绿茶多酚对慢性脑缺血大鼠认知功能障碍的影响

目的 探讨绿茶多酚对血管性认知功能障碍的影响及其可能的作用机制.方法 健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、2VO+生理盐水组、2VO+GTP100组[绿茶多酚100 mg/(kg·d)]、2VO+GTP400组[绿茶多酚400 mg/(kg·d)].采用大鼠双侧颈总动脉结扎(2VO)制备慢性脑缺血模型,结扎后从第4周开始给药,给药4周后通过Morris水迷宫观察大鼠的空间学习及记忆功能,并采用生化方法检测脑皮质的氧化应激性指标.结果 绿茶多酚缩短慢性脑缺血大鼠Morris水迷宫的逃逸潜伏期,400 mg/(kg·d)的绿茶多酚使大鼠的逃逸潜伏期从第3天开始就显著性缩短.绿茶多酚治疗后大鼠在空间探索实验中在平台区停留时间延长.绿茶多酚降低脑组织氧化性产物MDA的含量,增强SOD活性和组织抗氧化能力,400 mg/(kg·d)剂量的绿茶多酚的作用更显著.结论 绿茶多酚减轻慢性脑缺血大鼠的认知功能损害,其作用可能与抑制慢性脑缺血后的氧化应激反应,增强脑组织的抗氧化机制有关,尤其400 mg/(kg·d)的绿茶多酚效果更显著.     

丹芪偏瘫胶囊对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响

[目的]探讨丹芪偏瘫胶囊对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响。[方法]40只大鼠随机分为模型组,假手术组（给予羧甲基纤维素钠溶液）,丹芪偏瘫胶囊给药组（43.2 mg/mL）。制备四动脉结扎大鼠缺血模型,造模后2周开始给药,给药周期为1个月。采用Morris水迷宫及疲劳仪考察各组对前脑缺血模型大鼠平衡及学习记忆能力的影响。[结果]与模型组相比,丹芪偏瘫胶囊给药组大鼠的逃避潜伏期明显减少（P<0.05）,在平台停留显著增高（P<0.01）,穿越平台次数明显增多（P<0.01）,从转棒上掉落下来的次数明显减少（P<0.01）,在转棒上的最长停留时间明显增加（P<0.05）。[结论]丹芪偏瘫胶囊对四动脉结扎所致的慢性脑缺血大鼠的认知功能具有一定的改善作用。     

慢性脑缺血大鼠海马Notch1表达的动态变化

目的 观察慢性脑缺血大鼠海马Notch信号通路的表达变化,初步探讨该通路在慢性脑缺血后对认知功能的调控作用.方法 SD大鼠,采用随机数字表法分为假手术组、缺血8周组、缺血10周组、缺血12周组,每组10只.采用双侧颈总动脉永久性结扎方法(2-VO)制备慢性脑缺血大鼠模型,Morris水迷宫法测定各组大鼠学习记忆功能...     

rAAV1介导血管内皮生长因子基因表达对大鼠脑缺血新生血管形成及神经功能恢复的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗对大鼠脑缺血的治疗作用及其机制.方法 成年雄性SD大鼠64只,分为对照组和治疗组,每组均32只,采用立体定向微量注射的方法将相同滴度的rAAVl-VEGF(治疗组)和rAAVl-Lacz(对照组)注入大鼠侧脑室,21 d后制作大脑中动脉区缺血再灌注(MCAO)模型,于不同时间点对各组动物进行神经损伤程度评分(NSS),以免疫定量分析法榆测各组大鼠脑组织中VEGF的表达量、以免疫组织化学染色检测脑内VEGF的表达部位和微血管密度(MVD),并行vWF和BrdU的免疫荧光双重标记,采用尾静脉注射FITC-葡聚糖法行脑微血管灌注成像,并对各组缺血半暗带区域的脑微血管灌注情况进行评估.结果 (1)治疗组的NSS评分有明显改善;(2)VEGF可在脑内多个结构表达,其VEGF表达量是对照组的27倍;(3)治疗组MVD为157±13、对照组为89±9(P<0.05),且治疗组半暗带区域可见大量BrdU阳性的内皮细胞,而对照组未见;(4)缺血半暗带区域微血管显影面积为(152 617±13 076)μm2/mm2,对照组为(91 658±6577)μm2/mm2(P<0.05).结论 rAAVI-VEGF可介导VEGF在大脑内表达,并对脑缺血大鼠神经功能的恢复具有促进作用,其治疗机制可能与VEGF促进新生血管形成并改善脑组织供血有关.     

大鼠局灶性脑缺血早期脑内HO-1 蛋白的表达

目的　研究局灶性脑缺血血红素氧合酶 (HO)在脑内的表达。方法　采用大鼠大脑中动脉栓塞致脑缺血 ,对缺血早期不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并应用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果　栓塞后 3 0min皮质及海马即有HO 1阳性神经元和胶质细胞 ,且随着时间推移 ,HO 1的表达逐渐增强 ,HO 1主要分布在灶周皮质、梗死皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元及对测海马也出现HO 1的表达。结论　脑缺血时脑内HO 1迅速而强烈的表达可能是脑组织对自身损伤的恢复机制     

褪黑素对大鼠急性脊髓损伤后HO-1因子表达的影响

目的研究褪黑素(MT)对大鼠急性脊髓损伤(SCI)后血红素氧合酶(HO-1)表达的影响,探讨MT对SCI的作用机制。方法选取108只成年SD大鼠,随机分为3组:对照组、损伤组、MT组。对照组仅行椎板切除,暴露T_(11)~T_(12)节段,不损伤脊髓神经。损伤组和MT组用改良的Allen’s法建立T_(11)~T_(12)SCI模型,并分别在SCI后10 min腹腔注射MT溶剂和MT制剂。各组于术后6、12、24 h随机选取12只大鼠处死,取T_(11)~T_(12)节段脊髓标本。其中6个标本液氮保存,以备检测HO-1 mRNA的表达水平,另外6个标本甲醛固定,以备HE染色和免疫荧光切片,观察SCI及修复情况。结果术后各时间点大鼠脊髓的HO-1 mRNA水平比较:MT组最高,损伤组次之,对照组最低,在12 h和24 h时间点上各组间差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色切片观察SCI程度:对照组最轻,MT组次之,损伤组最重。免疫荧光显示:MT组HO-1表达最多,损伤组次之,对照组最少。结论 MT能在大鼠急性SCI后促进HO-1表达,并减轻损伤脊髓的炎性反应。     

慢性脑缺血对大鼠认知功能障碍及影响机制研究

目的观察慢性脑缺血（CCH）过程中大鼠认知功能的变化、前额叶皮层和海马神经元组织学改变以及胆碱能系统改变,探讨慢性脑缺血致大鼠认知障碍的影响机制。方法选取大鼠分组后,应用Morris水迷宫定位航行实验和空间搜索实验观察各组大鼠学习记忆功能变化;苏木精-伊红染色观察前额叶皮层和海马组织学改变;免疫组织化学方法显示前额叶皮层和海马胆碱乙酰转移酶和烟碱型乙酰胆碱受体α4阳性细胞表达。结果①Morris水迷宫测试：a.定位航行实验：各组大鼠逃避潜伏期随天数增加而缩短,逃避潜伏期有差异性;b空间搜索实验：CCH各组大鼠在中环停留时间随低氧时间延长而减少;②与对照组比较,CCH大鼠前额叶皮层和海马变性坏死神经元增多,随着低氧时间延长而加重;③CCH各组大鼠前额叶皮层和海马ChAT阳性表达随低氧时间延长而下降;④CCH各组大鼠前额叶皮层和海马nAChRα4阳性表达随着低氧时间延长而下降。结论慢性脑缺血大鼠认知功能障碍随低氧时间延长呈加重趋势。慢性脑缺血致大鼠认知功能障碍的机制与大鼠前额叶皮层和海马神经元组织学改变和胆碱能系统改变有关。     

慢性心力衰竭患者氧化应激及血清GDF11、HO-1水平与心功能指标的相关性分析

目的 探讨慢性心力衰竭（CHF）患者生长分化因子11（GDF11）、血红素加氧酶-1（HO-1）、氧化应激水平与心功能指标的相关性。方法 选取2021年2月—2023年2月川北医学院附属医院收治的134例CHF患者为研究组,并根据纽约心脏协会心功能分级将其分为3个亚组［Ⅱ级组（47例）、Ⅲ级组（61例）、Ⅳ级组（26例）］。另选取同期于该院体检的70例健康者为对照组。比较研究组与对照组、不同病情严重程度CHF患者的血清GDF11、HO-1、氧化应激指标［谷胱甘肽过氧化物酶3（GSH-Px3）、总抗氧化能力（T-AOC）、晚期蛋白氧化产物（AOPP）、过氧化脂质（LPO）］及心功能指标［脑钠肽（BNP）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）、左室舒张末期内径（LVEDD）、左心室质量指数（LVMI）、左心室射血分数（LVEF）］;采用Pearson法分析GDF11、HO-1、氧化应激水平与心功能指标的相关性。结果 研究组GDF11、HO-1水平高于对照组（P <0.05）。研究组GSH-Px3、T-AOC水平低于对照组,AOPP、LPO水平高于对照组（P <0.05）。研究组BNP、cTnI、LVEDD、LVMI水平高于对照组,LVEF水平低于对照组（P <0.05）。Ⅱ级组GDF11、HO-1、AOPP、LPO、BNP、cTnI、LVEDD、LVMI水平低于Ⅲ级组与Ⅳ级组（P <0.05）,Ⅲ级组GDF11、HO-1、AOPP、LPO、BNP、cTnI、LVEDD、LVMI水平低于Ⅳ级组（P <0.05）,Ⅱ级组GSH-Px3、T-AOC、LVEF水平高于Ⅲ级组与Ⅳ级组（P <0.05）,Ⅲ级组GSH-Px3、T-AOC、LVEF水平高于Ⅳ级组（P <0.05）。Pearson相关性分析显示,GDF11、HO-1、AOPP、LPO与BNP、cTnI、LVEDD、LVMI呈正相关,与LVEF呈负相关（P <0.05）;GSH-Px3、T-AOC与BNP、cTnI、LVEDD、LVMI呈负相关,与LVEF呈正相关（P <0.05）。结论 CHF患者GDF11、HO-1、氧化应激水平、心功能均处于异常状态,且GDF11、HO-1、氧化应激水平与心功能之间存在密切联系。     

富氢液联合浅低温对大鼠脑缺血再灌注海马氧化应激水平的影响

目的在脑缺血再灌注过程中,富氢液和浅低温均可影响机体的氧化应激水平。探讨腹腔注射富氢液联合浅低温对大鼠脑缺血再灌注海马氧化应激水平的影响。方法 50只雄性SD大鼠随机分为5组(n=10):假手术组(S组)、四血管结扎模型组(C组)、富氢液+模型组(W组)、浅低温+模型组(P组)和低温+富氢液+模型组(WP组)。W和WP组在脑缺血再灌注即刻腹腔注射富氢液5 ml/kg,S、P和C组注射等容量等渗盐水。P和WP组通过全身物理降温15 min内将体温降至目标温度32～34℃,维持6 h,其余3组维持在37～38℃。所有大鼠在缺血再灌注6 h时处死,分离海马。苏木精-伊红染色(HE染色),观察海马神经元形态;免疫组化法观察血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达;化学分光光度计法测海马谷胱甘肽过氧化物酶(glutathion eperoxidase,GSH-Px)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性。结果与C组比较,P、W和WP组海马神经元结构排列紧凑、变性神经元减少;海马HO-1免疫阳性细胞增多。与C组比较,P、W、和WP组MPO含量降低(P<0.05),GSH-Px含量增高(P<0.05),WP组变化最明显。结论富氢液联合浅低温治疗可通过诱导海马HO-1蛋白表达、降低MPO和上调GSH-Px活性影响大鼠全脑缺血再灌注损伤氧化应激水平。     

携带血红素加氧酶1基因的重组腺相关病毒的制备

目的:制备携带大鼠血红素加氧酶1(rHO-1)基因的重组腺相关病毒(AAV)。方法:通过RT-PCR的方法,从大鼠脾脏组织中扩增rHO-1基因,克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV中构建重组质粒pSNAV-rHO-1,通过酶切和测序鉴定。利用Lipofectamine将pSNAV-rHO-1转染BHK-21细胞,G418筛选得到表达外源基因的细胞系BHK/rHO-1。用具有能表达Rap和Cap及包装重组AAV功能的一种重组单纯疱疹病毒HSV1-rc/△UL2分别感染这株细胞系后收获并纯化病毒,DNA斑点杂交检测重组病毒滴度。结果:扩增了rHO-1基因,测序证实与GenBank中的一致,病毒滴度为1.5×1015v.g/L。结论:成功获得了高滴度、高纯度的重组AAV-rHO-1,这为以后心血管系统疾病的基因治疗研究奠定了基础。     

血红素氧合酶-1对预防动脉粥样硬化及炎症的影响

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)抑制动脉粥样硬化进程的机制。方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组及氯血红素组。3月后观察主动脉形态学变化,ELISA法测定血中C-反应蛋白(CRP)及白介素-6(IL-6)水平,免疫组化法检测斑块内HO-1及巨噬细胞CD68的表达。结果:模型组及氯血红素组与对照组比较,CRPI、L-6、HO-1及CD68升高(P<0.05)。氯血红素组与模型组比较,主动脉内膜斑块面积占内膜面积比(RAAPI)显著减少(P<0.01),HO-1升高(P<0.01),CRPI、L-6及CD68降低(P<0.05)。结论:HO-1对动脉粥样硬化有明显的预防作用,这种作用可能是通过抑制炎症因子及巨噬细胞数量,减少炎症反应来实现的。     

姜黄素对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及对血红素加氧酶表达的影响

目的:探讨姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变的作用及对肾脏血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:诱导大鼠糖尿病后,随机分为对照组(n=10)及治疗组(n=10),比较各组的血生化、尿微量白蛋白排泄量。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HO-1 mRNA。用免疫组化检测HO-1蛋白的定位和表达水平。结果:糖尿病大鼠内生肌酐清除率(Ccr)、尿微量白蛋白(mAlb)排泄量较正常鼠增多,HO-1 mRNA和蛋白表达无明显上调。HO-1蛋白主要分布于肾小管、髓质的集合管及髓袢的上皮细胞中,肾小球表达极少。姜黄素治疗能明显降低Ccr,减少mAlb排泄量,诱导HO-1 mRNA和蛋白的表达。结论:姜黄素对糖尿病大鼠肾脏病变具有明显的防治作用,其机制可能是通过诱导HO-1的表达。     

血红蛋白加氧酶1与脂肪肝缺血/再灌注损伤

脂肪肝肝移植术后原发性肝无功能发生率较高,目前认为主要是因为移植术后脂肪肝缺血/再灌注损伤程度较重造成的。血红蛋白加氧酶1(HO-1)是血红蛋白代谢为胆绿素、一氧化碳和二价铁离子过程中的限速酶。研究发现,HO-1过表达能降低肝移植中脂肪肝供肝的缺血/再灌注损伤,提高移植物的存活率。本文综述HO-1降低脂肪肝缺血/再灌注损伤的可能机制。     

氧应激在TNFα诱导血管内皮细胞HO-1基因表达中的作用

目的探讨氧应激在肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导血管内皮细胞血红素氧化酶-1(HO-1)基因表达中的作用。方法RT-PCR法检测小鼠脑血管内皮细胞(BVEC)中HO-1mRNA表达,用氧化-还原敏感的荧光探针2,7-Dichlorofluorescein(DCF)检测细胞内氧化-还原水平。结果TNFα(5ng/ml)作用24h后,BVEC中HO-1的mRNA表达增加136%,但小分子抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC,20mmol/L)能明显阻断TNFα对HO-1mRNA表达的诱导作用;TNFα处理24hBVEC的氧应激水平明显升高,但可被NAC明显抑制(P<0.05)。结论ROS部分介导了TNFα对HO-1基因表达的诱导作用。     

还脑益聪方对早期认知功能障碍大鼠海马病理形态、炎症因子和氧化应激指标的影响

目的观察还脑益聪方对复合因素所致早期认知功能障碍大鼠行为学及海马病理形态、炎症因子和氧化应激指标的影响。方法采用皮下注射D-半乳糖及饲喂半高脂饲料的方法造成早期认知功能障碍大鼠模型,并以还脑益聪方灌胃治疗。采用Morris水迷宫试验观察大鼠行为学变化,HE染色及透射电镜观察海马病理形态学改变;应用放射免疫法检测大鼠海马匀浆白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,酶联免疫法(ELISA法)测定氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量,免疫比色法测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和谷胱甘肽S转移酶(GSH-ST)含量。结果还脑益聪方能增加模型大鼠水迷宫试验穿台次数(P0.01),减轻模型大鼠海马神经细胞损伤、线粒体病变及胶质细胞增生,降低海马匀浆TNF-α及ox-LDL含量(P0.05,P0.01)。结论还脑益聪方能提高早期认知功能障碍模型大鼠的空间学习记忆能力,这可能与其抑制脑内炎症反应与氧化应激,从而减轻海马组织病理变化有关。     

黄连解毒汤通过抑制血红素加氧酶-1发挥逆转慢性粒细胞白血病加速期的作用

目的:探讨黄连解毒汤(HLJDT)对慢性粒细胞白血病(CML)加速期的治疗作用,以及HLJDT及其主要活性成份之一的黄芩素对血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法:通过对1例CML的患者口服HLJDT治疗6个月的观察,外周血检查和骨髓穿刺分析治疗前后外周血象和骨髓象的变化;流式细胞术分析HLJDT和黄芩素对CML细胞系K562的活细胞计数的影响;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测患者骨髓单个核细胞HO-1基因的表达;蛋白印记检测经黄芩素处理后K562细胞HO-1蛋白的表达水平。结果:口服HLJDT对CML加速期的治疗有效,可明显降低骨髓和外周血原始粒细胞和早幼粒细胞数,使疾病重新回复到慢性期;并且在体内能降低肿瘤细胞HO-1基因的表达,在体外,HLJDT能抑制K562细胞的增殖,且其主要成份黄芩素亦有相同作用,并且下调HO-1蛋白的表达。结论:HLJDT具有治疗CML加速期的作用,其机理与抑制HO-1基因和蛋白的表达有关;因此,HLJDT具有潜在的临床应用价值。     

血红素加氧酶1基因转染对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的影响

目的:观察重组腺相关病毒介导血红素加氧酶1(AAV-rHO-1)基因在大鼠心肌的表达情况,及其对大鼠心肌离体缺血再灌注损伤的影响。方法:雄性SD大鼠30只随机分成3组,对照组(C组,n=6),缺血再灌注组(I/R组,n=12),AAV-rHO-1基因组(A-r组,n=12)。基因转染3个月后,半定量RT-PCR检测转染基因的表达情况,并建立大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,C组持续灌注100 min,其他各组均平衡15 min,停灌40 min与再灌注45 min,记录各组心功能变化,测定冠脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性,测定再灌注后45 min时的心肌超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,同时取每组大鼠心肌检测梗死面积。结果:经半定量RT-PCR分析显示,血红素加氧酶在A-r组心肌中有效表达。离体心肌Langendorff灌注时,与I/R组比较,A-r组在复灌后各时间点心功能明显增强(P<0.01),复灌后冠脉流出液LDH活性降低(P<0.01),复灌后45 min后心肌MDA含量降低(P<0.01),SOD活性增高(P<0.01),梗死面积较小(P<0.01)。结论:腺相关病毒携带的血红素加氧酶1基因能有效地转染心肌组织,并在体内稳定表达,AAV-rHO-1转染预处理对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤有显著保护作用。     

慢性应激对大鼠下丘脑CRHR1基因启动子区域DNA甲基化的作用

目的:研究慢性应激所致的动物下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)表达和基因启动子区域甲基化状态关系。方法:将大鼠随机分为抑郁组和对照组各9只,抑郁组进行21d的慢性不可预见性温和应激。进行行为学观察,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹和亚硫酸氢盐修饰后测序分别检测mRNA及蛋白质表达和DNA甲基化。结果:抑郁组行为学有所改变,mRNA及蛋白质表达升高,均与对照组有显著差异,而DNA甲基化没有明显不同。结论:慢性应激后,CRHR1表达上调,但其非由DNA甲基化机制调控。     

细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1对大鼠缺血心肌的转导及影响

目的:探讨细胞穿透肽PEP-1介导血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法:制备融合蛋白PEP-1/HO-1,通过酶联免疫吸附法检测给予融合蛋白后各时间点血清HO-1水平,探讨动物实验给予融合蛋白的最佳时间点。健康雄性SD大鼠18只,体重220-280g,随机分为3组:正常对照组(C组,n=6)、缺血再灌注组(IR组,n=6)和PEP-1/HO-1处理+缺血再灌注组(HO组,n=6)。制备心肌缺血再灌注损伤模型,于再灌注结束后,测定血清肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性及心肌梗死面积。结果:给予融合蛋白后,血清HO-1蛋白浓度在1h和3h达峰值。与C组比较,IR组血清CK和LDH活性升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,HO组血清CK和LDH活性降低,心肌梗死面积减少(P<0.05)。结论:细胞穿透肽PEP-1介导的HO-1对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。