胞生长相关的生长因子相关蛋白（GFRP）,与免疫调节相关的IFNγ、IL-4、IL-6等;骨骼显示甲状旁腺（PTH）、降钙素（calcitonin）与骨基质相关的前胶原、胶原、结缔组织生长因子等;肝脏显示氧化磷酸化相关的细胞色素Cytochrome P450、NADH脱氢酶,与蛋白质代谢相关的谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase）,与糖代谢相关的葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Phosphatase）均为低表达.EF作用后,可见老年大鼠7个标本低表达的基因几乎全部上调,此外还有大量与衰老机理相关的基因明显上调.包括HPA轴的神经递质如GABA,激素如GnRH,细胞周期相关基因如CyclinB,免疫调节相关基因如NF-κB105;淋巴细胞与生长调节相关的基因如GFRP,免疫调节相关的基因如IFNγ;骨骼的甲状旁腺、降钙素、IGF、前胶原、胶原、GnRH、Progesterone等;肝脏的大量代谢相关的基因如Cytochrome P450、NADH脱氢酶;肾脏的代谢相关基因及钠、氯通道等基因.结论 通过以药测证,发现肾虚证大鼠模型存在神经-内分泌-免疫以及神经-内分泌-骨代谢两大基因调控路线的紊乱,补肾能纠正该网络功能低下.     

慢性心力衰竭气虚证、气阴两虚证、气阳虚证的临床特点分析

目的研究气虚类慢性心力衰竭不同证型的临床特点。方法纳入118例气虚类（含气阴两虚及气阳虚）慢性心力衰竭（CHF）患者,采集其相关临床症状、体征、检验检查,比较分析气虚证、气阴两虚证、气阳虚证的不同临床特点。结果扩张性心肌病患者辨证多为气阳虚;气虚证、气阴两虚证、气阳虚证心力衰竭严重程度不同,气阳虚证患者心力衰竭程度最严重。结论心力衰竭气虚证、气阴两虚证、气阳虚证在原发疾病和心力衰竭病情程度上有不同特点：扩张性心肌病患者辨证多为气阳虚,气阳虚证患者心力衰竭程度最严重。     

蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺激素和促甲状腺激素的影响

采用醋酸氢化可的松造成肾阳虚模型大鼠，以蛇床子素（ｏｓｔｈｏｌ，ＯＳＴ）和蛇床子总香豆素（ｔｏｔａｌ－ｃｏｕｍａｒｉｎｓ，ＴＣＲ）给药，测定大鼠血清促甲状腺激素（ＴＳＨ）和三种甲状腺激素Ｔ３、反Ｔ３（ｒＴ３）及Ｔ４的浓度。结果，肾阳虚模型大鼠与正常大鼠比较，ＴＳＨ、Ｔ３、ｒＴ３和Ｔ４都显著降低（Ｐ均＜０．０１）；用药大鼠与肾阳虚模型大鼠比较，上述４项指标都有显著性提高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。提示ＯＳＴ和ＴＣＲ可以提高肾阳虚模型大鼠的腺垂体－甲状腺轴功能。