酸性肽对阿尔茨海默病大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶水平的干预

背景有实验指出酸性肽可能是通过抑制一氧化氮等毒性化合物的生成而提高阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力.目的建立阿尔茨海默病动物模型,观察给予不同剂量浓度的酸性肽治疗后大鼠脑一氧化氮、一氧化氮合酶与乙酰胆碱酯酶含量的变化.设计随机对照单一实验.单位郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室.材料实验于2003-02/07在郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室的第二研究室和实验动物房完成.选取雄性SD大鼠100只,用跳台实验除去反应迟钝的动物,共84只大鼠纳入实验,随机分为7组正常对照组,模型组,生理盐水组,吡拉西坦治疗组,酸性肽15,30,60mg/kg治疗组,12只/组.酸性肽为本课题组从牛脑中分离出的一个新的小分子肽,由三个谷氨酸连成的三肽.方法除正常对照组外,其余各组大鼠常规饲养1周后,均采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,脑海马注射5 μg鹅膏蕈氨酸,以损毁大鼠双侧迈纳特基底核建立阿尔茨海默病模型.正常对照组和模型组不给药,生理盐水组用生理盐水灌胃,吡拉西坦治疗组用0.3 g/kg吡拉西坦灌胃,酸性肽15,30,60mg/kg治疗组分别用15,30,60mg/kg酸性肽灌胃,连续20 d,1次/d,2mL/次.灌胃期满将大鼠麻醉后断头处死,立即在冰盘中开颅取脑制备组织匀浆.4℃下1 000 r/min离心10 min,取上清液用一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶检测试剂盒测定一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的含量.主要观测指标各组大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶的含量.结果纳入实验的84只大鼠全部进入结果分析.各组大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶和乙酰胆碱酯酶含量的比较与模型组比较,酸性肽15,30,60mg/kg治疗组一氧化氮含量均明显降低[(1.95±0.20),(1.39±0.10),(1.25±0.07),(1.00±0.04)mmoL/kg,P＜0.05];一氧化氮合酶含量均明显降低[(4.53±0.18),(3.39±0.09),(3.10±0.06),(2.97±0.06)μmol/kg,P＜0.05];乙酰胆碱酯酶含量无明显变化[(0.67±0.12),(0.71±0.11),(0.72±0.08),(0.72±0.07)mmol/L,P＞0.05].结论酸性肽能够显著降低阿尔茨海默病模型大鼠脑内一氧化氮、一氧化氮合酶的生成,而对乙酰胆碱酯酶的活性并无明显影响.提示酸性肽可能是通过抑制一氧化氮等毒性化合物的生成或毒性作用来提高阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力.     

去松果体大鼠学习能力、大脑皮质胆碱能纤维及一氧化氮合酶的变化

目的：探讨松果体功能减退对大鼠学习能力、大脑皮质胆碱能纤维分布以及一氧化氮合酶表达影响。方法：实验于1997—07／2000—06在珠江医院神经内科实验室完成。选择经Y型迷宫测试学习正常的雄性SD大鼠12只，随机分两组，实验组6只，行松果体摘除术，对照组6只行假手术。①学习能力测试：大鼠学习能力测试用三等分Y型迷宫进行，以大鼠学习尝试次数表示。②采用酶组织化学法测乙酰胆碱酯酶表达，采用SABC法检测神经元型一氧化氮合酶表达。③乙酰胆碱酯酶纤维定量分析：采用Leica Diaplan显微镜及Leica Quantimet 500&;#177;图像分析仪，测量单位面积内乙酰胆碱酯酶的密度，定量参数为每374693．656μm^2内乙酰胆碱酯酶纤维覆盖面积（μm^2）。运动皮质，体感皮质测量第Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ层，海马为CA1，CA2，CA3区的辐状层、腔隙层、分子层和齿状回多形细胞层。皮质神经元型一氧化氮合酶表达以每只大鼠随机取相同部位的3张切片，共计6张切片，光镜下分别随机选右侧皮质、内侧隔核一斜角带核、纹状体、海马区各部位相邻4个视野（&;#215;400），统计神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数。结果：纳入动物12只，均进入结果分析。①大鼠学习能力测试：术前实验组大鼠学习能力（14．67&;#177;4．97）次，与对照组（14．33&;#177;4．32）次基本一致（P〉0．05），松果体摘除40d后大鼠学习能力（28．67&;#177;2．42）次，比术前自身对照及术后对照组（13．83&;#177;8．33）次明显下降（P（0．01）。②大鼠大脑皮质中乙酰胆碱酯酶纤维密度测定结果：实验组各部位均比对照组明显降低[实验组运动皮质、体感皮质、海马CA1，CA2，CA3区和齿状回多形细胞层纤维密度分别为（15244&;#177;1339），（14764&;#177;1391），（12991&;#177;970），（15077&;#177;1020），（19546&;#177;1489），（19337&;#177;1378）μm^2，对照组分另4为（21001&;#177;1021），（17930&;#177;2225），（17260&;#177;1342），（18911&;#177;1048），（24108&;#177;1671），（22917&;#177;1909）μm^2，P（0．01]。③不同脑区神经元型一氧化氮合酶表达：实验组大鼠大脑皮质含有较多神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数，细胞数为（5．90&;#177;0．68）个，并以体感皮质稍多于运动皮质，多于对照组（3．68&;#177;0．39）个（P＜0．05）；隔核一斜角带核部神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数（16．21&;#177;2．03）个，明显多于对照组（9．32&;#177;1．05）个（P＜0．01）；海马部神经元型一氧化氮合酶阳性细胞数（4．27&;#177;0．75）个、纹状体区（9．35&;#177;2．58）个，与对照组（3．94&;#177;0．53）个和（8．96&;#177;2.31）个相比差异无显著性（P〉0．05）。结论：大鼠松果体摘除可以引起大鼠学习能力障碍，其原因可能与大脑皮质、隔核-斜角带核神经元型一氧化氮合酶过度表达，引起一氧化氮神经毒性致胆碱能神经元受损伤有关。     

大鼠性别及去势对基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元形态与数量及学习记忆功能的影响

目的：比较正常雌、雄大鼠以及去势大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的变化，为阐明学习记忆的神经内分泌学特点提供形态学资料。方法：实验于2001—03／2002—03在广州中山大学基础医学院人体解剖教研室脑研究室完成。将60只成年健康SD大鼠随机分为6组，正常雌性组、去卵巢2周组、去卵巢4周组、正常雄性组、去睾丸2周组、去睾丸4周组，每组10只。应用组织化学染色法观察各组大鼠基底前脑的内侧隔核、斜角带垂直支及斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元形态和数目。结果：60只大鼠全部进入结果分析。①各组大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元形态变化：组织化学染色法显示一氧化氮合酶阳性神经元的胞体和突起均呈紫蓝色，胞体多为圆形，椭圆形、双极形或多极形，常由胞体发出1～3支初级树突，但轴突未被染色。各组大鼠一氧化氮合酶阳性神经元的胞体和树突均相似。②各组大鼠基底前脑的内侧隔核、斜角带垂直支及斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数目：经组织化学染色法观察，正常雄性、雌性大鼠内侧隔核，斜角带垂直支及水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数基本一致[（38．5&;#177;4．0）个／切片，（33．0&;#177;3．1）个／切片；（45．5&;#177;6．0）个／切片，（42．8&;#177;4．9）个／切片；（63．8&;#177;8．1）个／切片，（58．9&;#177;7.8）个／切片，（P〉0．05）]。去睾丸2周组内侧隔核、斜角带垂直支的一氧化氮合酶阳性神经元数明显高于去卵巢2周组[（45．8&;#177;5．8）个／切片，（18．9&;#177;3．8）个／切片；（58．4&;#177;7．2）个／切片，（28．3&;#177;5．0）个／切片，（P〈0．01）]；而去睾丸2周组斜角带水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数高于去卵巢2周组[（60．3&;#177;8．5）个／切片，（45．8&;#177;6．2）个／切片，（P〈0．05）]。去睾丸4周组内侧隔核、斜角带垂直支及水平支的一氧化氮合酶阳性神经元数依然高于去卵巢4周组[（35．1&;#177;5．5）个／切片，（23．1&;#177;4．2）个／切片；（45．7&;#177;8．0）个／切片，（27．8&;#177;6．5）个／切片；（53．5&;#177;6．3）个／切片，（40．2&;#177;7．2）个／切片，（P〈0．05）]。结论：不论去势与否，一氧化氮合酶阳性神经元脑体和树突的形态变化不存在性别差异。正常雌雄大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元数不存在性别差异，但去势后一氧化氮合酶阳性神经元数则出现性别差异。这种差异不仅与卵巢雌激素和睾丸雄激素在雌雄个体中所发挥的不同作用密切相关，而且还有可能是促使雌雄个体表现出特征性的学习记忆功能性别差异的形态学基础。     

运动结合补充葛根素干预糖尿病大鼠一氧化氮及一氧化氮合酶的变化

目的：分析有氧运动结合补充葛根素对链脲佐菌素所致糖尿病大鼠血清及肝脏中的一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的影响。方法：实验于2005—08／2006—01在江西师范大学体育学院完成.①选取8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠60只，随机数字表法分为5组：正常对照组、模型对照组、运动组、葛根素组、运动＋葛根素组，12只／组：②除正常对照组外，其余各组均喂以高脂饲料，腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。血糖值≥14．7mmol／L且尿糖为＋＋～卌者确定为造模成功。正常对照组仅以普通饲料喂养，腹腔注射等体积0．1mmol／L的枸椽酸盐缓冲液。③造模后，运动组进行跑台训练，跑台坡度为0&;#176;，每天以10-15m／s的速度运动30min，共训练8周。葛根素组每天按500mg／kg体质量给予葛根素灌胃，共8周。运动＋葛根素组跑台训练的同时给予葛根素灌胃：正常对照组、模型对照组不进行任何干预：各组均以普通饲料喂养。④分别于造模后第3天、造模后第8周末对各组大鼠尾静脉取血测定空腹血糖。造模后第8周末，各组大鼠乙醚麻醉，心脏取血，离心取上层无溶血血清，硝酸还原酶法测定一氧化氮含量。取新鲜肝脏组织1g，用40mmol/L的磷酸钾缓冲液制成匀浆，离心取上清检测一氧化氮合酶活性。结果：共54只大鼠进入结果分析。①空腹血糖检测结果：造模后第3天～第8周末，各模型组空腹血糖值均明显高于正常对照组（P〈0．01）。与模型对照组比较，造模后第3天葛根素组、运动组、运动＋葛根素组空腹血糖值无明显变化[（18．3&;#177;4．7），（18．6&;#177;3．0），（18．9&;#177;4．6），（19．1&;#177;2．9）mmol／L，P〉0．051，第8周末均不同程度下降，尤以运动＋葛根素组明显f（22．3&;#177;4．2），（9．4&;#177;2．0）mmol／L，P〈0．01]。②造模后各组大鼠血清中一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的比较：与模型对照组比较，运动组、葛根素组一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性均明显降低（P〈0．01或0．05），运动葛根素组降低的幅度尤为显著[（58．58&;#177;8．97），（30．80&;#177;14．80）μmol／L；（2．0&;#177;0．23），（0．92&;#177;0．13）μkat/K;P均〈0．01]。③造模后各组大鼠肝脏组织中一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的比较：与模型对照组比较，运动组、葛根素组、运动＋葛根素组一氧化氮合酶活性略有下降，但差异无显著性意义[（0．26&;#177;0．02），（0．23&;#177;0．03），（0．21&;#177;0．01），（0．19&;#177;0．03）μkat／L，P〉0．05]；运动组、葛根素组一氧化氮含量均明显降低[（4．21&;#177;0．83），（2.86&;#177;0．64），（3．39&;#177;0．86）μmol／L，P〈0．051，运动＋葛根素组降低至（1．75&;#177;0．31）μmol／L，差异尤为显著（P〈0．01）：结论：有氧运动结合补充葛根素，能够有效降低糖尿病大鼠血清及脏肝中一氧化氮含量及一氧化氮合酶的活性。     

诱导型一氧化氮合酶对大鼠心肌梗死后心室重构的影响

目的：应用诱导型一氧化氮合酶特异性阻滞剂氨基胍阻滞急性心肌梗死后大鼠诱导型一氧化氮合酶的表达，分析其诱发的大量一氧化氮在心肌梗死后心室重构中的作用。 方法：实验于2002-07／2003—05在郑州大学医学院药理实验室完成。选择Wistar大鼠60只，随机分为3组，即盐酸氨基胍组、急性心肌梗死模型组及空白对照组，每组20只。①盐酸氨基胍组，即急性心肌梗死模型大鼠（异丙肾上腺素剂量为80mg／kg，腹腔注射）应用氨基胍600mg／（kg&;#183;d）腹腔注射。②急性心肌梗死模型组，即急性心肌梗死模型大鼠用同等容量的生理盐水腹腔注射。③空白对照组，即正常大鼠腹腔注射同等容量（10mL／kg）生理盐水。各组给药时间均为4周。给药结束后，采用硝酸还原法测定血清一氧化氮、结构型一氧化氮合酶以及诱导型一氧化氮合酶的表达情况；记录左心室内压及左心室压力最大上升、下降速率等血液动力学指标；测定组织学指标包括左心室／体质量比及心肌细胞直径。 结果：60只大鼠全部进入结果分析，无脱失。①急性心肌梗死模型组大鼠诱导型一氧化氮合酶及一氧化氮表达水平显著高于盐酸氨基胍组和空白对照组（F=56．231，32．560，P〈0．01）。②急性心肌梗死模型组大鼠的左心室／体质量比值显著高于盐酸氨基弧组、空白对照组[（2．62&;#177;0．035，2．42&;#177;0．038，2．42&;#177;0．039）mg／g（F=47．842，P〈0．01）]。急性心肌梗死模型组大鼠的心肌细胞直径显著大于盐酸氨基胍组、空白对照组[（10．54&;#177;0．56，7．41&;#177;0.33，7．26&;#177;0．37）μm（F=31．140，P〈0．01）]。 结论：诱导型一氧化氮合酶在急性心肌梗死后高表达及诱发大量一氧化氮促进心室重构的发生。     

神经型一氧化氮合酶在早期糖尿病大鼠肾组织中的表达

目的：观察早期糖尿病大鼠肾组织内神经型一氧化氮合酶的表达变化。 方法：实验于2005-03／10在锦州医学院科学实验中心与组织胚胎学实验室完成。60只两三月龄大鼠随机数字表法分成糖尿病模型组和正常对照组，每组30只。禁食12h后糖尿病组一次性腹腔注射链脲佐菌素50mg／kg，建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型，对照组注射相同体积的柠檬酸缓冲液。分别在第1，2，4周3个时间点处死动物，取肾组织，采用亚硝酸还原酶法检测一氧化氮的含量；采用免组织化学染色法检查致密斑处神经型一氧化氮合酶的表达，采用Mivnt细胞图像分析系统测定一氧化氮合成酶在致密斑处阳性细胞的灰度值。． 结果：在实验过程中，无动物死亡。全部进入结果分析。（1）1周时糖尿病模型组大鼠肾组织神经型一氧化氮合成酶含量明显低于正常对照组，差异有显著性意义【（1068．01&;#177;61．61），（2329．99&;#177;200．62）mmol／L，P〈0．05】；2，4周时糖尿模型病组大鼠肾组织神经型一氧化氮合成酶含量逐渐升高，2周时与对照组差异无显著性意义[（2334．59&;#177;192．40），（2372．11&;#177;193．34）mmol／L，P〉0．05]；4周时差异有显著性意义[（4939．51&;#177;133．44），（2407．30&;#177;174．94）mmol／L，P〈0．05]。②1周病程时糖尿病模型组大鼠肾皮质一氧化氮水平低于正常对照组。差异有显著性意义[（8．56&;#177;1．25），（11．23&;#177;2．08）μmol／L，P〈0．05]，2周病程时高于同期正常对照组，差异有显著性意义【（13．71&;#177;1．86），（9．93&;#177;2．01）μmol／L，P〈0．05】，4周病程时显著高于同期正常对照组，差异有极显著性意义[（16．29&;#177;2．46），（10．99&;#177;1．64）μmol／L，P〈0．01]。③各病程糖尿病模型组大鼠血糖均高于正常对照组大鼠。差异有显著性意义（P〈0．01）。 结论：在糖尿病大鼠肾脏病变的早期，肾组织内一氧化氮合成减少。可能主要是由于神经型一氧化氮合酶合成减少造成的。     

胍丁胺对吗啡戒断大鼠海马神经元型一氧化氮合酶的影响

背景：胍丁胺具有增强吗啡的镇痛作用、对抗吗啡的耐受和依赖等作用。目的：观察注射胍丁胺对吗啡戒断大鼠海马神经元型一氧化氮合酶的影响，分析海马一氧化氮通路是否参与胍丁胺抑制吗啡的戒断作用。设计：随机对照实验。单位：解放军总医院麻醉科。材料：实验于2004-04／07在解放军总医院麻醉科实验室完成。选取健康SD大鼠18只，随机分为盐水对照组、吗啡组、胍丁胺吗啡组。6只／组。方法：盐水对照组皮下注射生理盐水10mg／kg；吗啡组进行5d预处理，分别皮下注射吗啡10，20，30，40，50mg／kg，2次／d；胍丁胺吗啡组每次给予吗啡前30min皮下注射胍丁胺10mg／kg。末次给吗啡后6h，吗啡组和胍丁胺吗啡组均腹腔注射纳洛酮5mg／kg。激发吗啡戒断症状，记录1h内各项吗啡戒断症状的次数（包括湿狗样抖动、咀嚼、激惹、流涎、腹泻等体征），根据动物在纳洛酮激发戒断症状的前后体重差值计算体质量减轻数。行为学测定后将各组动物麻醉处死，取海马作冰冻切片，神经元型一氧化氮合酶免疫组织化学染色。用CMIAS系统进行图像分析．每张切片选5个视野积分吸光度的均值作为阳性神经元的积分吸光度。主要观察指标：①各组大鼠吗啡戒断症状测定结果。②各组脑海马中神经元型一氧化氮合酶的表达变化。结果：实验纳入大鼠18只，全部进入结果分析。①各组大鼠吗啡戒断症状测定结果：胍丁胺吗啡组大鼠湿狗样抖动、咀嚼、激惹、流涎、腹泻、体质量减轻等戒断症状均明显低于吗啡组[（2．0&;#177;1．3），（5．0&;#177;1．1）；（0．3&;#177;0．4），（1．8&;#177;0．7）；（3．2&;#177;1．2），（6．8&;#177;3．1）；（0．2&;#177;0．4），（1．2&;#177;0．9）；（2．7&;#177;2．1），（6．7&;#177;2．1）；（6．0&;#177;3．0），（12．8&;#177;2．7）次；P均〈0．01]，与盐水对照组基本相近（P〉0．05）。②各组脑海马中神经元型一氧化氮合酶的表达变化：各组大鼠脑海马中神经元型一氧化氮合酶阳性神经元主要分布在CA1区，其胞浆被染成棕黄色，圆形的细胞核被苏木精染成淡紫色。胍丁胺吗啡组阳性神经元免疫荧光吸光度值较吗啡组显著降低（24．32&;#177;8.31，50．82&;#177;15．13，P〈0．01），与盐水对照组基本相似（24．32&;#177;8．31，15．24&;#177;1．88，P〉0．05）。结论：胍丁胺能抑制吗啡的戒断症状，降低吗啡戒断大鼠脑海马CA1区神经元型一氧化氮合酶的活性，海马一氧化氮通路参与胍丁胺抑制吗啡的戒断。     

黄体酮对缺氧脑组织一氧化氮含量的影响

目的：观察成年小鼠缺氧后脑内一氧化氮含量的变化及黄体酮的干预作用。方法：实验于2002-09／2003-06在新乡医学院生理学与神经生物学教研室完成。32只雄性昆明种小鼠，随机分为4组，对照组、单纯缺氧组、低孕酮（4mg／kg）组和高孕酮（8mg／kg），后两组于缺氧前30min腹腔注射孕酮4mg／kg或8mg／kg。小鼠缺氧24h断头取脑，检测脑皮质及海马组织中的一氧化氮含量。结果：32只小鼠均进入结果分析。①缺氧24h后，单纯缺氧组脑皮质一氧化氮的生成量明显高于对照组[（2．15&;#177;0．29），（1．66&;#177;0．65）μmol／g，P〈0．05]；经孕酮预处理的两组，脑皮质组织一氧化氮含量较单纯缺氧组均有所下降，4mg／kg组的效果尤为明显，下降了35．81％（P〈0．01）。②海马组织在缺氧24h后，单纯缺氧组一氧化氮含量明显高于对照组[（1．76&;#177;0．60），（1．21&;#177;0．58）μmol／g，P〈0．05]；低孕酮（4mg／kg）组[（1．07&;#177;0．33）μmot／g]显著低于单纯缺氧组（P〈0.01）；而高孕酮（8mg／kg）组[（1．27&;#177;0．41）μmol／g]与单纯缺氧组差异无显著性（P〉0．05）。结论：成年小鼠缺氧24h后脑皮质和海马组织一氧化氮含量明显升高，黄体酮通过降低这种一氧化氮的升高，可能产生一定的神经保护作用。     

电针对癫痫大鼠脑组织及肝脏的一氧化氮和一氧化氮合酶含量的影响

目的：探讨电针对癫痫大鼠脑组织和肝组织中一氧化氮，一氧化氮合酶(nitric oxide syntheses，NOS)的影响，以及电针治疗癫痫的可能机制。方法：实验于2004-03／10在南京中医药大学第二临床医学院实验室完成。选择SD大鼠40只，随机分成为正常组、模型组、电针组、假针刺组，每组10只。采用比色法测定对癫痫造模大鼠的一氧化氮，NOS和一氧化氮／NOS比值进行随机对照分析性研究。结果：模型组脑一氧化氮[(19．76&;#177;2．66)μmol／L]，NOS[(498．8&;#177;947)nkat／g]和一氧化氮／NOS比值(1．38&;#177;0．46)明显高于正常组(P&;lt;0．05)，电针组脑一氧化氮[(6．04&;#177;3．52)μmol／L]，NOS[(203．9&;#177;102．2)nkat／g]和一氧化氮／NOS比值(1．00&;#177;0．57)明显低于模型组(P&;lt;0．05)，假针刺组一氧化氮，NOS和一氧化氮／NOS含量不明显变化。肝组织中各项因子变化与脑组织中变化一致。结论：电针对癫痫大鼠的一氧化氮，NOS和一氧化氮／NOS有显著的抑制调节作用。这可能是电针治疗癫痫临床取得疗效的重要机制之一。     

复方戒毒肽对吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶表达水平的影响

目的：观察复方戒毒肽对吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶水平的影响。 方法：实验于2003-03／2004-05在郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室动物室和郑州大学志愿戒毒研究中心第一实验室完成。复方戒毒肽由脑肽配制而成，主要含有酸性肽，牛神经肽FF等小分子神经肽。80只健康的昆明种小鼠，雌雄各半，8～10周龄，体质量（20&;#177;2）g。抽签随机分为8组，每组10只。正常对照组：不做任何处理。成瘾模型建立：腹腔注射吗啡，1次／d，100mg／kg，共11d。成瘾模型组：成瘾模型建立后，不做任何处理。生理盐水组：成瘾模型建立后，用生理盐水1mL／次灌胃治疗15d。自然戒断组：成瘾模型建立后，正常喂养15d，期间不做任何处理；高、中、低剂量的复方戒毒肽治疗组：成瘾模型建立后，给成瘾小鼠按80mg／kg，40mg／kg，20mg／kg的复方戒毒肽进行灌胃治疗，神经肽溶液的实际用量为1mL，0．5mL，0．25mL，时间为15d。单独使用复方戒毒肽组：仅给正常小鼠按80mg／kg剂量的复方戒毒肽灌胃15d。实验结束后取材，通过免疫组化和Biosens数字成像系统分析仪测定海马内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶水平。 结果：80只小鼠均进入结果分析。各组N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶的水平的比较：与正常对照组相比，成瘾模型组两者水平均增高（134．93&;#177;6．83，117．24&;#177;3．91；116．26&;#177;8．64，96．81&;#177;6．16，P〈0．05）；与成瘾模型组、自然戒断组、生理盐水组、40mg／kg和20mg／kg复方戒毒肽组相比，80mg／kg复方戒毒肽组两者水平均明显降低（134．93&;#177;6．83，117．24&;#177;3．91；133．10&;#177;8．97．115．82&;#177;5．61；134．92&;#177;8．51，116．55&;#177;5．10；120．02&;#177;7．49，106．03&;#177;8．99；120．02&;#177;7．49．106．03&;#177;8．99；128．59&;#177;9．26，112．59&;#177;2．93；130．50&;#177;2．50，113．22&;#177;5．14，P〈0．05）。 结论：80mg／kg的复方戒毒肽能够降低吗啡成瘾小鼠脑内N-甲基-D-天门冬氨酸受体1和一氧化氮合酶的水平。     

Exhaled nitric oxide

We introduce the standard method of measurement of nitric oxide recommended by American thoracic society in 1999 and report the results of exhaled NO and nasal NO in patients with obstructive sleep apnea syndrome(OSAS). Our data showed lower exhaled NO output in the patients with OSAS than that of normal volunteers(NV) and that of patients with simple obesity(SO). On the other hand, nasal NO in the OSAS patients is higher than that of NV and that of SO patients. Also, there were significant relationships between apnea index and exhaled NO and between desaturation during sleep and nasal NO. These findings suggested that NO from lower and upper airway will be a non-invasive maker of sleep disordered breathing in future.     

Modulation of nitric oxide synthase by nitric oxide donor compounds in migraine

A controlled study was performed to assess the involvement of the nitric oxide pathway in migraine pathophysiology. Thirteen patients with migraine without aura and seven clinically healthy subjects (C) were selected. All of the migraine patients were studied both before, during an asymptomatic phase (t ₀), and 1 h after the administration of 5 mg isosorbide dinitrate, a nitric oxide donor able to induce an experimental migraine attack (t ₁). The nitric oxide levels were analyzed as nitrite accumulation in serum samples, in peripheral blood mononuclear cell extracts, and culture supernatants. Basal nitrite levels in serum samples and peripheral blood mononuclear cell culture supernatants of migraine patients and healthy subjects indicated that migraine patients possess an activated nitric oxide synthesis pathway (t ₀ vs. C F=8.16,P<0.01 and F=16.2,P<0.01, respectively). As expected, in the migraine patients treated with the nitric oxide donor, a marked increase of nitrite levels was observed in sera (t ₁ vs.t ₀ P<0.05,t=3.05). In contrast, during the nitric oxide donor-induced migraine attacks a statistically significant decrease of nitrite levels in peripheral blood mononuclear cell culture supernatants was observed (t ₁ vs.t ₀ P<0.01,t=−4.03), whereas a significant increase of nitrite in total cell extracts was detected (t ₁ vs.t ₀ P<0.001,t=−6.89). These preliminary data suggest that nitric oxide could be involved in the neurovascular modifications leading to a migraine attack.     

Exogenous nitric oxide regulates activity and synthesis of vascular endothelial nitric oxide synthase

Background Nitric oxide (NO) – a major signalling molecule of the vascular system – is constitutively produced in endothelial cells (EC) by the endothelial NO synthase (eNOS). Since a reduced NO synthesis is an early sign of endothelial dysfunction and NO delivering drugs are used to substitute the impaired endothelial NO production, we addressed the effect of exogenous NO on eNOS in human umbilical venous endothelial cell cultures. Materials and methods The synthetic NO donor DETA/NO (trade name, but in the following we refer to detNO), that releases NO in a strictly first order reaction with a half life of 20 h, was used in our experiments. Results Short‐term (20–30 min) detNO treatment of EC increases the Ser¹¹⁷⁷ phosphorylation of the constitutively expressed endothelial NOS and the production of endogenous NO generated by eNOS from [³H]arginine. The phosphorylation of eNOS is Akt‐dependent and completely reverted by the phosphatidylinositol‐3 kinase (PI‐3K) inhibitor LY294002. A prolonged continuous exposure of EC to detNO 150 µmol L^?1 over a period of 24–48 h causes a reversible cell cycle arrest at G₁‐phase associated with a larger cell volume and increased cell protein content (hypertrophic phenotype of EC). The eNOS protein and mRNA of the hypertrophic cells and the generation of endogenous NO are reduced but eNOS phosphorylation could still be elevated by stimulation with vascular endothelial growth factor. Conclusions Our data explain clinical studies describing a short‐term but not a long‐term benefit of NO treatment for patients with cardiovascular risk factors. The results could be a rational approach to develop a generation of NO donors accomplishing a retarded release from NO donors that mimic the low continuous pulsatile stress‐induced release of endogenous NO.     

大鼠小肠移植术后血清一氧化氮及小肠组织一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶活性的变化

目的:研究同种大鼠小肠移植后内源性一氧化氮、一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)及诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesyn-thase,iNOS)的变化及一氧化氮与急性排斥反应的关系。方法:以大鼠小肠移植为研究对象,16只SD大鼠进行同系移植作为对照组,8只SD大鼠和8只Wistar大鼠进行同种移植作为实验组,两组移植后分别于第3,5,7天同时取血液及小肠组织,病理为常规苏木精-伊红染色观察,血清一氧化氮采用硝酸还原酶法测定,NOS和iNOS采用分光光度法测定。结果:在急性排斥反应发生的早期实验组血清一氧化氮水平与对照组比较显著升高(术后第3,5,7天t值分别为9.7900,9.0073,6.3159,P<0.01),小肠组织NOS及iNOS活性亦显著高于对照组(NOS术后第3,5,7天t值分别为5.9318,9.1237,3.0457,iNOS术后第3,5,7天t值分别为3.2008,5.4930,4.8170,P<0.01)。结论:大鼠小肠移植后NOS及iNOS变化与排斥反应相关,血清一氧化氮水平的检测可作为干预移植措施始动的指标之一。     

Intraoperative administration of nitric oxide

Despite its therapeutic efficacy in various clinical scenarios in the intensive care unit setting, there are limited reports regarding the intraoperative applications of nitric oxide (NO). The authors present 2 pediatric patients to whom inhaled NO was administered intraoperatively. In one patient, NO was used to treat hypoxemia that developed after the institution of one-lung ventilation during thoracoscopic resection of a bronchiectatic section of lung. In the second patient, NO was used to alleviate pulmonary hypertension and cardiovascular dysfunction with pulmonary artery cross-clamping for placement of a modified Blalock-Taussig shunt. The potential intraoperative applications and techniques for the intraoperative delivery of NO are presented.     

The role of nitric oxide synthase/nitric oxide in vascular smooth muscle control

Vascular compliance is dependent on endogenous and exogenous sources of nitric oxide (NO). In a discussion of therapeutics and NO derived via nitric oxide synthase (NOS) enzymes, it is necessary to examine the pathways of each drug to provide the clinical perfusionist with a greater understanding of the role of NOS/NO in vascular function. Endothelial-derived NO is a contributor in the vasoregulation of vascular smooth muscle. Therapeutics seek to mimic the vasodilatory effects of the endogenous NO. The therapeutics included in this review are nitroglycerin, nitroprusside, amyl nitrite, and inhalation of NO. L-Arginine supplementation provides additional substrate for the endogenous pathway that can augment NO production. NO is a small bioactive molecule involved in various biochemical pathways. Dysregulation of NO production can impair normal physiologic control of vascular compliance. Therefore, the purpose of this review is to provide the perfusionist with an understanding of the biochemical and pharmacological aspects of NOS/NO associated with vascular function.     

Inhaled nitric oxide down-regulates intrapulmonary nitric oxide production in lipopolysaccharide-induced acute lung injury

OBJECTIVE: To examine whether inhaled nitric oxide (NO) affected the intrapulmonary production of NO, reactive oxygen species, and nuclear factor-kappaB in a lipopolysaccharide (LPS)-induced model of acute lung injury. DESIGN: Prospective, randomized, laboratory study. SETTING: Experimental laboratory at a biomedical institute. SUBJECTS: Twenty male rabbits weighing 2.5-3.5 kg. INTERVENTIONS: Saline or LPS (5 mg/kg of body weight) was administered intravenously with or without NO inhalation (10 ppm) in each group of five rabbits. MEASUREMENTS AND MAIN RESULTS: LPS increased the lung leak index, the neutrophils and NO levels in bronchoalveolar lavage fluid, and NO levels produced by resting and stimulated alveolar macrophages. Inhaled NO decreased the lung leak index, the neutrophils and NO levels as measured by nitrite levels in the lavage fluid, and NO produced by the resting and stimulated alveolar macrophages. Inhaled NO also blocked the activities of reactive oxygen species and nuclear factor-kappaB binding to DNA in lavage cells and in alveolar macrophages. CONCLUSION: Inhaled NO attenuates LPS-induced acute lung injury, possibly by decreasing NO production in the lungs. The mechanism of reducing NO production resulting from inhaled NO may involve, in part, the activities of reactive oxygen species and/or nuclear factor-kappaB.     

Recovery from withdrawal of inhaled nitric oxide and kinetics of nitric oxide-induced inhibition of nitric oxide synthase activity in vitro

Objective: To examine the kinetics of successful nitric oxide (NO) withdrawal in vivo and in vitro.¶Design and setting: Prospective study in a university pediatric intensive care ward and research laboratory.¶Patients and materials: Nineteen patients with acute respiratory distress syndrome (ARDS) or persistent pulmonary hypertension of the newborn (PPHN). Primary porcine pulmonary artery cells in vitro.¶Interventions: NO inhalation and withdrawal in patients; exposure to NO donor sodium nitroprusside (SNP) and gaseous NO in vitro.¶Measurements and results: In patients: a slight, but significant, increase of oxygenation index (OI) from 4.57 ± 0.24 cmH₂O/torr (mean ± SEM) to 4.90 ± 0.26 cmH₂O/torr after withdrawal of NO (p < 0.001). Recovery of OI (4.43 ± 0.23 cmH₂O/torr) 30 min after weaning, a significant drop after 4 h (3.72 ± 0.17 cmH₂O/torr; p < 0.001), values restored after 12 h.¶In vitro: NO synthase (NOS) activity was significantly lower in SNP-incubated cells (20.0 ± 4.0 μm/min) than in control cells (37.6 ± 7.0 μm/min; p < 0.05). Thirty minutes after SNP withdrawal there was NOS activity of 35.8 ± 10.0 μm/min with a significant increase by 4 h (p < 0.05). No alteration of endothelial NOS (ENOS) mRNA expression by NO (Northern Blot).¶Conclusion: In patients there is a slight, but significant, reversible increase of OI after successful weaning from NO. In vitro, NO leads to a reversible decrease of ENOS activity on a post mRNA level, resembling clinical observations.