苦木碱F通过miR-331-3p调控宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的机制研究

目的:探讨苦木碱F调控miR-331-3p在宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡中的作用及机制。方法:MTT法检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响; 流式细胞术检测苦木碱F对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响; RT-qPCR检测苦木碱F处理HeLa细胞后miR-331-3p的表达; miR-331-3p mimic或miR-331-3p inhibitor 转染HeLa细胞,经苦木碱F处理后检测HeLa细胞的增殖及凋亡情况; 使用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-331-3p与蛋白酶体活化复合物3(PSME3)的靶向关系; Western blot检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白表达情况。结果:苦木碱F能显著抑制HeLa细胞增殖,促进凋亡,且具有浓度依赖性(P<0.01); 苦木碱F显著上调HeLa细胞中miR-331-3p的表达(P<0.01); miR-331-3p mimic能显著抑制HeLa细胞增殖能力,促进细胞凋亡; miR-331-3p inhibitor能显著降低苦木碱F对HeLa细胞增殖的抑制以及凋亡的促进作用(P<0.05); 生物信息学预测PSME3是miR-331-3p的靶基因之一,双荧光素酶报告基因结果显示miR-331-3p与PSME3 3'UTR靶向结合; 与苦木碱F+NC inhibitor +NC-siRNA组比较,苦木碱F+miR-331-3p inhibitor +NC-siRNA组中细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,β-catenin和Bcl-2蛋白水平升高,Bax蛋白水平降低,而敲低PSME3能逆转这一结果,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:苦木碱F通过介导miR-331-3p/PSME3轴抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进凋亡,发挥抗肿瘤作用。     

土槿皮乙酸体外诱导HeLa细胞凋亡

 目的研究土槿皮乙酸(Pseudolaric acid B)诱导HeLa细胞凋亡的作用,探讨其抗癌作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT 法)、形态学观察、DNA凝胶电泳及Western blot检测法。结果土槿皮乙酸可剂量-时间依赖性的诱导HeLa细胞凋亡,5μmol·L-1土槿皮乙酸处理24 h的细胞,Hoechst 33258荧光染色后有明显的凋亡小体出现;处理36 h的细胞,有明显的DNA ladder出现。Bcl-2蛋白表达量-时间依赖性地减少,Bcl-x_L蛋白表达无明显变化,而Bax和p53蛋白表达量-时间依赖性地增加。结论土槿皮乙酸对HeLa细胞的杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡,降低Bcl-2蛋白的表达和增加Bax,p53蛋白表达为其诱发HeLa 细胞凋亡的机制之一。     

Liquiritigenin induces mitochondria‐mediated apoptosis via cytochrome c release and caspases activation in heLa Cells

It has been demonstrated that many flavonoids possess a potent and broad spectrum of antitumor activity. Liquiritigenin is a flavanone extracted from Glycyrrhizae. This study investigated the effects of liquiritigenin on cell viability and apoptosis induction in human cervical carcinoma (HeLa) cells. The results show that liquiritigenin significantly suppressed cell proliferation in a dose‐ and time‐dependent manner in HeLa cells. In addition, liquiritigenin promoted apoptosis in HeLa cells, evidenced by apoptotic morphological changes and Annexin‐V binding. The apoptosis induction with liquiritigenin is associated with the up‐regulation of p53 and Bax, along with down‐regulation of Bcl‐2 and survivin. Finally, examination of the mitochondrial pathway of apoptosis revealed that cytochrome c is released from mitochondria to cytosol, associated with the activation of caspase‐9 and ‐3, and the cleavage of poly (ADP‐ribose) polymerase (PARP). Overall, the results indicate that liquiritigenin induces apoptosis in part via the mitochondrial pathway, which is associated with p53 up‐regulation, release of cytochrome c and elevated activity of caspase‐9 and ‐3 in HeLa cells. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

蟾毒灵诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的蛋白组学研究

目的:该文通过考察蟾毒灵(bufalin)处理人宫颈癌HeLa细胞株后对细胞蛋白质表达谱的影响,寻找蟾毒灵在HeLa细胞中的可能作用靶点。方法:通过MTT检测细胞活性确定蟾毒灵的IC50,并通过流式细胞术和Hoechst 33342染色检测蟾毒灵诱导细胞凋亡。应用蛋白质组学技术寻找差异表达蛋白点并进行鉴定,用Western blotting试验进行确认。结果:蟾毒灵具有较强的细胞毒作用,IC50(154±21.5)nmol.L-1,可以诱导HeLa细胞发生凋亡。蛋白组学的结果显示蟾毒灵处理组与对照组相比有11个差异表达蛋白,其中9个蛋白点发生了下调;2个蛋白发生了上调。这些蛋白可能是蟾毒灵在HeLa细胞中的作用靶点。Western blotting分析显示heat shock protein 27,vimentin,HNRPK在蟾毒灵处理后的表达调节结果与双向电泳的结果吻合。结论:蟾毒灵可以诱导人宫颈癌HeLa细胞发生凋亡,其凋亡诱导作用可能是多个靶点蛋白共同参与的结果。     

黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用研究

目的研究黄连素对人宫颈癌Hela细胞株的体外作用，探讨其可能的作用机制。方法采用MTT法测定细胞生长抑制率；原位末端标记技术法（TUNEL）检测细胞凋亡率；免疫细胞化学法检测药物作用前后细胞（cox-2）、Bcl-2蛋白水平表达的变化。结果黄连紊在体外能以时间和剂量依赖的方式对宫颈癌Hela细胞产生细胞毒作用并诱导其凋亡；免疫细胞化学法证实黄连素作用Hela细胞后Bcl-2蛋白表达下调，COX-2的表达无明显变化。结论黄连素在俸外对宫颈癌Hela细胞具有生长抑制作用，并可诱导细胞凋亡，其诱导凋亡作用可能与Bcl一2蛋白表达下调有关。     

掌叶半夏提取物的有效部位对宫颈癌细胞株HPVE6和P53基因表达的影响

目的:观察中药掌叶半夏提取物的有效部位(PE)对CaSki和HeLa细胞人乳头瘤病毒(HPV)E6基因和P53基因表达的影响,进一步阐明PE的抑癌机制。方法:0.15mg/mL的PE作用于CaSki和HeLa细胞24h后,采用RT-PCR方法检测两种细胞HPVE6和P53 mRNA表达的变化,采用Western Blot检测CaSki和HeLa细胞HPVE6、P53蛋白表达的变化。结果:0.15mg/mL的PE作用24h后CaSki和HeLa细胞HPVE6 mRNA和蛋白的表达均明显下降,而P53mRNA和蛋白的表达均明显上升(P0.05,P0.01)。结论:PE可以明显抑制CaSki和HeLa宫颈癌细胞株HPVE6基因的表达、促进其P53基因的表达,这可能是PE抗宫颈癌作用的关键环节。     

Involvement of the Bcl-2 family members in Pinus massoniana bark extract induced apoptosis in HeLa cells

Pinus massoniana bark extract (PMBE) contains a variety of flavonoids whose antioxidant properties have been confirmed in vitro. This study was undertaken to evaluate the cytotoxic effects and the mechanism of cell death on the PMBE-treated human cervical cancer cell line, HeLa. PMBE treatment led to cell growth inhibition in a dose- and time-dependent manner, and PMBE-induced apoptosis was confirmed by DAPI staining, TUNEL assays and sub-G1 phase accumulation. Cell cycle was also arrested in G2/M phase. Immunoblotting analysis showed that cytochrome c was released, the protein expression of Bax was increased, the protein expression of Bcl-2 was down-regulated and caspase-9 and -3 were activated in PMBE-treated HeLa cells. Taken together, PMBE inhibited proliferation, induces apoptosis and causes cell cycle arrest in HeLa cells, indicating that PMBE may be a potential therapeutic agent for cancer.     

桂枝茯苓胶囊提取物的体外抗肿瘤活性及机制

 目的 比较桂枝茯苓胶囊不同溶剂提取物的体外抗肿瘤活性,并探讨其可能的机制。方法 采用四甲基偶氮唑蓝法观察桂枝茯苓胶囊不同溶剂提取物对HeLa和C33A 2种人宫颈癌细胞株增殖的影响,以酶联免疫吸附法测定蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinases, PTKs)活性,用二苯代苦味肼基 (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH) 清除率方法测定体外抗氧化活性。结果 桂枝茯苓胶囊的多种溶剂提取物具有良好的人宫颈癌细胞生长抑制活性。对HeLa细胞的抑制强度最大者为正丁醇部分-30%乙醇洗脱物 (提取物9),IC₅₀为（7.09±1.25）μg·mL^-1,对C33A细胞的抑制强度最大者为乙酸乙酯部分-丙酮洗脱物 (提取物5),IC₅₀为（5.14±0.70）μg·mL^-1。结论 桂枝茯苓胶囊提取物在体外显示不同的抗肿瘤活性,抑制蛋白酪氨酸激酶活性以及抗氧化作用可能是其提取物抗肿瘤作用的机制之一。     

阳和汤含药血清通过p38/STAT3信号通路对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的:以有丝分裂原激活蛋白激酶(p38)/信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路为基础,探究阳和汤含药血清对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响。方法:制备含生药1 g·m L~(-1)的阳和汤药液,将SD大鼠随机分为空白组(蒸馏水),阳和汤高、中、低剂量组(24,12,6 g·kg~(-1)),灌胃后制备阳和汤含药血清,用10%含药血清干预MCF-7细胞,通过细胞增殖及细胞毒性实验(CCK-8)检测阳和汤含药血清对MCF-7细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡情况;通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p38和STAT3蛋白的表达情况;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测B细胞淋巴瘤/白血病-xl(Bcl-xl)及生存素(Survivin)mRNA表达的情况。结果:CCK-8实验显示,与空白组比较,阳和汤含药血清抑制MCF-7细胞增殖,且呈时间与剂量依赖性。其中高剂量组抑制作用最为明显,不同时间抑制率分别达到38%,45%,54%(P0.01);流式细胞术实验表明,与空白组比较,阳和汤含药血清中、高剂量组细胞凋亡率明显增加,且呈剂量依赖性,凋亡率分别达11.6%,16.5%(P0.05,P0.01);Western blot表明,与空白组比较,阳和汤中、高剂量含药血清组p38,STAT3蛋白表达减少(P0.01),且呈剂量依赖性;Real-time PCR实验表明,与空白组比较,阳和汤中、高剂量含药血清组Bcl-xl,Survivin mRNA表达减少(P0.05,P0.01),且呈剂量依赖性。结论:阳和汤含药血清可以促进乳腺癌MCF-7细胞的凋亡,可能与p38/STAT3信号通路有关。     

bcl-2、p53蛋白与喉鳞癌的临床相关性研究

目的探讨bcl-2及p53蛋白在喉鳞癌患者中的表达及与喉鳞癌的病理分级、临床分期和患者生存率间的相互关系。方法采用免疫组化法测定43例喉鳞癌石蜡切片中bcl-2及p53蛋白的表达。结果43例喉鳞癌中bcl-2、p53蛋白的表达率分别为88%(38/43)和33%(16/43)。结论bcl-2、p53蛋白表达与喉鳞癌的病理分级、临床分期、颈淋巴结转移和患者的3,5 a生存率有一定关系,可作为评定喉鳞癌的进展、预测其转移与预后的指标。bcl-2、p53在喉鳞癌患者中的表达具有一定的相关性。     

Rhein lysinate induced S-phase arrest and increased the anti-tumor activity of 5-FU in HeLa cells

Rhein lysinate (RHL), easily dissolved in water, is one of the anthraquinones, and has been shown to have anti-tumor activity in different human cancer cell lines. In the present study, we observed that RHL could cause vacuolar degeneration in HeLa cells, which was not observed in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and other cell lines (SKOV-3 and SK-BR-3). Therefore, the purpose of this study was to investigate the anti-tumor effect of rhein lysinate on human cervix cancer HeLa cells. The results indicated that RHL could induce HeLa cell S-phase arrest and RHL (higher than 80 μM) also induced HeLa cell G2/M-phase arrest in a dose-dependent manner. Compared to the HeLa cells, RHL induced HUVECs G1-phase arrest at all dose levels tested in a dose-dependent manner. Treatment with RHL led to a significant S or G2/M-phase arrest through promoting the expression of p53 and p21 and the phosphorylation of p53. Moreover, 80 μM RHL could increase 5-FU anti-tumor activity. In conclusion, RHL could be a novel chemotherapeutic drug candidate for the treatment of human cervix cancer in the future.     

土荆皮酸诱导宫颈癌细胞系HeLa凋亡的实验研究

目的研究土荆皮酸(PAB)对体外培养的HeLa细胞的生物学效应和作用机制。方法用MTT法、流式细胞术、透射电镜检测体外培养的HeLa细胞在PAB作用下的增殖抑制及凋亡程度,用RT-PCR法检测p53/bcl-2/bax的表达水平。结果(1)PAB对HeLa细胞的增殖抑制作用随浓度升高而明显增强,其IC_(50)约10μmol/L。(2)流式细胞术证实10μmol/L PAB呈时间依赖性改变细胞周期分布,一方面降低G_0/G_1期的细胞比例,另一方面增高G_2/M期细胞的比例。(3)RT-PCR法显示HeLa细胞在10μmol/L PAB作用12、24、48 h均显示bax上调和bcl-2的下调,p53则未检测到表达。结论在体外PAB能抑制HeLa细胞增殖,诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与bax的上调和bcl-2的下调相关。     

皂角刺抑制小鼠宫颈癌U14的生长及对增殖细胞核抗原和p53表达的影响

目的:研究皂角刺醇提物对小鼠宫颈癌U14生长的抑制作用及对增殖细胞核抗原(PCNA)和突变型p53蛋白表达的影响。方法:观察皂角刺醇提物对U14实体瘤和腹水瘤的抑瘤率和生命延长率,并用免疫组化SP法检测PCNA和突变型p53蛋白阳性细胞表达数。结果:以阴性对照组为基数,皂角刺醇提物3个剂量组及环磷酰胺(CTX)阳性对照组实体瘤各组抑瘤率分别为47.44%,59.49%,63.92%,73.42%(P<0.01);腹水瘤各组生命延长率分别为52.21%,67.26%,78.76%,95.58%(P<0.01)。同时各组药物对PCNA和突变型p53蛋白的表达水平也有不同程度抑制作用(P<0.01,P<0.05)。结论:皂角刺对小鼠宫颈癌U14的生长有一定的抑制作用,其机制可能与抑制PCNA和突变型p53蛋白的表达有关。     

二脱甲氧基姜黄素对体外培养宫颈癌Hela细胞Caspase-8的影响

目的:观察二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌Hela细胞Caspase-8的作用。方法:MTT法检测二脱甲氧基姜黄素对体外培养人宫颈癌细胞Hela的抑制作用;分光光度计检测其对Caspase-8酶活性的影响;免疫组化法检测其对人宫颈癌细胞Hela Caspase-8蛋白表达的影响。结果:二脱甲氧基姜黄素对人宫颈癌细胞Hela有明显的抑制作用(P0.001),且呈剂量关系,与姜黄素有显著差异(P0.001);二脱甲氧基姜黄素能增强Caspase-8酶活性,增强Caspase-8蛋白的表达。结论:二脱甲氧基姜黄素能激活Caspase-8蛋白活性,这可能也是其体外抑制宫颈癌细胞Hela生长的机理之一。     

基于3D微流控芯片分析鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa的药理作用

目的:研究鸡血藤总鞣质的化学成分,并分析该有效部位对宫颈癌细胞HeLa的药效与作用机制,为鸡血藤抗宫颈癌提供实验依据。方法:运用UPLC-Q-TOF/MS对鸡血藤鞣质类化学成分进行定性分析。将不同质量浓度的鸡血藤总鞣质作用于宫颈癌细胞HeLa,通过3维(3D)微流控芯片筛选合适的给药浓度及时间。运用流式细胞仪测定鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa周期与凋亡的影响,分别应用Flow Jo v10. 0. 7及ModFit LT 3. 2软件进行分析。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)与半胱天冬酶-3(Caspase-3)因子的含量变化。结果:鉴定并推断了鸡血藤总鞣质中15种成分。最终确定鸡血藤总鞣质低、中、高给药质量浓度分别为0. 5,1. 0,2. 0 g·L-1,36 h为最佳给药时间。经鸡血藤总鞣质作用后宫颈癌细胞HeLa早凋与晚凋比例明显增加,宫颈癌细胞HeLa DNA合成前期(G0/G1期)明显增加,DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2/M期)减小。经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中VEGF-A因子显著降低,Caspase-3因子显著增加。结论:鸡血藤中含有丰富的鞣质类成分,此类成分对宫颈癌细胞HeLa有明显的抑制其增殖并促进其凋亡的作用,为该有效部位的后续研究与开发提供了实验依据。     

白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P＜0.01),抑制率最高可达54%.Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率最高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象.GBC细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.结论:Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.     

斑蝥酸钠对人胃癌细胞BGC823中Bcl-2、p53基因表达的影响

目的研究斑蝥酸钠对人胃癌细胞BGC823中Bc1-2、p53基因表达的影响。方法采用流式细胞仪检测、分析斑蝥酸钠处理前后人胃癌细胞BGC823中Bc1-2、p53基因表达的变化。结果不同剂量斑蝥酸钠作用24h均可使Bc1-2、p53基因在人胃癌细胞BGC823中的表达下降。结论斑蝥酸钠可抑制Bc1-2、p53基因在人胃癌细胞BGC823中的表达。     

青蒿酯钠诱导人肿瘤细胞凋亡及其分子机制的探讨

目的 研究青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡作用及探讨青蒿酯钠诱导人肝癌细胞凋亡的分子机制.方法 肝癌细胞(BEL-7402)经药物处理后,用荧光显微镜,透射电镜和流式细胞仪分析诱导凋亡作用,采用Western blot检测p53,p21和bcl-2.结果 与对照组相比,经青蒿酯钠处理后,肝癌细胞中p53,p21蛋白表达水平无明显变化,而bcl-2蛋白表达水平降低.结论 青蒿酯钠可诱导人肝癌细胞(BEL-7402)凋亡,其凋亡的分子机制是p53非依赖性的,即与p53,p21无关,而与凋亡调节基因bcl-2下调有关.