去甲肾上腺素对培养心肌细胞肥大和凋亡的作用

目的:研究不同剂量去甲肾上腺素(NE)对培养心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法:心肌细胞暴露于NE,观察心肌细胞形态变化,通过心肌细胞蛋白质含量、[3H]亮氨酸掺入率检测心肌细胞肥大;透射电镜、DNA Ladder和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果:1和10μmol/L NE可明显增加心肌细胞蛋白含量和[3H]亮氨酸掺入率,并有呈剂量依赖性升高的趋势;50μmol/L NE更可明显增加心肌细胞凋亡率;100μmol/L NE使心肌细胞凋亡率明显增高并出现超微结构改变和DNA梯状带纹。结论:低浓度NE主要诱导心肌细胞肥大,高浓度NE主要诱导心肌细胞凋亡,中浓度NE兼有两种功能。     

肾上腺素受体激动剂对乳鼠心肌细胞缝隙连接蛋白表达及功能的影响

目的 :研究α1-肾上腺素受体 (α1-AR)和 β-AR激动后 ,乳鼠心肌细胞中缝隙连接蛋白的表达和功能发生的变化。 方法 :(1)乳鼠心肌细胞培养 :用 0 1%胰酶消化法分离培养SD大鼠乳鼠心肌细胞。 (2 )免疫印迹技术 :用Westernblot的方法检测α1-AR激动剂 (苯肾上腺素 ,PE)和 β -AR激动剂 (异丙基肾上腺素 ,ISO)短时间 (10min)和长时间 (2 4h和 4 8h)作用后 ,乳鼠心肌细胞中缝隙连接蛋白 -Cx4 3表达量和磷酸化程度的变化。 (3)划痕标记染色示踪技术 (SLDT) :在生长到融合状态的心肌细胞中划痕 ,依据荧光染料 (luciferyellow ,LY)在细…     

17β-雌二醇对培养的乳鼠心肌细胞肥大的影响

目的观测17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）对肾上腺素（PE）诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响并探讨其机制。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,[^3H]标记亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因c-fos蛋白表达,半定量RT-PCR检测心肌细胞肥大特征性胚胎型基因β-肌球蛋白重链（pMHC）、α-骨骼肌肌动蛋白（α-skA）和心房肽（ANP）的mRNA表达。结果17β-雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和蛋白质合成速率的增加;17β-雌二醇减弱肥大心肌细胞c-fos蛋白表达;17β-雌二醇降低pMHC、α-skA的mRNA表达,但增加ANPmRNA表达。结论17β-雌二醇可抑制心肌细胞肥大,其作用机制可能与抑制原癌基因c-fos的蛋白表达,逆转收缩蛋白基因（β-MHC和α-skA）向胚胎型转化及促进ANPmRNA表达有关。     

视黄醇结合蛋白1通过激活TAK1促进大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大

目的：探究视黄醇结合蛋白1(retinol binding protein 1, Rbp1)在大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大中的功能和机制。方法：本研究通过联合分析基因表达数据库（Gene Expression Omnibus, GEO）中的小鼠心肌肥厚基因芯片数据，寻找在心肌肥厚发生过程中的关键调控因子，构建该基因过表达及敲减腺病毒并感染大鼠乳鼠原代心肌细胞，利用血管紧张素II(angiotensin II, Ang II)诱导大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大模型，研究目的基因对大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的影响，应用Western blot及RT-qPCR探究目的基因调控大鼠乳鼠原代心肌细胞肥大的分子机制。结果：在小鼠心肌肥厚心脏组织中Rbp1的表达显著上调（P<0.01），体外细胞实验显示与对照组相比，Rbp1过表达组的大鼠乳鼠原代心肌细胞面积显著增大，心肌肥厚标志基因心钠肽（atrial natriuretic peptide, Anp）和肌球蛋白重链7(myosin heavy chain 7, Myh7)的表达显著升高（P<0.01），证实Rbp1过表达能促进Ang II诱导的大...     

去甲肾上腺素对心肌细胞NF-κB活性的影响

目的:探讨去甲肾上腺素(NE)对心肌细胞核因子-κB(NF-κB)活性的影响及机制。方法:采用乳鼠心肌细胞培养模型,分别加入NE和哌唑嗪、普萘洛尔及维生素E等刺激,观察心肌细胞内活性氧水平和NF-κB核结合活性的改变。结果:NE刺激后,心肌细胞活性氧生成明显增加、NF-κB活性增强,维生素E、哌唑嗪和普萘洛尔可不同程度减少心肌细胞活性氧含量、降低NF-κB活性。结论:NE对心肌细胞的作用部分通过激活NF-κB实现,这与NE通过肾上腺素能受体介导活性氧过量产生有关。     

Losartan对AngⅡ诱导的培养乳鼠心肌细胞变频及肥大的影响

Ｌｏｓａｒｔａｎ对ＡｎｇⅡ诱导的培养乳鼠心肌细胞变频及肥大的影响余艳辉，凌琦，张翼，郭兆贵（湖南医科大学药理研究室，长沙４１００７８）新近研究已证实ＡｎｇⅡ受体有ＡＴ１和ＡＴ２两种亚型。ＡｎｇⅡ的许多生物作用均通过ＡＴ１介导，如血压升高，收缩外周血管...     

P38 MAPK信号通路在漆树酸改善苯肾上腺素诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase, P38 MAPK)信号通路在漆树酸改善苯肾上腺素(phenylephrine, PE)诱导的小鼠心肌细胞肥大中的作用。方法:原代培养新生小鼠心肌细胞,PE诱导心肌细胞肥大。按随机数字表法将细胞分为空白对照组、溶剂对照组、PE组、PE+漆树酸组、PE+漆树酸+P38抑制剂组和PE+P38抑制剂组。收集干预48 h后的乳鼠心肌细胞进行以下检测:Western blot检测p-P38、第9位赖氨酸乙酰化的组蛋白H3(acetylated histone H3 at lysine 9, H3K9ac)和心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)的蛋白表达水平,免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)法验证p-P38与H3K9ac蛋白之间的相互作用,RT-qPCR检测肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C, MEF2C)mRNA表达水平,免疫荧光染色观察小鼠心肌细胞表面积。结果:West...     

Ang-（1-7）对AngⅡ诱导培养的乳鼠心肌细胞分泌bFGF的影响

目的研究血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导培养的乳鼠心肌细胞肥大和合成碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响，探讨Ang-（1-7）的细胞保护机制。方法分离出新生1～3d内的SD大鼠心肌细胞进行体外培养，4d后将细胞随机分为正常对照组、AngⅡ组和AngⅡ＋Ang-（1-7）组行加药干预，加药2d后显微镜下测量细胞表面积，用免疫细胞化学方法检测心肌细胞bFGF含量。结果AngⅡ组细胞平均表面积较正常对照组明显增大，AngⅡ＋Ang-（1-7）组细胞表面积较AngⅡ组明显减小，但仍大于正常对照组；AngⅡ组细胞bFGF表达灰度值较正常对照组明显增加，AngⅡ＋Ang-（1-7）组bFGF表达灰度值较AngⅡ组明显减小，但仍大于正常对照组。结论Ang-（1-7）可拮抗AngⅡ的促心肌细胞肥大和促bFGF合成，起到细胞保护作用。     

9型腺相关病毒转染乳鼠心肌细胞的可行性及安全性**☆

背景：9型腺相关病毒对心肌细胞具有更好的靶向转染,是目前研究基因治疗心脏疾病的理想载体。 目的：探索9型腺相关病毒体外转染乳鼠心肌细胞的可行性及对乳鼠心肌细胞的毒性评估。 方法：分离培养原代乳鼠心肌细胞,以携带荧光蛋白基因的9型腺相关病毒为载体,将分离纯化的乳鼠心肌细胞分为正常培养组、无病毒转染组、病毒转染组。 结果与结论：第1周细胞搏动频率及百分率正常培养组和病毒转染组与无病毒转染组比较,差异无显著性意义(P > 0.05),但正常培养组高于病毒转染组(P < 0.05);3周后各组比较,差异无显著性意义(P > 0.05)。经9型腺相关病毒转染的心肌细胞24 h开始有表达,4~6 d荧光最强,3组细胞72 h内不同时间点还原比率均接近于1.0。说明9型腺相关病毒能成功有效地转染乳鼠心肌细胞,对乳鼠心肌细胞无明显毒性作用。     

小鼠乳鼠原代心肌细胞的改良培养

背景：大鼠心肌细胞原代培养技术日渐成熟,但小鼠心肌细胞在同样实验条件下不易获得,而小鼠基因组与人类基因组有更多相似之处,具有更高的研究价值。目的：改进小鼠乳鼠原代心肌细胞的培养方法,得到纯度高、活力强、保持心肌细胞原有结构和功能的心肌细胞。方法：将小鼠心肌组织利用酶消方法分离为单个的心肌细胞,实验步骤中将经典的胰酶、胶原蛋白酶混合酶消法分解开,先用胰酶消化心肌组织,使心肌组织变得松散,再用胶原蛋白酶,作用于细胞间质的胶原纤维,使心肌组织分离为单个的心肌细胞。调整胰酶和Ⅱ型胶原蛋白酶的浓度和作用时间,严格控制试剂pH值和各步骤的温度。结果与结论：心肌细胞在接种24 h后开始贴壁,48 h后可观察到部分心肌细胞出现自主搏动,72 h后彼此形成交联,96 h后可观察到心肌细胞形成细胞簇,并出现一致性搏动。心肌细胞的存活率和纯度均达95%以上。结果证实,实验采用改良方法成功培养出小鼠乳鼠心肌细胞,并且保留心肌细胞的结构和功能,纯度和成活率高,是可行的培养方法。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

乳鼠心肌细胞可成片生长的分离和培养方法北大核心

背景:传统方法培养的心肌细胞活力、纯度仍不高,细胞多呈簇状生长,细胞与细胞之间的联系较少,细胞多呈单个搏动。目的:改进传统的乳鼠心肌细胞培养方法,获得纯度高、成片生长的心肌细胞。方法:运用0.1%胰蛋白酶4℃过夜消化心肌组织后加入Ⅱ型胶原酶重复消化,二次差速贴壁分离法联合化学抑制剂纯化心肌细胞。倒置相差显微镜下动态观察心肌细胞形态变化,培养48 h后用抗心肌肌钙蛋白T抗体鉴定心肌细胞纯度,连续10 d隔日记录心肌细胞的搏动频率。结果与结论:(1)心肌细胞在24 h内贴壁,72 h后成簇状分布,5-7 d细胞连接成片生长;(2)细胞存活率为96%,免疫荧光鉴定心肌细胞纯度97%以上,连续10 d内心肌细胞搏动频率差异无显著性意义(P>0.05);(3)综上,通过这种改进的培养方式获得成片生长的心肌细胞纯度、活力更高,是一种更为有效的乳鼠心肌细胞培养方法。     

酚妥拉明阻断去甲肾上腺素对大鼠束旁核痛反应神经元电活动的影响

目的：去甲肾上腺素及其α受体阻断剂酚妥拉明对大鼠束旁核痛反应神经元电活动的影响。方法：以串刺激右侧坐骨神经为伤害性刺激，用玻璃微电极细胞外记录大鼠束旁核痛反应神经元电活动。结果：脑室去甲肾上腺素抑制旁核束旁核痛兴奋神经元放电，促进痛抑制神经元放电，此作用可被酚妥拉明阻断。结论：酚妥拉明阻断去甲肾上腺素对大鼠束旁核痛反应神经元电活动的抑制作用，提示去甲肾上腺素的镇痛作用与α肾上腺素能受体关系密切。     

钙信号早期干预对大鼠心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶信号途径及细胞凋亡的影响

通过建立肥大心肌细胞模型，研究钙通道阻滞剂对心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶II （calcium/calmodulin-dependent protein kinase II，CaMKII）的表达及钙离子浓度的变化对钙泵、ATP凋亡信号调节激酶（apoptosis signal-regulation kinase1 ASK1）、细胞活力及细胞凋亡率的影响，深入了解钙离子拮抗剂在心肌细胞肥大过程中的作用。通过早期应用钙离子拮抗剂，可以明显改善CaMKII信号系统的活性，保持心肌细胞内钙稳态，抑制心肌细胞的凋亡。     

激活PPARα表达对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大及 NFATc4与p65-NFκB相互作用的影响*

 目的：研究PPARα激动剂非诺贝特（fenofibrate）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响及机制。方法：在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型中加入非诺贝特（10 μmol/L）预处理1 h后,采用real-time PCR检测肥大标志物ANF、BNP和β-MHC mRNA水平变化,Western blotting检测NFATc4和p65-NFκB核转位的变化,免疫共沉淀检测心肌细胞核内p65-NFκB与NFATc4之间的相互作用,EMSA检测NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的变化。结果：非诺贝特可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4和p65-NFκB的入核,以及两者在核内的相互作用。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的增加。结论：非诺贝特可增强心肌细胞核内PPARα与NFATc4之间的相互作用,并减弱p65-NFκB与NFATc4之间的相互结合,进而降低NFATc4在BNP启动子上的DNA结合活性,这可能是其抑制AngⅡ诱导的心肌肥大的重要机制。