热休克基因表达对过氧化氢所致肺泡巨噬细胞损伤的保护作用

经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析发现热休克预处理使肺泡巨噬细胞中热休克蛋白（ＨＳＰ）７０ｍＲＮＡ增多，ＨＳＰ７０合成增加，且获得抵抗Ｈ２Ｏ２损伤的能力，用效放线菌酮和放线菌素Ｄ分别从蛋白合成及基因转录水平阻断热休克蛋白基因的表达，能取消热休克对Ｈ２Ｏ２所致ＰＡＭｓ损伤的保护效应。提示热休克系通过使热休克蛋白基因表达增强，ＨＳＰ７０合成增多，从而保护Ｈ２Ｏ２所致的ＰＡＭｓ损伤 。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ２Ｏ２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中的ＨＳＰ７０增多；在基因围录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂－－Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ２Ｏ２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ２ＯＳ诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

蛋白激酶C在热休克基因表达中的作用

热休克（４２℃，２ｈ）或Ｈ＿２Ｏ＿２预处理，均能在蛋白翻译合成水平使牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中ＨＳＰ７０增多；在基因转录水平使ＢＰＡＥＣｓ中ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ含量增加。蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂──Ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴＰ）能显著减少热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的ＨＳＰ７０合成及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录的增加。提示ＰＫＣ在热休克和Ｈ＿２Ｏ＿２诱导的热休克基因表达的信息传递中具有重要作用。     

热休克反应对大鼠油酸肺保护作用的机制研究

本研究发现，经热休克处理的大鼠注油酸后，肺组织损伤明显减轻。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析显示热休克使大鼠肺组织中ＨＳＰ７０含量明显增多；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析产此乃由于ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录增加所致。说明热休克处理使肺组织ＨＳＰ７０基因表达增强；提示热休克反应对大鼠油酸肺的保护作用与肺组织细胞中ＨＳＰ７０基因表达增强及与ＨＳＰ７０增多有关。     

热休克反应对大鼠油酸肺保护作用的机制研究

未研究发现，经热休克处理的大鼠注油酸后，肺组织损伤明显减轻，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析显示热休克使大鼠肺组织中ＨＳＰ７０含量明显增多；Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹分析证实此乃由于ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ转录增加所致。说明热休克处理使肺组织ＨＳＰ７０基因表达增强；提示热休克反应对大鼠油酸肺的保护作用与肺组织细胞中ＨＳＰ７０基因表达增强及与ＨＳＰ７０增多有关。     

热应激对热休克蛋白70mRNA的诱导

用＾３２Ｐ标记的热休克蛋白７０（ｈｓｐ７０）ｃＤＮＡ为探针，检测了热应激时完整及人骨肉瘤细胞（ＨＯＳ－８６０３）的ｈｓｐ７０ ｍＲＮＡ。结果表明，大鼠体温在４２℃３０ｍｉｎ后，脑、肝、肺、脾中ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达明显增加，以脑最为显著。ＨＯＳ－８６０３细胞经４２℃热处理３０ｍｉｎ，置３７℃培养２～４ｈ后，ｈｓｐ７０ｍＲＮＡ的表达，且在整体动物上有组织特异性。     

脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的 了解脑损伤后热休克蛋白７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ７０，ＨＳＰ７０）蛋白质及ｍＲＮＡ在脑干局部的改变，及其对维持脑干生命中枢功能的作用。方法 用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型，免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤后１、３、６、１２ｈ及损伤猝死组脑干ＨＳＰ７０的数量和分布变化；逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平。结果 在脑损伤１５ｍｉｎ后脑干ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高，ＨＳＰ７０蛋白质需３～６ｈ才大量表达；损伤后猝死的鼠脑中仅见ＨＰＳ７０ｍＲＮＡ升高，ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论 脑损伤后ＨＳＰ７０合成迅速增加，清除损伤因素，维持自稳状态；当损伤严重时，应激蛋白质的合成障碍，抗损伤的保护机制不能发挥，脑干生命中枢的功能紊乱，生命丧失。因此，Ｈ     

高热致胚胎发育毒笥性机理的研究：——热休克蛋合成

按Ｋｉｍｍｅｌ实验条件热暴露孕天大鼠。暴露后２小时取胚胎用＾３５Ｓ－蛋氨酸标记，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白分析，可见７０和９０ＫｉｌｏｄａｌｔｏｎＫＤ热休克蛋白合成增加。７０ＫＤ ＨＳＰ合成用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析又进一步得到证实。离体培养胚胎热暴露后，用同样方法分析蛋白，证实７０和９０ＫＤ ＨＳＰｓ合成增加。结果与Ｋｉｍｍｅｌ骨骼畸形和胚胎体节融合发生率相符合。本结果为Ｇｅｒｍａｎ提出的环境致畸机     

脑干热休克蛋白70的表达与实验性脑损伤猝死的相关性

目的了解脑损伤后热休克蛋白 ７０（Ｈｅａｔ－ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ ７０, ＨＳＰ７０）蛋白质及 ｍＲＮＡ在脑干局部的改变,及其对维持 脑干生命中枢功能的作用。方法用头颅打击器制成大鼠脑损伤猝死模型,免疫组化法分别测定损伤组损伤前和损伤 后 １、３、６、１２ ｈ及损伤摔死组脑于 ＨＳＰ７０的数量和分布变化;逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测各组相应部位 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ水平。结果在脑损伤 １５ ｍｉｎ后脑干 ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ水平显著升高, ＨＳＰ７０蛋白质需 ３～６ ｈ才大量表达;损伤后 猝死的鼠脑中仅见 ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ升高,ＨＳＰ７０蛋白质与对照组无差异。结论脑损伤后 ＨＳＰ７０合成迅速增加,清除损伤 因素,维持自稳状态;当损伤严重时,应激蛋白质的合成障碍,抗损伤的保护机制不能发挥,脑干生命中枢的功能紊 乱,生命丧失。因此, ＨＳＰ７０ ｍＲＮＡ－蛋白质分离可作为神经细胞致死性损伤的标志。     

大鼠自发性高血压和心肌肥厚时热休克蛋白70基因表达的研究

本工作采用热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）核酸分子杂交方法，检测了自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）与其正常对照（ＷＫＹ）大鼠离体培养的主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）受热刺激后以及大鼠腹主动脉缩窄后心肌肥厚时左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的水平，并对ＳＨＲ和ＷＫＹ肝组织基因组ＤＮＡ进行了限制性酶切片断长度多态性（ＲＦＬＰ）分析。结果表明：ａ．３７℃培养的ＳＨＲＡＳＭＣ及整体ＳＨＲ肝组织ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的基础表达水平均低于ＷＫＹ大鼠，ＳＨＲＡＳＭＣ受热刺激（４２℃１５ｍｉｎ）后２ｈ，ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达增加的程度明显大于ＷＫＹ大鼠。ｂ．大鼠腹主动脉缩后造成左室压力超负荷，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ在压力超负荷４ｈ时已明显升高，１ｄ、２ｄ、１ｗ均维持在高水平，１ｗ后逐渐降低。ｃ．ＳＨＲ和ＷＫＹ鼠肝组织基因组ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ酶切后，ＳＨＲＨＳＰ７０基因缺失一条约５．６ｋｂ的片段。提示：ＳＨＲＡＳＭＣ对热敏感性增加；压力负荷增加早期，左心室ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ表达明显增加；ＨＳＰ７０基因结构异常可能与高血压发生有关。     

热休克蛋白的历史回顾及研究进展

热休克蛋白是一组高度保守的、与应激相关的蛋白质，具有许多重要的生理和病理作用，如：细胞自稳、分子伴侣、肿瘤标志物和分子佐剂等。本文就热休克蛋白的历史回顾及其在医学相关领域的研究进展作一简要概述。     

HSP70在内毒素休克大鼠胰腺的表达及其意义

目的:观察内毒素休克大鼠胰腺的病理改变及HSP70的表达情况.方法:33只健康Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素小刑量组(5 mg/kg)及大剂量组(10 mg/kg),于处理后1 h及处死时采血测血糖及血清淀粉酶,处死后取胰腺免疫组化法测定HSP70及INs的表达.结果:内毒素休克大鼠血糖及血清淀粉酶正常(P＞0.05);胰腺组织HSP70表达增强,处理组与对照组比较强阳性表达率明显增高(P＜0.01);小剂量组的强阳性率又较大剂量组显著增强(P＜0.01).3组的Ins表达率无显著差异(P＞0.05).结论:内毒素可诱导胰腺HSP70的表达增强,从而使胰腺产生内毒素耐受.     

HSF1调控的炎症相关基因的筛选及SOCS3基因的实验验证

目的：筛选热休克因子1（HSF1）调控的炎症相关基因,初步探讨HSF1对下游基因的调控作用。方法：采用HSF1基因敲除小鼠,制备内毒素腹腔注射以及热休克反应后再给予内毒素腹腔注射的内毒素血症模型,分别抽提HSF1缺失突变纯合子和HSF1野生型小鼠肺组织总RNA,用微阵列进行筛选;用转录元件搜索软件分析差异表达基因的启动子区;选取启动子区含有热休克元件的基因：细胞因子信号转导抑制子3（SOCS3）,采用热休克反应（HSR）和HSF1过表达的RAW264,7巨噬细胞给予内毒素刺激,抽提总RNA进行RT—PCR,Northern印迹实验,观察HSR和HSF1过表达对内毒素诱导的SOCS3基因表达的影响。结果：用微阵列的方法筛选到HSF1可能抑制表达的炎症介质基因15个,其中9个基因的启动子区含有热休克元件;HSF1可能促进表达的炎症介质基因11个,其中8个基因的启动子区含有热休克元件;HSR和HSF1过表达可明显抑制小鼠RAW264．7巨噬细胞内毒素诱导的SOCS3mRNA的表达。结论：HSF1可抑制炎症介质SOCS3mRNA的表达。     

热休克对犬心脏体外循环手术中心肌的保护作用

目的：通过热休克的研究为心脏外科手术心肌保护探索新的途径。方法：实验犬全身加热至肛温４２℃，保持１５ｍｉｎ，２４ｈ后建立全身体外循环，监测心脏停跳前及再灌注后心脏复跳和血压，心率的变化及心肌损伤的改变。结果：热休克组心脏自动复跳率高，血压及心率值较稳定；冠状动脉溢出液中血清肌酸磷酸激酶（ＣＰＫ）及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量较对照组低（Ｐ〈０．０５），心肌超微结构损伤程度明显轻于对照组。结论：热休克预     

热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡及其机制

目的：探讨缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡发生的机制及热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡的机制。方法：采用结扎小鼠左冠状动脉制备在体小鼠心肌缺血-再灌注损伤（I/R）模型,经DNA ladder检测细胞凋亡,并检测caspase-3,caspase-8,caspase-9的活性。部分小鼠经热休克预处理后再进行上述实验。 结果：缺血-再灌注后心肌组织中出现DNA梯状条带,caspase-3,caspase-8,caspase-9活性显著增高;热休克预处理后,多种热休克蛋白（HSPs）表达增加,DNA片断化减轻及caspase的活性受到抑制。结论：缺血-再灌注损伤可激活膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路,导致心肌细胞凋亡;通过诱导多种HSPs的表达,热休克预处理可抑制上述两条信号通路的活化和心肌细胞凋亡的发生。     

高表达热休克蛋白70鼠脑胶质瘤细胞瘤苗的体内抗瘤作用

目的观察高表达热休克蛋白70（HSP70）鼠脑胶质瘤细胞（C6细胞）瘤苗在体内的抗瘤效应.方法以SD大鼠为动物模型,采用热休克、β榄香烯、丝裂霉素单独或联合诱导制备不同高表达HSP70表达率的细胞瘤苗.各实验组注射不同HSP70蛋白表达率的瘤苗进行免疫,对照组注射1640培养液;C6细胞皮下注射,观察皮下胶质瘤成瘤率及成瘤大鼠的生存期,分析HSP70蛋白表达率与抗瘤效应间的关系.结果经C6细胞瘤苗免疫大鼠较对照组皮下胶质瘤成瘤率下降,成瘤大鼠平均生存期明显延长,平均生存期与瘤苗的HSP70表达率呈正相关,应用单克隆抗体封闭瘤苗的HSP70表达则此作用消失.结论应用高表达HSP70的C6细胞瘤苗明显延长载瘤大鼠生存期.瘤苗免疫大鼠的抗瘤作用是由HSP70介导的.     

热休克蛋白70对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的影响

目的:研究热休克蛋白70(HSP 70)对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的影响,探索HSP对脑复苏的可行性。方法:将46只成年Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组与干预组,假手术组不进行模型制作及治疗干预;模型组仅制作心搏骤停(SCA)并心肺复苏动物模型,不进行治疗干预;干预组大鼠在SCA并心肺复苏模型制作后静脉注射HSP 70。分别于6、12 h后检测各组大鼠脑海马区神经细胞凋亡数目、Bcl-2蛋白表达量,对比分析各组大鼠神经细胞凋亡情况的差异,验证HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞凋亡的保护作用。结果:HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞具有保护作用,能减少神经元细胞凋亡数目,增加Bcl-2蛋白表达。结论:HSP 70对大鼠心肺复苏后神经细胞有保护作用,对脑复苏具一定的治疗前景。     

热应激蛋白的诱导、定位与再分布研究

用放射自显影和免疫印迹方法探讨了热应激蛋白（ＨＳＰ）在多种细胞株中的诱导、定位和分布。结果发现，与正常情况相比，各种细胞在热休克后均可诱导合成大量ＨＳＰ８２．３、ＨＳＰ６９．５和ＨＳＰ２６．８，其合成高峰为受热后４～６ｈ。在正常情况下，ＨＳＰ６９．５和ＨＳＰ２６．８主要位于胞浆，在热休克后（４３～４５℃）迅速向核内迁移，在恢复期，它们又回到胞浆。     

热休克预处理对化疗环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响及机制

目的:探索热休克预处理(heat shock pretreatment,HSP)对化疗微环境下骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的影响及其潜在机制.方法:探索HSP最佳条件,往热休克预处理BMSCs(heat shock pretreated bone marrow mesenchymal stem cells,HS-MSCs)培养基中加入顺铂,通过CCK-8检测细胞增殖率,Hoechst33342/PI测定存活率,流式细胞仪检测凋亡率.使用Western blot检测不同时间点HS-MSCs热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)、Hsp90、自噬相关蛋白Beclin1和LC3B的表达.通过透射电镜观察自噬小体数量.结果:加入顺铂后,热休克模型组凋亡率明显低于模型组.此外,热休克模型组增殖速率较模型组增加,而表达亮蓝色/暗红色荧光的比例则低于模型组.HS-MSCs内Hsp70和Hsp90的表达随时间推移逐渐上调,并在48 h后达峰值.同时,细胞内自噬小体减少、Beclin1表达降低、LC3B Ⅱ/LC3B Ⅰ比值下降.结论:HSP能够提高化疗微环境下BMSCs的存活与抗凋亡能力,其作用可能与HSP增强Hsp70及Hsp90的表达、减弱自噬水平有关.