树舌多糖GF对HepA瘤细胞p16基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞p16基因表达的影响，本实验用链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶免疫组化法来测定细胞中p16蛋白含量，通过多媒体图像分析系统分析实验结果，结果表明，树舌多糖GF组，猪苓多糖组与荷瘤对照组比较，p16表达增加均非常显著（P＜0．01），树舌多糖组与猪苓多糖组比较，差异非常显著（P＜0．01），因此可初步认为使抑癌基因p16表达增强，是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一，树舌多糖GF作用后小鼠HepA瘤细胞中p16，Rb基因表达增强，共同作用可启动细胞周期的负反馈调节，细胞周期的负调节增强，从而阻止无限制从G1期进入S期，抑制细胞增殖失控，起到抗肿瘤作用。     

树舌多糖GF对小鼠HepA瘤Rb基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤Rb基因表达的影响。本实验用链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶免疫组化法来测定瘤组织中Rb蛋白含量，通过多 体图像分析系统分析实验结果。结果表明：树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较，差异非常显著（P＜0．01），即树舌多糖GF更能显著增强Rb基因表达，优于猪苓多糖。因此可初步认为，作为于抑癌基因Rb并使之表达增强，是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一。     

树舌多糖GF对小鼠HepA瘤Rb基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤Rb基因表达的影响。本实验用链霉菌抗生素蛋白 -过氧化酶免疫组化法来测定瘤组织中Rb蛋白含量 ,通过多媒体图像分析系统分析实验结果。结果表明 :树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较 ,差异均非常显著 (P <0 .0 1) ,即树舌多糖GF、猪苓多糖明显增强HepA瘤组织中Rb基因的表达 ;树舌多糖组与猪苓多糖组比较 ,差异非常显著 (P <0 .0 1) ,即树舌多糖GF更能显著增强Rb基因表达 ,优于猪苓多糖。因此可初步认为 ,作用于抑癌基因Rb并使之表达增强 ,是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞p16基因表达的影响

为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤细胞 p16基因表达的影响。本实验用链霉菌抗生素蛋白 -过氧化酶免疫组化法来测定细胞中p16蛋白含量 ,通过多媒体图像分析系统分析实验结果。结果表明 :树舌多糖GF组、猪苓多糖组与荷瘤对照组比较 ,p16表达增加均非常显著 (P <0 .0 1) ,树舌多糖组与猪苓多糖组比较 ,差异非常显著 (P <0 .0 1)。因此可初步认为使抑癌基因p16表达增强 ,是树舌多糖GF抗瘤作用机制之一。树舌多糖GF作用后小鼠HepA瘤细胞中 p16、Rb基因表达增强 ,共同作用可启动细胞周期的负反馈调节 ,细胞周期的负调节增强 ,从而阻止无限制从G1期进入S期 ,抑制细胞增殖失控 ,起到抗肿瘤作用。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞N-ras基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织N-ras基因表达的影响.方法:运用原位杂交法、SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细包中N-ras mRNA量及N-Ras蛋白的表达量.结果:树舌多糖组、猪苓多糖组中N-ras mRNA量及Ras蛋白的表达量均显著低于荷瘤组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:初步认为树舌多糖GF可通过降低N-rasmRNA量及Ras蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞p53基因表达的影响

目的 :为探明树舌多糖GF对小鼠HepA瘤组织 p5 3基因表达水平的影响。方法 :用酶联免疫反应测定 p5 3多克隆抗体。结果 :荷瘤对照组 p5 3基因表达较空白对照组增加非常显著 (p <0 .0 1 ) ,而树舌多糖GF组较荷瘤对照组 p5 3基因表达减少非常显著 (p <0 .0 1 ) ,较正常组织有显著差异 (p <0 .0 5 ) ,其 p5 3平均表达量较空白对照组低 ;猪苓多糖对照组较荷瘤对照组 p5 3基因表达水平减少非常显著 (p <0 .0 1 ) ,接近空白对照组 (p >0 .0 5 )。结论 :初步认为树舌多糖GF可能直接作用 (或通过癌基因 )影响HepAcellsp5 3基因的表达频率。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞C-myc基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对HepA瘤组织C-myc基因表达的影响。方法:应用免疫组化和原位杂交方法检测小鼠HepA瘤细胞中C-myc基因的mRNA与蛋白的表达情况。结果:与荷瘤组比较,树舌多糖组、猪苓多糖组中C-myc基因的mRNA与蛋白的表达量均明显降低(P﹤0.01),其中树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论:树舌多糖GF可通过降低C-myc mRNA量及C-myc蛋白的表达,而抑制HepA瘤细胞的增殖。     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞MDM-2基因表达的影响研究

应用免疫组化技术对HepA瘤细胞中MDM-2基因的表达量进行分析,以探讨树舌多糖抗肿瘤的分子机制.目的:研究树舌多糖GF对HepA瘤细胞MDM-2表达的影响.方法:应用SP免疫组化染色技术和多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中MDM-2的表达.结果:树舌多糖组中MDM-2的表达量均显著低于模型组(P＜0.01),树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异.结论:初步认为树舌多糖GF可通过降低MDM-2的表达而抑制HepA瘤细胞的增殖.     

树舌多糖GF对HepA瘤细胞Ras蛋白表达的影响

研究应用免疫组化技术对HepA瘤细胞中Ras蛋白表达量进行分析 ,以进一步探讨树舌多糖抗肿瘤的机制。目的 :为探明树舌多糖GF对HepA瘤组织Ras蛋白表达的影响。方法 :用SP免疫组化染色技术及多媒体彩色病理图文分析系统测定HepA瘤细胞中Ras蛋白的表达。结果 :树舌多糖组、猪苓多糖组中Ras蛋白的表达量均显著低于模型组 (P <0 .0 1) ,树舌多糖组与猪苓多糖组无显著性差异。结论 :初步认为树舌多糖GF可通过降低Ras蛋白的表达 ,而抑制HepA瘤细胞的增殖。     

树舌多糖GF对小鼠肝癌H_(22)细胞P53及RB基因的影响

目的:为探明树舌多糖GF对肝癌H22瘤细胞RB基因及P53基因的影响。方法:用ELISA法检测RB基因及P53基因用药前后表达的差异。结果:树舌多糖GF组中P53基因、RB基因的表达量均显著高于荷瘤组(P<0.01)。树舌多糖组、环磷酰胺组无显著差异。结论:树舌多糖GF能使肝癌H22细胞P53及RB基因的表达上调。     

树舌多糖GF对小鼠H_(22)瘤CDK2基因表达的影响

目的:探明树舌多糖GF对H22瘤细胞CDK2基因表达的影响。方法:运用Elisa法测定H22瘤细胞中CDK2蛋白的表达量。结果:树舌多糖组中CDK2蛋白的表达量均显著低于荷瘤对照组(P0.01),树舌多糖组与环磷酰胺组无显著性差异(P0.05)。结论:树舌多糖GF可通过降低CDK2蛋白的表达,抑制H22瘤细胞的增殖。     

灵芝孢子粉对HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响

目的:观察灵芝孢子粉对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法研究灵芝孢子粉对HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果:MTT实验结果表明高剂量的灵芝孢子粉对HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,2500μg/m l的灵芝孢子粉作用于HepG2细胞72h后,对细胞生长的抑制率最高可达51.4%;流式细胞术实验结果表明,灵芝孢子粉浓度为3mg/m l时,可使肿瘤细胞生长G2期减小,浓度为6 mg/m l时,可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论:灵芝孢子粉具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,并可作用于细胞周期的G2期,高剂量的灵芝孢子粉还可使肿瘤细胞发生凋亡。     

复方丹参注射液对血管内皮细胞基因表达谱的影响研究

 目的探讨复方丹参注射液对血管内皮细胞基因表达谱的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞;复方丹参注射液作用细胞18 h,以正常培养的细胞作对照,用心血管疾病及细胞因子相关的基因芯片研究复方丹参注射液对培养的人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,并用RT-PCR方法对表达上调与表达下调的基因进行了扩增和电泳检测。结果基因芯片分析筛选出复方丹参对内皮细胞的影响基因9个,其中上调基因3个,下调基因6个,包括一些与免疫、血管舒缩、细胞黏附及抗氧化的相关基因;对差异表达的基因用RT-PCR扩增及电泳检测结果与基因芯片结果一致,证实了基因芯片的检测结果。结论复方丹参可通过多种途径在基因水平调节内皮细胞的功能。     

左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达谱的影响

目的:研究左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达谱的影响。方法:复制MSG-肝再生-大鼠模型,治疗组给予左归丸5g/kg灌胃,于术后5天处死动物,取再生肝组织液氮冻存。选用1176条与细胞分化增殖相关的基因表达谱芯片,观察再生肝组织基因表达谱的变化。结果:治疗组相对于模型组的差异表达基因有292条(上调表达20条,下调表达272条)。结论:左归丸对MSG-肝再生-大鼠再生肝组织的基因表达谱有显著影响,以基因表达下调为主,提示左归丸通过调控MSG-肝再生-大鼠基因表达而影响其肝再生,下调MSG-肝再生-大鼠再生肝组织基因表达可能是左归丸滋养肝肾的重要分子机制之一。     

源于鲨鱼肝的一种新基因的克隆表达及其对肝肿瘤细胞的抑制作用

目的：从鲨鱼肝脏中克隆表达一种新基因psll2，纯化该基因的表达产物，研究其对肝肿瘤细胞的抑制作用。方法与结果：我们前面已报道发现了鲨肝细胞再生刺激因子（sHRSF），根据sHRSF的N端氨基酸序列设计了引物，并利用RT-PCR方法从鲨鱼再生肝组织的，6-RNA中扩增到大小约为350bp的cDNA片段，序列分析表明350bp的片段含有一个开放阅读框（ORF），含有333个碱基，编码111个氨基酸残基，其编码的N端氨基酸序列与天然sHRSF的前7个氨基酸一致。该肽被命名为PSL12（来源于鲨肝的分子量约为12kD的肽）。该cDNA被连接到质粒pGEM—T-Easy，获得重组质粒pGEM—T-psll2。根据cDNA序列分析和质粒pET-32a的多克隆位点（BamHI和SalⅠ）的序列，设计并合成了psll2基因的特异性引物，质粒pGEM—T-psll2作为模板，进行了PCR扩增。将此PCR产物插入pET-32a得到表达质粒pET-32a—psll2，并将它转化入E．coli的BL21菌株。经IPTG诱导，带有组氨酸标签的融合蛋白的表达量约为40％。用金属螯合层析纯化融合蛋白后，再用FXa切割融合蛋白，经ResourceQ和MonoQ柱层析得到PSL12纯品，它可抑制肝肿瘤细胞株SMMC．7721和HepG2的增殖。结论：从鲨鱼肝脏中获得了一种新基因psll2。该基因的表达产物PSL12能显著抑制体外培养的肝肿瘤细胞的增殖。     

人参皂苷Rb1对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用及AMPK信号通路相关基因表达的影响

目的:观察人参皂苷Rb1对胰岛素抵抗(IR)的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖利用的影响,并基于AMPK信号通路探讨其可能的作用机制。方法:将C2C12细胞分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组,模型组以0. 25 mmol/L棕榈酸,1%小牛血清白蛋白培养16 h诱导IR,人参皂苷Rb1组在模型组的基础上以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,通过检测培养液中的葡萄糖含量反映葡萄糖消耗量,并应用CCK8试剂盒及光镜观察不同浓度人参皂苷Rb1对C2C12细胞活性及形态的影响,实时荧光定量PCR扩增分析人参皂苷Rb1对C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α基因表达的影响。并应用shRNA沉默AMPKα的表达,构建AMPKα低表达的骨骼肌细胞模型,以1、3、10、30、100μmol/L浓度的人参皂苷Rb1分别干预24 h和48 h,与不含人参皂苷Rb1的培养液比较,再次验证人参皂苷Rb1对C2C12细胞葡萄糖利用的影响及其与AMPK信号通路的关系。结果:1、3、10、30μmol/L人参皂苷Rb1对C2C12细胞形态及活性无显著影响,而100μmol/L人参皂苷Rb1造成C2C12细胞活性降低及部分细胞死亡。10,30μmol/L人参皂苷Rb1能够促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗量,与模型组比较,差异有统计学意义(P 0. 05),且人参皂苷Rb1能够上调C2C12细胞AMPKα、SIRT-1、PGC-1α的基因表达(P 0. 05)。10、30μmol/L人参皂苷Rb1亦能增加AMPKα低表达的骨骼肌细胞的葡萄糖消耗量(P 0. 05),而该作用程度低于其对棕榈酸诱导的C2C12细胞IR的影响,且RT-PCR结果显示人参皂苷Rb1能上调AMPKα低表达的C2C12细胞SIRT-1、PGC-1α的基因表达。结论:人参皂苷Rb1能够有效促进IR的C2C12骨骼肌细胞葡萄糖消耗,该作用与调节AMPK信号通路有关,但除AMPK信号通路亦有其他作用途径。     

肺气虚证患者T淋巴细胞相关基因的表达研究

目的：通过基因芯片技术研究肺气虚证患者T淋巴细胞基因表达的差异。方法：采集肺气虚证和肺阴虚证患者、正常人的外周血作为实验血样和对照血样。采用Fieoll技术分离外周血淋巴细胞、流式细胞仪分选并纯化T淋巴细胞，一步法提取总RNA，逆转录合成双链cDNA，体外转录合成生物素标记的cRNA，片断化后，采用人类全基因表达谱芯片进行芯片杂交，扫描后筛选出差异表达基因。结果：肺气虚证患者／正常人外周血T淋巴细胞相关差异表达基因45条，其中上调41条，下调4条；肺气虚证／肺阴虚证患者外周血T淋巴细胞相关差异表达基因43条，其中上调27条，下调16条；肺气虚证组／肺阴虚证组、正常人组均高表达的差异基因15条。结论：基因芯片技术能有效地研究中医证的基因表达谱，筛查出肺气虚证患者T淋巴细胞相关差异表达基因。