HPLC法测定青龙衣中胡桃醌的含量

目的:建立高效液相色谱(HPLC)对青龙衣中胡桃醌含量测定的方法。方法:色谱柱为:Waters symmetry shieldTM RP18(21mm×150mm×3.5mm),流动相为甲醇:水(梯度洗脱),流速为0.2ml/min,紫外检测波长为250nm。青龙衣烘干粉碎过筛后,采用索氏提取法提取青龙衣中胡桃醌成分,再水浴蒸干加甲醇溶解超声,离心后取上清液,用高效液相色谱法进行含量测定。结果:胡桃醌在1～150g内进样量与峰面积线性关系良好,线性方程为Y=5891.8X-5679.1,r=0.9982(n=6)。结论:该法灵敏度高,简便快捷,重现性好。     

HPLC法测定青龙衣中胡桃醌的含量

目的：建立高效液相色谱（HPLC）对青龙衣中胡桃醌含量测定的方法。方法：色谱柱为：Waters symmetry shieldTM RP18（21mm×150mm×3．5mm），流动相为甲醇：水（梯度洗脱），流速为0．2ml／min，挚外检测波长为250nm。青龙衣烘干粉碎过筛后，采用索氏提取法提取青龙衣中胡桃醌成分，再水浴蒸干加甲醇溶解超声，离心后取上清液，用高效液相色谱法进行含量测定。结果：胡桃醌在1～150g内进样量与峰面积线性关系良好，线性方程为Y=5891．8X-5679．1．r=0．9982（n=6）。结论：该法灵敏度高，简便快捷，重现性好。     

正交试验法优选青龙衣中胡桃醌的提取工艺

目的 探讨不同溶剂对青龙衣中胡桃醌提取率的影响,进一步通过正交试验优选青龙衣中胡桃醌最佳提取工艺。方法 以胡桃醌的量为评价指标,以乙醇、氯仿、石 油醚、醋酸乙酯为溶剂分别进行超声提取,用HPLC法测定提取物中的胡桃醌,确定出最佳提取溶剂。以溶剂用量(倍)、提取时间(min)、提取次数（次）为考察因素,采用正交试验法L₉(3⁴)确定提取青龙衣中胡桃醌的最佳工艺。结果 最佳提取溶剂为醋酸乙酯,最佳提取工艺条件为A3B3C2,即10倍量的醋酸乙酯,超声2次,每次40 min。结论 用正交试验法优选所得胡桃醌的提取工艺科学合理,适于工业生产。     

不同贮藏年限青龙衣中羟基萘醌的比较

目的 建立测定青龙衣中羟基萘醌的方法,考察不同贮藏年限的青龙衣药材中羟基萘醌的变化。方法 以胡桃醌为对照品,5%氢氧化钾为显色剂,在515 nm波长下,采用比色法测定青龙衣中羟基萘醌,对不同贮藏年限的青龙衣药材中羟基萘醌进行比较。结果 贮藏年限为一年、二年和三年的青龙衣药材中羟基萘醌的量存在明显差异,即随着贮藏时间的延长,青龙衣中羟基萘醌的量逐渐下降。结论 青龙衣药材不宜储藏时间过长,尽量应用当年的药材。     

青龙衣胡桃醌类成分富集

目的 以胡桃醌类成分转移率为指标,通过静态吸附和解吸附筛选最佳树脂,建立青龙衣胡桃醌类成分的富集工艺.方法 比较4种不同极性的大孔吸附树脂对青龙衣胡桃醌类成分的静态吸附与解吸性能,筛选出AB8树脂为最佳树脂,优化其工艺参数.结果 最佳工艺参数为:上样液浓度0.0760 g/ml、上样pH2.0、上样流速3BV/h,洗脱浓度70%、洗脱体积3BV、洗脱流速2BV/h,径高比1:10.工艺优化后,青龙衣中胡桃醌类成分的含量由1.026%提升到11.08%,转移率为72.08%.结论 AB8型大孔树脂能有效地富集纯化青龙衣胡桃醌类成分.     

不同干燥方法、贮藏年限及采收时间对青龙衣中胡桃醌的影响

方法 采用 HPLC 法测定不同干燥方法、贮藏年限及采收时间的青龙衣药材中胡桃醌的量。结果 不同干燥方法对青龙衣药材中胡桃醌量有不同的影响，60 ℃ 烘干处理后药材中胡桃醌的量显著低于其他的方法 (P＜001)。青龙衣宜采用阴干或 40 ℃ 烘干的方法干燥。青龙衣贮藏时间越长，胡桃醌的量越低。青龙衣适宜的采收时间是7～8月份果实未成熟时采收。结论 不同干燥方法、贮藏年限及采收时间对青龙衣药材中胡桃醌的量有一定影响。     

北青龙衣中萘醌类衍生物的细胞毒活性研究

目的 研究北青龙衣中萘醌类衍生物的细胞毒活性。方法 利用MTT法测定从北青龙衣中分离得到的12个萘醌类衍生物对SMMC7721人肝癌细胞和MCF-7人乳腺癌细胞的细胞毒活性。结果 12个萘醌类衍生物中,4-羟基萘-1-O-b-D-吡喃葡萄糖苷(9),1,4,8-三羟基萘-1-O-b-D-吡喃葡萄糖苷(10)和1,4,8-三羟基萘-1-O-b-D-[6’-O-(3’’,4’’,5’’-三羟基苯甲酰)]吡喃葡萄糖苷(11)对SMMC7721人肝癌细胞显示不同程度的抑制作用,仅11对MCF-7人乳腺癌细胞显示较强的细胞毒作用。结论 北青龙衣中萘醌类衍生物在其抗肿瘤活性中可能起重要作用。     

青龙衣的化学成分研究

目的 研究青龙衣的化学成分。方法 利用普通硅胶柱色谱技术对青龙衣乙醇提取浸膏进行分离、纯化,并利用核磁共振(NMR)、EI-MS等现代波谱技术鉴定化合物结构。结果 从青龙衣中分离鉴定了8个化合物,分别为泰国树脂酸(siaresinolic acid,Ⅰ)、白桦脂酸(betulinic acid,Ⅱ)、胡萝卜苷(daucosterin,Ⅲ)、4,5-O-异丙叉基-α-四氢萘醌(4,5-O-isopropylidene-α-tetralone,Ⅳ)、4-甲氧基-α-四氢萘醌-5-O-α-葡萄糖苷(4-methoxy-α-tetralone-5-O-α-glucopyranoside,Ⅴ)、4-乙氧基-8-羟基-α-四氢萘醌(4-ethoxy-8-hydroxy-α-tetralone,Ⅵ)、2,3-二羟基-1-(4-羟基取代苯基)-1-丙酮［2,3-dihydroxy-1-(4-hydroxy-phenyl)-propan-l-one,Ⅶ］、二氢红花菜豆酸(dihydrophaseic acid,Ⅷ)。结论 8个化合物均为首次从青龙衣中分离得到,其中化合物Ⅶ为新化合物,命名为核桃素D(juglanin D)。化合物Ⅳ为新的天然产物。     

HPLC测定不同生长期和采收期太空莲叶中荷叶碱的含量

目的建立太空莲叶中荷叶碱含量测定方法,测定太空莲叶不同生长期和采收期荷叶碱的含量。方法采用色谱柱Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm,5.0μm),乙腈-水-三乙胺-乙酸(27∶70.6∶1.6∶0.78),流动相流速为1.0 mL/min,检测波长为270 nm。结果在该色谱条件下,荷叶碱分离度良好,线性范围0.01-0.2 mg/mL。不同生长期和不同采收期荷叶中荷叶碱含量差异明显,8月初的初生嫩叶荷叶碱含量最高。结论不同采收期的近成熟叶荷叶碱含量普遍大于成熟叶,8月至9月的近成熟叶荷叶碱含量高于其他时间段的近成熟叶,因此综合考虑建议最佳采集时间为8月至9月,实验结果为荷叶资源的开发利用提供了参考依据。     

小青龙膏贴中马兜铃酸A限量检查和盐酸麻黄碱含量测定

目的建立小青龙膏贴中马兜铃酸A限量检查和盐酸麻黄碱含量测定方法。方法薄层色谱法检查马兜铃酸A限量。HPLC法测定盐酸麻黄碱含量,采用Zorbax TC-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);以甲醇-0.1%磷酸(10∶90)为流动相;流速:1mL/min;检测波长:207nm。结果细辛药材及制剂中未检出马兜铃酸A。盐酸麻黄碱含量线性范围0.0404-0.404μg(r=0.9999),平均回收率和RSD分别为100.21%和1.82%。3批样品中,盐酸麻黄碱含量分别为4.7273mg/贴、4.7137mg/贴、4.7195mg/贴。结论该方法简便、可靠,可用于小青龙膏贴中马兜铃酸A限量检查和盐酸麻黄碱含量测定。     

小青龙贴中桂皮醛含量测定的研究

目的建立小青龙贴中桂皮醛的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定,色谱柱Hypersil ODS-C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(35∶65);流速:1.0 mL.min-1;检测波长:290 nm;柱温:30℃;进样量:20μL。结果线性试验中桂皮醛在0.631～5.044μg.mL-1范围内呈良好的线性关系,r=0.999 9;精密度试验中峰面积RSD为0.65%;重复性试验峰面积RSD为0.59%;稳定性试验峰面积RSD为0.93%;平均加样回收率为99.61%,RSD为0.51%(n=6)。结论试验线性关系良好,精密度、稳定性及重现性均良好,加样回收率试验符合要求,可以作为小青龙贴中桂皮醛的含量测定。     

胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用

目的: 探讨胡桃醌对白血病细胞增殖的抑制作用,阐明胡桃醌抗白血病的机制。方法: 体外培养人白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞株,按不同处理因素分组：调零组,含有培养基、MTT和三联溶解液;空白对照组,含有各种人白血病细胞、药物溶解介质、培养液、MTT 和三联溶解液;实验组,分别采用不同浓度（终浓度为0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00和16.00 mg/L）的胡桃醌作用各种细胞株。MTT比色法检测胡桃醌对白血病细胞的增殖抑制作用。流式细胞术测定不同浓度胡桃醌对K562细胞株凋亡的影响。结果: 胡桃醌对白血病K562、Jurkat、U937、U266及NB4细胞株增殖均有较强的抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)(48 h)分别为3.87、1.13、4.48、1.87和4.67 mg/L。其中胡桃醌对Jurkat和U266细胞的抑制效果最为明显（P<0.05）,胡桃醌对其他3个白血病细胞株的IC50值均<40 mg/L,且胡桃醌对这5种细胞株增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性。流式细胞术检测显示,胡桃醌可诱导K562细胞凋亡,1、2、4、8和16 mg/L胡桃醌作用6 h,K562细胞凋亡率分别为(4.54±0.6) %、(11.5 4±0.6) %、(28.7±0.3) % 、(45.0±1.2) %和(76.1±1.4) %。结论: 胡桃醌可抑制多种白血病细胞株增殖,其机制可能与促进白血病细胞凋亡相关。     

胡桃醌通过PI3K/AKT途径促进前列腺癌LNCaP细胞氧化应激

目的 探讨胡桃醌对人前列腺癌LNCaP细胞的杀伤活性与其诱导氧化应激反应的相关性及机制.方法 采用 0、6.25、12.5、25、50和100 μmol/L胡桃醌作用前列腺癌 LNCaP细胞,MTT法检测不同剂量胡桃醌对LNCaP细胞生长抑制影响;胡桃醌联合抗氧化剂NAC作用细胞后,DCFH-DA作为荧光探针,用荧光酶标法检测活性氧(ROS);胡桃醌联合PI3K/AKT通路抑制LY294002作用细胞后,Western blot法检测p-AKT、AKT和Nrf2蛋白表达变化.结果 与阴性对照组比较,胡桃醌浓度在12. 5 μmol/L或以上显著抑制前列腺癌细胞生长(P＜0. 05, P＜0. 01).胡桃醌能够促进细胞ROS含量(P＜0. 01);胡桃醌联合抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)导致ROS含量下降(P＜0. 05),细胞存活率升高(＜0. 01).胡桃醌抑制p-AKT的表达,NAC能够恢复胡桃醌抑制的p-AKT表达.胡桃醌能够抑制细胞核Nrf2的表达,与PI3K/AKT抑制剂LY294002联合使用进一步抑制了 Nrf2的表达.结论 胡桃醌能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,作用的机制可能与促进ROS产生从而抑制PI3K/ AKT途径,导致Nrf2表达下降有密切关系.     

不同炮制温度和时间对炮姜中姜酮含量的影响

目的考察不同炮制温度和时间对炮姜中姜酮含量的影响。方法采用超高效液相色谱法对15份不同炮制温度和炮制时间的炮姜样品中姜酮含量进行测定。色谱条件:色谱柱为Acquity BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速0.3ml/min,检测波长280nm,柱温30℃。结果姜酮进样量在0.073 2~0.366 0μg时与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率为97.42%(RSD=2.35%)。炮姜中姜酮含量随着炮制温度和时间的变化明显,以炮制温度为200℃、炮制时间为6min时样品中姜酮含量最高。结论炮制过程中姜酮含量随着温度升高和时间延长呈现先升高后降低的趋势,所建立的超高液相色谱法简便、准确、重现性好,可用于炮姜中新生成分姜酮的测定。     

大黄不同煎煮时间对小承气汤中结合型蒽醌含量的影响

目的:探讨大黄不同煎煮时间对小承气汤中结合型蒽醌含量的影响,以确定大黄的最佳煎煮时间。方法:采用高效液相色谱法对大黄不同煎煮时间的小承气汤中结合型蒽醌的含量进行测定。色谱柱:Waters X Bridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15);流速:1 ml/min;检测波长:254 nm;柱温:25℃。结果:小承气汤中结合型蒽醌在大黄煎煮30分钟时含量最高。结论:小承气汤中大黄的最佳煎煮时间为30分钟。     

抗肿瘤中药青龙衣化学成分的研究

目的 研究抗肿瘤中药青龙衣的化学成分。方法 近年大量的药理实验及临床研究表明青龙衣CHCl₃及EtOAc部分具有显著的抗肿瘤作用,且毒性较小。本实验利用硅胶柱色谱和大孔吸附树脂分离化合物,并利用1D-NMR及2D-NMR光谱数据确定了化合物的结构。结果 从青龙衣的CHCl₃活性部位中分得8个化合物,并分别确定为20(S)-原人参二醇-3-酮(1)、达玛烷-20,24-二烯-3β-醇(2)、茸毛香杨梅酮(galeon)(3)、胡桃宁A(juglanin A)(4)、2α,3β,23-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸(5)、2α,3β-23-三羟基-12-烯-28-熊果酸(6)、齐墩果酸(7)、熊果酸(8)。结论 化合物1为首次从天然资源中分离得到的新天然产物;化合物2及5～8均为首次从胡桃属植物中分离得到,此前未见该属三萜类化合物的报道;化合物3为首次从青龙衣中分离得到。     

栽培西陵知母中菝葜皂苷元含量动态研究

目的：研究栽培西陵知母中菝葜皂苷元的积累变化规律。方法：采用高效液相蒸发光散射检测,测定不同采集时间知母药材中菝葜皂苷元的含量。色谱柱：Kromasil C18柱（250mm×4.6mm,5μm）。流动相：甲醇,流速1mL.min-1。柱温为30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度为50℃,蒸发温度为70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×105Pa。采用胆固醇为内标物,内标法定量。结果：栽培西陵知母各月菝葜皂苷元含量变化较大,尤以6月为最高,7月最低。春季各月含量总体平均高于6月份以后各月。结论：采收期对西陵知母药材质量有较大影响。栽培西陵知母中菝葜皂苷元的含量春季相对较高,春季知母返青前采挖,药材质量较高。     

胡桃醌体外抗胰腺癌细胞机制的初步研究

目的:探讨胡桃醌体外抗胰腺癌细胞的机制.方法:采用MTT法检测胡桃醌对BXPC-3细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析胡桃醌对BXPC-3细胞周期的影响.结果:MTT法试验结果显示,胡桃醌对体外培养的人胰腺癌BXPC-3细胞具有明显的生长抑制作用,24、48 h的IC50值为1.64x10-5,5.8x10-5 mol/L.同时胡桃醌能随着浓度的增加,时间的延长,诱导BXPC-3细胞周期停滞于G2期和S期,呈G2期和S期阻滞作用.结论:胡桃醌对胰腺癌BXPC-3细胞有明显的生长抑制作用,并能阻止其周期,诱导BXPC-3细胞凋亡.     

胡桃醌对宫颈癌caski细胞的细胞毒作用的研究

目的探讨胡桃醌对宫颈癌caski细胞增殖的影响。方法将宫颈癌caski细胞专代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的胡桃醌,并设空白对照组,用MTT比色法观察胡桃醌对体外培养的宫颈癌caski细胞生长的抑制作用,光学显微镜观察细胞形态学变化。结果MTT比色法测定显示,胡桃醌作用于宫颈癌caski细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论胡桃醌能抑制体外培养的宫颈癌caski细胞的增殖。     

栽培西陵知母中菝葜皂苷元含量动态研究

目的:研究栽培西陵知母中菝葜皂苷元的积累变化规律。方法:采用高效液相蒸发光散射检测,测定不同采集时间知母药材中菝葜皂苷元的含量。色谱柱:Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。流动相:甲醇,流速1mL.min-1。柱温为30℃。蒸发光散射检测器漂移管温度为50℃,蒸发温度为70℃,以氮气为雾化气,压力为1.03×105Pa。采用胆固醇为内标物,内标法定量。结果:栽培西陵知母各月菝葜皂苷元含量变化较大,尤以6月为最高,7月最低。春季各月含量总体平均高于6月份以后各月。结论:采收期对西陵知母药材质量有较大影响。栽培西陵知母中菝葜皂苷元的含量春季相对较高,春季知母返青前采挖,药材质量较高。