空肠弯曲菌在两种培养基上外膜蛋白中的表达及其体液免疫应答比较

目的 探讨不同培养基来源的空肠弯曲菌28～31 kD外膜蛋白免疫小鼠后的体液免疫应答效果.方法 将66只BALB/c小鼠分别随机分为11组,每组6只,采用布氏血培养基、改良卵黄培养基培养来源的空肠弯曲菌甘氨酸提取28～31 kD外膜蛋白以不同剂量疫苗组(50、100、200μg/只,加入0.2mL福氏完全佐剂).分别在0、7、14、21和28d,通过背部皮下+腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4mLNS、0.4mL福氏完全佐剂.在末次免疫后10d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价,采用ELISA技术分别检测小鼠血清和肠液中的特异性抗体IgG、IgA、分泌型IgA(slgA)的水平.结果 末次免疫后10d后,两种培养基来源的各免疫组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1:4～1:16和1:320～1:1 280,间接ELISA法检测两种培养基来源血清、肠液中IgG、IgA、sIgA的水平与空白组、对照组差异均有显著性(P<0.05);两种培养基来源的同剂量纽的疫苗之间IgG、IgA、sIgA的水平差异没有显著性(P>0.05);空白组与对照组差异无显著性(P>0.05).结论 改良卵黄培养基来源的空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kD外膜蛋白能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液sIgA抗体,与改良布氏血培养基相同,该培养基的选择和使用将为CJ亚单位疫苗、CJ检验、CJ食品卫生捡疫的深入研究奠定重要的实验依据.     

空肠弯曲菌亚单位脂质体佐剂疫苗诱导的Th1/Th2应答机制研究

目的探讨空肠弯曲菌(Campylobacter jejun i,CJ)亚单位脂质体佐剂疫苗免疫新西兰兔后Th1/Th2应答机制。方法制备CJ亚单位阳离子和阴离子脂质体佐剂疫苗,用不同剂量(按蛋白质含量计算,0.25mg/kg、0.5mg/kg、0.75mg/kg)的疫苗免疫新西兰兔,于末次免疫后10d采集血清,ELISA(双抗体夹心法)检测各组动物血清中IL-2、IFN-γ、TNF-β、IL-4、IL-6、IL-10的水平,同时设有CJ完全福氏佐剂免疫原对照组和生理盐水(NS)对照组。结果免疫组与CJ完全福氏佐剂免疫原对照组和NS对照组相比较,IL-4、IL-10水平与对照组相比有显著性升高(P<0.01),其中同一剂量(0.5mg/kg)不同佐剂组以CJ亚单位阳离子脂质体佐剂疫苗组升高明显(P<0.05),不同剂量同一佐剂疫苗组以0.5mg/kg组升高较明显(P<0.01),IL-2、IFNγ-、TNF-β水平各免疫组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论CJ亚单位脂质体佐剂疫苗诱导了以Th2应答为主的免疫应答类型。     

日本血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究

为检测血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态变化和免疫保护力，采用10^6CFU疫苗皮下1次和3次接种小鼠，接种后8周用日本血吸虫尾蚴感染。感染后6周剖杀小鼠，计算减虫率和减卵率，同时设有BCG对照组。结果发现：实验组免疫后血清IgG抗体迅速升高并持续高于水平；减虫率分别为39.74%和39.74%，减卵率分别为62.86%和55.62%，与对照组相比均有非常显著的差异（P＜0.01）。而免疫3次和免疫1次小鼠血清IgG抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗皮下注射1次即能诱导小鼠较高水平的IgG抗体和免疫保护力，是一种比较理想的新型疫苗，值得进一步研究。     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究

为检测血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态变化和免疫保护力,采用106CFU疫苗皮下1次和3次接种小鼠,接种后8周用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后6周剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,同时设有BCG对照组。结果发现实验组免疫后血清IgG抗体迅速升高并持续于高水平;减虫率分别为39.74%和39.74%,减卵率分别为62.86%和55.62%,与对照组相比均有非常显著的差异（P<0.01）。而免疫3次和免疫1次小鼠血清IgG抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗皮下注射1次即能诱导小鼠较高水平的IgG抗体和免疫保护力,是一种比较理想的新型疫苗,值得进一步研究。     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察

目的:动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgG的变化.方法:将疫苗分别采用鼻腔内接种和口服灌胃免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠,眼球取血,常规ELISA测定血清中IgG及其亚类和IgG水平,同时设有PBS对照.结果:鼻腔内接种组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2～18周升高,分别在免疫后10、4和6周达最高水平;血清IgG1、IgG3和IgE水平均在免疫后2～18周降低,分别在免疫后8、12和10～12周达最低水平.口服免疫组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2～18周增加,分别在免疫后14、8和8周达峰值;血清IgG1、IgG3和IgE水平均在免疫后2～18周下降,分别在免疫后8、6和16～18周达最低水平.结论:细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应.     

空肠弯曲菌外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答

目的 探讨空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白福氏佐剂疫苗免疫小鼠后的抗体应答效果.方法 将30只BALB/c小鼠随机分为5组,每组6只,采用空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白以不同剂量疫苗组,分别在第0、7、14、21、28天,通过背部及腹部皮下多点注射免疫小鼠;空白组、对照组分别采用0.4 mL生理盐水(NS)、0.4 mL福氏完全佐剂.在末次免疫10 d(即第38天),分别应用双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价, ELISA检测血清和肠液中的特异性IgG、IgA、.结果 末次免疫10 d后,各疫苗组中,双向免疫琼脂扩散试验法、试管凝集法检测血清特异性抗体效价分别达到1:4～1:16和1:320～1:1 280,ELISA法检测血清、肠液中IgG、IgA、的水平与空白组、对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);空白组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 空肠弯曲菌甘氨酸提取物28～31 kd外膜蛋白佐剂疫苗能够诱导BALB/c小鼠较好的体液免疫应答和高水平的肠液抗体,将为空肠弯曲菌亚单位疫苗的深入研究奠定重要的实验依据.     

百白破和麻疹疫苗同时或单独免疫小鼠的体液免疫效果及不良反应评价

目的：观察百白破疫苗和麻疹减毒活疫苗同时免疫小鼠后的抗体应答和不良反应。方法用百白破疫苗和麻疹减毒活疫苗皮下注射免疫小鼠,于末次免疫后10 d取血清,用ELISA间接法检测特异性IgG抗体水平,比较上述两种疫苗同时免疫与单独免疫小鼠后特异性IgG的产生水平,并观察其发生不良反应的差异。结果同时免疫两种疫苗的实验组白喉抗体效价显著低于单独免疫的实验组,而前者不良反应发生率显著高于后者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论两种疫苗同时接种与单独接种比较,抗体应答水平较低,安全性较差,最好不要同时接种。     

空肠弯曲菌口服全菌佐剂疫苗的初步研究

目的本研究采用明胶为空肠弯曲菌菌苗的佐剂,灌胃免疫小鼠,评价佐剂全菌苗的免疫原性.方法采用明胶为佐剂的全菌疫苗灌胃免疫Balb/c小鼠.加明胶为佐剂全菌疫苗灌胃免疫Balb/c小鼠为实验组,全菌疫苗肌注和全菌疫苗灌胃免疫为实验对照组,PBS灌胃免疫为正常对照组,未作任何处理的Balb/c小鼠为阴性对照组;接种3次,间隔7d,末次接种1wk后收集小鼠血清和小肠粘液.采用ELISA间接法检测血清抗体IgG、IgA、IgM和肠道粘液抗体SIgA水平.结果各组血清抗体IgG、IgA、IgM和肠道粘液抗体SIgA水平,加佐剂组明显高于未加佐剂组,有统计学差异(P＜0.05),肌注组与加佐剂组间没有统计学差异(P＞0.05).结论本研究显示佐剂疫苗口服有良好的免疫原性,明胶可作为口服疫苗的候选佐剂.     

惠州市546例接种狂犬病疫苗后患者抗体检测结果分析

目的及时了解和观察本市犬咬伤人群接种狂犬病疫苗后产生（IgG）抗体的免疫效果,为制订科学完善的防患措施提供科学依据。方法抗体检测,使用宁波天润生物药业有限公司生产的人狂犬病毒（IgG）抗体测定试剂盒（酶联免疫法）。结果狂犬病疫苗暴露后人群不同年龄组有差异,随着年龄的增大,接种狂犬疫苗后抗体阳性率呈下降趋势,不同性别的抗体水平无差异。结论全程接种狂犬病疫苗后产生较为良好的免疫效果。     

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导的保护力观察

目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCC-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:混合疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和lgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低.结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用.     

Echinococcus granulosus 14-3-3 protein: a potential vaccine candidate against challenge with Echinococcus granulosus in mice

Objective To investigate the protective immunity against Echinococcus granulosus in mice immunized with rEg14-3-3.Methods ICR mice were subcutaneously immunized three times with rEg14-3-3,followed by the challenge with Echinococcus granulosus protoscoleces intraperitoneally and then sacrificed after six months of post-challenge to detect the proliferation of splenocytes by MTT assay,and to measure the secretion of IL-2,IL-4,IL-10,and IFN -γ by ELISA.The rate of reduced hydatid cyst and the levels of IgE,IgG and IgG subclasses in sera were examined.Results Mice vaccinated with rEg14-3-3 and challenged with protoscoleces revealed significant protective immunity of 84.47％.ELISA analysis indicated that the immunized mice generated specific high levels of IgG and the prevailing isotypes of IgG were IgG1 and IgG2a,Splenocytes from mice immunized with rEg14-3-3 showed a significant proliferation response.The secretion of IFN-y and IL-2 increased significantly in the vaccinated mice whereas there was no significant difference in IL-4 and IL-10 levels between vaccinated and control mice.Conclusion The results indicate that the rEg14-3-3 vaccine could induce a high level of protective immunity as a promising vaccine candidate to prevent cystic echinococcosis.     

甲型肝炎灭活疫苗和冻干减毒活疫苗接种后1年的免疫原性研究

目的评价甲型肝炎灭活疫苗和冻干减毒活疫苗接种1剂1年后的免疫原性。方法采用单一中心随机双盲试验设计,对18月龄~4岁健康幼儿受试者随机接种1剂设盲的甲肝灭活疫苗或甲肝减毒活疫苗。接种前及接种后12个月,采用微粒子酶免法（MEIA）定量检测受试者甲型肝炎抗体（抗-HAV）。结果免疫后1年,甲肝灭活疫苗组和甲肝减毒疫苗组分别有124人和135人完成试验,抗-HAV阳转率分别为95.2%和91.1%,抗-HAV的几何平均浓度（GMC）分别为101.7 IU/L和65.5 IU/L,甲肝灭活疫苗免疫的抗体水平明显高于甲肝减毒活疫苗（P〈0.001）。结论接种1剂甲肝灭活疫苗或甲肝减毒活疫苗后12个月,均可产生良好的免疫效应,甲肝灭活疫苗免疫的抗体水平明显高于甲肝减毒活疫苗。     

铜绿假单胞菌重组Bb-pGEX-OprI疫苗的构建及其保护力的研究

目的 构建并鉴定含有铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, Pa）外膜蛋白I（OprI)基因与两歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum, Bb）疫苗 （Bb-pGEX-OprI）,并研究该疫苗对小鼠Pa感染的保护作用。方法 PCR扩增OprI抗原编码基因并将其定向克隆至pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprI,将pGEX-OprI电穿孔转化Bb,构建Bb-pGEX-OprI疫苗,进行双酶切、PCR和测序鉴定后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分别分析并鉴定表达产物。21只小鼠随机分为3组,分别灌胃接种Bb-pGEX-OprI 疫苗、空载体疫苗（Bb-pGEX-1λT)和Bb。首次免疫后4周用PA01株攻击。攻击后2周处死小鼠取肺组织,计数肺组织的细菌菌落数。免疫前、首次免疫后4周和PA01株攻击后2周采小鼠静脉血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE。结果 PCR成功扩增出194 bp的OprI抗原编码基因;双酶切、PCR和测序证实OprI基因成功克隆入pGEX-1λT中,并且pGEX-OprI成功转化Bb,构建为Bb-pGEX-OprI疫苗;SDS-PAGE显示Bb-pGEX-OprI 表达相对分子质量约32×103的OprI-谷胱甘肽转移酶（GST）融合蛋白;Western blot证实融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别。Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠肺组织的细菌菌落数低于Bb-pGEX-1λT组和Bb组（P<0.01）,Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清IgG、IgG2b、IgG3和IgE水平在首次免疫后4周和攻击后2周依次升高,相同时间点Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清抗体水平均高于Bb-pGEX-1λT和Bb组（P＜0.01或P<0.05）。结论 成功构建了重组疫苗Bb-pGEX-OprI,其在小鼠抗Pa感染过程中可产生有效的体液免疫应答。     

空肠弯曲菌口服全菌佐剂疫苗研究

目的采用明胶为空肠弯曲菌死疫苗的佐剂,灌胃免疫小鼠,评价佐剂全菌死疫苗的免疫原性。方法采用空肠弯曲菌全菌死疫苗肌肉注射(A组),用明胶为佐剂全菌死疫苗(B组),全菌死疫苗(C组)及PBS(正常对照组)灌胃免疫Balb/c小鼠;接种3次,间隔7d,末次接种1周后收集小鼠血清和小肠粘液。采用ELISA间接法检测各组血清抗体IgGI、gAI、gM和肠道粘液抗体SIgA水平。结果A、B、C组血清抗体IgGI、gAI、gM和肠道粘液抗体SIgA水平均高于正常对照组,B组明显高于C组有统计学差异(P<0.05),A组与B组间没有统计学差异(P>0.05)。结论明胶作佐剂的全菌死疫苗口服具有良好的免疫原性,可作为口服疫苗佐剂后选。     

Live varicella vaccine in both immunocompromised and healthy children

BACKGROUND: There is no information on the use of live varicella vaccine in Mexican children. Our objective was to evaluate antibody response and safety of the live varicella vaccine in both healthy and immunocompromised Mexican children. METHODS: One hundred children with no history of varicella/zoster were vaccinated with a live attenuated varicella vaccine. According to their immune status, patients were divided into either a compromised (leukemia, solid tumors, chronic renal failure, and cirrhosis) or a healthy children group. Serum IgG antibodies against VZV were measured by ELISA at baseline and at 3 and 6 months after vaccination. RESULTS: A positive VZV-ELISA at baseline was detected in 36 of 67 (53.7%) immunocompromised children and in 22 of 33 (66%) healthy children. Among VZV-seronegative children, seroconversion at 6 months post-vaccination was observed in 90.3% of compromised children and in 100% of healthy children. Increases in serum antibody levels at 3 and 6 months post-vaccination was similar in both groups. VZV vaccine-related adverse reactions, mostly mild and local, were detected in 29% of the children. Three compromised children had a mild rash symptomatic of varicella after vaccination. CONCLUSIONS: About 50% of immunosuppressed children (mean age 8.8 +/- 3.6 years) with no varicella history were VZV-seronegative. Almost all of these compromised VZV-seronegative patients seroconverted 6 months after vaccine. In addition, antibody titers were similar in both compromised and healthy children.     

复制缺陷型重组腺病毒rvAdG1VP7免疫学效果的研究

目的对1株可表达A组轮状病毒主要结构抗原VP7的重组腺病毒rvAdG1VP7的体内免疫学效果进行研究.方法通过灌胃和滴鼻2种途径对BALB/c小鼠进行免疫,并对免疫后小鼠体液和黏膜免疫进行分析.结果初次免疫后,2组小鼠均有应答,但血清IgG抗体滴度及阳转率不同.再次免疫后,显示出明显的加强效果.除了血清IgG外,小鼠还产生了较强的针对轮状病毒的血清IgA.滴鼻组在肺灌洗液和肠匀浆液中均可检测到SIgA,灌胃组仅在肠道检测到SIgA.滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组.对滴鼻组小鼠肺灌洗液IgG/SIgA的阳转率进行了比较,发现IgG的应答水平明显高于SIgA.免疫后小鼠血清中IgG的动态观察表明,抗体可长期持续至少半年以上.结论重组腺病毒载体rvAdG1VP7所取得的良好免疫学效果,为我国具有自主知识产权的新型轮状病毒基因工程疫苗的进一步研制奠定了基础.     

Humoral immune responses in rabbits induced by an experimental inactivated severe acute respiratory syndrome coronavirus vaccine prepared from F69 strain

Background The etiologic agent of severe acute respiratory syndrome (SARS) has been confirmed to be a novel coronavirus (CoV), namely SARS-CoV. Developing safe and effective SARS-CoV vaccines is essential for us to prevent the possible reemergence of its epidemic. Previous experiences indicate that inactivated vaccine is conventional and more hopeful to be successfully developed.Immunogenicity evaluation of an experimental inactivated SARS-CoV vaccine in rabbits was conducted and reported in this paper.Methods The large-scale cultured SARS-CoV F69 strain was inactivated with 0.4% formaldehyde and purified, then used as the immunogen combined with Freund‘s adjuvant. Eight adult New Zealand rabbits were immunized four times with this experimental inactivated vaccine. Twelve sets of rabbit serum were sampled from the third day to the seventy-fourth day after the first vaccination. The titers of specific anti-SARS-CoV IgG antibody were determined by indirect enzyme-linked immunosorbent assay, and the neutralizing antibody titers were detected with micro-cytopathic effect neutralization test.Results Rapid and potent humoral immune responses were induced by the inactivated SARS-CoV vaccine in all the eight test rabbits. Titers of both specific IgG antibody and neutralizing antibody peaked at about six weeks after first vaccination, with the maximum value of 1 : 81 920 and 1 : 20 480,respectively. After that, serum antibody levels remained at a plateau or had a slight decrease,though two boosters were given in the succedent 4 to 5 weeks. Cross neutralization response existed between SARS-CoV F69 strain and Z2-Y3 strain.Conclusions The inactivated SARS-CoVvaccine made from F69 strain owns strong immunogenicity, and the cross neutralization response between the two different SARS-CoV strains gives a hint of the similar neutralizing epitopes, which provide stable bases for the development of inactivated SARS-CoV vaccines.     

重组空肠弯曲菌蛋白疫苗免疫 BA LB／c小鼠的研究

目的探讨重组空肠弯曲菌rLTB-PEB1蛋白疫苗的免疫机制。方法经口服免疫 BALB/c 小鼠后，ELISA 法检测特异性抗体IgG 、IgA 水平；ELISPOT 法检测派伊尔结特异性抗体分泌细胞；实时荧光定量PCR 检测IFN-γ、IL-4 mRNA 表达的差异。计算疫苗保护率。结果免疫组小鼠派伊尔结特异性抗体、IFN-γ、IL-4 mRNA 水平明显增高（ P ＜0．05）。免疫组的疫苗保护率为89．3％～93．7％，可维持30周。结论重组空肠弯曲菌rLTB-PEB1蛋白疫苗口服免疫小鼠可有效预防空肠弯曲菌的感染，其免疫机制可能为诱导了TH1/TH2型免疫应答。     

采用间接免疫荧光法监测流行性出血热疫苗接种3年后的人群抗体水平

目的：研究接种疫苗３年后人群抗体水平及间接免疫荧光抗体检测方法在流行性出血热免疫抗体检测中的应用。方法：采用间接免疫荧光法测定特异性ＩｇＧ抗体,并对２６６例血清样本进行分析。结果：全程接种与未加得抗体阳性率分别为７０．６３％,５９．７９％,并拍摄到抗原抗体免疫荧光结合物。结论：全程接种疫苗３年后人群抗体保持较高水平,加强接种后免疫效果更佳。     

我国研制的乙型肝炎基因重组疫苗近期免疫效果观察

目的 考察新生儿接种国产乙型肝炎（乙肝）中仓鼠卵巢细胞（CHO）表达的基因重组疫苗的近期免疫效果。方法 1997年1月1日至1999年8月31日,在河北省正定县选择7个乡,对2969名新生儿按现生后2４h及１、６个月免疫程序接种３剂乙肝ＣＨＯ疫苗,每剂１０μg。每季度对新生儿的乙肝疫苗接种情况进行调查核实。２０００年４月对完成全程免疫的观察对象采集血清,检测ＨＢsAg、抗－ＨＢs和抗－ＨＢc三项乙肝病毒标志。结果 新生儿乙肝疫苗全程接种率为９３.74％（２７８３／２９６９）,第１剂在出生２４h内接种的及时接种率为９５.42%（２８３３／２９６９）。２０００年４月采血率为６８.4%（１９０６／２７８３）。新生儿乙肝ＣＨＯ疫苗全程免疫后第１年内抗－ＨＢs阳性率[样本值／阴性对照值（Ｓ／Ｎ）≥2.1]为９８．２５％,有效抗－ＨＢs阳性率（Ｓ／Ｎ≥10.0）为９４.26%,抗体几何平均滴度（ＧＭＴ）为７７.64;其后抗体水平随时间延长逐渐降低,第３年时抗－ＨＢs阳性率为９２.31%,有效抗－ＨＢs阳转率为６８.96%,ＧＭＴ为２２.86,３年中ＨＢsAg阳性率均小于１％,抗－ＨＢc阳性率和ＨＢＶ感染率在１％－３％之间,未见随年限延长而增加的趋势。结论 国产乙肝ＣＨＯ疫苗的免疫原性和近期保护效果良好。