用α-SMA结合部位标记新生血管周细胞

目的 :探讨 α-平滑肌肌动蛋白 ( α- SMA)在新生血管的结合部位标记周细胞的可行性。方法 :对乳腺癌组织进行免疫组织化学染色 ,并应用普通电镜及免疫电镜方法 ,观察α- SMA在乳腺癌间质新生血管周细胞内的表达情况 ,同时以 7例肉芽组织作为对照。结果 :免疫组织化学染色及超微结构观察发现α- SMA在新生血管壁细胞上有表达 ,进一步免疫电镜证实此种α- SMA表达阳性细胞为周细胞。结论 :α- SMA在新生血管的结合部位可作为周细胞标记     

血管紧张素1-7对大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和血管紧张素1-7(Ang1-7)对大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响.方法 采用HSC-T6细胞株,分别给予Angα,Ang1-7,Angα+Ang1-7,Ang1-7+A779 10μmol/L处理,逆转录聚合酶链反应检测Rock通路中Rock2(Rhokinase 2)mRNA的表达.免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白的表达水平.结果 AngⅡ处理组Rock2 mRNA的表达显著增强,Ang1-7可抑制AngⅡ诱导的Rock2 mRNA的表达.AngⅡ可诱导α-平滑肌肌动蛋白水平的变化,Ang1-7可抑制AngⅡ诱导的α-平滑肌肌动蛋白表达量.结论 Ang1-7可抑制AngⅡ诱导的α-平滑肌肌动蛋白表达.     

丹参酸乙对大鼠肝星状细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的：观察丹参酸乙对大鼠肝星状细胞α－平滑肌肌动蛋白的影响。方法：原位灌注、消化法分离正常大鼠肝星状细胞,异硫氰酸胍一步法提取细胞总RNA,RT－PCR法检测α－平滑肌肌动蛋白基因表达,免疫印迹法分析α－平滑肌肌动蛋白量。结果：10μmol/L SAB可抑制肝星状细胞α平滑肌肌动蛋白的基因表达,但不能抑制其蛋白表达。细胞经TGFβ1刺激后,不仅1μmol/L SAB甚至10μmol/L SAB均不能抑制α-平滑肌肌动蛋白的基因表达。结论：丹参酸乙在肝星状细胞活化的启动阶段可延缓其活化,对于已活化的细胞丹参酸乙则无逆转作用。     

肾小球肾炎时肾组织CD34的表达

目的：探讨多种类型肾小球肾炎时肾组织中CD34的表达及病理学意义。方法：对66例原发性和继发性肾小球肾炎患者肾活检组织进行CD34、α-平滑肌肌动蛋白的免疫组织化学染色，探讨二者的关系。结果：在病理条件下，肾小球系膜细胞出现CD34的表达；肾小球系膜细胞可同时表达CD34和α-平滑肌肌动蛋白，二者显著相关。结论：CD34是系膜细胞表型转化的一种有效标志物。     

TGF-β1在低氧诱导肺动脉内皮细胞向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的研究低氧条件下肺动脉内皮细胞（PAEC）向平滑肌样细胞的转分化及转化生长因子β1（TGF—β1）在此转分化过程中的作用。方法将经免疫磁珠法（用血小板内皮细胞粘附分子1做免疫分选标记）纯化后的原代肺动脉内皮细胞分别在常氧（含21％O2、5％CO2、74％N2）和低氧（含1％O2、5％CO2、94％N2）条件下培养1、4、7d，用核酸干扰法（RNAi）阻断TGF—β1的表达，用逆转录-聚合酶链式反应法（RT—PCR）和Western blot分别检测各组细胞TGF—β1 mRNA和蛋白的表达，并用免疫细胞化学法检测平滑肌细胞标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α—SM—actin）的表达，结合形态学观察从而判定有无平滑肌样细胞的转分化。结果低氧可增加肺动脉内皮细胞TGF—β1 mRNA和蛋白的表达（P〈0．05），RNAi沉默TGF—β1基因表达后可明显降低其mRNA和蛋白含量（P〈0．05），随着低氧培养时间的延长，肺动脉内皮细胞转分化为平滑肌样细胞的比率逐渐增加（P〈0．05）；阻断TGF—β1表达后，平滑肌样细胞的转化率明显降低（P〈0．05）。结论肺动脉内皮中存在具有转分化为平滑肌样细胞潜能的细胞；低氧可明显促进转分化，TGF-β1在此转分化过程中起重要作用。     

α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的观察α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在乳腺癌间质和正常乳腺组织中的表达变化。方法收集2012年1月至2013年3月在沧州市人民医院手术治疗并经病理证实的女性乳腺癌患者60例纳入病例组,选择同期乳腺活检的女性正常乳腺组织30例纳入对照组。采用免疫组织化学的方法检测两组间α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白的表达变化。结果α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白与陷窝蛋白1在正常乳腺组织及乳腺癌间质中阳性表达率分别为:0 vs73.4%、10.0%vs 61.2%、76.7%vs 60.0%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);三种标志物在不同年龄、组织学分型、临床分期及有无淋巴结转移的患者中表达水平均有不同,差异有统计学意义。结论α平滑肌肌动蛋白、波形蛋白在乳腺癌进展过程中表达逐渐增高,而陷窝蛋白1则呈现负性表达的趋势,提示三者在乳腺癌浸润和转移过程中起重要作用。早期乳腺癌监测此三项指标有助于乳腺癌危险度分级。     

血管平滑肌细胞和内皮细胞联合种植生物可降解材料的组织工程血管研究

目的探讨应用组织工程学方法构建人工血管片。方法应用聚(乙交酯/丙交酯)二元共聚物(PLGA)无纺网织片作为细胞支架,体外逐层顺序种植血管平滑肌细胞、内皮细胞制作组织血管片。免疫组织化学方法鉴定平滑肌细胞、内皮细胞;扫描电镜观察组织血管片生长情况;放射免疫方法检测内皮细胞分泌内皮素、前列腺素E的功能。结果免疫组织化学染色鉴定平滑肌细胞肌动蛋白染色阳性,内皮细胞凝血Ⅷ因子相关抗原染色阳性。组织血管片在扫描电镜下显示出细胞融合,连接成片。放射免疫方法可以检测出平滑肌细胞和内皮细胞联合培养的组织片分泌内皮素(229pg/ml±34pg/ml),分泌前列环素的代谢产物6-酮-前列腺素F1α(402pg/ml±108pg/ml)。结论应用PLGA无纺网织片作为细胞支架,体外逐层种植血管平滑肌细胞、内皮细胞制作的组织血管片,基本具备正常血管组织基本形态结构和功能。     

静脉移植物中整合素α5β1的表达及其与再狭窄的关系

目的 检测人静脉移植物中整合素α5β1的表达.方法 应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中整合素α5β1和α-smooth muscle actin(α-SMA)的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用SiliconGraphics Octane进行处理.结果 在正常静脉血管中,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞和内皮细胞呈微弱表达;α-SMA在中膜平滑肌细胞表达;在病变静脉血管,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞中的表达呈强阳性,在内膜平滑肌细胞中也有弱表达.α-SMA除在中膜平滑肌细胞表达外,在内膜平滑肌细胞也有表达.结论 静脉移植物整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞表达显著上调,提示整合素α5β1参与静脉移植物再狭窄的形成.     

脑出血患者脑小动脉壁α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的　探讨脑出血时脑小动脉平滑肌肌动蛋白 (α- SMA)表达与动脉粥样硬化的关系。方法　应用免疫组化技术并结合计算机图像分析 ,检测人类高血压脑出血脑小动脉内 α- SMA的表达程度。结果　在脑出血组脑小动脉内 α- SMA的表达明显增加。结论　 α- SMA的表达可作为血管平滑肌细胞 (VSMC)激活的标志 ,它的出现标志着 VSMC被激活并处于增殖 /分泌表型。     

脑出血患者脑小动脉壁α-平滑肌肌动蛋白的表达

目的探讨脑出血时脑小动脉平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达与动脉粥样硬化的关系.方法应用免疫组化技术并结合计算机图像分析,检测人类高血压脑出血脑小动脉内α-SMA的表达程度.结果在脑出血组脑小动脉内α-SMA的表达明显增加.结论α-SMA的表达可作为血管平滑肌细胞(VSMC)激活的标志,它的出现标志着VSMC被激活并处于增殖/分泌表型.     

兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定

目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔2只(正常及梗阻各1只)，采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后，于10％小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白(α-actin)鉴定细胞类型。结果：在倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片苏木精-伊红(H-E)染色及电镜检查均证实为平滑肌细胞。免疫组化染色检测α-actin呈阳性反应。结果证明，用该方法所分离、培养的膀胱平滑肌细胞其纯度几乎达99％。结论：该方法易行、可靠，在短期内可获得大量高纯度膀胱平滑肌细胞。     

myocardin在低氧诱导肺血管内皮向平滑肌样细胞转分化中的作用

目的探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAEC)向平滑肌样细胞的转分化及myocardin在其转分化过程中的作用。方法经免疫磁珠法(用血小板内皮细胞黏附分子1做免疫分选标记)纯化分离的原代肺动脉内皮细胞,用:RNA干扰(RNAi)技术构建psimyocardin RNA表达载体抑制myocardin基因的表达。细胞分为常氧组(含21％O2,5％CO2和74％N2)、低氧组(含1％O2,5％CO2, 94％N2)、常氧+myocardin抑制组和低氧+myocardin抑制组,分别培养1 d、4 d和7 d。用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测myocardin mRNA的表达;免疫荧光检测平滑肌特异性标志物α-平滑肌(α-SM)肌动蛋白的表达,结合形态学鉴定平滑肌样细胞的转分化。结果(1)免疫荧光检测PAEC中α-SM-肌动蛋白阳性率在低氧4 d组(0．96‰±0．08‰)明显低于7 d组(2．07‰±0．06‰,P< 0．01),阳性细胞呈梭形或多角形,而常氧组和低氧1 d组均未见α-SM-肌动蛋白的阳性表达;(2)RT- PCR显示myocardin mRNA的表达在低氧4 d组(0．14±0．01)明显低于低氧7 d组(0．23±0．03, P<0．01),常氧组和低氧1 d组均未检测出其表达。(3)RNAi沉默myocardin基因表达后,其mRNA水平明显低于对应的低氧4 d组(0．03±0．02)和低氧7 d组(0．05±0．01,P<0．01);平滑肌样细胞的转分化率也明显降低(0．19‰±0．07‰,0．21‰±0．04‰,P<0．01)。以上每组重复3次。结论PAEC中存在少数细胞具有转分化为平滑肌样细胞的潜能,低氧可明显促进其转分化,myocardin在此转分化过程中起重要作用。     

再造组织工程化平滑肌组织的实验研究

目的采用组织工程技术,将培养扩增的膀胱平滑肌细胞与国产可降解的聚合聚乙交酯丙交酯（PLGA）支架材料复合构建并植入裸鼠体内进行培育,探讨再造组织工程化平滑肌组织的可行性。方法从幼兔取膀胱,机械分离与酶消化获取培养平滑肌细胞,传代扩增平滑肌细胞后将其接种到国产PLGA支架材料的表面作为实验组,未接种细胞的单纯支架材料作为对照组。分别将它们植入到裸鼠体内进行培育。经裸鼠体内培育4周、8周后取材并进行大体观察、组织学及免疫组织化学检测。结果实验组标本经HE和Masson染色显示在材料表面形成数层平滑肌细胞层,经抗平滑肌α-肌动蛋白免疫组织化学染色呈棕黄色阳性。随着培育时间的延长,支架材料降解明显,而平滑肌细胞层进一步增殖形成平滑肌组织。对照组经HE染色材料表面见有少量成纤维细胞沉积,Masson染色示兰色,经抗平滑肌α-肌动蛋白免疫组织化学染色为阴性。结论采用国产PLGA聚合物为支架材料可再造出组织工程化平滑肌组织,为多种含平滑肌组织空腔脏器的组织工程研究奠定基础。     

1-磷酸鞘氨醇对体外培养的人视网膜色素上皮细胞α-SMA表达的影响

目的研究1-磷酸鞘氨醇对人视网膜色素上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。方法对RPE细胞常规培养,取传3～4代生长良好的细胞用于实验,以10~6个/ml接种于24孔培养板中,加入含1-磷酸鞘氨醇无血清培养液,使1-磷酸鞘氨醇终浓度为1、1×10~(-1)、1×10~(-2)、1×10~(-3)、1×10~(-4)μg/ml,加入不含1-磷酸鞘氨醇的无血清培养液为对照组,采用免疫荧光法分析1-磷酸鞘氨醇对α-平滑肌肌动蛋白表达的影响。结果 1、1×10~(-1)、1×10~(-2)μgm 1-磷酸鞘氨醇组中表达α-平滑肌肌动蛋白阳性的细胞与对照组相比差异具有明显统计学意义(P=0.000、0.000、0.000);而1×10~(-3)、1×10~(-4)μg/mI组表达α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞与对照组相比差异无明显的统计学意义(P=0.832、0.781)。结论α-平滑肌肌动蛋白主要在RPE细胞的胞浆中表达。随着1-磷酸鞘氨醇浓度的增加,RPE细胞α-平滑肌肌动蛋白的表达增强。     

EHF肾组织肾小球超微结构和细胞表型的研究

目的 研究流行性出血热（ＥＨＦ）肾组织中肾小球超微结构和细胞表型的改变及其意义。方法 应用多重ＰＡＰ３０例ＥＨＦ肾组织中肾小球α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ）,结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达及意义;应用电子显微镜观察肾小球的超微结构。结果 ＥＨＦ肾脏仅４例肾小球显示痕量的ａ－ＳＭＡ阳性表达,无ｄｅｓｍｉｎ和ＰＣＮＡ的表达。电镜下观察肾小球毛细血管内皮细胞不同程度肿胀。部分     

人视网膜Müller细胞的培养

目的:研究人视网膜Müller细胞的简易酶消化培养法。方法:使用单一酶消化法培养人视网膜Müller细胞,运用免疫荧光法和透射电镜技术进行细胞鉴定。结果:培养的Müller细胞胞浆丰富,电镜下胞浆中可见大量线粒体,粗面内质网,糖原颗粒和直径为8～10 nm的微丝,免疫荧光显示95%以上细胞可见阳性谷氨酰胺合成酶、神经胶质纤维酸性蛋白、α-平滑肌肌动蛋白、中间丝波形蛋白。结论:简易酶消化法可成功用于人视网膜Müller细胞的培养。     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

雄性大鼠肺组织中雌激素受体的研究

目的:研究雌激素受体(ER)在雄性大鼠肺组织的表达和定位。方法:采用RT-PCR方法检测大鼠肺组织ER-α、ER-βmRNA的表达,用免疫组织化学方法检测大鼠肺中ER-β蛋白表达定位。结果:RT-PCR结果显示,在大鼠肺组织中ER以ER-βmRNA的表达为主,ER-αmRNA几乎不表达。免疫组织化学检测结果显示ER-β存在于柱状上皮细胞、平滑肌细胞和间质细胞上,血管壁上内皮细胞和平滑肌细胞中也有表达。结论:ER-β在大鼠肺组织中有广泛的分布。     

COX-2在乳腺癌组织中的超微结构定位及其意义

目的：观察COX-2蛋白在乳腺癌组织中的超微结构定位及其意义。方法：采用胶体金标记免疫电镜方法检测22例乳腺癌组织标本,观察COX-2蛋白在乳腺癌组织中的定位。结果：胶体金标记免疫电镜显示,59.1%的乳腺癌组织中存在黑色、圆形、集中的胶体金颗粒。结论：COX-2蛋白超微结构定位于乳腺癌细胞的内质网与核膜上,可能与乳腺癌形成过程中蛋白质的合成和转运有关。     

血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及临床意义

目的 :检测血管内皮生长因子 ( VEGF)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组织化学法、原位杂交法检测乳腺癌中 VEGF蛋白及 m RNA的表达。结果 :VEGF蛋白及 m RNA均定位在乳腺癌癌细胞及血管内皮细胞中 ,且其表达随着临床分期的增高明显增强。结论 :肿瘤细胞和血管内皮细胞是产生 VEGF的主要细胞 ,VEGF可作为乳腺癌临床诊断、治疗及预后判定的有效指标之一。