紫草抗胚胎植入作用与muc1蛋白在子宫内膜表达的关系

目的 探讨中药紫草抗胚胎植入作用与粘蛋白1（muc1）在小鼠子宫内膜表达的关系。方法 将受精后昆明小白鼠随机分为实验组和对照组,实验组灌服不同浓度剂量的紫草浸液,对照组包括灌服生理盐水组和空白对照组。在小鼠交配后第4天晚取出Y型子宫,一侧子宫进行苏木素-伊红染色（HE）、免疫组化染色观察子宫内膜形态和muc1蛋白表达情况;另一侧行免疫印迹法（Western blot）对muc1蛋白的表达量测定分析;在合笼交配后的第8天观察小鼠胚胎植入成功率。结果 实验组与对照组比较,子宫内膜上皮细胞排列紊乱,宫腔变大;随着药物剂量的增加,子宫内膜细胞muc1表达量逐渐增多,各实验组与对照组差异明显（P＜0.05）;各实验组的胚胎植入率与对照组的胚胎植入率差异明显（P＜0.05）。结论 紫草能阻止子宫内膜muc1蛋白表达的消失从而阻止胚胎着床,具有抗早孕的效果。     

RNAi真核表达载体上报告基因的构建及其在人结肠癌HCT-8细胞中的表达

目的:构建携带绿色荧光蛋白报告基因的pSilencer3.1-H1真核表达载体,并转染真核细胞稳定表达,为进一步应用于RNAi相关研究奠定了基础。方法:应用PCR方法从pEGFP-C1标准质粒中获得GFP基因片段,在克隆载体中鉴定、测序;用DNA重组技术将片段定向插入RNAi常用载体pSilencer3.1-H1质粒中,构建pSilencer3.1-H1/GFP重组表达载体,经PCR及酶切鉴定后,通过脂质体介导转染HCT-8真核细胞;荧光显微镜观察GFP在细胞内的表达。结果:真核表达载体pSilenc-er3.1-H1中正确插入了GFP基因片段,并在人结肠癌HCT-8真核细胞中稳定的表达。结论:成功构建了pSilencer3.1-H1/GFP真核表达载体。     

人骨唾液蛋白膜靶向表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达

目的构建人骨唾液蛋白（BSP）膜靶向表达载体,并转染人乳腺癌细胞,筛选获得稳定转染细胞,为进一步体内外研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定基础。方法通过PCR的方法从pB-hBSP载体中亚克隆人骨唾液蛋白hbsp基因,定向克隆至细胞膜靶向定位真核表达载体pDisplay^TM中,构建中间重组载体pDisplay-hBSP,再次通过PCR的方法从构建的pDisplay-hBSP载体中亚克隆出膜靶向信号肽、hbsp以及细胞膜定位蛋白基因,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组复合载体pID-kBSP-EGFP,利用脂质体转染特异性骨转移的乳腺癌细胞。结果重组载体pDisplay-hBSP和pID-hBSP-EGFP插入目的片段的测序结果与Genbank中发表的BSP序列基本一致。结论成功构建了人骨唾液蛋白膜靶向表达载体,并且经转染后成功在特异性骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO中表达。为下一步进行体内外试验研究BSP在乳腺癌骨转移中的作用奠定基础。     

环氧化酶-2在子宫腺肌病组织中的表达及意义

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)在子宫腺肌病患者的异位内膜和子宫内膜中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化法检测COX-2在子宫腺肌病的子宫内膜、异位内膜和正常内膜中的表达,并对其差异进行分析。结果COX-2在子宫腺肌病异位内膜中的表达为(4.62±0.96)分(IHS评分,下同),子宫内膜中的表达为(4.59±0.77)分,与正常子宫内膜中的(3.55±1.28)分比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);异位内膜与子宫内膜间的差异无统计学意义(P>0.05)。异位内膜、子宫内膜组织及增殖期和分泌期组织间COX-2表达的差异亦无统计学意义(均P>0.05)。结论COX-2高表达可能与子宫腺肌病的发生、发展有关,并为子宫腺肌病的治疗提供新的靶点。     

MMP-2与CD105在肾透明细胞癌中的表达及意义

目的 探讨MMP-2与CD105在肾透明细胞癌(renal dear cell carcinoma,RCCC)中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组织化学(SP法)的方法检测45例肾透明细胞癌组织及10例正常肾组织中MMP-2及CD105的表达,分析其与肿瘤临床分期、组织学分级的关系.结果 MMP-2在45例RCCC中38例阳性表达,10例正常肾组织中2例阳性表达,癌组织中MMP-2的阳性表达率(75.60%)明显高于正常肾组织(20.0%)(P＜0.05);MMP-2在不同临床分期Ⅰ期、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期中的阳性表达率分别为73.60%、87.50%及100.00%,分期越高阳性表达率越高(P＜0.05);MMP-2在不同组织学分级G1级、G2级及G3级中的阳性表达率分别为76.10%、87.50%及100.00%,分级越高阳性表达率越高(P＜0.05).CD105标记的MVD在RCCC中分布不均匀,在正常肾组织中分布均匀,癌组织中MVD值(48.62±16.35)明显高于正常肾组织(25.17±8.52)(P＜0.01);不同临床分期Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期中MVD值分别为(35.17±9.32)、(51.34±12.27)及(64.69±13.41),分期越高其MVD值越高(P＜0.05);不同组织学分级G1级、G2级及G3级中MVD值分别为(39.08±12.35)、(50.45±14.18)及(62.65±15.42),分级越高其MVD值越高(P＜0.05).MMP-2阳性表达组MVD值(51.27±13.32)明显高于MMP-2阴性表达组(34.48±9.51)(P＜0.05),Spearman等级相关性分析显示MMP-2、CD105在R.CCC中的表达显著相关(rs=0.365,P＜0.05).结论 MMP-2与CD105在R.CCC中的表达明显高于正常肾组织,且与肿瘤临床分期及组织学分级相关,二者可能作为判断RCCC预后新的辅助指标.MMP-2与CD105在RCCC发生、发展过程中可能具有相互作用,二者的联合检测可能更有助于判断RCCC的预后.     

正常T细胞表达和分泌增强调节因子在体外培养人的子宫内膜上皮细胞中的表达

目的：研究Th1型和Th2型细胞因子在体外培养的人子宫内膜上皮细胞中对正常T细胞表达和分泌增强调节因子（RANTES）产生的调节影响。方法：用Th1型细胞因子[肿瘤坏死因子（TNF）-α和干扰素（IFN）-γ]以及Th2型细胞因子[白细胞介素（IL）-4和IL-13]刺激体外培养的人子宫内膜上皮细胞24h后，用酶联免疫测定法检测上清液中RANTES的浓度。结果：IFN-γ诱导的人子宫内膜上皮细胞产生RANTES，而TNF-α则无此影响。IL-4和IL-13也都同样诱导RANTES的产生。结论：Th1型细胞因子IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4和IL-13都诱导RANTES的产生，提示不论是细胞免疫还是体液免疫反应RANTES都参与，可进一步推测在以细胞免疫反应为主的妇女月经、盆腔感染、受精卵着床，以及以体液免疫反应为主的妊娠、妊娠维持过程中，RANTES是必不可少的一种化学因子。     

肿瘤坏死因子a、肿瘤坏死因子受体1在子宫内膜异位症的表达及意义

目的检测肿瘤坏死因子a（TNFa）和肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在子宫内膜异位症（简称内异症）的表达，探讨内异症的发病机制。方法采用免疫组化SABC法检测33例内异位症患者（内异症组）在位及异位子宫内膜TNFa和TNFR1的表达，并与20例对照组在位内膜进行比较。结果内异症组异位内膜TNFa及TNFR1的表达水平显著低于其在位内膜和对照组内膜（P〈0．05）；内异症组在位内膜TNFR1的表达显著低于TNFa的表达（P〈0．05）；TNFa、TNFR1在内异症I～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期间差异均无显著性（P〉0．05），与内异症R-AFS临床分期亦无直线相关关系（P〉0．05）；TNFa和TNFR1在对照组在位内膜的表达均分泌期强于增生期（P〈0．05）；内异症组在位内膜TNFa的表达分泌期强于增生期（P〈0．05），而TNFR1在两期间差异无显著性（P〉0．05），但TNFK1在内异症组分泌期显著低于对照组同期水平。结论TNFa、TN—FR1参与正常子宫内膜的周期性调节。TNFR1在分泌期及异位内膜低表达可能在内异症的发生中起重要作用。TNFa、TNFR1与内异症严重程度无关。     

细胞角蛋白、高分子量细胞角蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达及临床意义

目的检测细胞角蛋白（CK19）和高分子量细胞角蛋白（34βE12）在甲状腺乳头状癌（PTC）组织中的表达,筛选甲状腺乳头状癌的辅助诊断指标及预测淋巴结转移的可能性。方法采用免疫组化S-P法、DAB显色检测结节性甲状腺肿伴乳头状增生15例,乳头状癌32例（无淋巴结转移22例,有淋巴结转移10例）中CK19、34βE12的表达。结果CK19表达以甲状腺乳头状癌有转移最强（100%）,无转移较低（90.9%）,甲状腺乳头状增生更低（20%）,三者差异有显著性（χ^2=29.371,P〈0.0005）。34βE12表达以甲状腺乳头状癌有转移最强（100%）,无转移较低（81.8%）,甲状腺乳头状增生更低（26.7%）,三者差异有显著性（χ^2=17.192,P〈0.0005）。两种蛋白表达强度相互之间相关性没有统计学意义。结论CK19具有上皮组织表达特异性,在鉴别甲状腺乳头状癌与结节性甲状腺肿方面,表达水平具有重要的诊断价值。甲状腺乳头状癌34βE12表达阳性率约90%,且阳性范围与强度均显著强于结节性甲状腺肿,有助于区别甲状腺乳头状癌与结节性甲状腺肿。两项指标在甲状腺乳头状癌组织中的表达,与甲状癌乳头状癌的发生发展和转移有关,对于甲状腺乳头状癌的临床诊断和治疗决策具有指导作用。     

吗啡对体外培养人子宫平滑肌细胞ER mRNA表达的影响

目的 研究吗啡对体外培养的人正常子宫平滑肌细胞雌激素受体信使核糖核酸(estrogen receptor mRNA,ERmRNA)表达的影响. 方法 体外培养人正常子宫平滑肌细胞,免疫细胞化学的方法进行鉴定,然后将培养细胞随机分为5组:空白对照组,1×10-7mol/L吗啡组,1×10-6mol/L吗啡组,1×10-5mol/L吗啡组,1×10-4mol/L吗啡组.通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定各实验组子宫平滑肌细胞ER mRNA的表达水平. 结果 不同浓度的吗啡组与对照组平滑肌细胞ER mRNA表达相比差异有统计学意义(P<0.05);在吗啡组平滑肌细胞ER mRNA的表达呈剂量依赖性降低,细胞mRNA表达量与吗啡浓度之间存在负相关. 结论 外源性阿片类药物吗啡可抑制平滑肌细胞雌激素受体ER mRNA的表达.     

凋亡相关蛋白Survivin及hTERT mRNA在肾细胞癌中的表达及意义

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin和hTERT mRNA在肾细胞癌组织中的表达及意义。方法采用免疫组化和原位杂交法检测46例肾细胞癌组织和15例对照组织(癌旁正常肾组织)中Survivin蛋白和hTERT mRNA的表达。结果46例肾细胞癌组织中Survivin的阳性表达39例,阳性表达率为84.78%,而15例正常组织中Survivin蛋白仅1例阳性表达,阳性率为6.67%,肾细胞癌组织Survivin蛋白的阳性表达率与正常比较差异有显著性(P<0.01);46例肾细胞癌组织中hTERT mRNA阳性表达41例,阳性率为89.13%,15例正常组织中hTERT mRNA阳性表达仅有1例,阳性率为6.67%,两组hTERT mRNA阳性表达率差异有显著性(P<0.01)。结论肾细胞癌组织中存在Survivin蛋白和hTERT mRNA过表达,这可能与肾细胞癌的发生发展有关。     

胰岛素样生长因子在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1,2 (IGF 1,IGF 2 )在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用原位杂交法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1,IGF 2mRNA的表达情况。结果 :IGF 1及IGF 2mRNA于不同阶段的植入前胚胎细胞中表达不同 ,各表达量有差异。结论 :不同阶段的植入前胚胎细胞分泌IGF 1、IGF 2 ,参与早期人类胚胎的生长、发育。     

印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的 检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因—生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb10与胚胎发育以及辅助生殖的关系。方法 应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达。结果 4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达。结论 印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关。     

胰岛素样生长因子-1受体在植入前胚胎细胞中的表达

目的 :研究胰岛素样生长因子 1受体 (IGF 1R)在植入前胚胎的表达及其生物学意义。方法 :采用免疫组化ABC法 ,检测人植入前胚胎细胞IGF 1R的表达情况。结果 :不同阶段的植入前胚胎细胞均有IGF 1R表达 ,各表达程度无明显差异。结论 :IGF 1R在植入前胚胎中均有表达 ,提示IGF 1R可结合IGF 2、IGF 1,参与人植入前胚胎的生长、发育和着床。     

人成熟卵母细胞冻融的研究

目的 探讨冷冻保护剂中不同蔗糖浓度对人成熟卵母细胞冻融的影响.方法 根据冷冻液中蔗糖浓度的不同,将收集到的人成熟卵母细胞分为0.1 mol/L组、0.2 mol/L组、0.3 mol/L组,分别采用程序化慢冻-快融法,比较三组人成熟卵母细胞复苏后的存活情况及其行单精子卵泡浆内注射(ICSI)后受精率、卵裂率和优质胚胎形成率.结果 0.1 mol/L组、0.2 mol/L组、0.3 mol/L组解冻后的存活率分别为23.1%,40.8%,59.4%,三组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而受精率、卵裂率、优质胚胎形成率三组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 提高蔗糖浓度能明显提高人成熟卵母细胞解冻的存活率.     

在小鼠着床前胚胎中c-myc的表达

目的: 观察小鼠着床前胚胎细胞中c-myc基因的表达, 了解其对早期胚胎发育可能影响的作用. 方法: 采用原位杂交及免疫组织化学ABC法,分别检测小鼠着床前胚胎细胞中c-myc mRNA及c-myc蛋白. 结果: 在小鼠2细胞、4细胞、6细胞、8细胞和囊胚期胚细胞中均检测到原癌基因c-myc转录产物的表达,c-myc mRNA分布于胚细胞的胞质和胞核. 免疫组织化学方法也发现,2细胞至囊胚期胚胎细胞的 c-myc蛋白均呈免疫反应阳性, 阳性物质分布于胞质和胞核中, 胚胎透明带则呈阴性反应. 结论: 小鼠早期胚胎有c-myc基因表达,c-myc基因对小鼠着床前胚胎发育可能起重要调节作用.     

印迹基因生长因子-受体结合蛋白10在人类卵子及种植前胚胎的表达

目的检测Silver-Russell syndrome(SRS)候选印迹基因-生长因子受体结合蛋白10(Grb10)在人类卵子和种植前胚胎的正常表达,探讨Grb 10与胚胎发育以及辅助生殖的关系.方法应用巢式RT-PCR技术检测印迹基因Grb10在人类卵子及种植前胚胎的表达.结果4细胞、8细胞胚胎、囊胚及卵子中均可测到Grb10基因的表达,2细胞胚胎中未见表达.结论印迹基因Grb10表达于种植前胚胎,与胚胎发育密切相关.     

人类卵母细胞及体外受精发育阻滞胚胎中的组蛋白乙酰化水平的检测

目的 探讨人类不同成熟阶段的卵母细胞及体外受精发育阻滞胚胎中的组蛋白乙酰化水平的变化规律.方法 收集接受卵胞浆内单精子注射技术(ICsI)治疗的患者废弃的卵母细胞生发泡(GV)期、第一次减数分裂中期(MⅠ期)和经体外成熟培养发育至第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞,采用间接免疫荧光染色方法对人类不同成熟阶段的卵母细胞及体外受精阻滞胚胎中的组蛋白的(H4K12和H3K9)乙酰化水平进行检测.结果 人类GV期卵母细胞中组蛋白H4K12和H3K9均强表达.74.1%的MⅠ期卵母细胞中H4K12和H3K9的乙酰化水平显著降低.79.2%的MⅡ期卵母细胞中组蛋白H4K12乙酰化呈微弱表达或不表达,而来源于高龄妇女的MⅡ期卵母细胞仍维持较高的H4K12乙酰化水平.在MⅡ期卵母细胞中几乎检测不到H3K9的乙酰化表达.83.3%的发育阻滞胚胎中组蛋白H4K12和H3K9的乙酰化水平较高.结论 人类卵母细胞的成熟经历了一个组蛋白乙酰化到去乙酰化的动态修饰过程,体外受精后又重新建立新的组蛋白乙酰化修饰.     

人卵母细胞与体细胞的电融合效率

目的探索适合于人体细胞核移植的电融合参数,并比较不同类型和数目体细胞的电融合效率。方法首先对体外授精(IVF)后的低评分胚胎行电融合,观察不同电融合参数下胚胎的融合及继续发育情况,确定最适电融合参数;其次将1～2个颗粒细胞或成纤维细胞置入IVF后未受精卵子的卵周隙(PVS)中,在最适电融合参数下行电融合。结果在两段交流脉冲间给予200 V、25μs的直流脉冲为本研究的最适电融合参数;颗粒细胞与卵母细胞的电融合效率低于成纤维细胞(P<0.05);在PVS中加入2个颗粒细胞,其单个颗粒细胞的电融合效率高于加入1个颗粒细胞(P<0.05),而成纤维细胞则无差异。结论低融合效率的体细胞与卵母细胞电融合时可通过增加PVS中体细胞的数目来提高融合效率。     

Relationship between ATP Content and the Developmental Potential of Human Oocytes

Metabolic activity and energy production are es-sential to oocyte cytoplasmic maturation,meiotic re-sumption,normal fertilization,embryo cleavage,hatching and implantation[1] .The ATP in ooplasmwas utilized for nucleic acid and protein synthesis.The ATPcontentofoocyteshasbeen suggested as anindicator for the developmental potentialof mouse[2 ] ,cow[3] and cat[4 ] oocytes.Additionally,the result ofVan Blerkom' sresearch[5] also showed a positive cor-relation between human oocytes competence …     

sHLA-G检测及胚胎植前筛选

目的探讨胚胎植前筛选以提高胚胎移植成功率。方法单胚培养体外受精胚胎,ELISA方法检测移植成功组与失败组胚胎培养上清液sHLA-G水平,并比较培养上清中sHLA-G与胚胎HLA-G mRNA表达的相关性。结果胚胎移植成功组sHLA-G水平显著高于未成功受孕组;sHLA-G〉10 ng/ml移植组受孕成功率60.9%,sHLA-G〈5 ng/ml成功率11.5%。结论sHLA-G是植前筛选良好指标,能提高胚胎移植成功率。