帕瑞昔布对人胰腺癌细胞株BxPC-3、AsPC-1增殖凋亡的影响及其机制

目的:研究帕瑞昔布(parecoxib,PCB)对人胰腺癌细胞株BxPC-3和AsPC-1的增殖、凋亡及其可能的分子机制.方法:BxPC-3、AsPC-1细胞用不同浓度PCB的培养液孵育后,利用MTT法测定细胞活性,计算IC50值,TUNEL法检测处理后细胞的凋亡情况,RT-PCR验证相关蛋白的变化表达.结果:PCB对两种细胞生长呈时间和计量依赖性抑制;PCB处理后BxPC-3、AsPC-1两种细胞IC50值为:400.98μmol/L±10.78μmol/L、256.3μmol/L±2.98μmol/L;TUNEL法检测证明凋亡率增加;RT-PCR显示COX-2表达明显降低.结论:PCB可以抑制胰腺癌细胞增殖,并诱导其凋亡生长,其可能机制是通过抑制COX-2表达来实现的.     

环氧合酶2对胰腺癌细胞凋亡的调节作用及其机制

目的：有研究提示环氧合酶2（COX－2）可能参与了细胞凋亡和增殖平衡的调节过程。该文研究COX－2在胰腺癌细胞凋亡发生过程中的调节作用，并探讨其可能作用机制。方法：应用流式细胞术、DNA梯度电泳和透射电镜，观察选择性COX－2抑制剂Celebrex对胰腺癌细胞PC－3（高表达COX－2）凋亡的影响，并用RT－PCR研究凋亡相关基因bcl-xl、bax、Survivin等表达的变化。结果：100μmol/L Celebrex作用PC-3细胞24h，流式细胞术显示凋亡细胞比例显著升高；DNA电泳见典型梯形条带；透射电镜发现细胞核固缩，表明Celebrex可诱导PC－3细胞凋亡。RT－PCR结果表明，Bax、bcl-xl和Survivin等凋亡相关基因在PC－3细胞高表达，而Celebrex在诱导PC－3细胞凋亡过程中，bax基因的表达无明显变化，但bcl-xl和Survivin基因的表达均显著下调。结论：COX－2对胰腺癌细胞凋亡呈负向调节作用，其机制可能部分通过凋亡抑制基因bcl-xl和Survivin的信号传导而实现。     

二甲双胍抑制人胰腺癌细胞株Patu8988的增殖

二甲双胍孵育胰腺癌细胞株Patu8988 72 h后应用CCK-8(Cell counting Kit-8)检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测相关基因表达.干预后细胞增殖呈浓度依赖性抑制(r=0.994.,P＜0.05),细胞周期G0/G1期所占比例显著增加,G2/M期显著减少(均P＜0.05),相关基因MMP-3、CyclinD1、p53表达下调,Bax表达上调.结果表明二甲双胍抑制Patu8988细胞增殖,主要机制可能与阻滞细胞周期、影响相关基因表达有关.     

CpG对HBV感染者B细胞及Th1型细胞因子的活化作用

目的:观察CpG-ODN 2216对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中B淋巴细胞抗原提呈相关分子CD80、CD86、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子表达的影响,同时观察CpG对Th1型细胞因子分泌的影响.方法:取HBV感染者PBMC与CpG-ODN 2216共培养48 h,用流式细胞技术检测B淋巴细胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子的表达,并与未加CpG组进行比较,同时检测培养液中Th1型细胞因子白介素-12(IL-12)和干扰素-γ(IFN-γ)的水平.结果: 经CpG-ODN 2216活化刺激后,PBMC中B淋巴细胞抗原提呈相关分子CD80、CD86、MHC-Ⅰ及MHC-Ⅱ分子的表达显著高于对照组(CD80: 48.84%±21.29% vs 28.57%±18.7%;CD86: 50.12%±19.70% vs 13.15%±8.81%;MHC-Ⅰ:2108.88±289.04 vs 1679.22±388.22;MHC-Ⅱ:1602.77±362.61 vs 941.88±237.35;均P<0.05);并且培养液中IFN-γ及IL-12的水平也显著高于对照组(IFN-γ:61.38±38.81 ng/L vs 47.35±38.76 ng/L;IL-12:7.80±4.34 ng/L vs 5.56±3.56 ng/L;均P<0.05).结论:CpG-ODN 2216能够提高HBV感染者B淋巴细胞表面抗原提呈相关分子和共刺激分子的表达,同时提高PBMC分泌Th1型细胞因子的能力.     

反义肝素酶基因对胰腺癌细胞体外增殖和侵袭的抑制作用

目的:研究反义肝素酶基因对人胰腺癌SW1990细胞体外增殖和侵袭能力的抑制作用．方法:反义肝素酶基因转染胰腺癌sW1990细胞,并设空载体对照组和空白对照组,以流式细胞仪检测细胞周期;免疫组化、Western blot及RT-PCR检测肝素酶蛋白和mRNA表达;平板克隆形成实验检测细胞增殖活性,Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭能力．结果:与空白组和空载组比较,反义组细胞周期中S期比例明显减少(18.8％±2．5％vs 36．3％±2．2％,33．2％±2．1％,P<0．01),G1期细胞比例明显升高(66．0％±2．7％vs30．7％±3．2％,39．8％±4．9％,P<0．01);肝素酶蛋白及mRNA表达分别降低34．3％和37．8％:细胞克隆形成数目减少(12．2±2．8 vs 30．8±4．4,28．3±2．7,P<0．01);Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数减少(13．0±3．5 vs 34．8±5．8,29．4±5．6．P<0．01)．结论:反义肝素酶基因抑制人胰腺癌SW1990细胞体外增殖及侵袭能力．     

过表达RGC-32对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨RGC-32基因在胰腺癌Bx PC-3细胞增殖、凋亡中的作用。方法常规培养胰腺癌Bx PC-3细胞,构建RGC-32表达质粒pc DNA3.1/myc-His C-RGC-32,并瞬时转染Bx PC-3细胞作为实验组;将转染空质粒pc DNA3.1/myc-His C的Bx PC-3细胞作为对照组;应用实时定量PCR及Western blotting确定转染效率。采用细胞增殖试剂盒CCK-8(cell counting kit-8)法检测转染前后细胞增殖、流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果定量PCR及Western blotting检测结果均显示转染实验组较对照组RGC-32mRNA及蛋白表达显著上调(P0.05)。细胞增殖实验表明实验组较对照组细胞存活率显著性下降(P0.05);细胞凋亡实验表明实验组较对照组细胞凋亡率无显著性下降(P0.05)。结论在胰腺癌Bx PC-3细胞中,过表达RGC-32可抑制细胞增殖,但对细胞凋亡无明显作用。     

肺癌患者血浆Fas 水平的检测及临床意义

目的 探讨肺癌患者血浆Fas测定的临床价值.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测60例肺癌患者血浆Fas水平,应用双抗体免疫荧光剂、采用流式细胞仪(FACS)测定肺癌患者T淋巴细胞亚群,分析其临床价值.结果 40%患者血浆Fas水平升高,血浆Fas水平与病理类型无关,受临床分期的影响,进展期显著高于早期患者(P＜0.05),进展期CD3+、HLA-DR+细胞及CD+16、CD+56细胞比例亦显著高于早期患者,其CD+4、CD-8细胞比例显著低于早期患者.初诊时血浆Fas升高的小细胞肺癌患者疗效较好.治疗后有效、病情稳定的患者,血浆Fas水平降至正常.结论 肺癌患者血浆Fas水平显著升高,并与患者T细胞亚群有关,可作为判断病情和疗效的一项指标.     

流式细胞术,酶联免疫吸附反应及HLA配型——几种新型配型方法在器官移植中的应用

流式细胞术，酶联免疫吸附反应及ＨＬＡ配型——几种新型配型方法在器官移植中的应用戴春笋杨俊伟关键词流式细胞术酶联免疫吸附ＨＬＡ配型中图法分类号Ｒ４４６在器官移植发展的过程中，术前组织配型的实施以及术后免疫抑制剂应用，无疑是推动器官移植迅速发展的两大重要...     

胰腺癌患者血清 Dickkopf-1水平检测及其临床意义

目的：探讨Dickkopf-1（ DKK-1）在胰腺癌辅助诊断中的价值。方法采用ELISA法检测50例胰腺癌患者（胰腺癌组）和50例健康查体者（对照组）血清DKK-1水平,采用电化学发光法检查检测CA19-9水平;比较两组DKK-1表达情况及DKK-1、CA19-9诊断胰腺癌的敏感度、特异度和准确性。结果胰腺癌组血清DKK-1水平及阳性率均明显高于对照组（P均＜0．05）;DKK-1与CA19-9诊断胰腺癌的敏感度分别为52％、78％,P＜0．05;特异度分别为92％、84％,P＞0．05;准确性分别为72％、81％,P＞0．05;若两者联合检测则敏感度和准确性分别提高至90％和84％。结论胰腺癌患者血清DKK-1水平明显增高,可作为临床中胰腺癌的辅助诊断指标;血清DKK-1与CA 19-9联合检测有助于提高胰腺癌的诊断水平。     

靶向HIF-2 siRNA对人胰腺癌BXPC-3细胞增殖和凋亡的影响

目的观察靶向缺氧诱导因子2(HIF-2)的小干扰RNA(siRNA)对人胰腺癌BXPC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法将BXPC-3细胞随机分为A、B、C组,A组转染HIF-2 siRNA、B组转染非特异性siRNA、C组不转染,分别予常氧、缺氧环境下培养;采用MTT法检测培养24、48、72、96 h时BXPC-3细胞的光密度(OD)值观察增殖情况,用流式细胞仪检测培养48 h时BXPC-3细胞凋亡率。结果在缺氧培养48 h时,A、B、C组细胞OD值分别为0.54±0.07、0.69±0.09、0.72±0.13,72 h时分别为0.55±0.11、0.88±0.07、0.88±0.05,96 h时分别为0.56±0.12、0.93±0.11、0.94±0.09;A组与B、C组比较,P均<0.05。在缺氧培养48 h时,A、B、C组细胞凋亡率分别为21.37%±0.17%、7.12%±0.03%、7.24%±0.07%;A组与B、C组比较,P均<0.05。在常氧状态下,各组细胞OD值及凋亡率无明显差别。结论缺氧状态下,靶向HIF-2 siRNA可抑制人胰腺癌BXPC-3细胞增殖,诱导其凋亡。     

TMS对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的 观察细胞色素酶P4501B1( CYP1B1)抑制剂2,3',4,5'-四甲氧基二苯乙烯(TMS)对人子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 采用免疫细胞化学方法检测Ishikawa细胞中的CYP1B1蛋白.采用MTT法检测10、20、40、80 μmol/L TMS培养24、48、72 h后Ishikawa细胞增殖抑制率,并于培养48 h时用倒置显微镜对Ishikawa细胞进行形态学观察.采用流式细胞术检测10、20、40、80 μmol/L TMS培养48 h后的Ishikawa细胞凋亡率、细胞周期以及细胞中的Bcl-2、Bax及Survivin.结果 CYP1B1蛋白在Ishikawa细胞中为阳性表达.TMS可呈时间和剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖(P均＜0.05).用不同TMS培养48 h后镜下观察可见部分Ishikawa细胞皱缩变形,崩解坏死,细胞脱壁悬浮,并出现细胞核浓缩、核碎裂等细胞凋亡特征性形态学改变.TMS可剂量依赖性促进Ishikawa细胞凋亡,并使细胞周期中G0/G1期比例降低,G2/M期比例增高(P均＜0.05),同时降低凋亡相关蛋白Bcl-2和Surivin的表达(P均＜0.05),升高Bax的表达(P均＜0.05).结论 TMS能抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,其机制可能是通过下调凋亡抑制蛋白Bcl-2、Survivin,上调促凋亡蛋白Bax而实现的.     

吲哚美辛对胰腺癌细胞BxPC-3生长的抑制作用及机制

目的探讨环氧合酶抑制剂吲哚美辛体内外对胰腺癌细胞BxPC-3细胞生长的影响及其作用机制。方法用MTT法检测吲哚美辛作用后BxPC-3细胞的增殖情况;用流式细胞分析、透射电镜和原位末端标记(TUNEL)法观察细胞凋亡和细胞周期的变化;建立裸鼠胰腺癌BxPC-3细胞移植瘤模型,用吲哚美辛给荷瘤裸鼠灌胃(3 mg.kg-1.d-1,共4周),观察其对种植瘤生长曲线的影响,TUNEL法检测裸鼠移植瘤组织细胞凋亡。结果吲哚美辛呈剂量和时间依赖性抑制BxPC-3细胞生长。TUNEL、流式细胞仪检测显示药物处理后细胞凋亡增加,细胞阻止于G0/G1。透射电镜可见细胞呈现明显凋亡形态。随着用药时间的增加,吲哚美辛对裸鼠移植瘤的生长抑制作用增加,移植瘤组织凋亡细胞增多。结论吲哚美辛体内外可抑制胰腺癌细胞BxPC-3的生长,其机制可能与促进细胞凋亡,阻滞细胞周期有关。     

白藜芦醇对人喉鳞癌细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察白藜芦醇对喉鳞癌细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用不同浓度（12.5、25、50、100、200、400μmol/L）的白藜芦醇处理人喉鳞癌Hep-2细胞24、48、72 h,为白藜芦醇组。对照组不加白藜芦醇。采用MTT法测算Hep-2细胞增殖抑制率,采用TRAP-ELISA法检测Hep-2细胞端粒酶活性,采用W estern b lot法检测Hep-2细胞中的人端粒酶逆转录酶（hTERT）蛋白。结果白藜芦醇组Hep-2细胞增殖明显受到抑制,且呈浓度依赖性;细胞端粒酶活性受到抑制,hTERT蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。结论白藜芦醇可抑制喉鳞癌细胞增殖,与其下调癌细胞hTERT表达、抑制端粒酶活性有关。     

Blocking effects of genistein on cell proliferation and possible mechanism in human gastric carcinoma

AIM: To study the blocking effects of genistein on cell proliferation cycle in human gastric carcinoma cells (SGC-7901) and the possible mechanism. METHODS: MTT assay was applied in the detection of the inhibitory effects of genistein on cell proliferation. Flow cytometry was used to analyze the cell cycle distribution. Immunocytochemical technique and Western blotting were performed to detect the protein expression of cyclin D_1, cyclin B_1 and p21~(waf1/cip1). RESULTS: Genistein significantly inhibited the growth and proliferation of human gastric carcinoma cells (SGC-7901). Seven days after treatment with different concentrations of genistein (2.5, 5.0, 10.0, 20.0 μg/mL), the growth inhibitory rates were 11.2%, 28.8%, 55.3%, 84.7% respectively and cell cycles were arrested at the G(2)/ M phase. Genistein decreased cyclin D_1 protein expression and enhanced cyclin B_1 and p21~(waf1/cip1) protein expression in a concentration-dependent manner. CONCLUSION: The growth and proliferation of SGC-7901 cells can be inhibited by genistein via blocking the cell cycle, with reduced expression of cyclin D_1 and enhanced expression of cyclin B_1 and p21~(waf1/cip1) protein in the concentration range of 0-20 μg/mL.     

BxPC-3条件培养液对PC12细胞株DA和NE代谢的影响

目的:探讨BxPC-3条件培养液影响分化的PCI2细胞神经递质代谢的机制.方法:用去除IL-6的BxPC-3条件培养液处理分化的PC12细胞,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率、HPLC检测上清和细胞裂解液中DA、5-HT和NE的含量.在不合血清的条件培养液中加入 IL-6(0.01 mg/L,0.1 mg/L,0.25mg/L,0.5 mg/L,1 mg/L,1.5 mg/L,2 mg/L),分别收集上清和细胞裂解液,采用HPLC检测DA和NE的含量.结果:各组细胞凋亡率之间差别无统计学意义,条件培养液中加入IL-6抗体后,上清中DA和NE的含量明显增加,而细胞内DA和NE代谢差异无统计学意义,在加入不同剂量IL-6后,随着浓度的增加,DA和NE的代谢近似呈现剂量依赖性降低,当IL-6浓度为1 mg/L时DA和NE的变化有统计学意义.结论:BxPC-3条件培养液主要通过IL-6影响分化的PC12神经递质代谢.     

浅蓝菌素联合吉西他滨对人胰腺癌细胞BxPC3增殖与凋亡的影响

目的 观察浅蓝菌素联合吉西他滨对胰腺癌细胞BxPC3生长抑制的协同作用,探讨其机制.方法 以10μg/ml浅蓝菌素、20μmol/L吉西他滨、10 μg/ml浅蓝菌素+20μg/L吉西他滨分别处理对数生长期的人胰腺癌BxPC3细胞48 h,以不经药物处理的细胞作为对照.应用CCK-8法检测各组细胞增殖,AnnexinV/PI双染法检测细胞早期凋亡率,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 对照组、浅蓝菌素组、吉西他滨组、联合处理组48 h的生长抑制率分别为0、(51.28±1.84)％、(53.59±1.62)％、(84.57 ±1.01)％;细胞早期凋亡率为(0.83±0.31)％、(31.37±1.04)％、(38.33±0.75)％、(69.43±0.83)％;BxPC3细胞Bcl-2 mRNA表达量分别为0.67±0.01、0.44±0.01、0.36±0.08、0.27 ±0.07;Bax mRNA表达量为0.14±0.01、0.31±0.02、0.32±0.03、0.91±0.06;Bcl-2 mRNA/Bax mRNA比值为4.78±0.13、1.39±0.04、1.15±0.02、0.30±0.02;Bcl-2蛋白表达量分别为1.24±0.04、0.51±0.02、0.42±0.02、0.13±0.01;Bax蛋白表达量为0.20±0.05、0.47±0.01、0.54±0.01、1.21±0.03;Bcl-2/Bax比值为6.00±0.11、1.11±0.01、0.77±0.03、0.10±0.06.各处理组与对照组,联合处理组与单药处理组的差异均有统计学意义(P值均＜0.01).结论 浅蓝菌素与吉西他滨对人胰腺癌BxPC3细胞的生长抑制具有协同作用,其机制可能通过上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达,降低Bcl-2/Bax比值而促进细胞凋亡所致.     

乳铁蛋白对口腔鳞癌细胞增殖的影响

目的探讨乳铁蛋白（LF）对体外培养的舌癌细胞Tca8113增殖的影响。方法MTT法评定LF对中国仓鼠CHO、人胚肾293T及舌癌细胞Tca8113细胞系的生长抑制作用。结果LF对Tca8113细胞具有直接的细胞毒作用且呈剂量依赖性，但对正常细胞系增殖无抑制作用。结论LF作为新的口腔肿瘤的化学预防剂，可抑制舌癌细胞Tca8113增殖。     

三元复合因子Net对人胰腺癌细胞株BxPC3增殖的影响

目的研究三元复合因子Net转染人胰腺癌细胞株BxPC后的表达状态及对原癌基因c—fos表达的影响。方法采用脂质体2000将重组人pEGFP—Net质粒和空质粒pEGFP转染人胰腺癌BxPC3细胞株,建立稳定高表达Net的细胞系。应用MTT、流式细胞仪等方法检测胰腺癌细胞的增殖,应用实时定量PCR和Western blotting检测Net及c—fos mRNA和蛋白的表达。结果BxPC3细胞低表达Net,转染pEGFP-Net后稳定高表达Net,并抑制c-fos的表达。转染pEGFP—Net的细胞生长缓慢,转染后第3、5、7天的抑制率分别为38．8％、55．3％、56．9％,显著高于空质粒转染组的5．1％、12．4％、8．6％（P〈0．05）;G0／G1期细胞占（61．8±5．7）％,显著高于空质粒转染组的（45．1±3．4）％。结论三元复合因子Net能抑制人胰腺癌BxPC3细胞的增殖,其机制可能与抑制c—fos表达有关。