大黄素对内毒素刺激下的大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNFα及NO的影响

目的：研究大黄素抗炎作用机理。方法：利用脂多糖（Lipopolysacchride,LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞（PMφ）作为人体过度炎症反应的体外模型,用MTT法和荧光法测定了大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌TNFα,NO的影响。结果：大黄素可通过抑制LPS刺激的大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNFα,抑制过度的炎症反应;而对于未经LPS刺激的大鼠腹腔巨噬细胞,大黄素可促进TNFα的分泌。大黄素能抑制炎症反应中的NO的大量合成与释放。结论：大黄素对机体的免疫功能可能具有双向的调节作用。     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.     

芦荟多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及产生IL-1的影响

目的研究芦荟多糖(APS)对ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应,腹腔巨噬细胞分泌IL-1含量的影响。方法MTT法测定淋巴细胞增殖实验和IL-1。结果APS 10 g/kg2、0 g/kg能够显著提高正常小鼠脾脏T、B淋巴细胞的增殖能力(P<0.05,P<0.01),明显促进小鼠巨噬细胞分泌IL-1(P<0.05)。结论APS对正常小鼠的免疫功能具有促进作用。      

用干扰素α和内毒素诱导巨噬细胞产生肿瘤坏死因子

本文研究了用 IFNα联合 LPS 诱导小鼠骨髓及腹腔巨噬细胞产生 TNF 的动态,通过抗 TNF 血清对TNF 活性免疫吸收试验。证明巨噬细胞诱导培养上清引起 L929细胞毒作用的因子为 TNFα。结果证明:(1)HrIFNα和 LPS 在诱导骨髓和腹腔巨噬细胞产生 TNF 上有协同作用。(2)TNFα产生量以培养4hr     

δ阿片受体激动剂对LPS诱导的巨噬细胞凋亡及坏死的影响

目的研究δ阿片受体激动剂DADLE对LPS诱导的巨噬细胞凋亡和坏死的影响。方法用LPS（100μg/L）刺激大鼠腹腔巨噬细胞,在LPS后立即或4h后加入DADLE（104M）。流式细胞仪和共聚焦成像检测巨噬细胞凋亡及坏死,ELISA法检测巨噬细胞细胞核NF—KB的活化水平,Westemblot法检测p38MAPK活化水平。ELISA法检测细胞培养上清TNF-α、IL-1β和HMGB1水平。结果DADLE明显抑制了LPS诱导的巨噬细胞凋亡及坏死,降低了细胞培养上清中TNF—α、IL-1β和HMGBl的水平,而且对巨噬细胞NF—kB及p38MAPK的活化均有抑制作用。结论DADLE通过抑制NF—kB及p38MAPK的活化。减少了LPS诱导的巨噬细胞凋亡、坏死及细胞因子的释放。     

半夏泻心汤通过介导MAPK信号通路抑制巨噬细胞炎症因子的分泌

目的:观察半夏泻心汤体外抑制巨噬细胞分泌炎症因子的作用及对MAPK炎症信号通路的影响,以探讨其治疗胃炎的可能机制。方法:取小鼠8只,提取小鼠腹腔巨噬细胞,原代培养;用家兔制备半夏泻心汤含药血清和对照血清。小鼠腹腔巨噬细胞分为空白对照组、脂多糖(LPS)组、地塞米松组及半夏泻心汤5%含药血清组、10%含药血清组和20%含药血清组,各组分别给予对照血清、LPS、地塞米松和各浓度含药血清。作用6 h后收集细胞,用qRT-PCR方法检测细胞内IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA相对表达量;作用24 h后,用ELISA方法检测细胞培养上清中炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α的蛋白含量。收集20%含药血清作用30 min、60 min和2 h后的细胞,用Western blot方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和P38的磷酸化水平。结果:qRTPCR结果显示,与不含药血清对照组比较,LPS能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01);与LPS组比较,地塞米松能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01);5%含药血清能明显抑制巨噬细胞TNF-α的mRNA表达(P0.01),10%和20%含药血清均能明显抑制IL-1β、IL-8和TNF-α的mRNA表达(P0.01)。ELISA结果显示,5%含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β的分泌(P0.01),10%、20%含药血清能明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞IL-1β、IL-8和TNF-α的分泌(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,半夏泻心汤含药血清作用30 min、60 min均能抑制小鼠腹腔巨噬细胞MAPK信号通路中P38磷酸化水平(P0.05、P0.01);含药血清作用2 h能抑制巨噬细胞的ERK和P38的磷酸化水平(P0.01)。结论:半夏泻心汤可能通过调节巨噬细胞内MAPK炎症信号通路中ERK、P38的磷酸化水平,抑制巨噬细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-8和TNF-α而起到治疗胃炎的作用。     

PGRN缺失型腹膜巨噬细胞对细菌脂多糖的体外炎症应答

目的   观察颗粒蛋白前体(PGRN)对细菌脂多糖(LPS)诱导腹膜巨噬细胞(PM)炎症应答的影响。方法   诱导提取野生型(WT)小鼠及PGRN基因敲除小鼠(KO)腹膜细胞(PEC),观察PEC数目、形态和类型;流式细胞术检测PEC的巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80。LPS分别处理WT或KO小鼠PM,LPS、重组PGRN或LPS加重组PGRN分别处理WT小鼠PM,培养24h后收集细胞上清,ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素12(IL-12),Griess法检测一氧化氮(NO)。 结果   PGRN缺失对小鼠PEC的数目、成分及巨噬细胞表面标志物CD11b、F4/80的表达无明显影响;与WT组相比,LPS诱导PGRN KO来源的PM分泌较高水平的TNF-α、IL-1β、IL-12及NO。外源给予重组PGRN后,LPS诱导WT组PM分泌TNF-α、IL-1β、IL-12及NO的水平降低。结论   PGRN缺失使PM对LPS的刺激产生了更强的炎症反应;外源性给予重组PGRN则可抑制LPS诱导PM 释放前炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-12及炎症介质NO。     

α黑素细胞刺激素对大鼠胶原性关节炎软骨破坏的抑制作用

目的：研究α黑素细胞刺激素(α—melanocyte—stimulating hormone，α—MSH)对大鼠胶原性关节炎(collagen—induced arthritis，CIA)软骨破坏的保护作用及其机制。方法：建立大鼠CIA动物模型，随机分为3组：正常对照组，CIA组和α—MSH注射组，每组8只。于致敏建模当天起连续腹腔注射α—MSH或PBS，比较各组大鼠组织病理学及X线放射学表现。收集CIA组牛Ⅱ型胶原(bCⅡ)诱导的大鼠淋巴细胞和LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞，加入不同浓度的α—MSH(10^-12～10^-6mol／L)后，分别培养48h和24h收集上清，应用ELISA法测定IL-1β和IL-10含量，MTT法测定TNF—α浓度，硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)水平。结果：α—MSH可改善关节炎大鼠病灶的病理及X线表现，抑制关节软骨破坏。给予α—MSH后，CIA大鼠腹腔巨噬细胞和淋巴细胞上清中IL-1β、TNF—α及NO水平明显下降，IL-10含量则明显升高。结论：α—MSH对关节炎大鼠软骨破坏具有抑制作用，其机制可能与调节细胞因子及NO的水平有关。     

牛磺酸对小鼠腹腔巨噬细胞功能调节作用的体外研究

目的 研究牛磺酸对小鼠腹腔巨噬细胞功能的调节作用。方法 收集小鼠腹腔巨噬细胞,调整细胞浓度为2×10⁵/mL,分为5组,即正常对照组,LPS对照组(LPS终浓度为1 μg/mL)和低、中、高牛磺酸剂量组(牛磺酸的终浓度分别为5、50和500 μg/mL),培养24 h后ELISA法检测细胞上清中IL-12、TNF-α、IL-1、IL-6含量;瑞氏染色法检测并计算巨噬细胞对白色葡萄球菌的吞噬率和吞噬指数、Griess法检测吞噬葡萄球菌后细胞上清中NO的含量。结果 各剂量牛磺酸组的腹腔巨噬细胞TNF-α和IL-6含量均高于正常对照组(P<0.05),高剂量牛磺酸组IL-12的含量高于对照组(P<0.05),各剂量的牛磺酸组IL-1含量与对照组比较没有统计学意义;中、高剂量的牛磺酸组巨噬细胞对葡萄球菌的吞噬率、吞噬指数和上清中NO 的含量均高于正常对照组(P<0.05)。结论 牛磺酸可调节小鼠腹腔巨噬细胞IL-12、TNF-α、IL-6的分泌,但对IL-1的分泌没有调节作用,牛磺酸可促进巨噬细胞对葡萄球菌的吞噬和杀伤功能。     

济南假单胞菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用

本文研究了济南假单胞菌疫苗(PJV)对C_(57)BL/6小鼠腹腔巨噬细胞的激活作用.结果表明,腹腔注射PJV(40mg/Kg)能够明显激活小鼠腹腔巨噬细胞,增强其细胞溶解作用和增殖抑制作用.PJV激活的小鼠腹腔巨噬细胞,在有LPS(10ng/ml)存在的条件下,能在体外分泌肿瘤坏死因子(TNF).用钙离子通道剂A_(23187)(1μmol/L)预处理巨噬细胞,再加入LPS,则可显著增加其刺激作用.A_(23187)单独使用不能诱导TNF的分泌.     

大黄素对小鼠腹腔巨噬细胞产生的TNFα、IL—1、IL—6及细胞[Ca^2＋]i的影响

目的 研究中药大黄有效成分大黄素对不同状态下的巨噬细胞分泌TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i的方法。利用脂多糖（lipopolysacchride,LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞作为过度炎症反应的体外模型,用生物学方法和荧光分光光度法测定巨噬细胞合成分泌的TNFα、IL-1、IL-6和[Ca^2 ]i。结果 大黄素对TNFα的分泌和[Ca^2 ]i有双向调节作用。结论 大黄素可能具有免疫双向调节功能。     

白黎芦醇对脂多糖诱导大鼠腹腔巨噬细胞活化的抑制作用

目的探讨脂多糖（LPS）诱导的大鼠腹腔巨噬细胞（PMA）活性变化及白黎芦醇（RESV）对它的抑制作用。方法分离大鼠PMA，随机分为对照组、LPS组和RESVI-V组。培养24h后，分别用免疫组化方法检测核网子-kB（NF-kB）活性，酶联免疫吸附法和硝酸还原法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）和一氧化氮（NO）水平。结果对照组仅有少量NF-kB的活化。LPS诱导后，PMA出现大量NF-kB的活化，继而细胞上清液中TNF-α、IL-1和NO的水平显著升高。RESV治疗后NF-kB的活性较PMA组逐渐降低，具有剂量依赖性，并且相应的细胞上清液中TNF-α、IL-1和NO水平明显降低。结论RESV可以抑制PMA中NF-kB的活化，从而减少TNF-α、IL-1和NO的过度分泌。     

鸡Ⅱ型胶原喷雾剂对大鼠佐剂性关节炎的免疫调节作用

目的观察鸡Ⅱ型胶原(CⅡ)喷雾剂对大鼠佐剂性关节炎(AA)的免疫调节作用.方法用CFA诱导大鼠AA模型; MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应; IL-1、IL-2活性的检测采用小鼠胸腺细胞增殖法.结果 AA大鼠脾淋巴细胞增殖反应、IL-2活性均下降,腹腔巨噬细胞(PMФ)分泌IL-1升高;CⅡ 5、10、20 μg/kg治疗给药进一步降低脾淋巴细胞增殖反应及IL-2的活性,对PMФ产生高水平的IL-1有抑制作用;体外CⅡ 0.1、0.2、0.4、0.8 mg/L对LPS诱导的滑膜细胞产生IL-1水平无影响.结论鸡CⅡ对大鼠AA异常免疫功能具有调节作用,其机制可能与其诱导免疫耐受有关.     

当归醇沉物及其中性组份体外对巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1的影响

目的观察当归醇沉物(ESA)及其中性组分(ESA-1)体外对小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1的影响.方法L929细胞株细胞毒法测TNF-α;L929细胞增殖法测IL-1.结果ESA、ESA-1与小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)共同培养可显著增强其TNF-α、IL-1的分泌.在5～20μg/mL浓度范围,ESA的这种作用呈剂量依赖性;ESA-1虽有明显的作用,但未表现出剂量依赖.结论当归醇沉物及其中性组分体外可增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1.     

苦参碱对小鼠免疫功能的影响

目的:观察苦参碱对小鼠脾淋巴细胞增殖和释放白细胞介素-2(IL-2)及腹腔巨噬细胞释放白细胞介素-1(IL-1)的影响.方法:溴化四唑蓝比色法测定脾淋巴细胞增殖,胸腺细胞增殖法和溴化四唑蓝比色法测定IL-1、IL-2活性.结果:苦参碱可明显抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及ConA诱导的小鼠脾细胞释放IL-2,对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1亦有一定的抑制作用.结论:苦参碱可抑制体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1.     

白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的 研究白细胞介素18重组腺病毒(AdmsIL-18)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响,并对其机理作一探讨.方法重组腺病毒腹腔注射BALB/C小鼠,每周注射1次,共 2次.2周后制备腹腔巨噬细胞,经LPS刺激,采用ELISA法检测培养上清mIL-18、mIL-1β、mTNFα的水平;酶还原法检测NO的含量;LDH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性. 结果AdmsIL-18注射后,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达mIL-18,同时巨噬细胞分泌 mIL-1β、mTNFα、NO水平明显增加,并增强巨噬细胞的杀伤活性,与其它对照组比较均 P<0.01.结论小鼠腹腔注射AdmsIL-18,能显著增加巨噬细胞表达mIL -18、mIL-1β、mTNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性.     

滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的影响

目的:探讨滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠足趾肿胀及腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophages,PMф)分泌肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的影响。方法:建立大鼠佐剂性关节炎模型,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α,用酶联免疫吸附法检测。结果:滇产粗根荨麻水提取部分(400mg/kg,200mg/kg)能明显抑制佐剂性关节炎大鼠的足肿胀,并降低大鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α水平。结论:滇产粗根荨麻水提取部分对佐剂性关节炎的治疗作用可能与其抑制腹腔巨噬细胞分泌TNF-α有关。     

穿心莲内酯对巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究穿心莲内酯对小鼠巨噬细胞氧化亚氮（NO）、肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）生成的影响。方法培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分别加入脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,终质量浓度1μg/mL）和不同浓度的穿心莲内酯（终浓度1、10、50μmol/L）进行干预,并设空白组和穿心莲内酯单独作用组作为对照。取培养24h细胞上清,用Griess法检测NO产量;用Elisa法检测TNF-α、IL-6浓度。结果与空白组比较,LPS明显促进了RAW264.7细胞NO、TNF-α、IL-6等炎症因子的生成;穿心莲内酯单独作用不影响炎症因子的表达,但穿心莲内酯能显著下调LPS诱导的炎症因子表达,与LPS组差异有显著性。结论穿心莲内酯可明显降低LPS诱导的巨噬细胞炎症因子表达,抑制炎症反应。