DNase Ⅰ对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜的影响

目的研究不同浓度DNaseⅠ对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜形成及成熟生物膜的影响。方法分光光度计法检测25、50、100U／ml的DNaseⅠ对非黏液型铜绿假单胞菌PAOⅠ和黏液型铜绿假单胞菌PA17生长曲线的影响；改良平板培养法建立生物膜模型，分别在生物膜形成过程中及生物膜形成后用25、50、100U／ml的DNaseⅠ处理，扫描电镜观察PAOⅠ和PA17的生物膜形态。结果随着DNaseⅠ浓度增加，PAOⅠ和PA17的对数生长期延迟，但最终不能抑制细菌生长；25U／ml的DNaseⅠ即可抑制不同类型铜绿假单胞菌生物膜形成且分解成熟生物膜，100U／ml的DNaseⅠ可完全阻止铜绿假单胞菌生物膜形成并彻底分解成熟生物膜。结论DNaseⅠ不能直接杀灭铜绿假单胞菌，但可有效抑制铜绿假单胞菌生物膜形成并分解成熟生物膜，对非黏液型和黏液型铜绿假单胞菌生物膜的影响无明显差异，作用效果呈浓度依赖性。     

蹭行运动和胞外藻酸盐在铜绿假单胞菌生物被膜形成中的作用

目的 比较3株铜绿假单胞菌即含新的mucA基因突变的黏液型PA17、mucA基因经典突变的黏液型PD0300、含野生型mucA基因的非黏液型PA01生物被膜早期形成和成熟形态,探讨铜绿假单胞菌纤毛介导的蹭行运动和胞外基质藻酸盐在黏液型及非黏液型铜绿假单胞菌生物被膜形成中的作用.方法 用PAl7、PAO1、PD0300的单菌落穿刺接种1%琼脂糖平板,肉眼观察细菌纤毛介导的蹭行运动,测定细菌运动环评估3株细菌的蹭行运动能力;在生物被膜形成早期采用结晶紫对膜内黏附细菌染色,测定其吸光度(A)值,建立24 h内3株细菌的黏附曲线;建立未饱和铜绿假单胞菌生物被膜模型,检测早期和成熟期的胞外藻酸盐分泌;将含绿色荧光蛋白的pUCP/UV质粒转化3株铜绿假单胞菌,在激光共聚焦显微镜下观察静态生物被膜不同时期的形态和结构.结果 黏液型PA17、非黏液型PAO1菌株蹭行运动的直径小于黏液型PDO300(P<0.05),PA17、PAO1的运动能力弱于PDO300菌株;黏液型PDO300在早期生物被膜形成中黏附能力最强,非黏液型PAO1次之,黏液型PA17最弱;在未饱和生物被膜早期和成熟期黏液型菌株PA17、PDO300藻酸盐合成均明显高于非黏液型菌株PAO1(P<0.05),而PA17和PDO300在生物被膜相同时期的藻酸盐合成无明显差异(P>0.05);激光共聚焦显微镜下PA17菌株在生物被膜形成中,不可逆黏附形成明显迟于非黏液型PAO1和黏液型PDO300,PA17成熟生物被膜形态呈薄膜状,与非黏液型PAO1成熟生物被膜类似;而PDO300不可逆黏附形成早,成熟生物被膜形态呈蘑菇状.结论 纤毛介导的蹭行运动是早期生物被膜形成中黏附的重要方式,可能影响成熟生物被膜的形态;而藻酸盐不是早期黏附的主要决定因素,与成熟生物被膜形态无关.     

mucA基因突变对铜绿假单胞菌黏液表型的影响

目的 研究mucA基因突变对铜绿假单胞菌黏液表型的影响.方法 收集临床分离的黏液型铜绿假单胞菌9株,对稳定黏液表型的铜绿假单胞菌采用聚合酶链反应方法对其mucA基因进行扩增,全自动荧光测序仪测序分析.结果 筛选出3株稳定的黏液表型的铜绿假单胞菌,编号分别为PA255、PA622和PA880.mucA基因序列分析中,3株均存在第342位(A→G)的无意义突变,PA255第426位G缺失导致第439位产生终止密码,还伴有393位(C→G)的无意义突变,PA880还存在第465位(T→G)的点突变,PA622未发现其它位置的突变.结论 mucA基因突变是造成铜绿假单胞菌产生黏液表型的原因之一,同时也存在其它的遗传因素使其产生黏液表型.     

临床分离铜绿假单胞菌mucA基因突变与藻酸盐合成的关系

目的：探讨临床分离铜绿假单胞菌mucA基因突变情况及其与菌落形态、藻酸盐合成之间关系。方法：对58株临床分离铜绿假单胞菌（50株黏液型菌株和8株非黏液型菌株）mucA基因进行PCR-SSCP及DNA序列分析,与GenBank中野生型铜绿假单胞菌PAO1标准序列进行比对,并用比色法测定58株细菌藻酸盐浓度。结果：细菌mucA基因突变总发生率为100%,能够影响氨基酸编码的有意义突变在非黏液型菌株中未能检获,在黏液型菌株中为32%（16/50）;共发现14个突变位点,其中导致氨基酸编码发生改变的位点有5个,其余为沉默突变;黏液型菌株藻酸盐含量较非黏液型细菌显著增加（P＜0.01）,发生了有意义的mucA基因突变的菌株,藻酸盐合成较发生无意义突变的菌株显著增加（P＜0.01）。结论：mucA突变与临床分离铜绿假单胞菌菌落形态以及藻酸盐合成能力有关。     

黏液型铜绿假单胞菌和非黏液型铜绿假单胞菌的感染分布及耐药性比较

目的:了解黏液型和非黏液型铜绿假单胞菌感染分布特点及其耐药性。方法:回顾性分析2012年1月~2014年12月临床分离黏液型和非黏液型铜绿假单胞菌分布特征及其对抗生素敏感性,分析其耐药特点。细菌鉴定用VITEK 2 Compact全自动细菌培养鉴定仪、API 20NE;药敏试验采用K-B法。结果:38株黏液型铜绿假单胞菌中,痰液标本检出最多(31株),占81.58%;科室以呼吸科、ICU、烧伤科患者居高。非黏液型铜绿假单胞菌中,痰液占74.19%;以呼吸科、烧伤科分离居多。除环丙沙星、左氧氟沙星外,非黏液型铜绿假单胞菌对其他9种抗生素的耐药率明显高于黏液型铜绿假单胞菌黏液型PA;对庆大霉素的耐药性在治疗后明显高于治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05);其他抗生素的耐药性也表现出不同程度的变化。结论:应结合黏液型铜绿假单胞菌的特点,联合大环内酯类等抗生素,破坏其生物膜的影响,增强抗生素的杀菌作用。     

黏液型铜绿假单胞菌PA2815基因的敲除与功能鉴定

目的构建黏液型铜绿假单胞菌64(PA-64)株2815基因敲除株PA-64/ΔPA2815,建立有效的PA2815基因敲除平台。方法利用自杀质粒p CVD442及基因同源重组技术敲除PA-64株PA2815基因,并采用PCR及测序检测方法筛选获得PA2815基因被Gm抗性基因取代的克隆,命名为PA-64/ΔPA2815。比较敲除株与野生株之间的生长特性、抗生素的敏感性、藻酸盐以及绿脓菌素分泌的差异。结果 PA-64/ΔPA2815菌株与野生株的PA2815基因两侧同源臂片段PCR产物相比缺少1 480 bp,成功构建了黏液型铜绿假单胞菌PA2815基因敲除株。体外实验证实敲除株相比野生株生长速度略慢,藻酸盐分泌显著降低,差异有统计学意义(P0.05),而绿脓菌素分泌显著升高(P0.05),但在抗生素的敏感性方面差异无统计学意义(P0.05)。结论利用同源重组原理成功构建黏液型铜绿假单胞菌PA2815基因敲除平台;PA2815基因不影响黏液型铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性,但可以正向调控其藻酸盐的分泌和菌落生长状态,负向调控绿脓菌素的分泌。     

铜绿假单胞菌QS系统缺陷对生物膜形成及大鼠肺部慢性感染的影响

目的研究lasI rhlI基因缺陷对铜绿假单胞菌体外生物膜形成的影响;观察铜绿假单胞菌PAO1野生型及其群体感应系统的lasI rhlI基因缺陷型菌株人工生物膜致病性的差异,了解群感应系统的lasI rhlI基因在铜绿假单胞菌生物膜感染致病过程中的作用。方法采用生理盐水-吸痰管系统进行铜绿假单胞菌体外生物膜的培养,3d后用扫描电子显微镜观察PAO1、PAO1 lasI rhlI形成生物膜的情况。从大鼠支气管内直接予以PA(菌种为铜绿假单胞菌PAO1野生型,PAO1 lasI rhlI基因缺陷型)海藻酸盐微菌粒悬液(1×109CFU/mL)攻击,建立PAO1野生型及QS系统的lasI rhlI基因缺陷型菌株人工生物膜肺部感染动物模型。于感染2周后评估各组大鼠的肺部病理学、细菌学的变化。结果3d后PAO1野生型的生物膜较厚,lasI rhlI基因缺陷型菌株所形成的生物膜结构呈薄膜状,明显薄于PAO1野生型。感染2周后,PAO1野生型组的病理学改变和细菌学改变均显著重于lasI rhlI基因缺陷组(P<0.001)。结论QS系统的lasI和rhlI基因影响铜绿假单胞菌体外形成生物膜的能力,并且在PA肺部感染过程中发挥着重要作用。     

两种类型铜绿假单胞菌的耐药性分析

铜绿假单胞菌（PA）在自然界分布很广，对人类而言，其属于条件致病菌。在人体抵抗力低下时，易引起人体很多部位感染，是院内感染的重要病原菌之一。为指导临床合理应用抗生素，减少多重耐药菌株的产生，本文对我院分离出的42株黏液型铜绿假单胞菌和566株非黏液型铜绿假单胞菌进行耐药性分析，报告如下。     

同源重组构建铜绿假单胞菌新的mucA基因突变菌株

目的 构建铜绿假单胞菌新的mucA基因突变菌株,为研究新突变的mucA基因功能提供实验菌株.方法 首先将含新突变的mucA基因同源片段与自杀质粒pEX100T相连接,构建质粒pEXmucA56,再将质粒pEXmucA56转化人大肠埃希菌DH5α,与铜绿假单胞菌标准菌株PAO1共培养进行同源重组,并用羧苄青霉素(Carbenicillin)平板、假单胞菌分离平板(Pseudomonas isolation agar,PIA)和蔗糖(sucrose)平板进行筛选,获得染色体上含新突变的mucA基因的PAO1菌株.结果 经酶切及聚合酶链反应(polyrnerase chain reaction,PCR)鉴定质粒pEXmucA56构建及转化成功,经PCR及测序分析证实同源重组菌株PAOmucA56构建成功.结论 成功构建了含新的mucA基因突变的铜绿假单胞菌菌株PAOmucA56,为研究新突变的mucA基因的功能奠定了基础.     

呼吸道铜绿假单胞菌感染病灶藻酸盐合成相关基因的表达

目的:获得一种呼吸道铜绿假单胞菌生物膜检测方法,探讨藻酸盐合成相关基因的表达对临床治疗的影响。方法:提取60例呼吸道铜绿假单胞菌感染患者气管内病变组织,实时荧光定量PCR检测藻酸盐合成相关基因algD、algB、algU、mucA的表达,60例患者根据是否耐药分组,分为耐药组(R组)40例,非耐药组(NR组)20例,根据治疗的难易程度,将60例患者分为治疗困难组(D组)38例,治疗容易组(E组)22例。并进行基因algD、algB、algU、mucA的表达与临床抗生素耐药及治疗难易之间的相关性分析。结果:经细菌培养证实的铜绿假单胞菌感染病例60例,呼吸道病变组织均有algD、algB、algU、mucA基因的表达;耐药组(R组)和非耐药组(NR组)对比,algD、algU表达有统计学差异,algB、mucA表达无统计学差异;容易组(E组)和困难组(D组)对比,algD、algU、algB、mucA差异无统计学意义;细菌耐药和治疗难易的相关性分析显示,细菌耐药和临床治疗难易相关。结论:algD与铜绿假单胞菌藻酸盐的合成有着直接的正相关性,可以作为判断是否有黏液型铜绿假单胞菌生长及生物膜形成的依据,而algU与algD的表达有正相关性。     

Management of a patient with a complete rupture of a main bronchus in a community hospital

We describe the successful use of a portable extracorporeal membrane oxygenation machine for a patient with complete rupture of the left main bronchus after a road crash. The machine was used before and during left main bronchus reanastomosis at a community hospital 30 km from Melbourne, and then during acute interhospital transfer.     

Choledochoscopy: a comparison of a rigid and a flexible fibreoptic instrument

A comparison of choledochoscopy using a Storz rigid choledochoscope and a flexible Olympus instrument has been made. After using both instruments during a 12-month period, it is felt that the rigid instrument has practical advantages for general use, while the flexible instrument offers additional benefits, but requires more skill and care in its use.     

一起小学生食物中毒调查报告

丹东市宽甸县某小学发生一起食用课间餐（油炸糕）的食物中毒事件。中毒人数300人，经临床症状分析，流行病学调查及实验室检验证实，此次食物中毒是由油脂酸败引起的。     

微机在扩展多道记录仪功能方面的应用

应用微机控制的信号采集-输出系统扩展SJ-41型多道记录仪的功能,使它的频率响应增加到1000Hz。采用这项技术可清晰地记录家兔和豚鼠的原位希氏束电图。