多药耐药肺炎克雷伯菌尿液分离株检出gyrA基因新亚型

目的了解1株多药耐药肺炎克雷伯菌的遗传学背景。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1株多药耐药肺炎克雷伯菌可能存在的65种耐药相关基因:包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因及可移动的遗传元件(整合子、转座子、接合性质粒)遗传标记、抗菌制剂外排泵基因。结果该株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物基因检出blaTEM,耐氨基糖苷类药物基因检出aph(3′)-Ⅰ,耐喹诺酮类药物基因检出gyrA,Ⅰ类整合子遗传标记检出intⅠ1,转座子遗传标记检出tnp513,接合性质粒遗传标记检出trbC;抗菌制剂外排泵基因检出qacE△1-sul1,gyrA基因是新亚型(GenBank登录号:JN232083),83位密码子突变方式为TCG→TTC,导致氨基酸从丝氨酸(S)→苯丙氨酸(F);87位密码子突变方式为GAC→GCC,导致氨基酸从天冬氨酸(D)→丙氨酸(A)。结论携带多药耐药基因和抗菌制剂外排泵基因是这株肺炎克雷伯菌呈多药耐药的主要原因,携带多种可移动遗传元件使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。     

新生儿感染肺炎克雷伯菌的喹诺酮类耐药株gyrA基因研究

目的了解湖南地区新生儿感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA基因检测,采用法国生物梅里埃公司生产的VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定检测16种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果 gyrA基因耐药决定区的突变,其中17株都有第83位的改变,3株发现有第87位的改变。结论本省儿童感染肺炎克雷伯菌染色体介导喹诺酮类耐药基因gyrA基因突变情况十分普遍,监测其突变频率、位点对指导临床用药及耐药机制研究十分重要。     

多药耐药肺炎克雷伯菌毒力基因研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)中5种毒力基因存在情况,为临床治疗提供参考依据。方法收集2008年8月-2010年5月杭州市和湖州市6所医院共47株MDRKP,采用PCR及序列分析方法检测5种毒力基因(arr、magA、rmpA、hofA和ompT)。结果 47株MDRKP中检测到arr和magA两种毒力基因,检出率分别为29.8%和17.0%;6所医院A、B、C、D、E、F的MDRKP分离株中毒力基因arr的检出阳性率分别为26.7%、81.8%、0、14.3%、0、0,6所医院A、B、C、D、E、F的MDRKP分离株中毒力基因magA的检出阳性率分别为0、0、0、0、0、88.9%。结论 MDRKP中毒力基因arr和magA具有一定的携带率,在MDRKP中检出毒力基因arr和magA为国内首次报道。     

多药耐药肺炎克雷伯菌喹诺酮类耐药相关基因研究

目的 了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)喹诺酮类耐药机制.方法 对一组25株MDRKP进行了染色体介导和质粒介导的耐药相关基因进行检测和分析.结果 25株中,有19种存在gyrA基因突变(76.0%);9株存在aac(6′)-Ⅰ b-Cr(36.0%);2株存在qnrA1基因(8.0%)、2株存在qnrB基因(qnrB4-like)(8.0%)、3株存在qnrS1基因(12.0%);25株均存在mdfA基因,未检出qepA基因.结论 在MDRKP中,gyrA基因突变是喹诺酮类耐药的主要原因.     

201株肺炎克雷伯菌耐药性分析及其gyrA基因分析

目的 了解肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因gyrA的分布,给临床用药提供依据.方法 收集2003-2009年临床分离的肺炎克雷伯菌201株,采用琼脂稀释法进行药敏检测;利用引物特异性PCR结合测序识别gyrA基因耐药基因.结果 201株肺炎克雷伯菌对甲氧苄啶和氨苄西林有很高的耐药性,但是对亚胺培南和阿米卡星较为敏感;同时,检测到60株占29.9％存在gyrA基因突变.结论 随着抗菌药物的大量使用,肺炎克雷伯菌耐药性较严重,易导致肺炎克雷伯菌产生多药耐药性,给临床抗感染治疗带来了严峻的挑战.     

多药耐药肺炎克雷伯菌抗菌制剂外排泵基因研究

目的了解20株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)的灭菌剂、消毒剂、抗菌药物等抗菌制剂外排泵基因存在情况。方法运用PCR法对20株多药耐药肺炎克雷伯菌mdfA、tehA、smr、qacE△1等抗菌制剂外排泵基因进行检测。结果检出mdfAt、ehA、smr、qacE△1等4种外排泵基因,阳性率分别为:85.0%、5.0%、20.0%、75.0%;mdfA、qacE△1阳性率高,多数菌株能同时检出多种外排泵基因;在肺炎克雷伯菌中检出mdfA、tehA、smr基因为国内首次报道。结论多耐药肺炎克雷伯菌易检出多种外排泵基因,与医院多药耐药肺炎克雷伯菌耐药机制相关的可移动遗传元件主要有mdfA、qacE△1,耐药菌外排泵携带率高,开发抑制剂显得十分重要。     

肺炎克雷伯菌多药耐药株的耐药机制研究

目的 调查1株多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKP)58种耐药相关基因与可移动遗传元件的存在情况. 方法 对分离自我国内地的1株MDRKP,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析58种β-内酰胺类、氨基糖苷类,喹诺刚类和其他广谱抗菌药物耐药相关基因与可移动遗传元件. 结果 该株MDRKP检出TEM-1、SHV-11(均测序比对证实)、tetA、mafA、trbC、tnp513、ISEcp1基因,且gyrA基因存在突变,其余50种基因未检出. 结论 该菌株耐Ⅰ～Ⅲ代头孢菌素抗菌药物,可能与同时产TEM-1型和SHV-11型β-内酰胺酶引起牵制耐药机制有关,该株MDRKP表型为多药耐药与gyrA基因突变及获得可移动遗传元件和多种耐药基因相关,在肺炎克雷伯菌中检出ISEcp1为国内首次报道.     

多药耐药肺炎克雷伯菌抗菌制剂外排泵基因研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDRKPN)抗菌制剂外排泵基因的存在状况。方法收集连云港市第二人民医院2008年11月-2009年10月住院患者标本中分离的多药耐药肺炎克雷伯菌20株,采用PCR法检测mdfAt、ehA、oqxA、qacE△1等4种抗菌制剂外排泵基因。结果 20株多药耐药肺炎克雷伯菌mdfA、tehA、oqxA和qacE△1基因检出阳性率分别为85.0%、15.0%、10.0%和95.0%。结论 MDRKPN抗菌制剂外排泵基因携带率较高,肺炎克雷伯菌多药耐药的表型可能与携带抗菌制剂外排泵基因相关。     

老年患者多药耐药肺炎克雷伯菌的耐药性分析与耐药基因检测

目的了解浙江省台州地区的老年患者肺炎克雷伯菌耐药性及存在状况。方法采用VITEK-60型和VITEK-32型、肉汤稀释法测定并分析95株产AmpC和ESBLs肺炎克雷伯菌的药敏结果;对其中的46株采用PCR法测定产AmpC和ESBLs的耐药基因型、产AMEs的耐药基因型、喹诺酮类耐药的基因型。结果产AmpC和ESBLs肺炎克雷伯菌首选亚胺培南,对其他抗菌药物均有不同程度的耐药;46株菌株100.0%检测到TEM基因,86.9%菌株存在CTX-MⅠ,84.8%菌株有DHA基因,71.7%菌株包含CTX-MⅢ基因,21.8%菌株存在CTX-MⅡ基因,13.1%菌株存在SHV基因;80.4%菌株含到aac(3)-Ⅱ型基因型,65.2%菌株存在ant(3″)-Ⅰ型基因型,56.5%菌株检出aac(6′)-Ⅰ型基因型;78.3%菌株存在mdfA基因型,39.1%菌株存在qnrB基因型,32.6%菌株存在aac(6′)-Ⅰb基因型,30.4%菌株存在gyrA基因型,23.9%菌株含有qnrA基因型。结论产AmpC和ESBLs肺炎克雷伯菌表现多药耐药,碳青霉烯类亚胺培南是治疗效果最好的药物,同时存在2～6种不同类型的耐药基因。     

1株携带多种喹诺酮类药物耐药机制肺炎克雷伯菌的发现

目的研究肺炎克雷伯菌(KPN)烧伤分离株的喹诺酮类耐药机制。方法测定1株分离自烧伤科患者血液的肺炎克雷伯菌对3种喹诺酮类药物的敏感性,采用PCR方法进行6种喹诺酮类耐药基因[aac(6′)-Ⅰb、qnrA、qnrB、qnrS、qepA和gyrA]检测,并对aac(6′)-Ⅰb和gyrA PCR阳性产物进行基因测序并作BLASTx比对分析。结果该菌株对诺氟沙星和环丙沙星耐药,对左氧氟沙星敏感;PCR检测发现该菌株同时携带qnrB、qnrS及aac(6′)-Ⅰb,对aac(6′)-Ⅰb基因测序证实为aac(6′)-Ⅰb-cr突变体,对gyrA基因测序证实其83位丝氨酸(S)被异亮氨酸(I)所替代,并有65位丝氨酸(S)发生同义突变,作为新亚型已登录美国NCBI基因库(登录号为GQ422758)。结论首次发现一同时携带qnrB、qnrS及aac(6′)-Ⅰb-cr共3种质粒介导的喹诺酮类耐药基因肺炎克雷伯菌烧伤分离株,同时其gyrA基因66、83位氨基酸均有突变,为一新亚型;这对临床上预防控制多药耐药KPN在烧伤科的流行提出了更高的要求。     

多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究多药耐药肺炎克雷伯菌GyrA突变及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因型。方法对2008年分离的46株肺炎克雷伯菌〔(30株分离自零售食品(凉拌菜),16株分离自医务人员鼻腔拭子)〕采用K-B法进行药敏试验,检测多药耐药菌是否产ESBLs,PCR法扩增多药耐药菌环丙沙星耐药相关基因gyrA,ESBLs基因bla-TEM、blaSHV和blaCTX-M,3类整合酶基因(intⅠ1,intⅠ2,intⅠ3)及第1类整合子可变序列;对PCR产物进行测序分析,脉冲场凝胶电泳(PFGE)对多药耐药菌进行分子分型。结果 9株菌为多药耐药菌,3株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Ile,1株菌在GyrA的QRDR区83位Ser→Thr,8株菌产ESBLs,6株菌携带SHV型ESBL,其中3株菌同时携带TEM型ESBL;2株菌携带OKP型ESBLs;未检测到CTX-M型ESBLs,1株菌intⅠ1基因阳性,携带有第1类整合子和耐药基因盒aacA7,PFGE将9株菌分为8个PFGE型,2株菌为同一个PFGE型。结论耐药基因的获得如gyrA基因突变和携带ESBLs基因是肺炎克雷伯菌产生多药耐药的主要机制。     

多药耐药肺炎克雷伯菌可移动遗传元件研究

目的了解多药耐药肺炎克雷伯菌(MDR-KPN)耐药基因载体-可遗传元件分布状况。方法运用PCR法对20株MDR-KPN进行了接合性质粒遗传标记(traAt、rbC)、插入序列遗传标记(IS1133I、SEcp1)、转座子遗传标记(merAt、npUt、np513)、整合子遗传标记(intⅠ1i、ntⅠ2i、ntⅠ3)等4类可移动遗传元件检测。结果 trbC、ISEcp1、merAt、npUt、np513i、ntⅠ1检出阳性率分别为:55.0%、65.0%、25.0%、20.0%、50.0%、65.0%,其余4种基因均未检测到可移动性元件;20株菌株每株至少检出1种可移动遗传元件遗传标记,其中在MDR-KPN中检出ISEcp1、merA、tnpUt、rbC基因属国内首次。结论多药耐药肺炎克雷伯菌易检出各类可移动遗传元件,与医院多耐药肺炎克雷伯菌耐药机制相关的可移动遗传元件主要有trbCI、SEcp1、merAt、npUt、np513i、ntⅠ1。     

454株肺炎克雷伯菌的耐药性分析

目的了解医院肺炎克雷伯菌耐药情况、在科室的检出构成比及其标本来源。方法收集临床分离到的454株肺炎克雷伯菌培养鉴定,资料采用Excel 2000进行统计其在科室的分布及标本来源。结果 2008年1月~2009年6月共检出454株肺炎克雷伯菌,在内科重症监护病房检出率最高,有61株,占13.4%;其次为NICU神经外科41株,占9.0%;检出的454株肺炎克雷伯菌的标本来源,痰液300株(66.1%),尿液50株(11.0%),脓液29株(6.4%);肺炎克雷伯菌对氨苄西林耐药为99.1%,其余依次为哌拉西林(41.0%)、头孢唑林(38.8%)、头孢呋辛(37.7%)、氨曲南(35.5%)。结论随着克雷伯菌耐药性增高,会给临床治疗造成很大困难,因此临床合理使用抗菌药物、严格执行消毒隔离制度,重视洗手等措施非常重要。     

耐碳青霉烯酶类肺炎克雷伯菌中整合子及相关基因盒的分布

目的 了解耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌整合子及相关基因盒的分布,分析整合子与耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌多药耐药的关系.方法 采用革兰阴性杆菌药敏卡检测耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应(PCR)法检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因(intⅠ1、intⅡ2、intⅢ3)及Ⅰ类整合子可变医基因盒,并分析可变区上游启动子的类型.结果 74株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中有67株检测到Ⅰ类整合酶基因,检出率为90.5％,2株检测到Ⅱ类整合酶基因,检出率为2.7％,未检测到Ⅲ类整合酶基因阳性菌株;55株(74.3％)成功扩增出Ⅰ类整合子可变区,主要携带甲氧苄啶及早期使用的氨基糖苷类抗菌药物耐药基因,可变区启动子大多为弱启动子;携带Ⅰ类整合子菌株对常用抗菌药物的耐药率与Ⅰ类整合子阴性菌株之间的差异无统计学意义.结论 Ⅰ类整合子及相关基因盒在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中分布广泛.所携带的整合子具有非常强的从周围环境中捕获耐药性基因盒的能力.     

肺炎克雷伯菌随机DNA多态性分型研究

目的 建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性分型技术,以应用于临床菌株流行病学调查。方法 对临床分离的29株肺炎克雷柏菌进行Etest检测,并用酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型。结果 29株临床分离菌有7株ESBL阳性,24株有稳定的RAPD带型,其中ICU分离的5株ESBL阳性株的4株RAPD指纹图谱相同。结论 RAPD基因分型技术不需已知核酸序列,分型率高,分辨力强,简便快捷可为肺炎克雷伯菌株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解产ESBLs肺炎克雷伯菌中氨基糖苷类修饰酶基因存在状况。方法对35株肺炎克雷伯菌,采用聚合酶链反应（PCR）检测aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因。结果35株肺炎克雷伯菌中,共有26株检出氨基糖苷类修饰酶基因（74.3%）。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。