6A8α-甘露糖甘酶表达抑制使Jurkat细胞间的黏附性增强

目的 探讨6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对人T淋巴母细胞Judua生物学行为的影响。方法 采用反义核酸技术抑制细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达。用PCR检测转导基因在基因组中的整合。用单抗6A8作探针，Westem印迹和免疫荧光染色流式细胞术检测细胞中6A8α-甘露糖苷酶的表达状况。用Con A结合试验检测细胞蛋白质的糖基化改变。普通光学显微镜观察细胞的形态。用DNA芯片技术分析AS细胞和M细胞mRNA表达的差异。用RT-PCR和免疫荧光染色流式细胞术验证基因芯片结果的可靠性。结果 制备了6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)。与对照细胞(野生型细胞W和转导空载体的细胞M)相比，AS细胞在培养中黏附成大团块。DNA芯片分析见与M细胞相比，AS细胞中有19个基因的表达上调，加个基因的表达下调。上调的基因中有一些与细胞间黏附相关，如CD54、CD11a、CD24、CD82、整合紊αX、整合紊α7、整合素αE、IL-1R、IL-2Rγ和TNFSF9。RT-PCR肯定了DNA芯片分析的可靠性。免疫荧光染色流式细胞术进一步肯定了CD54和CD11a在AS细胞表达的上调。结论 6A8α-甘露糖苷酶表达抑制使Judua细胞间黏附增强，CD54和CD11a等黏附分子表达的增高可能与此相关。     

转导反向6A8α—甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响

用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA后,对抗Fas抗体诱导凋亡敏感性的变化,并用间接免疫荧光染色（流式细胞仪）检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明,抗Fas抗体诱导细胞24h后,野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA,两者之间无明显差异,但转导反向6A8cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向6A8cDNA的Jurkat细胞中凋亡细胞数明显减少,而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas(CD95,Apo-1)全阳性细胞,转导反向6A8cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示,转导编码6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。     

CD54和LFA-1的相互作用在6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的JurkatT细胞的黏附性增强中的作用

目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强，用细胞与细胞间黏附分子-1-人IgG的Fc片段(ICAM-1-Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试验研究CD54-LFA-1的作用，用单克隆抗体MEM-148检测As细胞LFA-1亲和力的变化，用单克隆抗体NKI-L16检测AS细胞LFA-1亲合力的变化，用鬼笔环肽染色细胞骨架，用Jurkat-Raji细胞间的作用作模型研究6A8α-甘露糖苷酶表达抑制对T和B细胞间黏附的影响，用ConA结合试验检测细胞中蛋白质N-糖基化的变化。结果(1)AS细胞间的黏附性增强主要与CD54及CD11a表达的增强相关，也与LFA-1亲和力的增高相关；(2)AS细胞的细胞骨架发生重排；(3)As细胞与Raji细胞间的黏附也增强；(4)ConA与AS细胞的结合增强。结论CD54和LFA-1的相互作用在AS Jurkat T细胞的黏附性增强中起重要作用。细胞骨架重排也可能起作用。As细胞的蛋白质发生了N-糖基化修饰。     

6A8 α-甘露糖苷酶也表达于细胞膜

目的 制6A8α-甘露糖苷酶羧基端单抗并进行鉴定,以确定6A8-α基露糖苷酶在细胞的表达部位。方法 用基因重组技术构建6A8cDNA3′端DNA片段的重组表达载体,在原核细胞表达其编码蛋白,杂交瘤技术制备单抗以3D5细胞为靶细胞,间接免疫荧光染色后,用激光共聚焦显微镜及流式细胞仪鉴定单抗。结果 6A8cDNA3′端DNA在原核细胞获得表达,制备了抗6A8α-甘露糖苷酶羧基端的单抗,观察到6A8α甘露糖苷酶不仅表达于3D5细胞胞浆,也表达于胞膜。结论 成功地制德了抗6A8α-甘露糖苷酶羧基端单抗,6A8-α-甘露糖苷酶不仅表达于3D5细胞胞浆中,也表达于胞膜。     

重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达

目的 采用重组腺相关病毒（AAV）载体pAGX( ),把6A8α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞,以获得正义或反义6A8DNA长期表达的B淋巴细胞株。方法 构建含正义或反义6A8DNA片段的重组pAGX( )质粒,经包装后转导淋巴细胞,经G418筛选,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞。Northern杂交和RT-PCR检测转导基因的mRNA表达水平。ConA结合试验检测细胞在转导基因后6A8α-甘露糖苷酶活性的改变,结果 pAGX-反义6A8DNA及pAGX-正义6A8DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV（rAAV)颗粒,藉助rAAV成功地把6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB。Northern杂交结果显示,转导的正义或反义6A8DNA获得表达,经1年余传代培养,RT-PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义6A8DNA的mRNA表达增加,新霉素抗性基因（neo^R)也获得表达,表明转导基因获得了长期表达,ConA结合强度在转导反义6A8DNA的细胞升高,提示转导反义6A8DNA可影响6A8α-甘露糖苷酶的表达。结论 用AAV载体成功地把6A8α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB,转导的基因获得长期表达,并干扰6A8α-甘露糖苷酶的表达。     

BJAB细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶的反义DNA后发生oncosis样死亡

目的：采用形态学和分子生物学方法,分析转导6A8α-甘露糖苷酶的反义DNA导致的B细胞株BJAB死亡的性质。方法：用Giemsa染色、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳以及透射电子显微镜等方法,分析细胞死亡的性质;应用ConA结合试验,检测转基因细胞6A8α－甘露糖苷酶活性的改变;应用Fluo-3探针测定细胞胞浆[Ca^2 ]i。结果：用重组腺相关病毒（rAAV)颗粒成功地将反义6A8DNA转导入了EB病毒转化的B细胞株BJAB。在克隆中,转导反义6A8 DNA的BJAB细胞在生长到3－10个细胞时死亡,而野生型、转导空载或转导正义6A8 DNA的BJAB细胞生长良好。转导反义6A8 DNA的BJAB细胞呈聚集状生长,且有大量细胞肿胀,最终死亡。Giemsa染色光镜观察、annexin-V荧光染色、梯形DNA电泳及透射电镜观察结果表明,这种死亡是一种oncosis(肿胀死）样死亡。ConA结合试验表明,BJAB细胞在转导反义6A8 DNA后的结合率升高,而转导正义6A8 DNA后的结合率则下降。另外,转导反义6A8 DNA的细胞胞浆[Ca^2 ]i升高。结论：转导反义6A8 DNA引起BJAB细胞发生oncosis样死亡,这种死亡可能与6A8α-甘露糖苷酶表达被抑制有关。     

6A8 α-甘露糖苷酶基因的mRNA表达与染色体定位

目的 对6A8α－甘露糖苷酶基因作染色体定位,比较6A8α－甘露糖苷酶mRNA在人多种免疫细胞株的表达。方法 用Fish原位杂交作染色体定位,用RT－PCR检测mRNA表达。结果 6A8α－甘露糖苷酶基因定位于人第13号染色体长臂的31－32区。6A8α－甘露糖苷酶mRNA在B细胞株SKW6高表达,在B细胞株3D5、BJAB、DESS、Daudi、Nalm6中度表达,在B细胞株Navalm,T细胞株GM、Jurkat,细胞细胞瘤细胞株U937弱表达,在T细胞株Peer,慢性髓性白血病细胞株K562极弱表达。结论 6A8α－甘露糖苷酶基因定位于人第13号染色体长臂的31－32区,其mRNA表达水平在各种人免疫细胞株不同。     

6A8α-甘露糖苷酶表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2端粒酶活性和端粒长度的影响

探讨端粒长度与端粒酶活性在人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性行为改变前后的变化，建立研究恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系的细胞模型。与6A8α-甘露糖苷酶表达正常的CNE-2L2细胞(野生型细胞W，转导空载体的细胞M及转导无关DNA片段的细胞S)相比，6A8α-甘露糖苷酶表达低下的细胞(AS)接种裸鼠皮下后的肿瘤性生长受抑。用Telo TAGGG Telomere Length Assay Kit及Telomerase PCR ELISA Kit分别测定端粒长度及端粒酶活性，用RT-PCR方法分析端粒重复序列结合因子(TRF)的转录水平。见AS细胞的端粒明显缩短(6．78Kb，W细胞为8．40Kb，M细胞为8．34kb，S细胞为9．56kb)，但端粒酶活性及端粒重复序列结合因子l和2(TRFl和2)的转录水平未见改变。实验表明，恶性行为降低的CNE-2L2细胞的端粒变短，但与端粒酶活性及TRF1／2无关，提示在CNE-2L2细胞中可能存在着端粒酶及TRF1／2以外的调节端粒长度的机制。这为研究肿瘤细胞恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系提供了一个模型。     

CD46 RNAi对CD59介导的T细胞信号转导的作用研究

目的构建携带针对CD46基因的pSUPER retro RNAi逆转录病毒载体,研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59与CD46在介导T细胞信号转导中的相关性。方法将能转录产生靶向CD46小发夹RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,克隆入逆转录病毒载体pSUPER retro,转化大肠杆菌JM109并转染Jurkat细胞。将Jurkat细胞分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)、转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)及转染CD46干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅳ组)。用RT-PCR、Western blot技术检测各组细胞中的CD59、CD46基因的表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD46与CD59联合作用对4组Jurkat细胞的增殖效应。结果重组载体经PCR及限制性内切酶酶切鉴定初步成功后送测序,结果表明序列正确,构建成功,稳定转染后,Ⅳ组细胞CD46分子的表达被成功抑制,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD46与CD59单抗联合作用后,增殖能力明显高于Ⅲ组、Ⅳ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组,Ⅲ组和Ⅳ组之间无差异。结论 CD59可增强CD46对T细胞信号转导的效应。     

下调Cbp分子促进GPI锚固蛋白CD59参与T细胞活化

目的采用RNA干扰技术构建针对Cbp基因的pSUPER-siCbp重组载体,以建立其高效转染表达体系。方法设计针对Cbp基因的寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSUPER载体中并进行鉴定。采用电转染方法转染Jurkat细胞,荧光显微镜观察GFP基因表达,并行RT-PCR和Western blot检测转染细胞中Cbp的表达。利用噻唑蓝(MTT)比色法检测转染重组载体前后各组Jurkat细胞的增殖效应;应用ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化水平,比较各组差异。结果经过限制性内切酶双酶切分析、DNA PCR和DNA测序鉴定,证实重组质粒pSUPER-siCbp的序列正确。转染重组质粒的Jurkat细胞,可表达绿色荧光蛋白,转染J2-pSUPER-siCbp重组质粒的Jurkat细胞中Cbp基因表达量明显低于其他各组;其细胞增殖能力,IL-2分泌高于其他各组。结论成功构建了靶向人Cbp基因的pSUPER-siCbp载体,转染Jurkat细胞中Cbp表达降低,为以后的CD59与Cbp在T细胞信号转导通路中相互作用研究奠定了基础。     

鼻咽癌细胞CNE-2L2的蛋白质组学分析：与恶性生物学行为相关的蛋白质

目的寻找与人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性生物学行为相关的蛋白质。方法用蛋白质组学分析高(W)和低(AS)恶性生物学行为的CNE-2L2细胞间蛋白质表达的差异,用实时定量PCR和免疫荧光染色流式细胞术对差异表达的蛋白质做确认,用siRNA抑制细胞中目的基因的表达,Western blot确认目的基因表达的抑制,细胞接种裸鼠的肿瘤生长实验。结果MOLDI-TOF MS分析见12个明显的差异表达蛋白质点。它们是:抗氧化蛋白Peroxiredoxin 2,异构型b;原肌蛋白3;II型TPM4-ALK融合癌蛋白;MLL蛋白;CD44;视网膜母细胞结合蛋白7;微管蛋白,β多肽;ATP合成酶,转H 作用的线粒体F1复合物,β多肽;波形蛋白;D21S2056E蛋白;蛋白酶体(prosome,macropain)26S subunit,non-ATPase,4;ENO1蛋白。前4个在AS细胞高表达,后8个在AS细胞低表达。对积分最高的7个蛋白质的差异表达做了肯定的验证。用siCD44抑制W细胞的CD44表达后,细胞接种裸鼠的成瘤性生长明显抑制。结论蛋白质组学分析见AS细胞与W细胞间有12个差异表达蛋白质,CD44表达减弱与AS细胞的恶性行为减弱相关。     

肠道病毒71型感染人横纹肌肉瘤细胞不同时期凋亡相关基因差异表达研究

目的 研究肠道病毒71型(EV71)感染人横纹肌肉瘤(RD)细胞后不同时期凋亡相关基因差异表达及信号通路转导机制.方法 锥虫蓝染色观察EV71感染RD细胞的存活率,Annexin V-FITC/PI双染色法检测病毒感染后凋亡细胞形态学及凋亡发生率,PCR芯片分析病毒感染RD细胞8h和20h后88个凋亡相关基因的表达情况.结果 EV71(MOI=5)感染RD细胞8h后存活率显著下降.流式细胞仪检测显示病毒感染20 h后早期凋亡及晚期凋亡细胞分别上升至18.0％和19.1％.PCR芯片检测88个凋亡相关基因,EV71感染8h后,除IFN-β1上调5.22倍外,ACIN1、Akt、Apaf1、caspase、CIDEB等47个基因发生明显下调.病毒感染20 h后,FasL、CD40L、TNF、caspase-10、caspase-3等28个基因发生2倍以上上调.结论 EV71感染早期RD细胞凋亡相关基因表达下调与病毒凋亡抑制效应相关,而感染晚期病毒可激活Fas/FasL、TNF/TNFR死亡受体信号通路诱导细胞凋亡.同时宿主细胞也通过调节CD40/CD40L、NF-κB/RelA、PI3 K/Akt等信号通路途径抑制凋亡作用.     

分化抗原gp42在人免疫细胞的表达

目的　明确gp4 2蛋白为分化抗原 ,检测它在人免疫细胞的表达。方法　用gp4 2蛋白免疫小鼠 ,制备抗gp4 2蛋白的单抗。用反义技术制备gp4 2蛋白表达抑制的 3D5细胞。用免疫荧光染色和Western印迹确定gp4 2单抗的特异性。用胞膜蛋白免疫沉淀和流式细胞术确定gp4 2蛋白为分化抗原。用双色免疫荧光染色流式细胞术检测gp4 2分化抗原在多种人免疫细胞的表达。结果　制备了抗gp4 2蛋白的特异性单抗。用gp4 2单抗作探针 ,从 3D5细胞膜免疫沉淀到相对分子质量 (Mr)为4 2 0 0 0的一条蛋白带 ,并在活 3D5细胞见阳性免疫荧光染色。gp4 2分化抗原在人外周围血CD19+ 、CD14 + 、CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率分别为 5 9.71%± 11.36 %、89.0 8%± 4 .87%、2 6 .0 3%±9.75 %、2 4 .2 4 %± 15 .2 9%和 2 4 .2 0 %± 15 .72 % ,在人免疫细胞株的表达率分别为 5 8.0 % (Nalm6 )、72 .7% (3D5 )、5 3.6 % (BJAB)、6 1.0 % (Daudi)、6 .9% (SKW6 )、6 .3% (Jurkat)、5 .8% (Peer)、2 1.3% (K5 6 2 )和 39.1% (U937)。结论　gp4 2蛋白为一个分化抗原 ,在人外周围血CD14 + 细胞的表达率最高 ,其次为CD19+ 细胞 ,CD4 + 、CD8+ 和CD5 6 + 细胞的表达率较低。     

CD59-CD2对T细胞信号转导的作用

目的将构建的CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体在Jurkat细胞中稳定表达,研究CD59与CD2分子在T细胞信号转导中的相互作用,探讨CD59向T细胞内传递信号的相关机制。方法酶切鉴定构建的pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体,脂质体法转染Jurkat细胞,G418筛选建立稳定转染细胞系,免疫酶法检测转染细胞表面CD59的表达,Western blot检测转染细胞中CD59蛋白的表达;用CD59单克隆抗体作用于各组Jurkat细胞,使用激光共聚焦显微镜检测细胞浆内的Ca2+,ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化,比较各组差异。结果经酶切鉴定证实携带CD59-linker-CD2融合基因的重组质粒扩增成功;免疫酶法和Western blot证实CD59在转染细胞中稳定表达,且转染组L-Jurkat细胞比正常组Ju-rkat细胞CD59表达量增加,二者比较其差别有统计学意义(P<0.05);与正常细胞相比,胞浆内Ca2+和IL-2在转染细胞中均高表达,两组细胞比较其差别有统计学意义(P<0.05)。结论 pIRES-CD59-linker-CD2融合基因真核表达载体可在Jurkat细胞中稳定表达,CD59mAb交联刺激后,CD59可通过CD2向细胞内传递信号,引起细胞内信号分子的一系列变化,为研究CD59与CD2在T细胞信号转导中的协同作用及进一步探讨CD59向T细胞内传递信号的机制奠定基础。     

酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖

目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响,探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制。方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jur-kat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系。结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h最为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡。结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现。     

噬菌体呈现的多聚多肽3A8诱导Jurkat细胞的凋亡效应

目的检测噬菌体呈现的多肽3A8诱导Fas^ Jurkat细胞的凋亡效应。方法噬菌体表面呈现的多肽3A8与Fas^ Jurkat细胞共孵育，通过Armexin-V检测细胞膜磷脂磷脂酰丝氨酸的翻转；流式细胞仪检测经处理的Jurkat细胞DNA含量；透射电镜观察细胞形态是否出现典型的凋亡特征。结果Annexin-V检测到经3A8处理的Jurkat细胞有32．64％的细胞膜磷脂磷脂酰丝氨酸发生了翻转。处理细胞经P1染色流式细胞仪分析，发现25．41％的Jurkat细胞发生凋亡，明显高于未经处理的对照组。透射电镜镜下观察到凋亡细胞不同时期的形态。结论噬菌体呈现的多肽3A8与Jurkat细胞结合，可诱导细胞凋亡。     

腺病毒受体及其介导基因转导的分子机制研究

腺病毒载体 (AdV)是一种重要的基因转导系统。腺病毒依两种不同的受体侵入靶细胞 :Ad纤维蛋白与CAR作用 ,介导病毒黏附细胞 ;Ad五邻体基底蛋白与整合素αvβ3 及αvβ5结合 ,促进病毒内化。靶细胞的CAR和整合素αvβ3 及αvβ5表达水平与AdV介导的基因转导效率直接相关 ,受体低表达限制AdV的转导率。动力蛋白调节Ad进入靶细胞 ,整合素聚集与肌动蛋白相关。Ad侵入靶细胞需要的信号通路包括GTP酶Pho家族成员P13K和肌动蛋白单纤维聚合。     

CD59真核表达载体的构建及其对Jurkat细胞增殖的影响

目的构建pIRES-CD59融合基因真核表达载体,探讨重组CD59在Jurkat细胞增殖中的作用。方法 RT-PCR法选择性扩增编码CD59的基因片段,克隆入pIRES真核表达质粒。脂质体法将重组载体转染Jurkat细胞,通过G418筛选获得稳定表达CD59的细胞克隆,利用RT-PCR和Western blot检测细胞中CD59的表达,通过MTT法检测Jurkat细胞的增殖。结果经酶切和测序鉴定表明携带CD59基因的重组质粒构建成功,RT-PCR和Western blot结果显示转染Jurkat细胞的CD59基因高表达,MTT实验显示转染CD59重组质粒的Jurkat细胞增殖速度明显快于对照组(P<0.05)。结论 pIRES-CD59真核表达载体在转染细胞Jurkat中可高表达CD59分子,并可影响Jurkat细胞的增殖,为研究CD59的生物学作用奠定了基础。     

CD59锚定蛋白对CD55介导的T细胞信号转导的增强效应

目的:研究糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定蛋白CD59对CD55介导T细胞信号转导的增强效应。方法:实验分为未转染的Jurkat细胞组(Ⅰ组)、转染空质粒的Jurkat细胞组(Ⅱ组)及转染CD59干扰质粒的Jurkat细胞组(Ⅲ组)。用RT-PCR检测3组细胞中的CD59基因表达水平。用噻唑蓝(MTT)比色法、免疫印迹技术和激光共聚焦扫描显微镜分别检测CD55与CD59联合作用对3组Jurkat细胞的增殖效应,Src家族酪氨酸激酶(SrcPTK)磷酸化的水平及细胞内钙离子的变化。结果:稳定转染后,Ⅲ组细胞CD59分子的表达被成功抑制。Ⅰ组和Ⅱ组细胞CD55与CD59联合作用后增殖能力,SrcPTK磷酸化水平及钙离子浓度均明显高于Ⅲ组(P<0.05);但Ⅰ组和Ⅱ组之间无差异。结论:CD59可增强CD55对T细胞信号转导的效应。     

人骨形成蛋白2在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及初步鉴定

目的:研究hBMP2在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法:将编码hBMP2的全长cDNA克隆入转移载体PK8中,重组后的载体与线性化的病毒DNA经脂质体包裹转染昆虫细胞。重组病毒经蓝白筛选后,提取病毒DNA进行PCR扩增,鉴定目的基因。收集重组病毒感染4d的细胞,进行免疫荧光及电子显微镜观察。结果:含有目的基因的重组载体经酶切可切下相应大小的目的基因片段。PCR产物的电泳结果表明,有目的基因片段的扩增。免疫荧光染色呈阳性的颗粒分布在昆虫细胞的胞浆及胞膜。结论:初步证实,hBMP2在此套表达系统中获得了表达。