骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞均参与多发性骨髓瘤白细胞介素6过度分泌

目的：探讨白细胞介素６（ＩＬ６）在多发性骨髓瘤（ＭＭ）中过度表达的机制。方法：采用多聚甲醛分别固定骨髓瘤细胞ＫＭ３和骨髓基质细胞，再将其置于同一体系中共同培养，用Ｂ９细胞增殖试验测量培养上清中ＩＬ６活性。结果：骨髓基质细胞及骨髓瘤细胞均能自发分泌ＩＬ６，两种细胞经固定后几乎均不能分泌ＩＬ６。固定的骨髓瘤细胞与未经固定的骨髓基质细胞共培养后，可使共培养上清中的ＩＬ６活性明显增加，同时固定后的骨髓基质细胞与未固定的骨髓瘤细胞共培养后亦可使后者分泌ＩＬ６增加，其中ＭＭ患者的骨髓基质细胞较正常对照组骨髓基质细胞与骨髓瘤细胞共培养后上清中ＩＬ６活性增加更明显（Ｐ均＜０．０１）。结论：ＭＭ患者ＩＬ６过度产生的机制存在二相性，即骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞均可过度表达ＩＬ６，参与ＭＭ的发病。     

骨髓基质细胞对人多发性骨髓瘤细胞系自分泌白细胞介素6诱…

研究了小鼠骨髓基质细胞对诱导人白细胞介素６（ＩＬ－６）依赖性多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞自分泌ＩＬ－６的作用。结果表明：人ＭＭ细胞系ＸＧ－１培养上清（ＳＮ１）没有可检测水平ＩＬ－６活性；小鼠骨髓基质细胞系ＭＦ－Ｌ培养上清（ＳＮ２）仅有低水平ＩＬ－６活性（１００Ｕ／ｍｌ）；ＸＧ－１细胞和ＭＦ－Ｌ细胞／上清共同培养上清（ＳＮ３，ＳＮ４）均含极高的ＩＬ－６活性（１０５０Ｕ／ｍｌ），并可被ＩＬ－６单抗ＢＥ－８     

骨髓基质细胞对人多发性骨髓瘤细胞系自分泌白细胞介素6诱导作用的研究

研究了小鼠骨髓基质细胞对诱导人白细胞介素６（ＩＬ－６）依赖性多发性骨髓瘤（ＭＭ）细胞自分泌ＩＬ－６的作用。结果表明：人ＭＭ细胞系ＸＧ－１培养上清（ＳＮ＿１）没有可检测水平ＩＬ－６活性；小鼠骨髓基质细胞系ＭＦ－１培养上清（ＳＮ＿２）仅有低水平ＩＬ－６活性（１００Ｕ／ｍｌ）；ＸＧ－１细胞和ＭＦ－Ｌ细胞／上清共同培养上清（ＳＮ＿３，ＳＮ＿４）均含极高的ＩＬ－６活性（１０５０Ｕ／ｍｌ），并可被ＩＬ－６单抗ＢＥ－８特异性中和，而且不同浓度的ＳＮ＿３，ＳＮ＿４可以促进其他依赖外源性ＩＬ－６的人ＭＭ细胞系（ＸＧ－２，４，６）生长。鉴此证实了小鼠骨髓微环境基质细胞可以诱导ＭＭ细胞自分泌ＩＬ－６，后者可促进ＭＭ细胞生长。     

多发性骨髓瘤患者白细胞介素6表达的研究

为探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）与多发性骨髓瘤（ＭＭ）发病的关系，检测了２１例ＭＭ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的ＩＬ－６活性。结果显示：进展期ＭＭ组的ＩＬ－６活性高于稳定期ＭＭ组（Ｐ＜０．０１）及正常对照组（Ｐ＜０．０００５）；ＩｇＧ型ＭＭ患者的ＩＬ－６活性与Ｍ蛋白，ＩｇＡ及ＩｇＭ的含量无相关性。加之ＩＬ－６可骨髓瘤细胞增殖，结果表明：ＩＬ－６可能是ＭＭ的发生或生长因子，但ＩＬ－６与ＭＭ的异...     

多发性骨髓瘤骨髓基质细胞分泌IGF-1、VEGF和IL-6的动态变化

目的研究骨髓基质细胞（BMSCs）分泌的IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）、胰岛素样生长因子（IGF-1）在多发性骨髓瘤（MM）进展中的变化和意义以及这三种细胞因子之间的相互作用。方法取28例MM患者（分为活动组和稳定组）、10例缺铁性贫血患者（对照组）及2例意义未明的单克隆免疫球蛋白血症（MGUS）患者的骨髓，建立BMSCs的体外培养体系。用ELISA法检测单独培养的BMSCs，以及BMSCs与U266细胞混合培养后IL-6、VEGF、IGF-1在培养上清中的浓度；应用外源性IL-6、VEGF、IGF-1作用于BMSCs后三种细胞因子的分泌量。结果①单独培养BMSCs所分泌的IL-6和VEGF浓度，对照组〈稳定组〈活动组（P〈0．05），IGF-1的浓度在三组之间差异无统计学意义（P〉0．05）；②U266细胞和BMSCs均分泌IL-6、VEGF和IGF-1；U266与BMSCs黏附后IL-6、VEGF、IGF-1的分泌明显升高（P〈0．05）；混合培养上清中IL-6、VEGF、IGF-1浓度，对照组〈稳定组〈活动组（P〈0．05）；③BMSCs分别加入外源性IL＆／VEGF／IGF-1后，诱导VEGF、IGF-1／IL-6、IGF一1／VEGF、IL-6分泌增加（P〈0．05）；④MGUS患者BMSCs分泌IL-6、VEGF、IGF-1的水平与对照组相似。结论BMSCs分泌的细胞因子IL-6、VEGF、IGF-1与MM的进展有关；IL-6、VEGF、IGF-1三种细胞因子影响BMSCs的分泌，三者之间有相互促进分泌的作用。     

人骨髓瘤细胞Sko-007中的白细胞介素6信号转导途径研究

目的 研究人骨髓瘤细胞系Ｓｋｏ－００７中的白细胞介素６（ＩＬ－６）信号转导途径。方法 采用凝胶阻滞电泳和免疫常常方法观察ＩＬ－６刺激前后Ｓｋｏ－００７细胞中ＩＬ－６相关转录因子ＳＴＡＴ３、ＮＦ－ＩＬ－６、ＮＦ－ｋＢ和参与ＩＬ－６信号转导功能的蛋白激酶ＥＲＫ、ＪａｋＩ的诱导活化状态并确定该细胞中的ＩＬ－６信号转导通路。结果 转录因子ＳＴＡＴ３、ＮＦ－ＩＬ－６和蛋白激酶ＥＲＫ、Ｊａｋｌ都能在Ｓｋｏ－０     

多发性骨髓瘤患者外周血B细胞激活状态及其对白细胞介素4的反应

用间接免疫荧光染色流式细胞仪分析技术，检测了２８例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者以及２０名健康对照者外周血Ｂ细胞（ＣＤ２０＾＋）以及Ｂ，Ｔ细胞中ＨＬＡ－ＤＲ＾＋细胞比率。发现ＭＭ患者外周血中Ｂ细胞比率（９．３８±２．８３％）以及Ｂ，Ｔ细胞中ＨＬＡ－ＤＲ＾＋细胞比率（２６．０４±６．８０％和１２．５０±４．２２％）明显低于对照组中Ｂ细胞的比率（１２．２０±２．９２％）及Ｂ，Ｔ细胞中ＨＬＡ－ＤＲ＾＋细胞...     

血清白细胞介素6和肿瘤坏死因子与多发性骨髓瘤相关性的初步探讨

采用ＩＬ－６依赖细胞株ＫＤ８３增殖实验检测２３例多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者血清ＩＬ－６活性；用ＥＬＩＳＡ法测定相应患者血清ＴＮＦ水平，结果显示ＭＭ患者血清ＩＬ－６和ＴＮＦ水平分别为０．２０±０．１０（ＯＤ值）与８．８±２．４μｇ／Ｌ，而正常组分别为０．１０±０．０６（ＯＤ值）与０．５±１．１μｇ／Ｌ，两组相比Ｐ＜０．０ｌ，ＭＭ患者血清ＩＬ－６和ＴＮＦ水平显著高于正常组，并与疾病分期相关。对１３例初治患者进行动态观察，发现ＩＬ－６、ＴＮＦ水平和变化情况与疗效有关。结果提示ＩＬ－６和ＴＮＦ都可作为ＭＭ临床分期、反映疗效和估计预后的重要指标。     

多发性骨髓瘤患者骨髓细胞IL-6分泌机制的研究

目的：探讨多发性骨髓瘤（ＭＭ）患者骨髓细胞中白细胞介素６（ＩＬ－６）分泌机制。方法：应用双标记免疫荧光技术检测了１６例ＭＭ患者和１９例对照者新鲜分离的骨髓单个核细胞中ＩＬ－６表达情况。结果：ＭＭ患者骨髓单个核细胞ＩＬ－６表达阳性率为１５．４％±６．５％，骨髓瘤细胞ＩＬ－６表达阳性率达７．９％±２．９％，基质细胞ＩＬ－６表达阳性率达４．５％±１．２％；对照组骨髓单个核细胞ＩＬ－６表达阳性率为４．６％±２．３％，基质细胞ＩＬ－６表达阳性率为２．６％±１．１％，浆细胞ＩＬ－６表达阳性率为０．７％±０．１％。ＭＭ患者均较对照组显著升高（Ｐ均＜０．００１）。另外ＭＭ组骨髓单个核细胞中基质细胞所占比率为６．９％±１．４％，也较对照组的４．７％±１．８％明显升高（Ｐ＜０．００１）。结论：ＭＭ患者升高的ＩＬ－６既可由瘤细胞分泌，又可由基质细胞分泌，自分泌和旁分泌机制可能都参与了ＭＭ的发病。     

VEGF对多发性骨髓瘤骨髓基质细胞分泌IL-6的影响

目的 研究血管内皮生长因子（VEGF）对多发性骨髓瘤患者骨髓基质细胞分泌白细胞介素6（IL-6）的影响,探讨多发性骨髓瘤（MM）的发病机制,为开发骨髓瘤新的治疗途径提供依据。方法 骨髓来源于18例骨髓瘤患者,并取8例缺铁性贫血患者的骨髓做正常对照组。常规分离培养骨髓基质细胞（BMSCs）,观察BMSCs生长情况,流式细胞仪检测BMSCs表型,取2-3代BMSCs进行实验,加入不同浓度外源性VEGF或作用不同时间,收集BMSCs上清液,以ELISA方法 检测IL-6浓度。结果 骨髓的基质细胞在体外成贴壁生长,为成纤维细胞形态,流式细胞仪检测其表型为CD54（＋）、CD33（-）、CD31（-）.骨髓瘤患者BMSCs分泌IL-6的结果 高于正常对照BMSCs,两者差异有统计学意义（P〈0.05）。不同浓度重组VEGF作用于骨髓瘤患者BMSCs或VEGF作用不同时间,均有显著刺激BMSCs分泌IL-6增多,呈现剂量和时间依赖性,P〈0.05。结论 在多发性骨髓瘤中,VEGF除了可以促进骨髓肿瘤血管的新生,支持瘤细胞的浸润转移,还可以明显刺激骨髓基质细胞分泌IL-6,促进肿瘤生长,针对VEGF的相关治疗将成为治疗骨髓瘤的新途径。     

血管内皮生长因子对骨髓瘤骨髓基质细胞分泌白细胞介素6的影响

背景:研究表明骨髓瘤细胞和骨髓基质细胞黏附后,可促进多种细胞因子如血管内皮生长因子、白细胞介素6的分泌,这些因子在促进肿瘤生长、浸润中起到关键作用.目的:观察血管内皮生长因子对多发性骨髓瘤患者骨髓基质细胞分泌白细胞介索6的影响.设计、时间及地点:对照观察,于2005-04/2007-04在大连医科大学附属二院血液实验室完成.对象:所有骨髓标本来源于大连医科大学附属二院血液科住院患者,多发性骨髓瘤患者18例,缺铁性贫血患者8例的骨髓为正常对照.血管内皮生长因子为R＆D公司产品.方法:上述对象每例抽取骨髓5 mL,贴壁法分离培养骨髓基质细胞.当细胞贴满瓶壁后传代,取2～3代细胞进行实验.分别向骨髓瘤骨髓基质细胞、正常骨髓基质细胞的悬液中加入含10%胎牛血清的IMDM培养液,按1×109 L-1密度接种,48 h后收集上清液待测.此外,分别以10,50,100μg/L血管内皮生长因子作用骨髓瘤骨髓基质细胞48h,另以100 μg/L血管内皮生长因子分别作用骨髓瘤骨髓基质细胞24,48,72 h,收集上清液待测.主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞表型.ELISA 法检测两种骨髓基质细胞培养上清液中的白细胞介素6浓度.ELISA法检测血管内皮生长因子作用于骨髓瘤骨髓基质细胞对分泌白细胞介素6的影响.结果:26例骨髓标奉均进入结果分析.①体外培养的骨髓基质细胞贴壁生长,平均4周融合为单层,传代后表现为成纤维细胞形态,其表型为CD54 ,CD33-,CD31-.②骨髓瘤骨髓基质细胞上清液中白细胞介素6的含量明显高于正常骨髓基质细胞(t=6.17,P<0.05).③分别以10,50,100 μg/L血管内皮生长因子作用骨髓瘤骨髓基质细胞48 h后,其上清液中白细胞介素6的含量逐渐升高,3种浓度间比较差异有显著性意义(F=218.19～1970.90,P<0.05).以100 μg/L血管内皮生长因子分别作用骨髓瘤骨髓基质细胞24,48,72 h后,其上清液白细胞介素6的含量逐渐升高,各时间点比较差异有显著性意义(F=92.86～1026.30,P<0.05).结论:骨髓瘤骨髓基质细胞在生长形态卜与正常骨髓基质细胞基本相似,但前者白细胞介素6的分泌却显著高于后者.血管内皮生长因子对骨髓瘤骨髓基质细胞的白细胞介素6分泌呈剂量、时间依赖性影响.     

IL—6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复？…

目的：探讨白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染的骨髓基质细胞系ＱＸＭＳＣ１ＩＬ－６对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法：将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠，建立骨髓移植（ＢＭＴ）模型。小鼠的造血功能用脾结节（ＣＦＵ－Ｓ）、粒－单系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）、红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ）测定及外周血各项血液学指标来确定。结果：ＷＸＭＳＣ１ＩＬ－６转基因骨髓基质细胞可明显增强ＢＭ     

两种不同的骨髓检验方法在多发性骨髓瘤诊疗中的价值

目的分析骨髓同步涂片与骨髓活检在多发性骨髓瘤诊断及疗效判断中的价值。方法选取2008年3月至2013年1月在该院进行治疗的多发性骨髓瘤患者92例,均进行骨髓活检与骨髓涂片检查,观察增生程度、诊断敏感性、浆细胞浸润度和浆细胞异常细胞形态检出率。结果骨髓活检检出的骨髓增生程度、诊断敏感性、浆细胞浸润度和浆细胞异常细胞形态检出率均明显高于骨髓涂片检验（P〈O．05）。结论骨髓活检在诊断多发性骨髓瘤方面价值高于骨髓涂片,但可以根据患者的具体情况,采用两者联合以提高诊断准确率。     

N-乙酰半胱氨酸拮抗6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用

背景：内源性6-羟基多巴胺能参与氧化应激,N-乙酰半胱氨酸能有效抗氧化和清除自由基。目的：探讨6-羟基多巴胺对骨髓基质细胞的毒性作用及N-乙酰半胱氨酸对其的拮抗作用。方法：在体外培养SD大鼠骨髓基质细胞,取第3代骨髓基质细胞分别加入终浓度为0,0.05,0.1g/L的6-羟基多巴胺和终浓度为0,0.075,0.3,1.2,4.8g/L的N-乙酰半胱氨酸。结果与结论：MTT检测发现0.05和0.1g/L6-羟基多巴胺可以明显降低骨髓基质细胞的细胞活性,而加入6-羟基多巴胺的同时加入0.3g/LN-乙酰半胱氨酸可以显著抑制6-羟基多巴胺的毒性作用。提示抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以影响6-羟基多巴胺的作用。     

Arsenic trioxide inhibits growth of human multiple myeloma cells in the bone marrow microenvironment

Multiple myeloma (MM) remains incurable with current therapies, and novel biologically based therapies are urgently needed. Thalidomide and its analogues, as well as proteasome inhibitors, are examples of such novel agents that target both the myeloma cell and its microenvironment and can overcome classical drug resistance. In this study we demonstrate that arsenic trioxide (As2O3) mediates anti-MM activity both directly on tumor cells and indirectly by inhibiting production of myeloma growth and survival factors in the bone marrow (BM) microenvironment. Specifically, As2O3 at clinically achievable levels (2-5 microM) induces apoptosis even of drug-resistant MM cell lines and patient cells via caspase-9 activation, enhances the MM cell apoptosis induced by dexamethasone, and can overcome the antiapoptotic effects of interleukin 6. As2O3 also acts in the BM microenvironment to decrease MM cell binding to BM stromal cells, inhibits interleukin 6 and vascular endothelial growth factor secretion induced by MM cell adhesion, and blocks proliferation of MM cells adherent to BM stromal cells. These studies provide the rationale for clinical trials of As2O3, either alone or together with dexamethasone, to overcome classical drug resistance and improve outcome in patients with MM.     

IL-6基因转染的骨髓基质细胞系对骨髓移植小鼠造血功能恢复的促进作用

目的:探讨白细胞介素6(IL-6)基因转染的骨位基质细胞系QXMSC, IL6对骨髓移植后造血功能的重建作用。方法:将骨髓造血细胞和骨髓基质细胞系一起经尾静脉注射给同系小鼠,建立骨髓移植(BMT)模型。小鼠的造血功能用脾结节(CFU-S)、粒-单系祖细胞(CFU-GM)、红系祖细胞(CFU-E、BFU-E)测定及外周血各项血液学指标来确定。结果:QXMSC_1 IL-6转基因骨髓基质细胞可明显增强BMT小鼠形成的CFU-S、CFU-GM、CFU-E和BFU-E数,促进外周血象的恢复。结论:QXMSC_1 IL-6细胞可明显促进小鼠骨髓移植后早期造血功能重建。     

Osteogenic potential of bone marrow stromal cells

Bone marrow is the point of origin of several cell types, including stromal cells. Adherent bone marrow stromal cells can differentiate into chondrocytes, adipocytes and osteoblasts. Several substances which modulate the dynamics and differentiation of bone marrow stromal cells have been identified. Recently it has been discovered that those bone marrow cells which are non-adherent in tissue culture for 3 days have osteogenic potential comparable to that of whole bone marrow cells. In the future, implantation of non-adherent bone marrow stromal cells may be of use as an aid in bone fracture healing, similar to whole marrow or adherent stromal cell grafting at present.