人硫氧还蛋白cDNA的克隆和表达

我们在本研究中克隆出hTrx成熟区cDNA序列并在原核中高效表达出hTrx蛋白,现将结果报道如下。一、材料和方法14 3 (TK-)人骨肉瘤细胞、pBV2 2 0由西安华广生物工程公司馈赠。pGEM TEasy为Promega公司产品。AMV逆转录酶、Oligo(dT) 15等试剂均购自华美生物工程公司。收集铺满度为80 %的14 3 (TK-)人骨肉瘤细胞2×10 7,异硫氢酸胍一步法提取RNA。根据Genbank提供的已知序列(J0 40 2 6) ,设计下列引物:上游引物5’CGGAATTCATGGT GAAGCAGATCGAGAGC 3’,5’端设有EcoRI酶切位点;下游引物:5’CGGGATCCGATTAGACTAAT…     

硫氧还蛋白对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的 观察经硬膜外注入硫氧还蛋白(Trx)对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)后脊髓组织中Nogo-A表达的影响,探讨其对脊髓损伤的保护作用.方法 成年Wister大鼠56只,分为假手术组(A组,n=8)、损伤对照组(B组,n=24)和Trx治疗组(C组,n=24).B、c组用改良Allen's法以30 g/cm致伤大鼠T8脊髓制作损伤模型,同时在蛛网膜下腔置管,C组术后即刻和随后每天1次按0.75mg/kg从硬膜下导管推入硫氧还蛋白,B组在相同时问点给予等量生理盐水;A组打开椎板后蛛网膜下腔置管,不损伤脊髓,不给药.在术后3、7、14 d分别对其进行后肢运动功能BBB评分(n=8),评分完毕即处死动物,取受损节段脊髓组织行免疫组织化学观察脊髓组织中Nogo-A阳性细胞的表达,同时计数阳性细胞.结果 各时间点B组大鼠BBB评分均显著低于A组(P<0.01),伤后7、14 d时C组评分显著高于B组(P<0.05或0.01).B组在术后7与14日Nogo-A表达均显著高于A组(P<0.01);C组在伤后7、14 d的表达量显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,Trx能明显抑制Nogo-A的表达,可能促进轴突的再生.     

组织扩张与机械牵拉对皮肤组织表达硫氧还蛋白影响的初步研究

目的 探讨硫氧还蛋白(TXN)在扩张皮肤组织与正常皮肤组织中的表达差异.方法 选取近两年在我院行额部扩张器取出术的患者13例,收集患者额部扩张器张力最大点(扩张组)以及颞部行附加切口处(对照组)的全层皮肤.免疫组织化学染色、Western blot检测TXN蛋白在扩张皮肤组织及正常皮肤组织中的表达.结果 免疫组织化学检测发现,扩张皮肤组织中TXN阳性细胞明显多于正常皮肤组织(P＜0.05);Western blot检测发现,扩张皮肤组织中TXN表达高于正常皮肤组织.结论 扩张皮肤组织中TXN蛋白表达高于正常皮肤组织,为进一步研究TXN在组织扩张中的作用提供理论基础.     

硫氧还蛋白-1：预防心脏相关活性氧损伤的潜在靶点

活性氧（reactive oxygen species,ROS）可导致细胞凋亡进而引发器质性疾病,损伤心脏功能,在多种心脏疾病的发生中起重要作用。虽然抗ROS疗法备受期待,但目前仍缺乏公认理想的方案以预防ROS损伤。作为重要的内源性抗氧化系统之一,硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx）被证明具有出色的抗氧化活性。通过不同方法激动Trx-1活性,能还原关键生物分子,或清除ROS,或调节众多细胞生存相关信号通路,抵抗ROS损伤。本文就Trx-1在心脏抗氧化治疗中的研究进展作一综述,以探讨Trx-1作为抵抗ROS损伤靶点的潜力与可能性。     

硫氧还蛋白还原酶抑制剂抗结直肠癌的作用机制研究进展

结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤,也是全球第二大癌症相关死亡因素。近些年来,结直肠癌的发病率也在逐渐升高,对人们的生命安全造成严重的威胁。硫氧还蛋白还原酶（TrxR）主要分布在细胞内,是含硒同型二聚体酶的一种,在机体氧化还原稳定、细胞增殖及肿瘤转移中起到关键作用。TrxR的特有结合域是含硒C末端活性位点,其靶向抑制剂已成为了肿瘤治疗的研究重点。该文综述了TrxR抗结直肠癌的作用机制,以期为临床治疗结直肠癌提供参考。     

睾丸/精子特异的硫氧还蛋白Sptrx-1,2,3与男性生殖功能的关系

Sptrx-1,2,3是一组特异表达于睾丸/精子的硫氧还蛋白,在精子发生过程中,它们在结构和功能上发挥了重要作用。Sptrx-1,2,3的发生及其变异与男性生殖功能密切相关。以Sptrx-1,2,3为研究和治疗靶点,开拓了临床男性生殖研究的新领域。     

低温通过冷诱导RNA结合蛋白/硫氧还蛋白1通路减轻心肺复苏后神经元氧化应激损伤

目的 探讨心跳骤停心肺复苏后脑损伤(BIC)模型中,治疗性低温(TH)对神经元氧化应激损伤的作用及相关机制.方法 雄性SD大鼠60只,7～10周,体重280～320 g.采用随机数字表法分为五组:假手术组(S组)、BIC组、低温治疗组(TH组)、沉默冷诱导RNA结合蛋白(CIRP)后低温治疗组(THC组)和空载后低温治...     

金属硫蛋白1E对胰腺癌SW1990细胞生长的影响

目的 观察外源性人金属硫蛋白1E(MT1E)基因对胰腺癌SW1990细胞生长的影响.方法 构建MT1E基因真核表达载体,转染SW1990细胞并获得阳性单克隆细胞.用Westernblot技术检测转染前后MT1E蛋白表达,噻唑蓝(MTT)实验检测其增殖能力的变化,流式细胞仪分析细胞周期时相分布.同时检测Cyclin D1与p53的表达.结果 MT1E融合蛋白在SW1990MT1E细胞中表达.MTT结果表明,与SW1990和SW1990MT1E空细胞比较,SW1990MT1E细胞增殖速度明显增快.SW1990MT1E细胞与SW1990和SW1990空细胞比较,G0/G1期细胞明显减少,S期明显增多,差异有统计学意义.SW1990MT1E较SW1990空的细胞Cyclin D1与p53表达明显升高.结论 MT1E能够促进SW1990增殖,可能和上调Cyclin D1促使细胞进入S期增多,通过失活p53蛋白使细胞恶性变.     

熊去氧胆酸对大鼠肝再生和细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 观察熊去氧胆酸对大鼠肝再生和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠分为对照组和熊去氧胆酸组(UDCA组),各32例.对照组给予标准饲料,UDCA组给予0.3%UDCA饲料,7d后行70%肝部分切除术(PH).于术后0、1、2、3 d四个时间点观察大鼠肝细胞增殖和Cyclin D1表达情况.结果 两组大鼠在0d时PCNA蛋白几乎不表达,在PH后1d,PCNA蛋白标记指数迅速上升达高峰,而UDCA组PCNA标记指数显著高于对照组(40.70±4.73比33.24±5.59,P<0.01).2 d时,UDCA组PCNA标记指数仍显著高于对照组(35.64±5.86比29.45±7.04,P<0.05).3 d时两组差异无统计学意义(P>0.05).UDCA组在PH术后1、2 d Cyclin D1表达明显高于对照组(P<0.05),3 d时两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 熊去氧胆酸可促进肝细胞增殖,并且上调Cyclin D1表达.     

硫氧还蛋白2在2-乙酰氨基芴加肝切除诱导的卵圆细胞中的表达及意义

目的 观察硫氧还蛋白2(Trx2)在2-乙酰氨基芴(2-AAF)加肝切除诱导的卵圆细胞增殖中的表达,并探讨其表达的意义.方法 Balb/c小鼠喂饲2-AAF加2/3肝切除方法诱导肝脏卵圆细胞的增殖.经门静脉灌注消化法和等密度离心法分离卵圆细胞,并在体外进行原代培养.免疫荧光和双标法对培养的细胞进行鉴定.免疫组化法检测卵圆细胞的增殖,免疫荧光法检测Trx2在卵圆细胞和肝实质细胞中的表达,TUNEL法检测卵圆细胞和肝实质细胞的凋亡.结果 喂饲2-AAF后引起肝脏损伤,与肝切除前相比,肝切除后肝脏损伤明显加重(P＜0.01),同时有明显的卵圆细胞增殖.卵圆细胞中Trx2的表达明显高于肝实质细胞,同时其凋亡率明显低于肝实质细胞(P＜0.01).结论 喂饲2-AAF加2/3肝切除可以引起严重的肝损伤,促进卵圆细胞增殖,卵圆细胞高表达Trx2可以抑制自身凋亡和损伤,在肝脏功能的恢复过程中起着非常重要的作用.     

重组人生长激素在体外对人直肠癌细胞株HR8348增殖的影响

目的　探讨重组人生长激素 (rhGH )在体外对人直肠癌细胞增殖的影响。方法　实验分为对照组、rhGH组、奥沙利铂 (L OHP)组和rhGH +L OHP组 4组 ,利用体外细胞培养、MTT比色技术及流式细胞仪等方法 ,测定不同浓度的rhGH对人直肠癌细胞株HR83 48细胞倍增时间、细胞抑制率、细胞周期、增殖指数 (PI)和DNA抑制率的影响。结果　rhGH在体外不促进HR83 48细胞的分裂增殖 ,rhGH组与对照组比较 ,以及rhGH +L OHP组与L OHP组比较 ,其差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;rhGH +L OHP组与对照组比较及rhGH +L OHP组与对应的rhGH组配对比较 ,细胞倍增时间明显延长 ,细胞抑制率增加 ,阻滞于G0 ～G1期的细胞数增加 ,S期和G2 ～M期细胞明显减少 ,PI明显降低 ,DNA抑制率显著升高 (P<0 .0 1,S期P<0 .0 5 )。结论　rhGH在体外不促进直肠癌细胞的分裂增殖。     

奥曲肽对人胃癌细胞的凋亡诱导作用

目的 探讨生长抑素对人胃癌细胞的抑制作用及其作用机理。方法 以生长抑素类似物奥曲肽作用于人胃癌细胞株SGC-7901细胞，以人成纤维细胞株HF作为正常细胞对照，以5-FU作为阳性药物对照，通过MTT实验、荧光显微镜观察及流式细胞术分析，得出结论。结果 一定浓度范围内的奥曲肽对SGC-7901细胞产生抑制作用，其抑制作用具有量效关系和饱和性。奥曲肽对SGC-7901细胞的抑制程度接近于5-FU对他的抑制，而对HF细胞无影响。奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论 奥曲肽在体外对SGC-7901细胞具有抑制作用，诱导肿瘤细胞凋亡可能是其作用机理之一。     

体外模拟C02气腹对人结肠癌SW480细胞生长的影响

目的通过建立体外模拟CO2,气腹环境,研究CO2,气腹对人结肠癌SW480细胞生长的影响。方法建立体外模拟CO2,气腹环境,在全自动气腹机作用下维持密闭培养箱内压力分别为9、12、15mmHg,持续时间分别为1、2、4h。在处理后第12h通过流式细胞仪观察细胞周期变化;在处理后第12、24、36、48、60、72h用MTT法检测细胞增殖情况;在处理后0、0．5、1、1．5、2、2．5h通过电子pH计检测细胞培养液pH值的变化。结果流式细胞仪检测细胞周期结果显示,CO2,气腹组G02／G1期细胞比例与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。CO2,气腹压力对于人结肠癌G0／G1期细胞周期有显著影响（P=0．008）,但对s期、G2／M期无影响（P〉0．05）;CO,气腹持续作用时间对各细胞周期无影响（P〉0．05）。MTT法检测细胞增殖结果显示,各气腹组人结肠癌SW480细胞的D（490）值均低于对照组,且9mmHg一4h、12mmHg一4h、15mmHg一2h气腹组在处理后第24、36h,15mmHg一4h气腹组在处理后第24、36、48、60h的人结肠癌SW480细胞的JD（490）值与对照组差异具有统计学意义（P〈0．05）。压力处理后第24、36h对SW480细胞的增殖有显著的一过性影响（P〈0．01）,而在第12、48、60、72h对SW480细胞的增殖无影响（P〉0．05）;作用时间对SW480细胞的增殖无影响（P〉0．05）。电子pH计检测细胞培养液pH值结果显示,除9mmHg一1h气腹组在处理后2．5h细胞培养液的pH值与对照组无统计学差异外（P〉0．05）,其余各气腹组在处理后0、0．5、1、1．5、2、2．5h与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外模拟CO,气腹环境,不会促进结肠癌细胞的增殖,且高CO,气腹压力对结肠癌细胞的增殖有一过性抑制作用,CO2：气腹持续时间对结肠癌细胞的增殖无影响。     

生长抑素对胆囊癌细胞生长周期的影响

目的：探讨生长抑素作用下胆囊癌细胞分裂周期的变化。方法：选择梯度浓度的生长抑素作用于人胆囊癌细胞株，观察浓度依赖性生长曲线；同时，运用流式细胞仪观察胆囊癌细胞周期在生长抑素作用下的变化。结果：随生长抑素浓度的递增；胆囊癌细胞株的生长逐步受到抑制（P＜0．05）。生长抑素作用后1d，胆囊癌细胞周期停滞于S期，随后，细胞凋亡率明显上升。结论：生长抑素在较高浓度下能够抑制胆囊癌细胞的生长，其机制在早期为诱导生长停滞，随后则诱导细胞凋亡。     

红霉素逆转人胃癌细胞株多药耐药性的研究

目的：研究以红霉素逆转人胃癌SGC7901／ADM亚株所呈现的多药耐药性。方法：应用递增阿霉素剂量的方法，诱导建立人胃癌细胞耐药亚株。试以红霉素逆转该耐药亚株对阿霉素等抗癌药物的耐药性，以MTT法测定各药之．细胞毒作用，用LSAB法检测亲本(SGC7901)与耐药细胞亚株(SGC7901／ADM)之P-糖蛋白的表达水平。结果：体外诱导建立之人胃癌细胞耐药亚株SGC7901／ADM，对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞SGC7901提高了9.l倍；前者同时对长春新碱、鬼臼乙叉甙呈交叉耐药性，而对丝裂霉素和顺铂则不显示交叉耐药性。红霉素浓度为273、545、1090μmol／L时．均可提高阿霉素、长春新碱、鬼臼乙叉甙对SGC7901／ADM耐药细胞亚株的细胞毒作用。免疫细胞化学研究显示，约86％的耐药亚株表达P-糖蛋白，而亲本细胞则均为阴性。结论：非毒性剂量的红霉素可以逆转人胃癌耐药细胞株的耐药性。为临床上胃癌常规化疗方案中加用红霉素提供了实验依据。     

重组人生长激素对体外人结肠癌COLO-320细胞生长的影响

目的　探讨重组人生长激素 (rhGH)对体外人结肠癌COLO 3 2 0细胞生长的影响。方法　取对数生长期的人结肠癌细胞株COLO 3 2 0细胞 ,分别在有血清 (血清组 )和无血清 (无血清组 )条件下培养 ,以不同浓度的rhGH和(或 )羟基喜树碱 (CPT)培养COLO 3 2 0细胞 ,分别培养 2 4h、48h及 72h ,然后用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定结肠癌细胞生长抑制率。结果　不同浓度的rhGH作用不同时间对人结肠癌细胞株COLO 3 2 0细胞的生长均无明显影响 (P>0 .0 5 ) ;单用CPT或rhGH联合CPT使用时对该细胞生长的抑制率均明显高于单用rhGH(P<0 .0 1) ,但前两者间差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。结论　体外条件下rhGH对人结肠癌细胞株COLO 3 2 0细胞的生长既无促进作用 ,也无抑制作用 ,且不影响CPT对人结肠癌细胞株COLO 3 2 0细胞的抑制作用。     

马兜铃酸对人肾小管上皮细胞细胞周期影响的实验研究

目的：研究马兜铃酸（aristolochic acid,AA）对人肾小管细胞（human kidney cell,HKC）的细胞周期的影响。方法：以体外培养的HKC为研究对象,实验分为正常对照组和AA组。检测指标包括MTT 490 nm处OD值、细胞免疫组化测定的增殖核细胞抗原（proliferation cell neuclus antigen,PCNA）表达和流式细胞仪测定的细胞周期。结果：AA呈剂量正相关和时间正相关地抑制细胞增殖,特别是40mg/LAA组（0.49±0.076vs0.831±0.134,P〈0.05）。10mg/LAA组PCNA表达增加[（75.7±2.1）%vs（42.2±5）%,P〈0.01]。AA将HKC阻滞在S期,随着剂量的增加和时间的延长,愈加明显。结论：AA将人肾小管上皮细胞抑制在细胞周期的S期。     

尿多酸肽对乳腺癌细胞周期的影响

目的研究肿瘤细胞分化诱导剂尿多酸肽（CDA-Ⅱ）对乳腺癌细胞周期的影响。方法将CDA-Ⅱ与乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231进行体外培养，同时以维甲酸为阳性对照，观察其对乳腺癌细胞生长曲线、细胞周期、形态学等方面的影响。结果CDA-Ⅱ可减缓两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，使乳腺癌细胞的细胞周期的分布出现S期比例减少，G0／G1期增加。结论CDA-11可抑制不同生物学特性的两株乳腺癌细胞的生长和增殖能力，细胞周期出现G0／G1期阻滞，为CDA-Ⅱ治疗乳腺癌提供了实验依据。     

保肾片对人系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 :探讨对慢性肾衰竭治疗有效的中药复方保肾片对人系膜细胞生物学行为的影响。方法 :以健康志愿者服用保肾片 ,取不同浓度含药人血清加入系膜细胞培养体系中。应用MTT法和流式细胞仪检测系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期。结果 :含中药保肾片的血清组 ,与正常人血清对照组相比 ,显著抑制人系膜细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,并且使大量系膜细胞阻滞在G0 /G1期 ,能诱导人系膜细胞发生凋亡。结论 :保肾片延缓慢性肾衰竭进展的作用机理之一是抑制系膜细胞增殖和促其凋亡。     

小干扰RNA分子对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 使用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制黏着斑激酶（Focal adhesion kinase,FAK）基因的表达,观察增生性瘢痕成纤维细胞在生物学行为上发生的变化。方法设计特异性探针合成FAKSiRNA片段,脂质体法转染体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,光学显微镜观察细胞形态;MTT检测细胞活性并绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期。结果转染后的成纤维细胞呈短梭形改变,胞质、突触减少,细胞核内核仁减少。细胞生长曲线表明．转染FAKsiRNA的瘢痕成纤维细胞生长明显抑制。转染后瘢痕成纤维细胞阻滞在G1期,S期和G2期细胞比例减少。结论FAK与瘢痕增生相关密切,因此改变FAK在成纤维细胞中的表达可望调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物活性．