芒柄花素对葡萄糖氧化酶诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的影响

背景：研究发现,芒柄花素具有抗氧化、抗炎和免疫调节等生物活性。然而,芒柄花素是否具有调节葡萄糖氧化酶诱导大鼠肝星状细胞氧化应激的作用尚不明确。目的：探究芒柄花素对葡萄糖氧化酶诱导大鼠肝星状细胞HSC-T6氧化应激的作用及可能的机制。方法：实验分为对照组,模型组,芒柄花素低、中、高剂量组和姜黄素组。对照组不做任何处理,模型组用葡萄糖氧化酶处理2 h,芒柄花素组和姜黄素组先用不同浓度的芒柄花素或姜黄素处理HSC-T6细胞24 h,再用葡萄糖氧化酶处理2 h。采用CCK8法检测芒柄花素对HSC-T6细胞活力的影响;化学试剂盒检测各组细胞中超氧化物歧化酶和丙二醛水平;DCFH-DA荧光探针检测各组细胞中活性氧表达;ELISA检测各组细胞培养上清液中白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平;免疫细胞荧光染色观察各组细胞中Ⅰ型胶原表达;Western blot检测各组细胞中Ⅰ型胶原、NOX4和Nrf2蛋白表达。结果与结论：(1)与模型组比较,芒柄花素能抑制HSC-T6细胞的活化增殖(P <0.05);(2)与对照组比较,模型组HSC-T6细胞中超氧化物歧化酶活性和Nrf2蛋白表达均明显减低(P &...     

刺芒柄花素通过FAK/AKT/Bcl-2通路促进外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的 探讨刺芒柄花素(FMN)对外阴鳞癌SW962细胞凋亡的影响及其相关机制.方法 通过CCK8方法和流式细胞仪检测FMN对SW962细胞增殖和凋亡的影响;Westernblot方法检测FMN对细胞凋亡和FAK通路相关蛋白表达的影响;通过EGF激活FAK通路,检测FMN对激活后FAK通路和凋亡相关蛋白表达的影响.结果F...     

三氧化二砷抑制兔血管平滑肌细胞增殖及诱导凋亡的相关机制

目的 研究三氧化二砷（As2O3）对免血管平滑肌细胞（VSMC）的抑制增殖、促进凋亡及诱导细胞周期停滞的作用.方法 经组织块贴壁法原代培养的兔VSMC,应用3H-胸腺嘧啶胞苷渗入法、透射电镜、TUNEL法、流式细胞术和基因芯片测定As2O3对VSMC的细胞活力、生长、增殖及凋亡.结果 随着三氧化二砷浓度的增加显著抑制了细胞生长,且呈剂量依赖性,透射电镜下可见凋亡小体,TUNEL检测出现了凋亡细胞,流式细胞术出现了典型的凋亡峰.基因芯片扫描杂交结果数据显示其中26条基因表达有差异.结论 As2O3对VSMC具有抑制增殖、促凋亡、阻滞细胞周期进程的作用.     

芒柄花苷靶向ADORA1抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨芒柄花苷靶向腺苷A1受体(adenosinereceptor A1, ADORA1)抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制,将肺腺癌细胞(SPC-A1和A549)分成对照组(细胞不处理)、芒柄花苷组(芒柄花苷处理细胞)、ADORA1组(转染ADORA1质粒)和芒柄花苷+ADORA1组(经芒柄花苷处理细胞后转染ADORA1质粒)。通过生物信息学分析芒柄花苷的作用靶点及其恶性行为。以不同浓度芒柄花苷干预细胞,随后通过MMT法检测细胞活力、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组细胞增殖能力、Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。裸鼠移植瘤实验检测芒柄花苷体内抑制细胞增殖能力。免疫组化检测增殖细胞抗原Ki-67。Western blotting检测细胞ADORA1蛋白表达。生物信息学结果显示ADORA1是芒柄花苷的作用靶点之一,且在肺腺癌中高表达,与临床恶性行为有关。细胞实验表明,芒柄花苷可以抑制肺腺癌细胞活力(P<0.05),且能抑制其细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。裸鼠移植瘤实验显示,芒柄花苷处理明显抑制移植瘤体积和重量增长(P<0.05)。分子水平揭示,...     

串珠素对大鼠平滑肌细胞增殖的影响及其机制的研究

目的 观察串珠素对于大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells。VSMCs）增殖反应的影响以及细胞信号转导机制。方法以^3H-TdR掺人法测定VSMCs增殖。Westem blot方法检测FAK表达。结果 Perlecan加强碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）引起的VSMCs增殖反应，并诱导粘着斑激酶（focal adhesion kinase，FAK）表达上调。Perlecan抗体消除Perlecan促进bFGF致VSMCs增殖反应，并抑制FAK表达。结论 串珠素增强bFGF致大鼠平滑肌细胞的增殖反应，其机制涉及FAK表达上调。     

超声辐照对血管紧张素Ⅱ诱导的牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

为观察不同剂量的超声辐照对牛主动脉平滑肌细胞 (CASMC)增殖的影响 ,寻找出抑制细胞增殖的最佳辐照剂量 ,利用体外培养的牛主动脉平滑肌细胞 ,用细胞计数法、MTT法、3H 胸腺嘧啶核苷 (3H thymidine,3H TdR)掺入法测定细胞增殖率的变化 ,观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞增殖的影响以及不同剂量的超声辐照对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增值的预防和逆转作用。细胞计数、MTT法、3H TdR掺入法均显示 1 0 - 9～ 1 0 - 7mol L浓度的AngⅡ可使血管平滑肌细胞数明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;而用一定剂量超声辐照后 ,AngⅡ诱导的上述作用被明显抑制 (P <0 0 5 ) ,提示一定频率和剂量的超声辐照可以抑制CASMC增殖     

肾上腺髓质素对血管紧张素II的促血管平滑肌细胞增殖作用的影响

观察肾上腺髓质素前体N端20肽（PAMP）和肾上腺髓质素（ADM ）对血管紧张素II（AngII）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。用测定培养的大鼠VSMC3H-TdR掺入和蛋白激酶C（PKC）活性的方法。结果发现：10-8mol/L AngII刺激培养的VSMCs 3H-TdR掺入增加2.68倍（P＜0.01）、PKC活性增加1.02倍（P＜0.01）。而10-9mol/L-10-7mol/L的PAMP或ADM与10-8mol/L AngII同时孵育，则显著抑制AngII的上述作用（P＜0.01）。且两者的抑制作用无明显差异。PAMP和ADM均有抑制AngII所致的VSMC增殖作用，可能是通过抑制信号传导系统中的PKC活性来实现的。PAMP和ADM 与AngII相互作用，共同调节VSMC的增殖，从而维持循环系统功能的稳态。     

Sirt3 抑制血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠血管平滑肌细胞增殖

目的 检测小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中Sirtuin3(Sirt3)的表达,探讨Sirt3在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导小鼠VSMCs增殖中的作用.方法 用RT-PCR、Western blot法检测细胞中是否有Sirt3基因和蛋白表达;用不同浓度AngⅡ(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5 mol/L)分别刺激细胞,用RT-PCR、Western blot法检测AngⅡ对Sirt3表达的影响;用Sirt3 siRNA转染干扰Sirt3mRNA水平后5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(Edu)试剂盒检测细胞增殖水平.结果 Western blot法、RT-PCR结果均显示正常C57小鼠VSMCs中有一定量Sirt3蛋白和mRNA表达;10-7 mol/L、10-6 mol/L、10-5mol/L AngⅡ刺激细胞后Sirt3 mRNA水平及蛋白表达量均明显升高(P＜0.01),其中10-6 mol/L组比10-7 mol/L组和10-5mol/L组升高更明显,差异有统计学意义(P ＜0.05);Sirt3敲减组细胞增殖较对照组明显增加(P＜0.01),Sirt3沉默+AngⅡ(10-6 mol/L)组较AngⅡ组细胞增殖明显增加(P＜0.01).结论 小鼠VSMCs中有一定量的Sirt3表达,AngⅡ刺激可使Sirt3 mRNA水平和蛋白表达量明显升高;Sirt3可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖.     

氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导血管平滑肌细胞增殖的机制

ox-LDL能诱导血管平滑肌细胞增殖 ,是致动脉粥样硬化的重要因素。近几年来 ,从细胞内信号、内含增殖活性成分、生长因子作用及氧化效应等方面深入探讨了其作用机制。ox LDL诱导血管平滑肌细胞增殖可能存在多种机制 ,目前还有许多问题有待研究     

血红素加氧酶系统对ox-LDL介导的血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制

目的探讨血红素加氧酶(HO)系统对ox-LDL介导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其机制.方法采用倒置显微镜和MTT法观察VSMC生长状况;检测VSMC中cAMP/cGMP的水平、c-fos和c-myc mRNA及其蛋白质和HO-1蛋白质的表达.结果HO特异性抑制剂锌原卟啉-9(ZnPP-9)组在6、12 h的VSMCs生长曲线与ox-LDL组(C组)间无明显差异(P＞0.05);然而,48 h明显高于C组(P＜0.01);24、72 h与ox-LDL组重合,在终点(96h)略高于ox-LDL组(P＞0.05);ZnPP9组与ox-LDL组c-myc、c-fosmRNA及其蛋白和HO-1蛋白的表达均较强.尽管HO分解的代谢产物三价铁(Fe )螯合剂(去铁胺)组生长曲线高于ZnPP-9组(48h时与ZnPP-9组重合)和ox-LDL组(P＜0.01),但VSMCs体积明显增大,数量减少.结论锌原卟啉-9抑制血红素加氧酶活性而促进ox-LDL介导的血管平滑肌细胞增殖效应,去铁胺螯合Fe 能抑制VSMCs数量增加.其机制可能与HO-1活性和c-myc、c-fosmRNA及其蛋白表达有关,而与HO-1蛋白表达和cAMP/cGMP水平无明显关系.     

11,12-EET对缺氧血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨11,12-环-二十碳三烯酸(11,12-EET)对缺氧大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法:采用贴块法体外培养大鼠主动脉VSMC,将细胞分为常氧对照组(Con组),缺氧模型组(H组),EET组(EET组)和EET-缺氧组(EET-H组),以MTT法测定VSMC的增殖率,以流式细胞术观察VSMC细胞周期及凋亡率,Western blot方法检测Bax的表达。结果:与Con组比较,H组VSMC增殖率升高(P<0.01),EET组VSMC存活率降低(P<0.01);EET-H组细胞增殖率低于H组(P<0.01)。与Con组相比,H组G0/G1期VSMC细胞比例减少(P<0.05),S期细胞比例增加(P<0.05);EET组较Con组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05);与H组相比,EET-H组G0/G1期细胞比例增加(P<0.05),S期和G2/M期细胞比例减少(P<0.05)。EET-H组VSMC凋亡率高于H组(P<0.05)、Con组(P<0.05)及EET组(P<0.05)。EET组Bax的表达高于Con组(P<0.05);与H组比较,EET组及EET-H组Bax的表达均升高(P<0.01)。结论:外源性给予11,12-EET有抑制缺氧VSMC增殖和促进缺氧VSMC凋亡双重作用。11,12-EET可能通过对VSMC增殖和凋亡的调控,影响血管损伤后血管重构。     

含辛伐他汀药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖的直接作用及意义

目的 :探讨辛伐他汀对体外培养兔血管平滑肌细胞增殖的影响及意义。方法 :16只雄性新西兰兔随机分为血清对照组和三个不同剂量的辛伐他汀亚组 (每日分别给予辛伐他汀 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg) ,7天后采血并混合每组 4只兔血 ,无菌分离制备三亚组的辛伐他汀含药血清。采用内皮素 1(ET 1)刺激正常喂饲原代培养兔主动脉血管平滑肌细胞的方法 ,建立血管平滑肌细胞增殖模型。采用MTT及3H TdR法检测各组辛伐他汀含药血清对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 :与不含药的正常对照组相比 ,不同亚组辛伐他汀含药血清呈剂量依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖 (P <0 .0 1～0 .0 5 )。结论 :兔口服辛伐他汀后的血清具有抑制血管平滑肌细胞增殖的作用     

内皮素-内皮素受体在凝血酶促进血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 :探讨凝血酶引起血管平滑肌细胞增殖是否通过内皮素 内皮素受体途径介导。方法 :在培养的鼠主动脉平滑肌细胞中 ,加入不同浓度的凝血酶培养 2 4h ,放免法观察细胞和培养液中内皮素的浓度 ;然后观察内皮素受体A和B阻滞剂对凝血酶促进平滑肌细胞增殖( 3 H TdR掺入 )的抑制作用。结果 :凝血酶可剂量依赖地引起血管平滑肌细胞培养液中内皮素的含量明显增加 ,内皮素受体A阻滞剂可明显抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖 ,而内皮素受体B阻滞剂无作用。结论 :凝血酶可剂量依赖地引起血管平滑肌细胞内皮素的合成和释放 ,内皮素受体A阻滞剂可部分阻断凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖 ,凝血酶引起血管平滑肌细胞增殖的延迟作用可能与此有一定关系。     

淫羊藿苷对大鼠血管平滑肌细胞钙化的抑制作用

目的:研究淫羊藿苷(Icariin)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的抑制作用。方法:组织贴壁法培养大鼠胸主动脉VSMCs,取5-8代细胞分为对照组、钙化模型组和淫羊藿苷干预A、B、C组。对照组用DMEM培养基培养;钙化模型组用含10mmol/Lβ-甘油磷酸盐(β-GP)的DMEM培养基培养;干预A、B、C组均以钙化模型组为基础分别与10-6 mol/L、10-5 mol/L和10-4 mol/L Icariin的DMEM培养基共培养,茜素红-S染色法鉴定各组细胞钙化情况,硝基苯酚法测定各组细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,RT-PCR检测各组细胞内骨保护素(OPG)和核因子κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)的mRNA水平,用Western blotting检测各组细胞OPG和RANKL的蛋白表达。结果:与对照组比较,钙化模型组VSMCs发生细胞钙化,并形成红色结节,ALP活性显著升高(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均增加(P0.01);与钙化模型组比较,干预A、B、C组细胞钙化减少,ALP活性减低(P0.01),OPG、RANKL mRNA和蛋白表达均下调(P0.01),尤以干预B组效果最显著。结论:淫羊藿苷可能通过降低ALP活性及OPG、RANKL表达来抑制动脉钙化。     

生长抑素抑制内皮素刺激的家兔血管平滑肌细胞增殖

为探讨生长抑素（ＳＳＴ）对内皮素（ＥＴ）刺激细胞增殖的作用其机理，本工作在培养的兔主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）上发现，１０＾－８ｍｏｌ／ＬＥＴ刺激细胞增殖（＾３Ｈ＝ＴｄＲ参入增多）和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）激活，１０＾－８ｍｏｌ／ＬＳＳＴ单独作用可抑制细胞增玩具增殖但不曩ＭＡＰＫ活性。ＳＳＴ不仅呈浓度依赖性地抑制ＥＴ刺激的ＶＳＭＣ增殖（Ｐ〈０．０１），而且亦抑制ＥＴ刺激的细胞ＭＡＰＫ激     

细胞外信号调节激酶在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的 :本研究主要从细胞外信号调节激酶 (ERKs)的角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在缓激肽 (BK)介导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法 :通过3H 胸苷 ( 3H TdR)掺入率与SMC3H 亮氨酸掺入率分别反映SMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率 ;并通过给予MAPK激酶 (MEK )特异性抑制剂PD0 980 5 9及ERKS抑制剂UO12 6预处理 ,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果 :①BK( 10 - 8mmol/L)处理 3 0minVSMC3H 胸苷掺入率和3H 亮氨酸掺入率均明显增高 ;②BK增高3H 胸苷掺入的作用可明显被PD0 980 5 9所抑制和部分被UO12 6所抑制 ;③BK增高3H 亮氨酸掺入的作用可部分被PD0 980 5 9和UO12 6所抑制。结论 :ERKs激活在缓激肽导致VSMC增殖反应中具有重要作用 ,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应 ,影响血管平滑肌细胞的增殖效应     

香烟尘粒对血管平滑肌细胞生长的影响

目的观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒 (DSP)对血管平滑肌细胞(VSMC)生长的影响。方法以兔主动脉血管平滑肌细胞为实验对象 ,将1、2、3、4、8μl·ml -1剂量DSP加入培养基中。采用四氮唑盐 (MTT)比色试验和细胞蛋白测定评价DSP对VSMC生长的影响 ;透射电子显微镜 (TEM)观察细胞超微结构变化 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞凋亡情况。结果1、2μl·ml-1DSP可刺激VSMC增殖 (P<0.01) ,4、8μl·ml -1DSP能抑制VSMC增殖 (P<0.05,P<0.01) ,减少细胞总蛋白 (P<0.05,P<0.01)。电镜下 ,2、4μl·ml-1 DSP组均有典型的细胞凋亡形态学变化。2μl·ml-1 DSP组凋亡率为(10.2±3.2) % ,4μl·ml-1DSP组凋亡率为 (29.2±8.7) % ,均较对照组显著增高 (P<0.05,P<0.01)。结论DSP既可刺激VSMC增殖 ,又可促进VSMC凋亡 ,吸烟参与动脉粥样硬化病理过程的机制 ,可能与其影响VSMC增殖和凋亡两者的平衡有关。     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白对培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

我们用不同剂量的纤维粘连蛋白（Ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ，Ｆｎ）和层粘连蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，Ｌｎ）作用于培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）观察ＶＳＭＣｓ的生长和分裂情况，发现Ｆｎ和Ｌｎ均能促进ＶＳＭＣＳ的生长和分裂，Ｆｎ的这种作用在４０μｇ以下呈剂量依赖性，Ｌｎ则在２４μｇ以下呈剂量依赖性，当细胞数达到最大后，Ｆｎ和Ｌｎ的促进作用均逐步减弱。