凝血因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列的云南省傣,彝和汉族 …

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子２２（ＣＡ）ｎ二核苷酸重复序列的多态性,获取高多态信息量的分子遗传标志。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和ＤＮＡ序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）对该位点的基因频率及多态信息量进行调查。结果发现,傣族和彝族中至少有（ＣＡ）ｎ拷贝数为２４,２５和２６的３种等位基因片段,两民族中的频率分布分别为１．２％－５７．５％和１６．４３％－６３．００％;汉族人群中     

DXS52VNTR位点多态性频率分布的研究

ＤＸＳ５２ＶＮＴＲ位点多态性频率分布的研究陈维之周道斌武永吉ＤＸＳ５２（Ｓｔ１４）是Ｘ染色体长臂远端与凝血因子Ⅷ（ＦⅧ）基因紧密连锁的一段ＤＮＡ序列，距ＦⅧ基因２Ｍｂ。包含一个高度多态性的可变数目串联重复序列（ＶＮＴＲ），基本构成为一个６０ｂｐＤＮＡ...     

云南省傣、彝、汉族人FⅧ基因BclⅠ限制性片段长度多态性研究

为确定凝血因子Ⅷ (ＦⅧ )基因ＢｃｌⅠ多态性位点在云南省人群中的多态信息量 (ＰＩＣ)及其在血友病Ａ家系携带者检测及产前诊断中的价值 ,我们应用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)技术对云南省傣、彝、汉族人群进行了ＦⅧ基因ＢｃｌⅠ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)分析。对象和方法1　研究对象　标本来自云南省三代纯傣族、彝族和汉族不相关正常个体各 5 0名。傣族男 2 0名 ,女 30名 ,共检测 80条Ｘ染色体 ;彝族男 2 2名 ,女 2 8名 ,共检测 78条Ｘ染色体 ;汉族男 2 2名 ,女 2 8名 ,共检测 78条Ｘ染色体。2　基因扩增　参照常规方法稍改进 ,从外…     

凝血因子Ⅷ基因内二核苷酸重复序列在云南省傣、彝和汉族人群中的多态性研究

研究云南省傣、彝和汉族人凝血因子Ⅷ基因内含子22(CA)n二核苷酸重复序列的多态性,获取高多态信息量的分子遗传标志.应用聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对该位点的基因频率及多态信息量进行调查.结果发现,傣族和彝族中至少有(CA)n拷贝数为24,25和26的3种等位基因片段,两民族中的频率分布分别为1.2%-57.5%和16.43%-63.00%;汉族人群中至少有5种等位基因片段,(CA)n拷贝数分别为24,25,26,27和28,频率分布在8.97%-32.00%.在上述三种民族人群中均未发现FⅧ基因内含子22二核苷酸重复序列的杂合子.本研究的结果提示,目前至少可认为该位点不宜作为云南省傣、彝和汉族人群的DNA遗传标志.     

凝血因子Ⅷ cDNA的克隆及分子裁剪

凝血因子Ⅷ基因的分子克隆是制备重组因子ＦⅧ及进行甲型血友病基因治疗的基础。本研究采用基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增，ｍＲＮＡ的逆转录酶／聚合酶链反应扩增以及基因组ＤＮＡ文库的筛选等多种技术，得到了编码Ｆ Ⅷ的合部ｃＤＮＡ片段，并剪接成了可供表达的两种Ｆ ⅧｃＤＮＡ分子：一种包括Ｆ Ⅷ全部编码序列，长７８２８ｂｐ。另一种是缺失编码大部分Ｂ结构域及部分轻链Ｎ端的缺友型，长５３２３ｂｐ。     

人凝血因子Ⅷ基因表达调控的研究

血友病A是一种单基因遗传病，目前尚无根治方法。基因治疗有可能最终治愈本病，但目前在血友病A的基因治疗研究中，FⅧ的表达量低，表达持续时间短，阻碍了将血友病A的基因治疗推向临床的进程。因而研究FⅧ基因表达的调控，以提高其表达水平，延长表达时间，是当前乃至今后血友病A基因治疗研究的重点。本文分别从转录前、转录以及转录后水平综述了近年来在FⅧ基因表达调控方面的研究进展。     

广东汉族人群St14（DXS52）VNTR与血友病A携带者的检测

目的 研究广东正常人群Ｓｔ１４（ＤＸＳ５２）位点的遗传多态性,为血友病Ａ的基因诊断提供依据。方法 采用扩增片段长度多态性（Ａｍｐ－ＦＬＰ）分析技术,检测了广东地区无血缘关系的正常汉族个体１２５名,男２１名,女１０４名,总计２２９条Ｘ染色体。利用此数目可变串联重复序列（ＶＮＴＲ）多态作为遗传标记,对４个血友病Ａ家系进行连锁分析。结果 共栓出１１种等位片段,其片段大小为７００￣１８１０ｂｐ,基因频率分     

注射用重组人凝血因子Ⅷ治疗血友病A的护理

目的探讨注射用重组人凝血因子Ⅷ(拜科奇)治疗血友病A的护理方法和要点。方法通过对7例血友病A患者31次使用注射用重组人凝血因子Ⅷ进行治疗时,予心理护理、药物配制、用药观察以及健康教育等护理干预。结果 7例血友病A患者31次使用注射用重组人凝血因子Ⅷ治疗,均未见不良反应。结论在使用注射用重组人凝血因子Ⅷ治疗中,加强药物及患者的护理,可减少不良反应,提高患者的治疗依从性与治疗效果。     

应用PCR技术对凝血因子Ⅷ基因多态性的研究

凝血因子Ⅷ(FⅧ)是血液凝固过程中起重要作用的一种血浆蛋白,其基因缺陷可导致临床上常见的遗传性出血性疾病——血友病A。本研究应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增FⅧ基因的BclⅠ和Xba Ⅰ的特异片段,经酶解后分析酶切位点限制性片段长度多态性(RFLP),BclⅠ的多态信息量(PIC) 为0.36,XbaⅠ为0.49,联合应用则为0.67。在30名受检女性中,BclⅠ杂合频率为40％,XbaⅠ为53％,联合应用则为76％。15个家系中,10个可采用BclⅠ或XbaⅠ进行RFLP分析。对这些家系中19名可疑携带者进行检测,结果诊断出8名基因携带者。     

重组狗凝血因子Ⅷ的慢病毒介导体外表达的研究

本研究的目的是制备携带狗凝血因子Ⅷ（cFⅧ）基因的慢病毒载体,探讨慢病毒载体能否介导cFⅧ在体外的有效表达。用构建携带cFⅧ基因的慢病毒载体pTK161（含PUB启动子）和pTK162（含2OH1启动子）,同时构建含绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒载体pTK161′（含PUB启动子）和pTK162′（含2OH1启动子）的方法,分别与包装质粒ΔNRF、包膜蛋白质粒VSV-G共转染293T包装细胞,将包装好的病毒颗粒再感染293T细胞,检测病毒滴度和培养细胞上清中cFⅧ活性。结果显示：经限制性酶切鉴定,成功构建了pTK161、pTK162、pTK161′和pTK162′正向连接载体;pTK161′和pTK162′的病毒滴度分别为1.54×10^6U/ml和2.83×106U/ml;pTK161、pTK162感染靶细胞后24小时细胞上清中即可检测到cFⅧ的表达,72小时表达量达高峰。pTK162载体cFⅧ表达活性接近正常狗血浆FⅧ活性,而且明显高于pTK161（p〈0.05）,6周后cFⅧ表达活性仍达最高值的1/4。结论：构建的自身失活慢病毒载体可携带较大片段的cFⅧ基因,并在体外可获得有效表达;本研究为慢病毒载体介导的血友病A的基因治疗研究提供实验依据。     

Nijmegen法检测凝血因子Ⅷ抑制物的临床应用

目的观察血友病A(HA)及获得性HA(AHA)患者凝血因子Ⅷ(FⅧ)抑制物的产生情况,探讨Nijmegen法结合APTT纠正试验在FⅧ抑制物检测中的应用及对临床诊断和治疗的指导意义。方法用一期凝固法对42例临床患者进行凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及FⅧ活性检测,进一步采用APTT纠正试验进行筛选,阳性患者用Nijmegen法进行FⅧ抑制物浓度的测定,并结合临床资料进行分析。结果 42例均为FⅧ活性减低患者。39例HA患者中有2例存在FⅧ抑制物(5.1%),浓度分别为3.7 BU/m L和83.2 BU/m L。3例非HA患者经APTT纠正试验未能纠正到正常范围,其中2例AHA患者的抑制物浓度分别为3 686 BU/m L和61 BU/m L,另1例SLE患者APTT纠正试验结果不具有时间依赖性,抑制物浓度仅为0.1 BU/m L。结论 Nijmegen法结合APTT纠正试验检测FⅧ抑制物,方法简便准确,可为FⅧ活性减低患者的临床诊断和治疗提供指导。     

云南省傣、彝、汉族人FⅧ基因BclⅠ限制性片段长度多态性的研究

为探讨FⅧ基因BcⅠ限制性内切酶多态性位点在云南省人群中的诊断价值,应用PCR技术及PAGE分离技术获得云南省傣、彝、汉族人群的多态信息量(polymorphic informative con-tent,PIC),其中傣族人的PIC为0.6435,明显高于汉族人的PIC 0.4190,显著高于彝族人PIC0.3641,这充分显示了FⅧBclⅠ多态现象的民族差异性及该分子遗传标志的应用价值。     

精子载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达

利用精子载体技术通过人工授精观察人凝血因子Ⅷ基因在转基因小鼠体内的表达，将含有人FⅧBD（B-domain deleted)cDNA的质粒pRC/RSV-hFⅧBDl转染至小鼠精子，通过人工授精使母鼠受孕，新生小鼠出生后第4周，应用PCR筛查hFⅧBDcDNA阳性转基因幼鼠，取转有人FⅧBDcDNA幼鼠的血液检测血浆中的人FⅧ抗原和抗体，分别用Northern印迹和Western印迹检测脾，肝，肺和肾组织中人FⅧBDcDNA的转录和表达。结果发现，人工授精后20只受体母鼠7只受孕，共产下11只仔鼠，存活9只，PCR筛检出3只转有人FⅧBDcDNA的阳性鼠，3只阳性鼠血浆中的人FⅧ抗原量分别为8.65ng/ml,7.84ng/ml和8.44ng/ml，人FⅧ的抗体均为阴性。Northern印迹和Western印迹检测显示3只F1代阳性幼鼠的脾，肝，肺和肾组织中均有人FⅧBDcDNA的转录和表达。结论提示，利用精子载体法可以制备转有人凝血因子Ⅷ基因的转基因小鼠，并表达人FⅧ蛋白，这为用精子载体技术生产转基因动物并将之作为生物反应器生产人凝血因子Ⅷ提供了实验依据。     

人凝血因子Ⅷ cDNA 体外真核表达的初步研究

目的：建立人凝血因子ⅧｃＤＮＡ体外真核高效表达的体系。方法：将人ＦⅧＢ区大部分缺失（Δａ７６０１６３９）的ＦⅧｃＤＮＡ插入ｐＣＩ真核表达载体、ｐＧＲＥ５．２／ＥＢＶ载体和逆转录病毒载体ｐＭＳＣＶ，构建了５种表达框架，在体外转染和感染了多种靶细胞。结果：ｐＣＩⅧ在ＮＩＨ３Ｔ３细胞产生了低水平表达，而ｐＧＲＥ５．２／ＥＢＶⅧ和ｐＭＳＣＶⅧ系列分别在Ｈｅｌａ细胞和Ｂｏｓｃ２３逆转录病毒包装细胞中呈较高水平的表达。Ｂｏｓｃ２３细胞培养上清感染的ＮＩＨ３Ｔ３和３２ＤＣ不能有效地产生ＦⅧ。结论：在ＦⅧ体外表达及基因治疗的方案设计中，靶细胞的选择是一重要因素。     

血友病A患者产生凝血因子Ⅷ抑制物的治疗相关危险因素

血友病A的治疗以凝血因子替代治疗为主.替代治疗目前存在的主要问题为血友病患者输注FⅧ制剂后产生针对FⅧ的中和性抗体,其发生率国外各家报道差异较大,危险因素包括患者相关因素(疾病严重程度、患者的种族、基因型和免疫反应)和治疗相关因素(替代治疗的起始时间、种类、剂量和方式),本综述主要阐述了国内外治疗相关危险因素的研究现状.     

成年人及儿童重型血友病A患者凝血因子Ⅷ的预防性应用指南

本指南以文献为依据,以专家共识为基础,介绍在重型血友病A的儿童和成年人患者中预防性使用凝血因子Ⅷ(FⅧ)的作用.指南就预防性使用FⅧ的起始时机、预防方案的选择、治疗过程中的监测、突发出血时的处理,以及患者和家属的教育等问题进行了讨论.     

小剂量凝血因子输注治疗血友病急性关节出血的疗效研究北大核心CSCD

目的验证小剂量凝血因子Ⅷ输注对血友病患者急性关节出血的治疗效果.方法采用自身交叉对照的研究方法,即对于同一个患者同一个关节在出血后24 h内分别进行低于推荐剂量的小剂量和推荐剂量(一次输注309 U和一次输入618 U)的治疗方法进行因子替代治疗,并分别观察出血前关节出血程度和疼痛程度在不同剂量因子治疗下的改善程度.结果小剂量(309 U)组平均使用因子剂量为5(3.86～10) U/kg体质量,推荐剂量(618 U)组平均使用因子剂量为10(7.72～20) U/kg体质量;小剂量组和推荐剂量组的疼痛程度部分和完全缓解分别为90%和100%;出血程度部分和完全改善分别为80%和93.10%,差异无统计学意义(P>0.05).结论小剂量组和推荐剂量组均能改善血友病A患者关节出血疼痛和出血程度.     

人凝血因子Ⅷ基因表达调控的研究

血友病A是一种单基因遗传病,目前尚无根治方法。基因治疗有可能最终治愈本病。但目前在血友病A的基因治疗研究中,FⅧ的表达量低,表达持续时间短,阻碍了将血友病A的基因治疗推向临床的进程。因而研究FⅧ基因表达的调控,以提高其表达水平,延长表达时间,是当前乃至今后血友病A基因治疗研究的重点。本文分别从转录前、转录以及转录后水平综述了近年来在FⅧ基因表达调控方面的研究进展。     

白细胞介素6诱导人凝血因子Ⅷ基因的体外表达

血友病A是一种单基因遗传病，基因治疗有可能根治本病，因此，近二十年来国内外在血友病A基因治疗的研究方面做了大量工作，取得了一定进展，但总的效果并不理想，焦点是凝血因子Ⅷ（FⅧ）的表达量低，表达持续时间短。所以，研究FⅧ基因表达的调控，以提高其表达水平，延长表达时间，是当前和今后血友病A基因治疗研究的重点和方向。我们观察了白细胞介素6（IL-6）在体外对人FⅧ基因表达的影响，并对其机制进行了初步探讨。