木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901作用的研究

目的探讨木黄酮对体外培养的人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法用MTT法检测药物效应，透射电镜及流式细胞仪观察木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞周期和细胞凋亡。细胞免疫化学观察木黄酮处理SGC-7901细胞后，SGC-7901细胞PCNA，FAS，C-mvc的变化。结果①MTT法证实木黄酮对SGC-7901细胞生长有抑制作用，并呈剂量-效应关系。②流式细胞仪分析木黄酮处理SGC-7901细胞后细胞滞留于G2／M期，并可见凋亡峰。③透射电镜可见SGC-7901细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变。④木黄酮下调PCNA及C—myc表达，上调FAS表达。结论木黄酮对人胃癌细胞SGC-7901有抑制作用，其抑制作用可能通过下调C-mvc基因表达，上调Fas蛋白表达，下调PCNA表达，从而多途径诱导胃癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程，抑制SGC-7901细胞增殖。     

生长抑素类似物联合丝裂霉素对胃癌细胞的抑制作用

目的:探讨生长抑素类似物奥曲肽(OCT)联合细胞毒化疗药物丝裂霉素(MMC)对胃癌细胞系SGC-7901的抑制作用.方法:体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,分别设空白组、对照组、OCT组、MMC组以及OCT+MMC组.用MTT比色法观察对胃癌细胞生长的影响;用免疫组织化学法分析对细胞凋亡调节基因Bcl-2表达的影响.结果:在OCT组中,当浓度从1×10-9g/L到1×10-3g/L变化时,OCT对胃癌细胞均有抑制,当OCT为1×10-3 g/L时.其抑制作用最明显(20.9%,P<0.05).MMC随着浓度由1×10-4g/L增加至1 X 10-2g/L其抑制率也由14.1%增加至71.1%,呈递增趋势.OCT联合MMC的抑制作用随着MMC浓度由1×10-3g/L增加至5×10-3g/L,抑制率也由22%增加至45.8%(均P<0.05);当MMC为5×10-3g/L时,联合治疗组优于单独给药组(54.8% vs 30.4%,P<0.05).OCT、MMC及OCT+MMC均可以下调Bcl-2的表达,阳性细胞数分别为12.9%、6.7%和5.0%(均P<0.05),其中OCT+MMC组下调作用最明显.结论:OCT联合MMC可以增强对胃癌细胞的抑制作用,联合应用可以减低MMC的剂量.     

ezrin基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在人胃癌SGC-7901细胞系中的表达

目的构建ezrin基因RNA干扰慢病毒载体并建立ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系,为ezrin基因的功能研究奠定基础。方法设计ezrin基因特异性RNA干扰靶序列,与PHR-SIN-CSGW-H1a载体定向连接,构建PHR-SIN-CSGW-H1a真核入门表达载体。通过与psPAX2和PMD2.G载体进行重组,获得ezrin基因真核表达重组慢病毒表达载体。利用包装细胞293FT获得重组的慢病毒,感染人胃癌SGC-7901细胞。结果成功构建PHR-Eai-psPAX2-PMD2.G真核表达慢病毒干扰载体并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度>1×107U/L。RT-PCR、Western blot结果表明,ezrin基因mRNA及蛋白表达显著降低。结论成功构建人ezrin基因特异性的重组慢病毒干扰载体,获得ezrin基因稳定干扰的人胃癌SGC-7901细胞系。     

曲古菌素A协同GX15-070诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制的研究

目的探讨联合应用曲古菌素(Trichostatin A,TSA)和Bcl-2抑制剂GX15-070诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用及其机制。方法以联用或单用TSA、GX15-070作用于SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞存活率;采用Western blot法检测经处理后细胞SGC-7901中cleaved caspase 3和Bcl-2蛋白表达的变化。结果在一定浓度范围内(2.5～10μmol/L)GX15-070以浓度依赖性诱导SGC-7901细胞存活率降低,各浓度组间细胞存活率差异有统计学意义(P<0.01),且随作用时间延长,SGC-7901细胞存活率降低(P<0.05);TSA和GX15-070联用组较单用TSA组、GX15-070组SGC-7901细胞存活率差异有统计学意义(P<0.01);West-ern blot检测显示TSA能上调凋亡蛋白cleaved caspase 3的表达和下调Bcl-2蛋白的表达。结论 TSA具有协同诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用,其机制可能是通过上调cleaved caspase 3和下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

VEGF基因表达抑制对胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的:研究siRNA(small interfering RNA)对人胃腺癌细胞SGC-7901的VEGF基因表达的影响．方法:选择血管内皮生长因子(VEGF)基因为靶基因,设计两组针对VEGF mRNA的小干扰RNA,合成DNA寡核苷酸链,体外转录合成siRNA．以人胃腺癌细胞系SGC-7901为靶细胞,应用脂质体转染的方法,将siRNA导入细胞．采用Hoechst33258染色观察siRNA作用于SGC-7901细胞中出现凋亡小体的情况．流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR法比较转染前后VEGF mRNA表达水平的变化, ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化．结果:两组siRNA转染后均能有效地抑制 SGC-7901细胞的生长,诱导细胞凋亡产生凋亡小体．siRNA作用于SGC-7901细胞．其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0／G1 期细胞增多,S期细胞减少,并使细胞周期阻滞于G0／G1期(siRNA1组,siRNA2组G0／G1期VS 对照组G0／G1期:75．04％,76．52％ vs 58．37％, P<0．01;siRNA1组,siRNA2组S期vs对照组S 期:17．82％,16．73％ vs 39．52％,P<0．01),而其他组则无明显变化．VEGF mRNA的表达量大幅度减少(siRNA1组,siRNA2组vs对照组: 0．638±0．078,0．656±0．085 vs 0．941±0．046, P<0．01),相对应的VEGF蛋白水平也显著降低(164．7±22．7,166．3±26．6 vs 414．0±61．5, P<0．01),而其他组siRNA转染后则无上述作用．结论:应用靶向VEGF基因RNA干扰技术可以有效抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖．     

羟基喜树碱诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 研究羟基喜树碱(HCPT)诱导胃癌细胞的凋亡作用,探讨其治疗胃癌的作用机制.方法 应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究HCPT对胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、MKN-28的细胞毒和诱导凋亡的作用.结果 HCPT具有很强的细胞毒作用,对三株不同分化程度胃癌细胞的SGC-7901(中分化)、MKN-45(低分化)、MKN-28(6高分化)的IC50为0.008～0.012mg/ml.HCPT作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧贴于核膜周边,核碎裂,染色质片断化,凋亡小体形成等.流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体"凋亡峰".流式细胞仪计数显示,HCPT诱导胃癌细胞SGC-7901、MKN-45、MKN-28的凋亡率分别为21.88%、12.35%、30.26%.HCPT诱导胃癌细胞的凋亡率与胃癌的分化程度有关.TDT染色法显示,细胞凋亡指数在12.35%～30.26%之间.HCPT的作用表现为细胞周期特异性,HCPT主要作用于细胞周期的S期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于S期.结论 HCPT对胃癌细胞具有很强的细胞毒作用,诱导凋亡是其主要作用机制之一.     

HSP90抑制剂17-DMAG对胃癌细胞株SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)功能特异性抑制剂17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响.方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,以不同浓度的17-DMAG处理后采用MTT法检测SGC-7901细胞的生长抑制情况,流式细胞仪碘化丙啶(PI)染色分析细胞周期分布,流式细胞仪及Annexin V-FITC试剂盒监测17-DMAG对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响.结果:不同浓度的17-DMAG对人胃癌细胞SGC-7901有明显的生长抑制作用,各组之间比较(P＜0.01),且呈时效量效依赖关系(F=241.313,246.856,均P＜0.001).17-DMAG作用24 h后胃癌细胞株SGC-7901呈现G2/M期阻滞,试验组与对照组比较(F=231.991,P＜0.001),呈浓度依赖关系.17-DMAG处理胃癌细胞SGC-7901 24 h早期凋亡细胞增加,48 h晚期凋亡细胞增加.结论:17-DMAG可明显抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖,使胃癌细胞SGC-7901阻滞于G2/M期,诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡.     

幽门螺杆菌致胃上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901的氧化性损伤

目的: 探讨H pylori对人正常胃黏膜上皮细胞永生细胞株GES-1和人淋巴结转移胃腺癌细胞株SGC-7901的氧化性DNA损伤作用.方法: 采用细菌-细胞共培养的方法, 比较H pylori作用前后GES-1和SGC-7901细胞株的形态学变化;采用激光扫描共聚焦显微镜方法, 比较H pylori作用前后GES-1和SGC-7901细胞株8-羟基脱氧鸟苷(8-OhdG)的表达.结果: H pylori对GES-1和SGC-7901细胞株均具有损伤作用;8-OHdG表达升高, 加菌组与对照组相比差别具有统计学意义(64.9396±17.8142 vs 32.3010±7.3620;102.8344±30.2632 vs 77.1336±32.3223, 均P = 0.000);而且8-OHdG表达的变化程度GES-1细胞显著高于SGC-7901细胞.结论: H pylori能够诱导GES-1和SGC-7901细胞DNA氧化性损伤显著增加;在H pylori氧化损伤的相关研究中, 更适宜选择对损伤作用敏感的GES-1细胞株作为研究对象.     

天花粉蛋白诱导的胃癌细胞凋亡与bcl-2表达下降有关

目的 在体外实验中,探索天花粉蛋白诱导胃癌细胞发生凋亡的可能性,揭示该凋亡发生与ｂｃｌ－２之间的关系。方法 以细胞形态学和ＴＵＮＥＬ染色法,定性、定量地研究天花粉蛋白与胃癌细胞凋亡的关系;通过免疫组化法和Ｎｏｒｔｈｅｎ Ｂｌｏｔ杂交法检测凋亡相关基因ｂｃｌ－２的表达。结果 天花粉蛋白在体外能诱导人胃癌细胞发生凋亡。下调ｂｃｌ－２的表达。结论 诱导胃癌细胞凋亡是天花粉蛋白抗胃癌作用的机制之一,天花粉蛋白可能经下调调亡相关基因ｂｃｌ－２的表达而诱导胃癌细胞发生凋亡。     

2-(3羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖对人胃癌细胞系(SGC-7901)的诱导凋亡作用

目的 观察2-(3-羧基-t-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COADG)体外诱导人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用，探讨其可能作用机理。方法 采用MTT法，筛选药物作用最佳浓度。用流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量分析诱导凋亡前后的细胞DNA含量，透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。结果 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖能明显抑制胃癌细胞的增长，MTT法显示抑制程度具有时间和剂量效应关系，统计组问比较差异有显著性；流式细胞仪分析可见亚二倍体(Sub-G1)凋亡峰；电镜观察到凋亡小体。结论 2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖有诱导人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的作用。     

槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGG-823生长的影响

目的 观察槲皮素对胃癌细胞SGC-7901和BGC-823生长和增殖的影响。方法 以台盼蓝拒染法计数胃癌细胞的生长抑制率，荧光显微镜了解凋亡的发生，流式细胞术检测细胞周期变化。结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制SGC-7901和BGC-823细胞增殖的作用明显，呈浓度和时问依赖性，槲皮素处理48h后的Ic50为14．12μm(SGC-7901)和28．13μm(BGC-823)。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化，流式细胞仪检测表明经10～20μm／L的槲皮素处理，SGC-7901细胞周期阻滞于G0／G1期，BGC-823细胞周期阻滞于S期。结论 槲皮素能抑制胃癌细胞的生长并诱导其发生凋亡，是有效的抗癌药。     

氧化砷对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用

目的:研究三氧二化砷(氧化砷)对胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡作用。方法:应用MTT、TUNEL染色、流式细胞仪技术研究氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞的细胞毒和诱导凋亡的作用。结果:氧化砷对不同分化程度的胃癌细胞均具有较强的细胞毒作用.10μmol/L氧化砷作用24小时细胞杀伤率为24.6％ 48小时接近50％,氧化砷作用于不同分化程度的胃癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化:细胞核固缩,染色质疑集.呈新月型紧贴于核膜周边.核碎裂.染色质片断化,凋亡小体形成等,流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”TU-NEL染色法显示,细胞凋亡指数为1.4％～9.5％。氧化砷的细胞毒作用呈时间和剂量依赖性,且表现为细胞周期特异性,作用48小时后,SGC-7901细胞的细胞周期变化明显,G0/G1期细胞从54.2％下降到17.7％ 而G2/M期细胞则从20.2％上升到63.4％,说明氧化砷主要作用于细胞周期的G2/M期,抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。结论:氧化砷对胃癌细胞具有较强的细胞毒和诱导细胞凋亡的作用.具有治疗胃癌的潜在价值。值得进一步研究     

2'-O-meRNA对人胃癌细胞的抑制作用及对5-FU和BCNU疗效的影响

目的探讨2'-O-meRNA通过抑制端粒酶来杀伤胃癌细胞系SGC-7901的作用及对化疗药5-FU和BCNU疗效的影响。方法培养人胃癌细胞系SGC-7901,分为5-FU组、BCNU组、2'-O-meR- NA组、反义对照组、化疗药与反义抑制剂合用组,观察用药后该细胞系存活情况及端粒酶活性。结果5- FU、BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制SGC-7901细胞的活性(P<0.05),BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制细胞端粒酶活性,1μM 2'-O-meRNA可加强6.25 μg/ml BCNU的疗效(P<0.01),但是不能加强12.5μg/ml 5-FU的作用(P>0.05)。结论2'-O-meRNA抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长。1 μM 2'-O- meRNA与6.25 μg/ml BCNU合用时有协同作用,2'-O-meRNA与5-FU合用时无协同作用。     

尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞PGE2合成及COX-2、VEGF表达的影响

目的观察尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞前列腺素E2（PGE2）合成及环氧合酶（COX）-2、血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其抑制胃癌血管生成的机制。方法对人胃癌SGC-7901细胞进行培养．免疫组织化学、放射免疫法检测不同浓度尼美舒利作用后细胞COX-2、PGE2、VEGF的表达。结果与阴性对照组相比。尼美舒利100、200μmol／L作用48h后SGC-7901细胞的COX-2、VEGF表达明显降低（P〈0．05），COX-2与VEGF的表达呈正相关（r=0．8080，P〈0．05）；随着尼美舒利浓度的升高，PGE2分泌逐渐降低。结论抑制COX-2的活性与表达、减少PGE。的合成及由此引起的VEGF表达降低，在抑制胃癌血管生长中可能具有一定作用。     

赖氨酰氧化酶对胃癌细胞迁徙能力的影响

目的 研究赖氨酰氧化酶(LOX)对胃癌细胞迁徙能力的影响.方法 培养两株胃癌细胞,用Real-Time PCR法检测其LOX的表达量;通过体外Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞在不同浓度β-氨基丙腈(BAPN)作用下迁徙能力的变化.结果 两株胃癌细胞中均有LOX的表达,当BAPN浓度是0.2和0.3 mmol/L时,胃癌细胞的体外迁徙能力受到抑制.结论 LOX可能通过增强肿瘤细胞的迁徙能力而促进肿瘤的转移.     

Gastric cancer cell lines induced by trichostatin A

AIM： To explore the effect of trichostatin A （TSA） on apoptosis and acetylated histone H3 levels in gastric cancer cell lines BGC-823 and SGC-7901. METHODS： The effect of TSA on growth inhibition and apoptosis was examined by MTT, fluorescence microscopy and PI single-labeled flow cytometry. The acetylated histone H3 level was detected by Western blot. RESULTS： TSA induced apoptosis in gastric cancer cell lines BGC-823 and SGC-7901 was in a dose and time-dependent manner. Apoptotic cells varied significantly between TSA treated groups （37.5 ng/mL 72 h for BGC-823 cell line and 75 ng/mL 72 h for SGC-7901 cell line） and control group （0.85 ± 0.14 vs 1.14 ± 0.07, P = 0.02; 0.94 ± 0.07 vs 1.15 ± 0.06, P = 0.02）. Morphologic changes of apoptosis, including nuclear chromatin condensation and fluorescence strength, were observed under fluorescence microscopy. TSA treatment in BGC-823 and SGC-7901 cell lines obviously induced cell apoptosis, which was demonstrated by the increased percentage of sub-G1 phase cells, the reduction of Gl-phase cells and the increase of apoptosis rates in flow cytometric analysis. The result of Western blot showed that the expression of acetylated histone H3 increased in BGC-823 and SGC-7901 TSA treatment groups as compared with the control group.CONCLUSION： TSA can induce cell apoptosis in BGC-823 and SGC-7901 cell lines. The expression of acetylated histone H3 might be correlated with apoptosis.