胡黄连苷Ⅱ通过线粒体途径诱导肾癌细胞凋亡的实验研究

目的研究胡黄连苷Ⅱ(picrosideⅡ)对人肾癌ACHN细胞凋亡的影响及作用机制。方法将体外培养的肾癌ACHN细胞分为对照组、不同浓度胡黄连苷Ⅱ(1μg/mL、10μg/mL及100μg/mL)组,采用CCK-8法测定细胞增殖率,采用Hoechst 33258核染色法和Annexin V/PI检测细胞凋亡,采用Western blot法检测肾癌ACHN细胞内Bax及Bcl-2蛋白表达。结果不同浓度的胡黄连苷Ⅱ能抑制肾癌ACHN细胞生长并诱导细胞凋亡,随着胡黄连苷Ⅱ作用浓度的递增,肾癌ACHN细胞凋亡率呈剂量依赖性递增;胡黄连苷Ⅱ作用后,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。结论胡黄连苷Ⅱ通过改变线粒体凋亡途径中凋亡相关信号分子Bax及Bcl-2的表达,抑制肾癌ACHN细胞增殖并促进细胞凋亡。     

姜黄素抑制肾癌ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对人肾癌ACHN细胞株增殖及细胞凋亡的影响,探讨姜黄素诱导ACHN细胞株凋亡的作用机制。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌ACHN细胞24 h后,应用MTT比色法检测姜黄素对人肾癌ACHN细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;RT-PCR检测姜黄素对ACHN细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65 mRNA表达的影响;Western blot方法检测其对细胞Bcl-2、Bax、NF-κBP65I、κB蛋白表达的影响。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞24 h后,Bcl-2、NF-κBP65 mRNA水平下降,Bax mRNA水平升高(P0.05),Bcl-2、NF-κBP65蛋白表达量下降,BaxI、κB蛋白表达量升高(P0.05)。结论姜黄素通过上调IκB,下调NF-κB活性,调控凋亡基因Bcl-2/Bax的表达,抑制人肾癌ACHN细胞的增殖,诱导人肾癌ACHN细胞的凋亡。     

血管新生抑制剂TNP-470对鼠ACHN肾细胞癌增殖与凋亡的影响

目的 :探讨血管新生抑制剂TNP 4 70对ACHN肾细胞癌增殖与凋亡状态的影响。方法 :采用TNP 4 70 (4 0mg·kg-1·0 .2ml-1)皮下注射治疗ACHN肾细胞癌荷瘤裸鼠 ,观察肿瘤生长情况 ,进行细胞增殖与细胞凋亡的研究。结果 :TNP 4 70治疗组与对照组相比 ,ACHN肾癌生长明显减慢 ,肿瘤细胞凋亡指数明显增加 (P <0 .0 1) ,增殖指数无显著变化 (P >0 .0 5 )。肿瘤体积与凋亡指数间存在负相关 (r =- 0 .85 4 0 ,P <0 .0 1)。结论 :TNP 4 70对ACHN肾癌有显著的抑制肿瘤生长作用 ,可能与肾癌细胞凋亡增加有关     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体单克隆抗体对人肾癌细胞的毒性作用

目的　探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体 (TRAIL R)的单克隆抗体对肾癌细胞的毒性作用和机制。方法　在人肾癌细胞系ACHN和Caki 1中 ,应用四甲基偶氮唑盐 (MTT)方法分析细胞毒效应 ,应用流式细胞术检测相关凋亡诱导配体受体 (TRAIL R)的表达 ,应用荧光染色和AnnexinV标记检测细胞凋亡的发生 ,应用比色法分析多种Caspase活性在凋亡过程中的变化。结果　抗TRAIL R2单克隆抗体 (ETR2 )对人肾癌细胞系ACHN和Caki 1都具有明显的细胞毒性 (P <0 .0 1) ,而抗TRAIL R1单克隆抗体 (ETR1)的细胞毒性不显著 (P >0 .0 5 )。TRAIL R2在两种细胞表面均高表达 (ACHN :97.9% ,Caki 1:98.7% ) ,TRAIL R1表达微弱 (ACHN :7.6% ,Caki 1:7.5 4% )。ETR2通过诱导细胞凋亡发挥细胞毒作用 ,Caspase 8, 9, 6和 3活性在凋亡过程中明显增高 (P <0 .0 1)。结论　TRAIL R2的单克隆抗体在体外可诱导肾癌细胞发生凋亡 ,其细胞毒性与TRAIL R2的表达有关 ,在凋亡过程中内源性与外源性凋亡通路均被激活。     

siRNA沉默VEGF基因对肾癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨siRNA干扰血管内皮生长因子（VEGF）基因对人肾细胞癌细胞株（ACHN）细胞增殖与凋亡的影响.方法：化学合成针对VEGF的小干扰RNA,通过脂质体转染至ACHN中,利用Western印迹法检测细胞内VEGF的表达,采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率（IR）,用TUNEL方法检测细胞凋亡率（AR）.结果：生长曲线提示,与空白对照组及阴性对照组相比,siRNA1组、siRNA2组ACHN细胞的生长明显减慢 在24 h、48 h、72 h,siRNA1的增殖抑制率为10.6%、18.0%、27.1%,siRNA2增殖抑制率为18.9%、32.7%、40.3%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组的细胞凋亡率为10.7%、15.2%、20.3%,siRNA2组的细胞凋亡率为17.3%、26.2%、37.4%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组、siRNA2组VEGF蛋白表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,其中siRNA2对ACHN细胞的IR、AR和VEGF蛋白表达的抑制作用均显著高于siRNA1组（P〈0.05）.结论：VEGF在肾癌的发生发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA能特异性抑制肾细胞癌ACHN细胞株中VEGF的表达,抑制细胞生长增殖,促进细胞凋亡.对于VEGF基因高表达的肾细胞癌患者,针对VEGF的RNAi技术有望成为肾细胞癌新的基因治疗手段.     

白藜芦醇对肾癌细胞体外增殖与侵袭能力的影响

目的探讨白藜芦醇对肾癌786-O与ACHN细胞体外迁增殖与侵袭能力的影响及可能的机制。方法 MTT检测白藜芦醇对肾癌细胞增殖能力的影响,划痕实验检测白藜芦醇对786-O与ACHN细胞体外迁移能力的影响,Transwell实验检测白藜芦醇对786-O与ACHN细胞体外侵袭能力的影响,RT-PCR与Western bolt检测白藜芦醇对MMP-2与MMP-9蛋白表达水平的影响。结果白藜芦醇可抑制膀胱癌细胞体外生长能力,且呈剂量依赖性。30μmol/L白藜芦醇处理786-O与ACHN细胞24h后,划痕实验发现白藜芦醇可抑制786-O与ACHN细胞体外迁移能力,Transwell实验证实白藜芦醇可抑制肾癌细胞786-O与ACHN的体外侵袭能力。RT-PCR与Western bolt结果表明,白藜芦醇可从mRNA与蛋白水平抑制MMP-2与MMP-9的表达。结论白藜芦醇能抑制肾癌细胞体外增殖能力,可能通过下调MMP-2与MMP-9的表达而抑制肾癌细胞786-O与ACHN体外迁移与侵袭能力,有望成为治疗肾癌的新策略。     

姜黄素对人肾癌ACHN细胞放疗增敏作用的实验研究

目的研究姜黄素对人肾癌ACHN细胞放射增敏作用并探讨其作用机制。方法不同浓度姜黄素作用于ACHN人肾癌细胞24h后,MTT法检测姜黄素药物毒性;克隆形成实验观察其对放射敏感性的影响;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率、细胞周期分布。结果姜黄素对人肾癌ACHN细胞有明显的抑制作用,可引起细胞的凋亡,且存在剂量和时间依赖;较低浓度的姜黄素（5μmol和10μmol）即可降低放射后ACHN细胞的克隆形成率,其放射增敏比分别为1．61及2．36;姜黄素及姜黄素联合辐射组的细胞周期阻滞在辐射敏感时相G2／M期;结论低剂量的姜黄素对人肾癌ACHN细胞有放射增敏作用,其机制可能与其引起细胞的凋亡增加,细胞周期阻滞有关。     

沙利霉素逆转P-gp介导的肾癌ACHN细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨沙利霉素对肾癌ACHN细胞多药耐药的逆转及其机制.方法 实验分为对照组、阿霉素组、沙利霉素组及阿霉素和沙利霉素联合用药组,药物作用24 h后,CCK-8方法 检测肾癌细胞的生长活性,免疫细胞化学法检测肾癌细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果 10 μg/ml 阿霉素对肾癌ACHN细胞的生长抑制率仅为4.758%.沙利霉素组对肾癌ACHN细胞生长抑制率呈剂量依赖性,并高于阿霉素组(P<0.05),其中以10 μmol/L组抑制率最高(达17.555%).联合用药组的生长抑制率高于沙利霉素组及阿霉素组(P<0.05),以10 μmol/L 沙利霉素 +10 μg/ml 阿霉素组的抑制率最高(达45.447%).与阿霉素组比较,经沙利霉素处理过的肾癌ACHN细胞中的P-gp蛋白表达下降(P<0.05).结论 沙利霉素增强了肾癌ACHN细胞对阿霉素的敏感性,耐药性逆转的机制之一可能与沙利霉素下调癌细胞中P-gp的表达有关.     

环氧合酶-2选择性抑制剂对肾癌细胞生长抑制和诱导凋亡作用机制的研究

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂NS-398对肾癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法 常规方法培养肾癌细胞株786-0,以不同浓度NS-398(25,50,100,150,200μmol/L)处理786-0细胞.MTT法检测NS-398对786-0细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测786-0细胞凋亡,Western blot检测COX-2及Bcl-2表达,EIA法检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)的含量.结果 NS-398可抑制肾癌细胞786-0生长,24 h最大抑制率为41.7%,48 h达50.4%;NS-398诱导肾癌细胞786-0凋亡,24 h细胞凋亡率达21.88%;NS-398可明显降低786-0细胞中产生的PGE2水平,下调COX-2和Bcl-2蛋白的表达.结论 NS-398通过抑制COX-2表达,减少肿瘤细胞中PGE2的产生、下调Bcl-2的抗凋亡活性,从而抑制肾癌细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

蓝舌病毒HbC_3对人肾癌细胞的感染杀伤作用

目的 观察蓝舌病毒湖北株(BTV-HbC_3)对人肾癌ACHN细胞的感染特性,探讨其杀伤肾癌细胞作用及其机制.方法 BTV-HbC_3感染肾癌ACHN细胞,观察细胞病变效应及显微电镜变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,RNA凝胶电泳检测BTV-HbC_3在ACHN细胞内的增殖,DNA ladder法检测感染后凋亡并用流式细胞仪检测感染后细胞凋亡指数.结果 BTV-HbC_3感染细胞后有明显的细胞病变效应,细胞胞质内出现病毒颗粒,细胞肿胀破裂,1 MOI的BTV-HbC_3感染ACHN细胞24、36、48 h的存活率分别为68.14±5.13、57.14±2.68、42.21±5.63.RNA电泳出现L1-L3、M4-M6和S7-S10特征性病毒dsRNA,DNA ladder显示非特异凋亡表现,流式细胞仪检测1 MOI的BTV-HbC_3感染ACHN细胞24、36、48 h后可见低亚二倍体峰,比例分别为13.7%、18.5%和24.2%.结论 BTV-HbC_3能有效地杀伤人肾癌ACHN细胞.     

槐耳清膏体外诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察槐耳清膏在体外对人肝癌细胞株HepG-2凋亡的影响,为槐耳清膏在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据.方法 采用MTT法、TUNEL法及流式细胞术,观察不同浓度的槐耳清膏对体外培养的人肝癌细胞株HepG-2的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响;琼脂糖凝胶电泳检测DNA-LADDER的形成.结果:槐耳清膏在体外能抑制人肝癌细胞HepG2的生长,并具有时间及剂量依赖性;发生作用后,细胞生长有明显的凋亡特征性改变;细胞DNA的合成能力下降.结论:槐耳清膏能有效地抑制体外肝癌细胞生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关.     

13-MTD诱导膀胱癌细胞株T24凋亡的实验研究

目的观察饱和脂肪酸13-MTD对人膀胱癌细胞株T24体外诱导凋亡作用。方法用13-MTD处理人膀胱癌细胞株T24后,MTT法检测细胞生长情况。TUNEL、流式细胞仪检测13-MTD是否诱导凋亡,Western印迹法检测caspase酶底物裂解。结果35~145μg/ml的13-MTD以剂量及时间依赖方式明显抑制T24细胞生长。TUNEL示13-MTD引起T24凋亡细胞呈棕色或棕褐色形态学改变。70μg/ml的13-MTD显著抑制T24细胞增殖周期进程,2h出现sub-G1亚二倍体凋亡峰,48h后细胞凋亡率可以达到84.1%。同时13-MTD可以引起T24细胞的caspase酶的代谢底物(PARP、LaminB、RB)的裂解。结论13-MTD对T24细胞具有诱导凋亡的作用,诱导途径为Caspase酶依赖。     

姜黄素诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞周期阻滞和凋亡研究

目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的生长抑制作用。方法10～100μmol姜黄素作用PC3细胞5～24h后,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相及细胞凋亡变化,透射电镜观察细胞超微结构变化,Western印迹法检测细胞内IκBα的表达。结果姜黄素能显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的体外生长(P<0.05),呈时间与剂量依赖性;姜黄素将PC3细胞周期阻滞于G2/M期;不同浓度姜黄素诱导PC3细胞凋亡率分别为(6.33±0.88)%、(7.53±2.32)%、(12.74±3.02)%、(18.09±2.51)%与(27.54±2.63)%(P<0.05);细胞内IκBα的表达随姜黄素剂量的增加而逐步升高(P<0.05)。结论姜黄素通过抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长。     

三氧化二砷诱导肝癌细胞株凋亡的实验研究

目的明确三氧化二砷对人肝癌细胞体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法、^3H-TdR掺入法、TUNEL法、透射电镜观察及流式细胞术，观察不同浓度的三氧化二砷对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721的生长活力、细胞凋亡、DNA合成能力的影响。结果三氧化二砷能显著地抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长，并且具有时间和剂量依赖性；发生作用后，细胞生长有明显的凋亡特征性改变；细胞DNA合成能力下降。结论三氧化二砷能有效地抑制体外肝癌细胞生长，其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关。     

体外侵袭实验分离人肾癌细胞

目的:探讨体外分离侵袭性和非侵袭性肾癌细胞的方法.方法:对肾细胞癌细胞株ACHN进行传代培养.在预实验确定铺胶浓度、消化回收时间的基础上,采用涂有Matrigel胶的Transwell对传代培养的肾癌细胞进行体外侵袭实验,分离回收侵袭性和非侵袭性肾癌细胞.结果:以浓度为1.17 mg/ml、20 μl/孔铺胶在Transwell,固定细胞悬液密度(5×10 6/ml),第48小时消化回收细胞较为理想.非侵袭性细胞呈散在生长,侵袭性细胞多呈聚集样生长.结论:Transwell可体外快速分离及回收、培养不同侵袭性的肾癌细胞群.用肾癌细胞株ACHN进行体外侵袭实验代表性好,且传代稳定性好.     

长链非编码RNA MALAT-1通过EZH2-β-catenin信号通路调控肾癌细胞的增殖、凋亡及侵袭

目的探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录因子1(LncRNA MALAT-1)在肾癌组织及肾细胞癌(RCC)细胞株中的表达情况及其在调控RCC细胞增殖、凋亡及侵袭过程中的作用机制。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测正常和RCC组织以及HK-2、786-O、ACHN及Caki-1细胞中MALAT-1的表达情况;将786-O细胞随机分为3组,分别转染MALAT-1-siRNA沉默载体(si-MALAT-1组)及MALAT-1-siRNA阴性表达载体(si-NC组),空白对照组加入PBS(Blank组)。采用CCK-8法、流式细胞术法、Transwell法检测细胞增殖、凋亡及侵袭能力;利用Western blot法检测Zeste基因同源物增强子2(EZH2)及β-catenin的蛋白表达水平。结果与正常组织及细胞株HK-2相比,肾癌组织及细胞株786-O、ACHN及Caki-1中MALAT-1的表达水平明显增加(P<0.05);与Blank组和si-NC组相比,si-MALAT-1组RCC细胞活性和侵袭能力明显降低、细胞凋亡率明显增加、EZH2及β-catenin的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论LncRNA MALAT-1在肾癌组织及RCC细胞中表达上调;抑制MALAT-1的表达能够抑制RCC细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,其机制可能与下调EZH2-β-catenin信号通路的表达有关。     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）对非雄激素敏感的前列腺癌PC-3细胞株的凋亡诱导作用及分子机制。方法：以体外培养的PC-3细胞为研究对象,采用含不同浓度的VES培养液作用于细胞。采用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞增殖活性;采用Wright—Giemsa染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡并测定Fas蛋白表达水平;采用酶联免疫法检测转化生长因子口（TGF-β）的表达水平的变化。结果：VES可显著抑制PC-3细胞的生长及增殖,光镜下可见到PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变。FCM细胞周期分析显示G2／M期细胞增加而s期细胞明显减少,Fas蛋白和TGF-β表达明显上调。结论：VES可诱导前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Fas、TGF-β的表达有关。     

异阿魏酸抑制人肾癌细胞A-498增殖和诱导凋亡的机制研究

目的:探究异阿魏酸(isoferulic acid,IFA)抑制人肾癌细胞A-498增殖,诱导细胞凋亡的作用机制.方法:本研究通过克隆形成实验和CCK-8增殖检测实验考察IFA对人肾癌细胞A-498增殖能力的影响;用An-nexin V-FITC/PI双染色法检测IFA对A-498细胞凋亡的影响;用免疫印迹法检测IFA...     

多沙唑嗪诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的实验研究

目的探讨多沙唑嗪(doxazosin)对雄激素非依赖性人前列腺癌PC-3细胞株增殖与凋亡的影响及其机制。方法用MTT法测定不同浓度多沙唑嗪对PC-3细胞生长抑制情况,用荧光显微镜、流式细胞仪观察多沙唑嗪对细胞凋亡的诱导作用,Western-Blot检测caspase-3,caspase-8,caspase-9、FADD和Bid、Bax、Bcl-2的表达水平。流式细胞仪检测不同时段Caspase-9抑制剂对细胞凋亡率的影响。结果多沙唑嗪可显著抑制PC-3细胞的体外生长,其25,50,100μmol/L浓度组的A值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。PC-3细胞中FADD、caspase-3,-9,-8和Bid、Bax表达显著增加,Bcl-2无明显变化。PC-3细胞凋亡可显著被caspase-9抑制剂抑制。结论多沙唑嗪能诱导PC-3细胞凋亡,其作用可能通过死亡信号途径激活caspase-8,同时Bid,Bax表达上调,引发线粒体途径激活caspase-9和caspase-3而实现的。     

茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的 观察茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH的抑制增殖及诱导凋亡作用,并比较茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用强度差异.方法 1～10mmol/L茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸分别处理SK-N-SH细胞后,MTT法检测细胞生长活性;克隆形成实验检测细胞增殖能力;PI单染法流式细胞术检测细胞周期;AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡.结果 各浓度茉莉素作用后,SK-N-SH细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制,其中茉莉酸甲酯作用最强,1～10mmol/L茉莉酸甲酯作用24 h后,细胞生长抑制率为(22.74～88.67)%,IC50为1.44mmol/L;2.5mmol/L茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用后,细胞克隆形成能力分别降低87.00%、78.66%、39.00%,细胞周期示S期细胞比率显著增高,G0/G1期细胞比率下降,部分细胞发生典型的凋亡形态学改变;1.5～2.5mmol/L茉莉酸甲酯作用后,细胞凋亡率为(23.77～36.43)%.结论 茉莉素能通过减弱瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡等机制抑制人神经母细胞瘤细胞株的生长活性.