TF3-H4对CD4~+CD25~+调节性T细胞和CD4~+CD25~-效应性T细胞早期活化的影响

目的观察1',2',3',7'-四氢茶黄素-3,3'-双没食子酸酯(TF3-H4)对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的影响,分析TF3-H4对两群功能相反的CD4+T细胞的作用。方法免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞,加入ConA或PDB,和TF3-H4共同孵育12 h后收集细胞,流式细胞仪分析细胞表面早期活化标志CD69的表达。结果在ConA和PDB的作用下,两群细胞早期活化标志CD69的表达均升高。TF3-H4(20 mg.L-1)不能抑制PKC激动剂PDB激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,却能抑制ConA激活的CD4+CD25-效应性T细胞CD69表达;同时,TF3-H4也能明显抑制ConA激活的CD4+CD25+调节性T细胞的CD69表达。结论茶黄素衍生物TF3-H4可能经由TCR活化途径的上游抑制CD4+CD25-效应性T细胞活化;TF3-H4对CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞早期活化的抑制作用,可能是该类化合物发挥抗炎、抗肿瘤作用的机制之一。     

杨梅素对淋巴细胞活化及增殖的影响

目的研究杨梅素(myricetin)对小鼠T细胞活化及增殖的影响,探讨其作为免疫调节药物开发的可能性并提供相关实验依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的杨梅素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术,流式细胞仪检测杨梅素对小鼠CD3+T细胞CD69表达的影响;采用3H-TdR参入法检测杨梅素对淋巴细胞增殖的影响,采用半定量RT-PCR技术从mRNA水平检测杨梅素对IL-2mRNA表达的影响。采用ELISPOT检测杨梅素对IFN-γ分泌的影响。结果杨梅素能抑制T细胞早期活化标志CD69的表达,并能抑制淋巴细胞增殖反应,同时对淋巴细胞活化后IL-2 mRNA的表达及IFN-γ的分泌也有抑制作用。结论杨梅素对淋巴细胞的活化增殖反应具有抑制作用。     

选择性去除表达CD25+、CD69+的同种异体反应T细胞的实验研究

目的 探讨体外选择性去除表达CD25+、CD69+的同种异体反应T细胞协调移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤的可能性.方法 流式细胞仪检测初次单向混合淋巴细胞反应CD25+、CD69+表达情况,磁性细胞分离系统在细胞表达高峰去除CD25+、CD69+同种异体反应T细胞.MTT法在各时间点检测不同抗原组再次混合淋巴细胞反应的细胞增殖情况.结果 再次单向混合淋巴细胞反应显示明显降低了对相同刺激原的反应性(48.82±13.71)%,保留大部分对无关刺激原的反应性(65.47±9.84)%和肿瘤刺激原的反应性(64.83±3.65)%.结论 体外选择性去除表达CD25+、CD69+的同种异体反应T细胞可以协调移植物抗宿主病和移植物抗肿瘤.     

穿龙薯蓣皂苷元对小鼠T淋巴细胞CD69、CD25表达影响的体外研究

目的研究穿龙薯蓣皂苷元(diosgcnin,Dio)对小鼠脾脏T淋巴细胞CD69、CD25表达的影响,探讨Dio的免疫调节机制。方法以不同浓度Dio与经刀豆蛋白A(Con A)刺激的T淋巴细胞共同培养,用流式细胞术和Western-blot法检测Dio对CD69、CD25表达的影响。结果 Dio质量浓度在3.75~15 mg·L~(-1)内,对CD69、CD25的表达有抑制作用,随药物质量浓度递增抑制作用增强,7.5mg·L~(-1)为最佳抑制浓度,超过此浓度后,抑制作用逐渐减弱。结论 Dio对T淋巴细胞CD69、CD25的表达有抑制作用,即Dio对T淋巴细胞的早期、中期活化均有抑制作用。     

丙二酸次氮酰胺对刀豆蛋白刺激的胶原性关节炎模型大鼠CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞体外分化的影响

目的:研究来氟米特活性代谢物丙二酸次氮酰胺(A771726)对刀豆蛋白(ConA)刺激的胶原性关节炎(CIA)模型大鼠CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(CD4+CD25+Tregs)体外分化的影响及其治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法:取大鼠分为正常对照组和CIA模型组,建模后制备脾淋巴细胞悬液,再分为正常组、模型组和A771726低、中、高剂量(0.1、1、10μmol·L-1)组,各组加入ConA刺激和相应药物培养液培养48h后,以MTT法检测各组脾淋巴细胞增殖情况,流式细胞术检测各组CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例;反转录-聚合酶链式反应检测各组CD4+CD25+Tregs特异性标志物Foxp3和转化生长因子β(TGF-β)mRNA表达情况;酶联免疫吸附测定法检测各组TGF-β浓度。结果:与正常组比较,模型组脾淋巴细胞增殖明显升高(P<0.01),CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例、Foxp3和TGF-βmRNA表达、TGF-β浓度均明显降低(P<0.05);与模型组比较,A7717263个剂量组脾淋巴细胞增殖明显降低(P<0.05或P<0.01),A771726高剂量组CD4+CD25+Tregs占CD4+T淋巴细胞的比例明显升高,A771726中、高剂量组Foxp3和TGF-βmRNA表达、TGF-β浓度均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:A771726可抑制CIA模型大鼠脾淋巴细胞增殖,诱导CD4+CD25+Tregs的分化,其机制可能与上调TGF-β的表达和分泌有关。     

咖啡酸苯乙酯对小鼠CD3~+T细胞体外活化和增殖的影响

目的研究咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester,CAPE)对小鼠CD3+T淋巴细胞活化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结淋巴细胞,制备淋巴细胞悬液。在淋巴细胞活化实验中,分别与不同浓度的咖啡酸苯乙酯预先孵育2h后,加入促分裂原伴刀豆蛋白A(ConA),运用荧光抗体染色技术结合流式细胞术,8h后,检测T淋巴细胞早期活化标记分子CD69的表达情况;24h后,检测T淋巴细胞中期活化标记分子CD25的表达情况;在淋巴细胞增殖试验中,运用CFDA-SE标记法检测T淋巴细胞刺激48h后的增殖情况。结果CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞活化,且呈浓度依赖性;CAPE(0·5、1、5、10mg·L-1)能够明显地抑制ConA刺激的小鼠淋巴细胞增殖,且呈浓度依赖性。结论CAPE对小鼠CD3+T淋巴细胞的体外活化和增殖具有抑制作用,其作用机制可能通过同时抑制PLC-γ信号途径和MAP激酶途径,由此推理CAPE是一种潜在的有效的免疫抑制剂。     

模拟微重力下瘦素对肺T淋巴细胞蛋白激酶C信号转导途径的影响

目的探讨在模拟微重力下瘦素对肺T淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)信号转导途径的影响。方法分离肺T淋巴细胞,利用旋转式细胞组织培养系统(RCCS)模拟微重力条件。培养T淋巴细胞后,采用PepTag非放射性PKC检测试剂盒测定T淋巴细胞PKC活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定T淋巴细胞的白细胞介素-2(IL-2)生成;采用流式细胞技术检测T淋巴细胞表面抗原CD25、CD71的表达。结果在普通细胞培养容器组,刀豆蛋白A(ConA)组与瘦素组、ConA+瘦素组与ConA组相比,PKC活性增强,IL-2生成增加,表面表达CD25分子的细胞增多;模拟微重力条件下,与普通细胞培养容器培养的T淋巴细胞相比较,ConA刺激后,PKC活性、IL-2水平,表面表达CD25分子的细胞减少(P<0.01);在模拟微重力条件下,瘦素组与ConA组相比,相同指标无明显变化,而且加入瘦素的ConA组与ConA组比较,仍无明显变化。RCSS组中的ConA+瘦素组,与普通细胞培养容器组中的ConA+瘦素组相比较,上述指标均降低,差异有统计学意义(P<0.01);且在模拟微重力条件下,瘦素组和ConA+瘦素组与同样条件下的ConA+12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)组相比,上述所有指标均降低(P<0.01)。结论模拟微重力条件下,T淋巴细胞的激活受到抑制;PKC的活性降低,表面表达CD25的细胞数降低,T淋巴细胞分泌的IL-2降低;同样条件下,PMA对T淋巴细胞的上述指标有部分恢复作用。     

雷公藤甲素对类风湿性关节炎患者外周血T细胞的免疫抑制作用

目的:研究雷公藤甲素对类风湿性关节炎(RA)患者外周血T细胞免疫功能的抑制作用。方法:在RA患者外周血T细胞中加入T细胞多克隆刺激剂(0.2μg/ml)以活化淋巴细胞并分泌细胞因子。实验分为空白对照(常规培养液)组、抗人CD3抗体(anti-CD3)刺激(0.2μg/ml)组、雷公藤甲素(anti-CD3 0.2μg/ml+雷公藤甲素1 mmol/ml)组。采用密度梯度离心法分离RA患者的外周血单核细胞(PBMCs),加入雷公藤甲素,以酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞γ干扰素(IFN-γ)含量,流式细胞仪检测分泌IFN-γ、白细胞介素(IL)-2、IL-4与T细胞活化分子CD69和CD25的CD4+、CD8+T细胞百分比。结果:与anti-CD3刺激组比较,雷公藤甲素组PBMCs中IFN-γ含量减少,分泌IFN-γ、IL-2、IL-4的CD4+、CD8+T细胞百分比降低,分泌CD69和CD25的CD4+、CD8+T细胞百分比降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制T细胞活化和细胞因子分泌来发挥免疫抑制作用,从而发挥对RA的临床治疗作用。     

过敏性紫癜患儿外周血CD4~+CD25~+CD127~-调节性T细胞表达及意义

目的探讨过敏性紫癜(schonlein-henoch purpura,HSP)患儿治疗前后外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达及其临床意义。方法采用免疫荧光流式细胞技术检测56例HSP患儿治疗前后及20例健康儿童外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达值。结果 HSP患儿治疗前CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达值明显低于治疗后组和正常对照组(P<0.01),HSP治疗后组CD4+CD25+CD127-调节性T细胞表达值与正常对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSP治疗前患儿外周血CD4+CD25+CD127-调节性T细胞的表达值较正常对照组明显降低,而在治疗有效后升高,说明调节性T细胞可能参与了HSP的发病和病情的发展。而CD4+CD25+CD127-Treg细胞水平的检测可作为对HSP患儿预后判断的一个有效指标。     

川芎嗪体外对活化T细胞的抑制作用

目的 研究川芎嗪体外对活化T细胞的作用及机制.方法 应用植物血凝素(PHA)刺激正常人外周血T细胞,经川芎嗪处理后,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法榆测细胞增殖,流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞上CD25(白细胞介素-2受体,IL-2R)及负性协同刺激分子程序性死亡分子1(PD-1)的表达,ELISA法检测细胞因子IL-2水平变化.结果 川芎嗪(150μg/ml)处理72 h后,能明显抑制T细胞的增殖和活化(P＜0.01),并降低IL-2水平(P＜0.01);能抑制CD4+和CD8+T细胞上IL-2R的表达(P＜0.05);对负件协同刺激分子PD-1的表达作用不明显(P＞0.05).结论 川芎嗪对免疫过激T细胞具有一定的抑制作用,其对T细胞的免疫抑制作用可能与降低IL-2的分泌和抑制IL-2R(CD25)的表达有关.     

Differential effect of sodium arsenite during the activation of human CD4+ and CD8+ T lymphocytes

Contamination of water with arsenic is a problem affecting several regions of the world. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from chronically exposed individuals show a lower replicating activity than non-exposed individuals when stimulated with phytohemagglutinin (PHA). We have previously reported that PBMC from healthy donors treated in vitro with 1 muM sodium arsenite (NaAsO2) and stimulated with PHA showed a reduction in proliferation by a delay in cell cycle entry and a decrease in the rounds of cell division. In this paper we tested the effect of 1-5 muM NaAsO2 on the proliferation, viability, blast transformation, expression of the CD4 and CD8 molecules, and during the activation and proliferation of both CD4+ and CD8+ T lymphocytes. We found a reduction in cell proliferation and an increase in non-dividing cells with higher concentrations of NaAsO2 (2-5 microM) when proliferation was studied by 5,6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) dilution. The use of 7-aminoactinomycin D (7-AAD) in CFSE-labeled cells allowed us to detect an increase in percentage of non-dividing cells, and an increase in apoptotic/dead cells mainly in non-proliferating cells. Analysis of the expression of CD4 and CD8 molecules on these cells showed that concentrations > or = 2 microM NaAsO2 reduced the expression of the CD8 molecule and induced apoptosis/death in CD4+ cells. Analysis of blast transformation by flow cytometry showed an accumulation of CD8+ resting cells in the presence of NaAsO2. Analysis of CD25 and CD69 expression in kinetics experiments in both subtypes showed a delay in the expression of CD25 and a delay in the downregulation of the CD69 molecule, in both CD4+ and CD8+ cells. However, in the case of CD8+ cells, we detected an accumulation of a CD25- CD69- population in the presence of increasing concentrations of NaAsO2. Altogether, our results show that NaAsO2 alters the expression kinetics of the early activation molecules CD25 and CD69 similarly in both subtypes. In addition, activated and non-activated CD4+ cells die by apoptotic mechanisms and although a percentage of CD8+ cells also die by apoptosis, a subpopulation of these cells is unable to activate and thus accumulates as resting cells.     

类风湿关节炎外周血和关节滑液中T细胞CD25 CD69表达及意义

目的 检测类风湿关节炎(RA)患者的外周血和关节滑液中T细胞表达CD25和CD69水平,并探讨它们在关节炎症发生过程中的免疫病理作用.方法 于2005年4月-2006年9月间,采集了30例RA患者和12例健康人外周血和膝关节滑液标本,利用流式细胞仪检测T细胞CD25、CD69表达,分析它们在疾病发展过程中的作用.结果 RA患者外周血T细胞CD25、CD69表达稍有升高,但与健康者比较无统计学差异(P＞0.05);而RA患者的关节滑液中T细胞表达CD25、CD69水平明显高于健康对照者(P＜0.05).12例RA患者接受免疫抑制剂治疗,2个月后分析发现患者的T细胞表达CD25、CD69水平显著下降(P＜0.05).结论 RA患者关节滑液中T细胞表达CD25、CD69水平明显升高,提示在关节炎症发生时,T细胞激活、增殖,并直接参与了关节滑膜组织的免疫应答.     

Rottlerin inhibits human T cell responses

Rottlerin is a pharmacological inhibitor of protein kinase C (PKC) theta, a novel PKC selectively expressed in T lymphocytes. PKC theta is known to regulate T cell receptor (TCR)/CD28 signalling pathways in T lymphocytes, but the impact of PKC theta inhibition on human T cell responses remains undefined. In this work, we describe the effects of rottlerin on the responses of CD4+ and CD8+ human T lymphocytes upon polyclonal activation. We observed a dose-dependent inhibition of CD4+ and CD8+ T cell proliferation in response to anti-CD3/anti-CD28 antibodies stimulation in the presence of rottlerin. This inhibition was associated with impaired CD25 expression and decreased interleukin (IL)-2 production in activated T cells. In contrast, rottlerin did not alter IL-2-induced T cell proliferation. Furthermore, we demonstrated that rottlerin blocked interferon (IFN) gamma, IL-10 and IL-13 mRNA expression in TCR/CD28 activated CD4+ T cells. These findings place rottlerin as a potent immunosuppressive agent for the development of novel therapies in T cell mediated immune disorders.     

木瓜苷对环磷酰胺增强的小鼠接触性超敏反应的影响(英文)

目的　探讨胸腺在环磷酰胺 (Cy)增强的小鼠接触性超敏反应 (CHS)中的作用及木瓜苷 (GCS)对胸腺T淋巴细胞亚型的影响。方法　采用了 2 ,4 二硝基氟苯 (DNFB)诱导小鼠CHS模型及Cy诱导小鼠增强CHS模型 ,检测ConA诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖、胸腺T淋巴细胞亚型和ConA诱导的胸腺T淋巴细胞培养上清中TGF β1,IL 4和IL 2水平。结果　小鼠CHS模型中 ,ConA诱导的脾淋巴细胞增殖增强 ,CD4 +CD8+双阳性胸腺T淋巴细胞比例增加 ,胸腺细胞产生的Th1和Th3型细胞因子IL 2和TGF β1水平增高而Th2型细胞因子IL 4水平降低。DNFB初次致敏前 3d腹腔注射Cy (2 5 0mg·kg- 1)可以增强CHS反应。GCS(12 0和 2 4 0mg·kg- 1)连续灌胃 12d可以提升Cy增强的小鼠CHS胸腺T淋巴细胞中CD4 - CD8- 和CD4 +CD8- 细胞比例 ,降低CD4 +CD8+细胞比例 ;并提高胸腺淋巴细胞培养上清中IL 4水平 ,降低IL 2和TGF β1水平。结论　GCS对Cy增强的小鼠CHS有明显抑制作用 ;可有效调节小鼠胸腺CD4 /CD8和Th 淋巴细胞亚群及细胞因子产生平衡。     

调节性T淋巴细胞在HCV感染者病程不同阶段的表达

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在HCV感染者病程不同阶段的表达及其意义。方法收集非活动性HCV感染33例(A组)、活动性HCV感染32例(B组)、慢性丙型肝炎56例(C组)、HCV相关性肝硬化47例(D组)、HCV相关性肝癌45例(E组)和健康对照者60例(F组),采用流式细胞术检测外周血CD4+T细胞中CD4+CD25+Treg的表达频率,并进行统计学分析。结果 B、C、D、E组外周血CD4+T细胞中CD4+CD25+Treg的表达频率均明显高于F组(P<0.01)。组间比较,A组患者外周血的CD4+CD25+Treg细胞表达频率明显低于B、C、D、E组(P<0.01),D、E组表达频率明显高于B、C组(P<0.01)。结论 HCV感染导致CD4+CD25+Treg细胞的增殖与活化,使机体对其的免疫清除不完全,从而促进HCV感染者疾病的进展和肝癌的发生。     

红车轴草提取物对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞分泌NO的影响

探讨红车轴草提取物(RCE)在体外对小鼠T淋巴细胞和巨噬细胞的影响。MTT法检测RCE对细胞的毒性作用。荧光抗体染色结合流式细胞术检测RCE对T淋巴细胞在Con A的刺激下表达活化抗原CD69、CD25、CD71的影响。CFDA-SE标记技术结合流式细胞术分析RCE对T淋巴细胞在Con A诱导下增殖情况的影响。Griess法检测RCE对小鼠巨噬细胞在LPS刺激24 h后分泌NO的影响。RCE对小鼠有潜在的抗炎作用。RCE对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的细胞毒作用很小。不同质量浓度的RCE能够很好的抑制过量的炎症相关信号分子表达，如NO, CD69, CD25, CD71，且呈剂量依赖性。RCE能够抑制T淋巴细胞的增殖。数据显示RCE可能通过对小鼠淋巴细胞活化与增殖及巨噬细胞NO分泌的抑制展示其抗炎效应。