Podocin与糖尿病肾病

Podocin是新近发现的肾小球裂隙隔膜上的一个蛋白,参与肾小球滤过屏障的形成并维持其正常功能。在糖尿病肾病(DN)患者中存在其编码基因nphs2的异常和podocin蛋白的表达下降。Podocin蛋白表达下降可使nephrin诱导的肾小球足细胞内信号转导功能障碍,肾小球足细胞减少,肾脏裂隙隔膜结构与屏障功能的完整性破坏,肾小球蛋白滤过增加。Podocin在DN的发生、发展中可能起关键作用。对podocin的进一步研究可能对DN的诊治有重要的指导意义。     

NPHS2及其基因产物Podocin与激素抵抗的肾病综合征

2000年在激素抵抗的肾病综合征中新克隆的NPHS2是一种结构基因，含有8个外显子，其编码蛋白podocin特异地表达于肾脏足突细胞，是裂孔隔膜相关的一种重要膜蛋白，属于stamatin蛋白家族，含有383个氨基酸残基，由于NPHS2突变造成裂孔隔膜功能异常，引起大量蛋白尿，不仅是家族性激素抵抗的肾病综合征、而且是散发性激素抵抗的肾病综合征的常见病因，该基因的发现不仅有助于阐明肾小球滤过屏障的结构和功能，而且有助于激素抵抗的肾病综合征预后的判断和治疗方案的选择。     

α3β1整合素与肾小球足细胞脱落的研究进展

肾小球是肾脏滤过单位,其滤过功能与滤过屏障密切相关.肾小球滤过屏障可有效阻止白蛋白等大分子量物质进入尿液,其结构和功能的改变是蛋白尿产生的病理生理基础.肾小球滤过屏障由内而外分为三层:①首先是带窗孔的肾小球内皮细胞;②其次为肾小球基底膜(GBM),这是一高度水化的胶原网,对白蛋白及其他血浆大分子物质兼有分子及电荷屏障作用,GBM含有紧密交联的层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-collagen)、纤维连接蛋白(FN)和硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG),GBM中主要的HSPG是集聚蛋白(agrin),这些HSPG构成GBM的高度阴电荷;③足突(FP)及覆盖于FP裂隙间的裂孔隔膜(SD).足细胞作为肾小球滤过膜的重要组成部分,在维持肾小球正常滤过方面具有至关重要的作用.足细胞从GBM上脱落会导致肾小球滤过屏障的完整性遭到破坏.足细胞通过许多分子锚定于GBM上,如:α3β1整合素、αβ蛋白聚糖复合体(αβdystroglycan complex)、辅肌动蛋白(α-actinin)、组织蛋白酶-L(cathepsin-L)、尿激酶纤维蛋白酶原激活剂受体(UPAR)、磷酸二酯酶抑制剂(B7-1)等[1～5],其中α3β1整合素与足细胞脱落之间的关系最近成为研究热点.本文就α3β1整合素与足细胞脱落的相互关系作一综述.     

冬虫夏草对DN大鼠肾足细胞的保护作用观察

目的观察冬虫夏草对糖尿病肾病（DN）大鼠肾足细胞的保护作用,并探讨其机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、DN模型组（B组）、冬虫夏草治疗组（C组）,各20只。B、C组建立DN模型,C组给给予冬虫夏草菌粉5g／（kg·d）每日灌胃。8周后观察24h尿白蛋白排泄量（UAER）,肾小球、肾小管形态学变化,足细胞超微结构变化,以及肾皮质中Nephfin和Podocin蛋白分布情况。结果与A组比较,B、C组24hUAER明显增高（P均〈0．01）,肾小球、小管间质及足细胞病变明显,肾组织中Nephrin和Podocin分布减少（P均〈0．01）。与B组比较,C组24hUAER明显减少,肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻（P均〈0．01）,肾组织中Nephrin和Podocin蛋白分布有明显增加（P均〈0．01）。结论冬虫夏草具有保护及修复DN大鼠肾足细胞的作用,其机制可能与其上调肾组织中Nephrin和Podocin蛋白表达有关。     

足细胞损伤与糖尿病肾病

糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病的主要并发症。1936年Kimmelstiel等[1]第一次描述DN时,系膜基质增多和肾小球基底膜(glomerular basement mem-brane,GBM)增厚就被描述为DN的主要病理表现。研究也证实,系膜增生与蛋白尿、肾功能恶化密切相关。但是,系膜增生并不能解释蛋白尿的发生,因为由肾小球内皮细胞、GBM、足细胞构成的肾小球滤过屏障的损伤才是蛋白尿的根源。事实上,肾小球内皮细胞和GBM参与了DN蛋白尿的发生,但两者均是有孔的,均允许某些蛋白通过[2]。因此,足细胞构成了蛋白滤过的最后一道屏障,但其在DN中的生物…     

足细胞与蛋白尿发病机制的研究进展

蛋白尿是肾脏疾病最常见的表现之一,其发生与肾小球滤过屏障的异常有密切关系。肾小球滤过屏障由毛细血管内皮细胞、肾小球基底膜(GBM)及脏层上皮细胞即足细胞组成。肾小球滤过膜具有电荷屏障和孔径屏障功能,任一屏障损伤均会产生蛋白尿。足细胞位于GBM最外侧,是避免机体蛋白丢     

Nephrin与糖尿病肾病及肾素血管紧张素系统的关系

Nephfin为肾小球足突细胞裂孔隔膜的重要组成成分,在维持肾小球滤过屏障的结构和功能方面起关键作用。研究发现nephrin分布和表达异常将导致不同程度蛋白尿,糖尿病肾病中蛋白尿也与nephrin异常有关。阻断肾素一血管紧张素系统可缓解蛋白尿并恢复Nephrin的正常表达,这可能是血管紧张素转移酶抑制剂及血管紧张素受体阻断剂缓解蛋白尿的机制之一。     

导致家族性局灶节段性肾小球硬化新基因--TRPC6

蛋白尿是肾脏疾病最常见的临床症状之一。近年来，Nephrin、Podocin、CD2AP和α-actinin-4等重要足细胞结构蛋白和细胞骨架分子的确立，为肾小球性蛋白尿发生机制的研究提供了新的思路。然而，由于蛋白尿临床病理以及遗传背景的异质性，其发生机制尤其是分子机制仍未完全阐明。2005年，Winn和Reiser研究组又确定了一个导致家族性局灶节段性肾小球硬化（FSGS）的基因——TRPC6，其编码蛋白瞬时受体电位阳离子通道蛋白（transient receptor potential cation channel 6，TRPC6）是一个非选择性阳离子通道，新近发现其在足细胞也有表达，而且和裂孔隔膜分子Nephrin以及Podocin间存在相互作用，这一发现将足细胞结构蛋白和离子通道联系起来，丰富了足细胞分子网络，拓宽了对肾小球性蛋白尿发生机制的认识。因此，认识该基因、筛查可能存在的突变以及进一步研究该基因的功能将对探讨蛋白尿发生的分子机制以及防治蛋白尿具有新的意义。本文着重介绍TRPC6突变致家族性FSGS，同时对TRPC6在肾脏疾病领域的研究也作一概述。     

足细胞与糖尿病肾病关系的若干研究进展

足细胞在维持肾小球滤过屏障完整性及限制血浆蛋白的滤出方面发挥重要作用,足细胞的损伤可部分解释肾小球滤过屏障结构及功能的改变的原因。在糖尿病肾病早期,足细胞损伤已出现,并可进一步导致。肾脏损伤。本文就足细胞与糖尿病肾病中若干研究进展作简要综述。     

信号调节蛋白α在足细胞损伤中的作用

足细胞是肾小球中的一种终末分化的上皮细胞,相邻足细胞间足突相交错形成特殊的细胞间连接——裂孔隔膜。裂孔隔膜上分子的稳定对维持足细胞正常形态及肾小球滤过功能具有重要意义。信号调节蛋白α(SIRPα)是一种近期新发现的在裂孔隔膜上表达的跨膜蛋白,正常状态下被高度磷酸化后转导胞内信号并维持足细胞自噬活性,其磷酸化水平的改变可能会参与并介导足细胞损伤。本文将就SIRPα在足细胞损伤中的作用研究进展作一综述。     

Nephrin研究进展

蛋白尿是肾小球疾病最常见的表现,遗传性疾病如先天性肾病综合征或获得性肾小球疾病如微小病变肾病,膜性肾病、膜增生性肾炎均以大量蛋白尿为典型表现,人们早已认识到蛋白尿的发生与肾小球滤过屏障的异常有密切关系。肾小球滤过屏障包括三层：内皮细胞孔、肾小球基膜（GBM）和脏层上皮细胞足突裂隙,裂隙孔上有裂隙膜,研究表明虽然内皮细胞孔和GBM对大分子血管蛋白的滤过有重要的阻挡作用,但白蛋白滤出的最后屏障是足突裂隙膜,多年来,虽然对GBM的结构和成分已经有了较深入的认识,而有关足突裂隙膜的 分子组成一直知之甚少,直到近3年来,通过克隆先天性肾病综合征的致病基因并研究该基因的产物Nephrin,人们对裂隙的结构才有了进一步的了解,并且开始认识到裂隙膜Nephrin的异常,是蛋白尿发生的重要机制。     

糖尿病肾病患者肾小球中nephrin表达及其临床意义

目的检测糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中nephrin的表达,以探讨nephrin在DN患者蛋白尿发生机理中可能的作用.方法免疫荧光染色图像分析及RT-PCR法检测DN组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组肾小球组织nephrin的表达水平.结果DN组肾小球组织nephrin的表达量显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.DN组患者肾小球组织中nephrin的mRNA表达量也显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.结论DN患者肾小球组织nephrin的表达减少,可能影响肾小球滤过屏障的通透性,导致蛋白尿的产生.     

Nephrin，podocin及α-actinin在小鼠肾小足细胞系的表达与分布

目的：探讨nephrin，podocin及α-actinin在小鼠肾小球足细胞系(MPC5)的表达与分布，为进一步研究上述分子间的相互作用建立稳定的实验平台。方法：培养小鼠MPC5，以γ-干扰素诱导在33℃传代增生，继而在37℃培养两周使细胞分化成熟以用于实验研究。相差显微镜观察足细胞形态；免疫荧光染色观察nephrin，podocin，α-actinin及WTl在足细胞的分布；RT-PCR检测足细胞nephrin，podocin及α-actinin4的mRNA；免疫蛋白印迹检测nephrin，podocin，α-actinin及WTl蛋白。结果：成熟足细胞呈星形且有突起形成。免疫荧光及免疫蛋白印迹显示足细胞特异性的表达WTl分子。免疫荧光染色可见nephrin和podocin在足细胞内均呈线状分布于胞膜表面，α-actinin呈细丝状分布于胞质内及伸出的突起中。在mRNA水平及蛋白水平均检测到nephrin，podocin和α-actinin-4表达，其蛋白大小分别为180KDa，45KDa和100KDa。结论：首次在mRNA水平及蛋白水平证实了小鼠MPC5能够表达nephrin，podocin及α-actinin，为进一步研究这些分子间的相互作用奠定了基础。     

斑马鱼抗podocin抗体的制备、鉴定及在足细胞损伤模型中的应用

目的:利用合成的podocin多肽制备针对斑马鱼podocin的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用于斑马鱼足细胞损伤研究中。方法:(1)设计、合成斑马鱼podocin抗原多肽,将合成后的多肽与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联,免疫新西兰大白兔制备抗血清,protein A亲和纯化得到抗podocin多克隆抗体;(2)ELISA和免疫组化检测抗体效价及组织特异性;(3)构建足细胞特异性表达硝基还原酶(NTR)的转基因斑马鱼Tg(pod:Gal4;UAS:NTR-m Cherry),NTR/MTZ(甲硝唑)系统特异性地诱导足细胞损伤;用podocin反义寡核苷酸阻断正常斑马鱼胚胎podocin mRNA的翻译过程,利用抗podocin抗体对上述两种疾病模型进行免疫荧光染色以验证合成的podocin抗体能否应用于斑马鱼足细胞研究中。结果:(1)化学合成的多肽纯度为92.6%,达到免疫用抗原标准;(2)ELISA和免疫组化染色结果表明抗体效价分别达1∶5.12×105和1∶106;(3)免疫荧光染色表明无论在斑马鱼前肾还是中肾,podocin均特异性地表达于足细胞,且沿着毛细血管袢呈连续、线性分布,表明抗体具有良好的组织特异性;(4)MTZ诱导足细胞损伤24h后见podocin呈粗糙的颗粒状分布,48h后阳性表达面积占整个肾小球面积比值明显下降;(5)显微注射podocin反义寡核苷酸的斑马鱼胚胎出现心包水肿、体轴弯曲的表型,第3天时几乎无Podocin表达,随后逐渐恢复至正常,第5天时表达与正常组无异。结论:所制备的斑马鱼抗podocin抗体效价高、组织特异性强,能够反应足细胞损伤情况,是斑马鱼足细胞研究的有力工具。     

肾小球滤过屏障及相关疾病的再认识

<正>肾单位是肾脏行使其功能的基本单元,肾小球滤过屏障又是它发挥正常生理作用的重要防线。肾小球内皮细胞、肾小球基膜(GBM)和肾小球足细胞构成了滤过屏障这个有机整体,它们之间相互依从,协同完成肾小球滤过屏障的功能。有鉴于此,对其构成成分损伤导致的疾病成为肾脏疾病研究的重要领域之一,也相继提出了足细胞病、GBM相关疾病、Ⅳ型胶原相关疾病等概念。随着基因检测技术的快速发展和越来越多导致肾小球滤过屏障功能异常基因的发现,     

蛋白尿形成的分子基础

肾小球毛细血管壁 (ＧＣＷ )的滤过屏障由内皮细胞孔、肾小球基膜 (ＧＢＭ)和脏层上皮细胞足突组成。正常情况下 ,水和小分子溶质可自由通过滤过屏障 ,而蛋白质和其它大分子物质不能滤过。过去认为ＧＢＭ对大分子血浆蛋白的滤过有重要的阻挡作用 ,但最新的研究发现 ,白蛋白滤出的最后屏障是足突之间的裂隙膜 ,故肾小球脏层上皮细胞 (ＧＥＣ)是决定肾小球选择性滤过的关键。从经典生理学和微穿刺技术 ,发展到今天复杂的显微技术 ,多年来 ,人们一直对蛋白尿的形成机制进行研究。分子生物学研究的发展增进了人们对于蛋白尿的认识。本文主要综述…     

肾小管在糖尿病肾损害中的作用研究进展

糖尿病发展到一定时期，一部分患者会发展成为糖尿病肾病（ DN ）。肾小球及血管改变，特别是系膜细胞、滤过屏障及足细胞的改变，在DN的病理生理学中起着重要的作用。此外，高血糖也可对肾小管系统造成损伤，进一步引起肾功能下降。随着对糖尿病认识的深入，糖尿病中肾小管的损伤及其在病程发展过程中的意义逐渐受到重视。现就糖尿病肾损害发病机制作一综述。     

瞬时受体电位阳离子通道蛋白6与糖尿病肾病

糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)主要而严重的慢性并发症之一,30％ ～ 40％的终末期肾病患者来自于DN.最近的研究结果发现,瞬时受体阳离子通道蛋白6(TRPC6)与DN密切相关.TRPC6在肾小球表达异常,使系膜细胞及足细胞的钙内流异常而引起足细胞数量减少、肾小球高滤过、胞外基质(ECM)增多、肾小球基底膜(GBM)增厚,参与了DN的发生发展.我们现对TRPC6表达异常与DN的关系及治疗前景作一综述.     

糖尿病糖脂代谢紊乱与足细胞损害的实验研究

目的　观察糖脂代谢紊乱对糖尿病大鼠肾小球滤过屏障外层足细胞的影响 ,以探讨糖尿病肾病的发病机制。方法　采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型 ,喂养 5周后 ,测定血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、总胆固醇、血肌酐、尿素氮和尿白蛋白排泄率 ,应用免疫组化检测肾小球足细胞损伤标志蛋白 -desmin的表达 ,同时利用透射电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构。结果　糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,肾小球内desmin蛋白表达上调 ,足细胞部分足突融合 ;同时 ,两组间血甘油三酯水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　糖脂代谢紊乱可导致糖尿病大鼠肾小球滤过屏障外层足细胞明显损害 ,尿白蛋白排泄率增加 ,这可能是糖尿病肾脏损害、蛋白尿出现的机制之一     

肥胖大鼠尿液Podocin检测及意义

目的探讨检测高脂饮食诱导的肥胖大鼠尿液Podocin的变化。方法实验大鼠分为正常对照组(Con组)和肥胖组(Ob组)。在造模14 w时,分别用光学显微镜、电子显微镜方法观察肾脏形态变化,用免疫组织化学方法,检测肥胖大鼠肾小球足细胞Podocin的表达,用ELISA方法检测尿Podocin蛋白。结果 (1)0 w时Ob组与Con组比较性别、体重、身长、尾长,Lee指数等无差异,14 w时Ob组体重、身长,Lee指数明显高于Con组(P0.05)。(2)14 w时Ob组与Con组比较血肌酐(Cre)、血尿素氮(BUN)无差异(P0.05)。(3)Ob组在14 w时尿Podocin排泄明显多于Con组。(4)光镜下Ob组大鼠肾小球变化不明显。电镜下Ob组大鼠肾脏肾小球足细胞呈粗大状,足突轻度微绒毛化。(5)免疫组化染色Ob组大鼠肾小球足细胞Podocin的蛋白表达比Con组减少。结论肥胖大鼠肾小球足细胞Podocin的蛋白表达减少,但尿液Podocin排泄增多,有望成为肥胖导致肾损害的标志物。