盐酸米托蒽醌聚乙二醇化脂质体的制备及对A549细胞体外抗肿瘤作用的研究

目的 研究盐酸米托蒽醌聚乙二醇化脂质体(DHAD-PEG-L)的制备及其抗肿瘤细胞增殖作用,比较DHAD-PEG-L与常规盐酸米托蒽醌(DHAD)制剂的抗肿瘤活性差异.方法 以主动载药法制备获得DHAD-PEG-L;以人非小细胞肺癌A549细胞为模型,采用MTT法考察DHAD-PEG-L和DHAD对肿瘤细胞的抑制效果,测定制剂作用肿瘤细胞48 h后的IC50值;以方差分析法比较DHAD-PEG-L与DHAD抗肿瘤活性的统计学差异.结果 DHAD-PEG-L和DHAD对A549细胞的IC50分别是(1.561±0.09)mg·L-1和(0.862±0.02)mg·L-1;药物经聚乙二醇(PEG)脂质体包封后,与常规制剂相比,高浓度时肿瘤抑制作用略有下降,低浓度时抑制作用增强.结论 PEG化技术可运用于脂质体,对DHAD进行减毒增效改造,预期可降低药物不良反应.     

赛特铂抗肿瘤作用的临床前观察

目的观察赛特铂临床前抗肿瘤作用.方法体外观察赛特铂对人卵巢癌细胞A2780,肺腺癌细胞A549,结肠癌细胞HCT8,乳腺癌细胞MCF7和前列腺癌细胞DU145等10株人肿瘤细胞的细胞毒作用.体内观察赛特铂对人卵巢癌A2780,小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌HepS的生长抑制作用.结果赛特铂的体外体内作用强度与对照药顺铂相当.对10种肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50为0.51～3.29μmol·L-1,平均IC50为(1.44±0.32)μmo1·L-1;体内口服给药明显抑制裸鼠人卵巢癌A2780,小鼠肉瘤S180和小鼠肝癌HepS的生长,抑制率分别为61.3%,57.9%和50.6%.结论赛特铂的体外细胞毒和体内口服抗小鼠肿瘤生长抑制作用均与顺铂相仿.     

蟾酥脂质体注射液的抗肿瘤作用

目的探讨蟾酥脂质体注射液(CS)的抗肿瘤作用。方法体内实验采用小鼠肝癌H22、肉瘤S180荷瘤小鼠模型,考察CS的抑瘤作用;采用小鼠接种肝癌H22后,用环磷酰胺造成免疫低下模型,考察CS提高机体免疫力作用。体外实验采用MTT法,测CS对人宫颈癌HeLa细胞或人肝癌BEL-7402细胞增殖抑制率。结果CS(0.2、0.4、0.8 mg.kg-1)对2种荷瘤小鼠肿瘤增长有显著或非常显著的抑制作用(P<0.05,P<0.01);同时对机体具有明显的免疫调节作用。CS 0.01~3.00 mg.L-1对人宫颈癌HeLa细胞或肝癌BEL-7402细胞增殖有非常显著的抑制作用;CS对人宫颈癌HeLa细胞IC50为0.51 mg.L-1,95%可信限0.213 2~1.214 0 mg.L-1,CS对人肝癌BEL-7402细胞IC50为0.75 mg.L-1,95%可信限0.312 6~1.801 5 mg.L-1。结论蟾酥脂质体注射液体内、体外均有抗肿瘤活性,且具有免疫调节功能。     

膜修饰脂质体对缺氧心肌细胞的保护作用

目的考察亲脂性化合物3{4[2羟基(1甲基乙胺基)丙氧基]苯基}丙酸十六醇酯(PAC)膜修饰脂质体对缺氧心肌细胞的保护作用。方法将普通脂质体(Plain L)、PAC膜修饰脂质体(PAC L)分别于常氧和缺氧条件下与乳鼠心肌细胞共同培养1、22、4 h,荧光法测定正常与缺氧心肌细胞对脂质体的摄取,以不加脂质体的细胞为对照,台盼兰染色法测定心肌细胞存活率。结果在常氧状态下1、2、24 h心肌细胞对PAC L的摄取较Plain L分别高约3.97、3.87、4.27倍,而在缺氧状态下心肌细胞对PAC-L的摄取较Plain L分别高约4.26、6.24、29.51倍。当细胞连续缺氧24 h时,对照组、Plain L组、PAC L组的心肌细胞存活率分别为7.8%、29.7%、95.4%。结论与Plain L相比,PAC L对缺氧状态的心肌细胞具有较强的亲和性,脂质体的加入能够明显降低缺氧对心肌细胞的损伤,PAC L对缺氧心肌细胞具有较强的保护作用,效果明显优于Plain L,且随着缺氧时间的延长这种优势越显著。     

黄连解毒汤体内外抗肿瘤作用的实验研究

目的：观察黄连解毒汤的体内、体外抗肿瘤作用。 方法：采用小鼠肉瘤S180和小鼠前胃癌MFC等移植性肿瘤模型进行体内实验,通过检测抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数等指标观察黄连解毒汤的体内抑瘤作用及对免疫器官的影响。并用MTT方法检测黄连解毒汤对小鼠S180、小鼠MFC、人胃癌SGC-7901、人肝癌SMMC-7721等4种瘤株的抑制作用。结果：黄连解毒汤大、中剂量组中对S180荷瘤小鼠有抑制作用,大剂量组对MFC荷瘤小鼠有抑制作用,抑瘤率分别为48.38%、33.77%、30.74%;对S180、MFC、SGC-7901和SMMC-7721细胞均有一定的细胞毒作用, IC50分别为99.73 mg?L-1、84.47 mg?L-1、153.32 mg?L-1和102.87 mg?L-1。结论：黄连解毒汤体内对S180、MFC小鼠移植瘤有一定的抗肿瘤活性,体外对4种肿瘤细胞也具有抑制作用。     

牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制

目的探讨牛耳枫生物碱F21对HepG-2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 F21 6.25～100 mg.L-1作用24,48和72 h,MTT法检测细胞抑制率并计算IC50。F21 10～100 mg.L-1作用48 h,瑞姬氏染色光学显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA的梯形条带,流式细胞仪检测细胞凋亡。F2110,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK(胱天蛋白酶抑制剂)20μmol·L-1作用48 h,MTT法检测抑制率。结果 F21可明显抑制HepG-2细胞增殖,其于24,48和72 h的IC50值分别为5.3±0.1,1.3±0.1和(0.13±0.1)mg.L-1,且具有量效(F=232.39,P<0.05)和时效(F=65.59,P<0.05)关系。F21 10～30 mg.L-1可使HepG-2细胞体积增大、胞质内细胞核周围出现大量空泡、细胞膜完整、细胞核破碎甚至细胞形态消失。琼脂糖凝胶电泳未观察到典型的凋亡细胞DNA梯形条带。流式细胞术分析显示,与正常对照组比较,F21 10,30和100 mg.L-1处理HepG-2细胞48 h后,晚期凋亡率分别(17.34±0.01)%,(25.45±0.01)%和(43.67±0.03)%(P<0.05)。Z-VAD-FMK可明显抑制星形孢菌素诱导的细胞死亡。F21 10和30 mg.L-1组的增殖抑制率分别为(18.42±0.09)%和(42.77±0.01)%,而F21 10,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK组的增殖抑制率分别为(16.46±0.01)%和(44.01±0.01)%,与相应的F21组相比无统计学差异。结论 F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用,其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡。     

紫杉醇脂质体大鼠体内药动学考察

目的使用HPLCUV法测定大鼠体内紫杉醇血药浓度,考察紫杉醇脂质体在大鼠体内药动学。方法大鼠尾静脉注射紫杉醇脂质体及紫杉醇注射液,血浆用叔丁基甲醚提取。ODS柱,流动相为甲醇水(65∶35),检测波长227nm。结果本法在0.05～50μg·ml-1范围内线性良好,日内、日间精密度RSD<6%,高、中、低3个浓度下提取回收率均大于90%。紫杉醇脂质体及紫杉醇注射液血药浓度经时曲线均符合二室模型。t1/2β分别为(11.19±0.08)h和(7.49±0.80)h,AUC分别为2615.89±770.58(mg·L-1·min-1)和904.94±25.36(mg·L-1·min-1)。结论与市售紫杉醇注射液相比,紫杉醇纳米脂质体有一定的长循环作用,且提高大鼠体内的利用度。     

雷公藤红素新型衍生物体外抗肿瘤活性

目的探讨几种雷公藤红素新型衍生物的体外抗肿瘤活性。方法取对数生长期的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株PC12细胞以及大鼠神经胶质瘤C6细胞,加入雷公藤红素、雷公藤红素衍生物(Cel-1～Cel-13)及阳性对照药顺铂,48 h后,通过四甲基偶氮唑盐比色法,测定各化合物半数抑制浓度(IC50),用以观察雷公藤红素各衍生物对PC12细胞以及C6两种细胞株增殖的影响。结果雷公藤红素衍生物Cel-1、Cel-3、Cel-6和Cel-13对PC12细胞的IC50值分别为(1.6±0.3)、(2.2±0.3)、(1.3±0.3)和(2.4±0.1)μmol.L-1,明显小于母核雷公藤红素(3.2±0.4)μmol.L-1(P<0.05,P<0.01);Cel-1对C6细胞的IC50值为(0.6±0.2)μmol.L-1,明显小于母核雷公藤红素(1.5±0.3)μmol.L-1(P<0.05);而且Cel-1、Cel-3、Cel-6和Cel-13明显小于顺铂对PC12和C6的IC50[(11.6±0.8)、(59.0±4.0)μmol.L-1](P<0.01)。结论雷公藤红素新型衍生物中4个化合物有较好的体外抗肿瘤活性,比母体雷公藤红素活性强。     

替诺福韦阳离子脂质体的制备及其对人体肝细胞SMMC-7721摄取和细胞毒性研究

目的:研究替诺福韦阳离子脂质体的制备及其促进肝实质细胞摄取的情况和细胞毒性作用。方法:采用叔丁醇冻干法制备替诺福韦阳离子脂质体,测定其包封率及理化性质;以SMMC-7721细胞为模型,研究脂质体对肝实质细胞摄取替诺福韦的促进作用,MTT法检测不同条件下载药脂质体对细胞的毒性情况。结果:制备的脂质体包封率为(88.3±1.6)%,粒径为(278.4±67.6)nm,Zeta电势为(31±5)mV;经半乳糖基及PEG修饰的脂质体较游离药物进入肝实质细胞的浓度明显升高,且时间延长;当替诺福韦脂质体、脂质浓度分别为7.5、30μg·mL-1时,细胞存活率在80%以上,毒性较小。结论:所制备的阳离子脂质体具有显著增加细胞摄取替诺福韦和保护替诺福韦的作用,有望成为抗病毒药物如替诺福韦等的高效传递系统。     

PEG修饰的索拉非尼脂质体联合核转录因子NF-κB抑制剂的抗肿瘤活性研究

目的 考察PEG修饰的索拉菲尼脂质体联合核转录因子NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸（PDTC）的体内外抗肿瘤活性。方法 采用薄膜分散法制备PEG修饰的索拉菲尼脂质体,体外细胞毒性试验考察游离药物与脂质体的抗肿瘤作用。同时以5~7周龄SPF裸鼠为研究对象,建立体内肿瘤模型,通过测量裸鼠体质量、肿瘤质量与体积变化情况评价药物的抗肿瘤作用,并采用免疫印迹检测手段评价索拉菲尼脂质体及不同浓度的PDTC联合促凋亡、抗肿瘤作用。结果 采用最优处方制备的索拉菲尼脂质体包封率高、分布均匀,体外抗结肠直肠癌细胞SW480作用较游离药物强。体内动物试验结果显示索拉菲尼脂质体联合使用PDTC组能显著降低肿瘤的生长速度,具有较高的抑制肿瘤和促凋亡作用,免疫印迹结果亦进一步证实了二者的联合应用能更强地促进肿瘤细胞凋亡。结论 通过体内外试验,证实了PEG修饰的索拉菲尼脂质体联合核转录因子NF-κB抑制剂PDTC能显著提高药物的抗肿瘤和促凋亡作用,可为索拉菲尼新型载药系统的深入研究提供参考。     

In Vitro andIn Vivo Studies of Different Liposomes Containing Topotecan

Liposome as a carrier of topotecan (TPT), a promising anticancer drug, has been reported in attempt to improve the stability and antitumor activity of TPT. However, the biodistribution pattern of TPT liposome in vivo and PEG-modified liposome containing TPT have not been studied systemically. In this paper, the in vitro stability and in vivo biodistribution behavior of several liposomes containing TPT with different lipid compositions and PEG-modification were studied. Compared with the 'fluid' liposome (S-Lip) composed of soybean phosphatidylcholine (SPC), the 'solid' liposome (H-Lip) composed of hydrogenated soybean phosphatidylcholine HSPC decreased the leaking efficiency of TPT from liposome and enhanced the stability of liposome in fetal bovine serum (FBS) or human blood plasma (HBP). The results of biodistribution studies in S180 tumor-bearing mice showed that liposomal encapsulation increased the concentrations of total TPT and the ratio of lactone form in plasma. Compared with free TPT, S-Lip and H-Lip resulted in 5- and 19-fold increase in the area under the curve (AUC(0-->infinity)), respectively. PEG-modified H-Lip (H-PEG) showed 3.7-fold increase in AUC(0-->infinity) compared with H-Lip, but there was no significant increase in t(1/2) and AUC(0-->infinity) for PEG-modified S-Lip (S-PEG) compared with S-Lip. Moreover, the liposomal encapsulation changed the biodistribution behavior, and H-Lip and H-PEG dramatically increased the accumulation of TPT in tumor, and the relative tumor uptake ratios were 3.4 and 4.3 compared with free drug, respectively. There was also a marked increase in the distribution of TPT in lung when the drug was encapsulated into H-Lip and H-PEG. Moreover, H-PEG decreased the accumulation of TPT in bone marrow compared with unmodified H-Lip. All these results indicated that the membrane fluidity of liposome has an important effect on in vitro stability and in vivo biodistribution pattern of liposomes containing TPT, and PEG-modified 'solid' liposome may be an efficient carrier of TPT.     

精氨酸布洛芬糖浆与布洛芬片剂人体药动学及生物等效性比较

目的:比较精氨酸布洛芬糖浆与布洛芬片在健康人体中的药动学及生物等效性。方法:采用液相色谱法测定18位健康男性受试者交叉服用精氨酸布洛芬糖浆和布洛芬片后的血浆中布洛芬浓度。结果:糖浆剂的药动学参数为:AUC_(0-10)=(150±s 17)mg·h·L~(-1),C_(max)=(47±9)mg·L~(-1),t_(max)=(0．6±0．3)h;布洛芬片剂的药动学参数为:AUC_(0-10)=(136±13)mg·L~(-1),c_(max)=(28±4)mg·L~(-1),t_(max)=(2．7±1．0)h,相对生物利用度为 (98±7)％。结论:精氨酸布洛芬糖浆和布洛芬片生物等效。     

十二元环红霉素衍生物对T淋巴细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨十二元环红霉素衍生物(LY267108)对T淋巴细胞增殖和细胞周期的影响。方法用MTT法观察LY267108和红霉素对T淋巴细胞增殖的影响;用流式细胞仪经PI染色观察LY267108和红霉素对T淋巴细胞周期的影响。结果LY267108和红霉素抑制T淋巴细胞的增殖IC50值分别为(176.38±10.42)×10-6mol.L-1和(606.28±35.43)×10-6mol.L-1;在3.0~30.0 mg.L-1之间LY267108引起T淋巴细胞G2/M期周期阻滞;红霉素在30.0 mg.L-1和100.0 mg.L-1时出现凋亡峰。结论红霉素衍生物的抗炎活性可能与该类化合物对炎症细胞的影响有关。     

心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响

目的研究心肌肽素对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的影响,探讨心肌肽素在离子通道水平的药理作用机制。方法用急性酶解分离法获得豚鼠心室肌细胞,标准的全细胞膜片钳技术记录L型钙电流(ICa-L)。结果心肌肽素1、5、10、50、100、500 mg.L-1使豚鼠心室肌细胞ICa-L分别增加(5±4)%、(21±5)%、(30±5)%、(55±8)%、(76±11)%、(80±9)%,半最大效应浓度(EC50)为(18±6)mg.L-1。心肌肽素50 mg.L-1使ICa-L激活时间(TTP)从(6.7±0.9)m s缩短为(5.9±0.7)m s(P<0.01);使ICa-L电流密度-电压曲线下移,但激活电压、峰电压和I-V曲线的形状不变;激活曲线向负电压方向变化,半数激活电压从(-4.3±0.4)mV减少至(-8.6±0.4)mV(P<0.05);不影响稳态失活曲线和稳态失活后恢复曲线。结论心肌肽素浓度依赖性增强豚鼠心室肌细胞ICa-L。     

液相色谱-串联质谱法研究白花前胡甲素脂质体在大鼠体内的药动学

目的制备白花前胡甲素脂质体并进一步研究其在大鼠体内的药动学。方法采用乙醇注入法制备白花前胡甲素脂质体,采用正交设计优化处方。白花前胡甲素脂质体按5、10、20mg·kg~(-1)低、中、高3个剂量经大鼠颈静脉给药后检测一定时间点的血药浓度,对照组为10mg·kg~(-1)的白花前胡甲素溶液。结果制备的脂质体含药量为2g·L~(-1),包封率为93.2%,脂质体高、中、低剂量组及对照组的t_(1/2)分别为(136.58±22.86),(74.12±6.97),(44.93±7.47),(51.26±5.13)min;AUC_(0-∞)分别为(215.93±33.24),(91.75±26.47),(29.22±4.47),(66.90±14.54)min·mg·L~(-1)。结论成功制备了白花前胡甲素脂质体,制得的白花前胡甲素脂质体在大鼠体内半衰期显著延长,生物利用度有明显的提高。     

LC-MS法研究尼莫地平脂质体原位凝胶在家兔体内的药动学

目的研究尼莫地平脂质体原位凝胶在家兔体内的药动学。方法单剂量(尼莫地平0.5 mg·kg~(-1))于家兔后腿股四头肌肌内注射尼莫地平溶液剂、尼莫地平脂质体、泊洛沙姆188(P188)修饰的尼莫地平脂质体和尼莫地平脂质体原位凝胶,建立高效液相色谱-质谱(LC-MS)法测定血浆中尼莫地平的浓度。结果尼莫地平在0.8～800μg·L~(-1)范围内线性关系良好(r=0.999 2),提取回收率大于90%,日内、日问精密度RSD<15%。尼莫地平脂质体原位凝胶和脂质体的c_(max)分别为(88±s 18)和(224±64)μg·L~(-1);t_(max)分别为(2.0±0.7)和(0.29±0.14)h;AUC_(0-∞)分别为(402±15)和(273±28)μg·h·L~(-1)。尼莫地平脂质体原位凝胶的c_(max)、t_(max)、AUC_(0-∞)等药动学参数与尼莫地平脂质体和P188修饰的尼莫地平脂质体均有显著或极显著差异。结论尼莫地平脂质体原位凝胶经肌内注射后可延长药物在体内的驻留时间,具有一定的缓释作用并提高了尼莫地平的生物利用度。     

苯丁酸钠单用与氟尿嘧啶或顺铂联用对喉癌Hep-2细胞株的影响

目的:研究苯丁酸钠(sodiumphenylbu-tyrate,PB)对体外喉癌Hep-2细胞株生长和分化的影响,及其能否增强氟尿嘧啶、顺铂对喉癌细胞的细胞毒性。方法:采用流式细胞仪检测PB作用后喉癌细胞的细胞周期,应用四氮唑蓝法检测PB单独及联用氟尿嘧啶或顺铂时,喉癌细胞的存活能力。结果:经PB作用4d后,细胞周期出现G1-S期阻滞和剂量依赖性生长抑制作用;PB的半数抑制浓度(IC50)是4.21mmol·L-1。1mmol·L-1PB与氟尿嘧啶或顺铂联用3d后,2药的IC50分别由(11.4±s1.7)mg·L-1和(1.60±0.05)mg·L-1下降至(8.2±0.8)mg·L-1和(1.36±0.11)mg·L-1P<0.05。结论:PB能诱导体外喉癌细胞发生分化和生长抑制作用,增强氟尿嘧啶、顺铂对喉癌细胞株的细胞毒性作用。     

2种舒他西林片的人体生物等效性

目的：比较口服2种舒他西林片的相对生物利用度。方法：20名健康男性受试者采用随机交叉试验设计。反相高效液相色谱法测定单剂量口服2种舒他西林片750 mg后的氨苄西林、舒巴坦血药浓度。DAS程序计算药动学参数,AUC,c_(max)对数转换后进行分析。结果：口服舒他西林受试制剂和参比制剂氨苄西林的c_(max)分别是(10.8±s 1.9),(10.4±1.8)mg·L~(-1)；t_(max)分别是(0.68±0.14),(0.66±0.12)h；AUC_(0-t)分别为(22±4),(22±4)mg·h·L~(-1)；AUC_(0-∞)分别为(24±5),(23±4)mg·h·L~(-1)；t_(1/2)分别是(1.07±0.26),(1.13±0.25)h。口服舒他西林受试制剂和参比制剂舒巴坦的c_(max)分别是(7.4±1.3),(7.3±1.2)mg·L~(-1),t_(max)分别是(0.66±0.12),(0.70±0.10)h,AUC_(0-t)分别为(13.7±2.8),(13.2±2.3)mg·h·L~(-1)；AUC_(0-∞)分别为(14.2±2.9),(13.7±2.5)mg·h·L~(-1)；t_(1/2)分别是(0.97±0.19),(0.87±0.24)h。结论：2种舒他西林片具有生物等效性。     

多廿烷醇与普伐他汀治疗高脂血症的疗效和安全性

目的评价多廿烷醇治疗高脂血症,特别是高胆固醇血症的疗效和安全性。方法多甘烷醇组(试验组,多廿烷醇10mg·d~(-1))和普伐他汀组(对照组,普伐他汀10 mg·d~(-1))各119例。进行随机、双盲、双模拟、阳性药物平行对照试验。观察2组降脂疗效和不良反应发生情况。结果经过12 wk治疗,多廿烷醇组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、TC-高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)/ HDL-C、载脂蛋白B_(100)(Apo B_(100))、脂蛋白(Lpa)治疗前分别为(6.6±s0.7)、(4.0±0.6)、(0.10±0.03)、(3.3±0.5)mmol·L~(-1)、(260±184)mg·L~(-1),治疗后分别为(6.0±1.3)、(3.5±0.8)、(O.09±0.04)、(2.7±0.8)mmol·L~(-1)、(130±130)mg·L~(-1),治疗后各指标较治疗前均有非常显著差异(P<0.01)。普伐他汀组TC、LDL-C、TC-HDL-C/HDL-C、Apo B_(100)、Lpa治疗前分别为(6.7±0.8)、(4.1±0.7)、(0.10±0.03)、(3.4±0.5)mmol·L~(-1)、(279±240)mg·L~(-1),治疗后分别为(6.0±1.3)、(3.5±0.9)、(0.09±0.03)、(2.8±0.8)mmol·L~(-1)、(182±213)mg·L~(-1),治疗后各指标较治疗前均有非常显著差异(P<0.01)。但2组相比较,调脂作用相似,无显著差异(P>0.05)。不良反应方面,多廿烷醇组(9.2%)明显少于普伐他汀组(18.5%),2组有显著差异(P<0.05)。不良反应大多较轻微,不需停药能自行缓解。结论多廿烷醇10 mg·d~(-1)降脂效果与普伐他汀10 mg·d~(-1)的疗效相当,均能明显降低TC、LDL-C、TC-HDL-C/ HDL-C、Apo B_(100)、Lpa。多廿烷醇的安全性优于普伐他汀,不良反应轻微,耐受性好。