姜黄素调节Bcl-2、Bax蛋白表达诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡

目的 研究姜黄素诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其分子机制.方法 用10、20、40 μmol/L姜黄素(对照组0μmol/L)处理增生性瘢痕成纤维细胞24 h,MTT法检测姜黄素对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3活性,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 MTT结果显示姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,抑制率随姜黄素浓度增加而上升(P＜0.05);Annexin V-FI℃/PI双标法结果显示成纤维细胞凋亡率随姜黄素浓度增加而上升(P＜0.05);经姜黄素作用,Caspase-9、Caspase-3的活性随姜黄素浓度增加而升高(P＜0.05);West-ern Blot结果显示Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值增大,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,升高Caspase-9、Caspase-3活性有关.     

碱性成纤维细胞生长因子对增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的:研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对瘢痕成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:取术中切除的增生性瘢痕组织3例,以植块培养法进行成纤维细胞原代培养,取第2代用于实验.选用含1、5、10、50、100、500 ng/mL不同浓度bFGF的培养液作用于细胞72 h,以未加bFGF的培养液作为对照,并进行如下检测:①MTT法检测细胞增殖情况;②流式细胞仪检测细胞周期及凋亡.结果:①MTT显示,随bFGF浓度增高,OA值由0.1833±0.019递增至0.3432±0.041(P＜0.05),且具有剂量依赖性.②流式细胞仪检测结果示:bFGF主要影响G1期,G1期细胞百分数随bFGF浓度增加由81.3%±3.24%递减至75.9%±1.21%.凋亡细胞百分比由7.2%±O.56%递减为2.3%±0.49%(P＜0.05).结论:bFGF可通过增加有丝分裂促进瘢痕成纤维细胞增殖,并有保护细胞免于凋亡的作用.     

姜黄素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察姜黄素体外抗增生性瘢痕的作用．方法：以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞,分别用不同浓度的姜黄素培养液培养,MTT法测定细胞的增殖情况,透射电镜进行形态学检测,流式细胞仪技术结合PI及Annexin V双标记染色检测姜黄素的促凋亡作用,实时荧光定量聚合酶链反应检测Ⅰ,Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达情况．结果：姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用;透射电镜观察发现,处理组凋亡细胞增多,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;流式细胞仪检测发现,随着药物浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率也在逐渐升高;实时荧光定量聚合酶链反应检测结果显示,姜黄素处理后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达水平均下调．结论：姜黄素具有一定的体外抗增生性瘢痕的作用．     

增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的研究

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长特性的差异。方法：应用消化法建立成纤维细胞系，在倒置相差显微镜下观察细胞形态，应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线，测定细胞生长速度。结果：增生性瘢痕成纤维细胞比正常皮肤成纤维细胞胞体大，形态不规则。前者细胞倍增时间约为6d，后者细胞倍增时间为3d。细胞融合后前者细胞数为后者的56％。结论：增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞是两种不同基因表现型的细胞。     

异常瘢痕成纤维细胞凋亡研究

目的：明确异常瘢痕成纤维细胞的凋亡特性及激素的机理。方法：以瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤（各６例）为材料,在体外对低血清和氟美松对不同成纤维细胞的细胞凋亡及怀凋亡有关的蛋白Ｂａｘ和Ｂｃｌ－２的表达的影响进行了研究;同时,对６例增生性瘢痕局部注射康宁克通后３ｄ和７ｄ的细胞凋亡和相关基因ｃ－ｍｙｃ的表达进行了在体研究。结果：在低血清中发生细胞凋亡正常皮肤成纤维细胞多于增生性瘢痕,增生性瘢痕多于瘢痕疙     

PTEN抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用及其机制

目的观察染色体10上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)编码蛋白对TGF-β1刺激下瘢痕成纤维细胞转分化的抑制作用及其机制。方法用重组PTEN腺病毒转染体外培养的人瘢痕成纤维细胞,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;将实验分为对照组、PTEN转染组、空载体转染组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),RT-PCR和Western blot分别检测对照组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN mRNA和蛋白表达;Western blot检测各组中α-SMA、Akt、p-Akt表达水平。结果 PTEN基因转染瘢痕成纤维细胞36h后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN转染组PTEN mRNA及蛋白的表达明显升高,与对照组及空载体转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而p-Akt和α-SMA的表达明显下降(P<0.05);TGF-β1组α-SMA表达较对照组明显升高,同时伴有p-Akt表达上升,与对照组、PTEN转染组、PTEN+TGF-β1组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);空载体转染组与对照组相比,p-Akt、α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05);空载体+TGF-β1组与TGF-β1刺激组相比,p-Akt、α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。各组细胞的Akt表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 TGF-β1可促进PI3K/Akt通路活化,使瘢痕成纤维细胞α-SMA表达升高,促进其转分化;空载体转染对p-Akt、α-SMA的表达无明显影响,高表达PTEN可使瘢痕成纤维细胞α-SMA的表达明显降低,并且可拮抗TGF-β1对瘢痕成纤维细胞的转分化作用,其机制可能是抑制PI3K/Akt通路活化。     

姜黄素诱导人肺成纤维细胞凋亡的相关分子机制的初步研究

目的 观察姜黄素诱导特发性肺纤维化(IPF)患者肺成纤维细胞凋亡的作用,探讨相关分子机制.方法 体外培养开胸肺活检IPF患者的肺成纤维细胞.采用不同浓度姜黄素(5、10、20及40μmol/L)作用于肺成纤维细胞.MTT法检测姜黄素对肺成纤维细胞增殖的抑制作用,计算细胞抑制率;应用流式细胞术检测细胞凋亡以及凋亡相关基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspage-3)的表达.采用SPSS11.5软件进行统计学分析,多组数据间比较采用单因素方差分析,采用Pearson相关分析进行相关性检验.结果 5～40 μmol/L姜黄素作用于肺成纤维细胞不同时间(6、12、24及48 h)后,对细胞增殖具有明显抑制作用,呈剂量-时间效应关系,抑制率与浓度和时间均呈正相关(r=0.886,r=0.832,P均<0.01).流式细胞术检测到细胞凋亡,5～40 μmol/L姜黄素作用后凋亡率分别为(29.58±2.13)%、(64.36±3.92)%、(72.98±4.42)%和(83.14±2.51)%,与不加姜黄素的阴性对照组(3.84±1.88)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01);Caspage-3蛋白表达阳性率分别为(26.24±3.64)%、(44.87±5.31)%、(57.44±4.23)%和(73.65±5.01)%,与不加姜黄素的阴性对照组(4.02±0.62)%比较,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 姜黄素可能通过激活Caspase-3,诱导IPF患者肺成纤维细胞凋亡.     

增生性瘢痕成纤维细胞P物质表达的研究

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^-7mol／L）加入培养液中刺激成纤维细胞，分别于刺激前和刺激后1、3、6、12、24h采用RT—PCR检测细胞内SP基因的表达情况，ELISA检测培养液中SP浓度。正常皮肤对照组及瘢痕对照组除不应用SP外，余处理均相同。结果未受SP刺激时，人增生性瘢痕及正常皮肤体外培养的成纤维细胞均能分泌一定浓度的SP，两者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。SP刺激后，正常皮肤体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达均在1～3h内达到高峰，随后迅速下降，24h后仍高于其正常水平；而增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达在3～6h内达到高峰，随后缓慢下降，24h后仍高于其正常水平。两种成纤维细胞SP的分泌差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性SP可诱使成纤维细胞内SP的分泌增加，而增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞SP的分泌情况有明显差异。     

增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长差异比较

【目的】探讨增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞基因表现型的差异以及EGF、PDGF和bFGF对其的影响。【方法】测定细胞生长曲线;应用液闪计数测定成纤维细胞胶原蛋白的合成。【结果】增生性瘢痕成纤维细胞增殖速度比正常皮肤成纤维细胞慢;胶原蛋白的合成高于正常皮肤成纤维细胞。EGF、PDGF和bFGF均对两种成纤维细胞的增殖具有强烈的刺激作用。EGF和bFGF可减少增生性瘢痕成纤维细胞的胶原蛋白合成,PDGF可以使两种成纤维细胞的胶原蛋白合成增加。【结论】增生性瘢痕成纤维细胞是一种特殊基因表现型的成纤维细胞,它具有自己特殊的生物学特性。EGF、PDGF和bFGF在增生性瘢痕的形成过程中可能具有重要作用。     

不同幅度牵张力对正常皮肤成纤维细胞向增生性瘢痕成纤维细胞转化的诱导作用

目的 分析不同幅度牵张力对正常皮肤成纤维细胞(NSFB)向增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)转化的诱导作用.方法 体外培养增生性瘢痕患者的NSFB和HSFB.加载牵张力的NSFB作为实验组,分N10％组、N15％组和N20％组3组,分别加载幅度为10％、15％、20％的周期性牵张力24 h,不加载牵张力的NSFB和HSFB作为对照组(N0组和H0组).通过观察细胞形态,以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖,实时定量荧光PCR法检测整合素β1、P130Cas、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原a1链(COL1A1)、Ⅲ型胶原a1链(COL3A1)的基因表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1蛋白表达,分析NSFB的转化程度.结果 机械牵张力刺激NSFB增殖,N10％组细胞增殖水平显著高于N20％组(0.91±0.09比0.8±0.07,P＜0.05).牵张力作用下各个基因表达上调,N10％组整合素β1、P130Cas、TGF-β1、COL1A1、COL3A1的mRNA表达水平均显著高于N20％组(3.14±0.24、5.01±0.49、1.55±0.08、2.38±0.08、1.37±0.11比1.78±0.32、3.07±0.41、1.18±0.05、1.97±0.05、1.26±0.19,均P＜0.05).机械牵张力引起TGF-β1蛋白表达上调,N10％组TGF-Jβ1的蛋白表达水平显著高于N20％组[(459±12.96)比(372±10.49) pg/ml,P＜0.05].实验组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达水平均显著高于N0组,但低于H0组(均P＜0.05);N10％组Ⅰ型胶原蛋白表达水平显著高于N20％组[(12.66±1.16)比(11.23±0.75)ng/ml,P＜0.05].结论 10％幅度牵张力对NSFB有明显的诱导转化作用,能够使NSFB表现出HSFB的部分生化特征.     

miR-222通过MMP1对增生性瘢痕成纤维细胞的调控机制研究

目的观察成纤维胶原酶1（MMP1）和miR-222在增生性瘢痕（HS）成纤维细胞中的表达水平,探讨miR-222对HS发生、发展的调控机制。方法选取36例HS患者的HS组织,并各留取HS旁正常组织作为对照。分离培养出HS组织与正常组织的成纤维细胞;采用RT-PCR法检测成纤维细胞MMP1mRNA和miR-222表达水平;采用Westernblot法检测成纤维细胞MMP1蛋白表达水平;采用MTT法检测成纤维细胞增殖情况;采用双荧光素酶报告实验检测miR-222是否可调控MMP1基因。结果与正常组织比较,HS组织成纤维细胞MMP1mRNA、蛋白表达水平均下调（均P＜0.05）,miR-222表达水平上调（P＜0.05）。与空白对照成纤维细胞比较,HS组织转染MMP1过表达质粒后的成纤维细胞MMP1mRNA、蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）,增殖速度明显减慢（P＜0.05）;转染antagomiR-222质粒后的成纤维细胞miR-222表达水平下调（P＜0.05）,MMP1mRNA表达水平上调（P＜0.05）,增殖速度明显减慢（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果表明miR-222能与MMP1基因的3′-UTR区相结合,从而调控其表达。结论miR-222在HS组织中存在过表达,miR-222或通过负调控其靶基因MMP1的表达而发挥其调控成纤维细胞增殖和凋亡的作用。     

rhIFN-a对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构影响的实验研究

目的研究细胞因子rhIFN-a对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响,以探讨细胞因子对增生性瘢痕的作用机理.方法对增生性瘢痕成纤维细胞进行体外培养,采用透射电子显微镜观察、分析,以研究细胞因子rhIFN-a对增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响以及病理改变.结果加入rhIFN-a后细胞表现为生长趋势及增殖活性被明显抑制,部分细胞见空泡样及残体样结构,线粒体肿胀,嵴溶解,并出现细胞凋亡现象.结论细胞因子rhIFN-a对成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用,促进成纤维细胞凋亡.提示rhIFN-a是成纤维细胞负性调节因子,在增生性瘢痕的治疗中有一定的应用价值.     

A型肉毒素预防人瘢痕成纤维细胞增生机制的初步研究

目的 探究不同浓度A型肉毒素(BTX-A)对瘢痕成纤维细胞的影响,初步阐释BTX-A治疗瘢痕及预防术后瘢痕增生的相关分子作用机制.方法 选取人瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的B T X-A(0.01、0.10、1.00 U/L及10.00 U/L)作用24 h后,激光共聚焦显微镜观察细胞黏附及骨架变化,并采用MTT及流式技术检测其增殖、凋亡及周期变化,同时采用实时荧光定量PCR(qRCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)方法 ,探究TGF-β、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2及MMP-9基因及蛋白的表达变化.结果 随着BTX-A剂量的升高,其细胞黏附数量及骨架荧光强度逐渐减弱;细胞增殖能力减弱且主要阻断在细胞G0/G1期;此外其凋亡也随着BTX-A剂量增大而逐渐增强.qPCR及Western blot结果显示,随着BTX-A剂量增大,MMP-1及MMP-2基因及蛋白均呈现高表达,而TGF-β及MMP-9呈现出低表达.结论 BTX-A通过阻断瘢痕细胞G0/G1期抑制其增殖,同时提高MMP-1及MMP-2的表达来减轻瘢痕形成,对瘢痕的治疗起着积极的作用.     

雷公藤提取物对增生性瘢痕成纤维细胞的负性调节作用

目的 :观察雷公藤提取物对成纤维细胞形态和增殖的影响。方法 :从增生性瘢痕中获取的成纤维细胞进行体外培养 ,加入 5× 10 - 3mg/ ml的雷公藤提取物作用 2 4 h后 ,在光镜下观察细胞形态。并用 MTT法检测成纤维细胞与不同浓度的雷公藤提取物 ( 5× 10 - 3、5× 10 - 4、5× 10 - 5、5× 10 - 6 mg/ m l)作用 2 4 h后增殖活性。结果 :雷公藤提取物在对成纤维细胞无毒性作用的浓度下 ,可使成纤维细胞的突起变短 ,增殖减缓。结论 :雷公藤提取物对成纤维细胞的形态和增殖都具有负性调节作用     

粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的 了解粉防己碱对瘢痕成纤维细胞的超微结构的影响;方法 培养来自增生性瘢痕的成纤维细胞,在加入粉防己碱后．用透射电镜观察其超微结构;结果 使用粉防己碱后,成纤维细胞胞体变小,胞质突起变少．核变小．核仁不明显．细胞器变少且小;结论 粉防己碱可影响瘢痕成纤维细胞的超微结构,从而可能降低其胶原蛋白等细胞外基质的合成。     

姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡机制研究进展

姜黄素作为一种传统中药,可抑制多种肿瘤细胞生长并诱导其凋亡,本文综述了姜黄素诱导肿瘤细胞凋亡的机制。     

姜黄素对尿道瘢痕成纤维细胞的放疗增敏作用及其机制

目的 探讨姜黄素对尿道瘢痕成纤维细胞的放疗增敏作用及其机制.方法 体外原代培养人尿道瘢痕成纤维细胞,CCK-8实验及平板克隆实验确定合适的姜黄素实验浓度及放疗剂量,平板克隆实验明确姜黄素的放疗增敏作用.流式细胞仪检测细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡情况,Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白及Ⅲ型胶原蛋白表达,...     

三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞转分化作用的研究

目的 观察三羟基异黄酮(Genistein)对人增生性瘢痕(hypertrophic scar,HS)成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响,探讨其抑制组织纤维化的作用机制.方法 体外培养人HS成纤维细胞,分别以25、50、100μmol/L浓度的Genistein进行处理,流式细胞术检测体外培养HS成纤维细胞中α-SMA阳性细胞率;Western blot检测细胞α-SMA蛋白的表达;观察HS成纤维细胞三维培养组织的收缩情况.结果 在Genistein作用下,α-SMA阳性细胞率及α-SMA蛋白表达与对照组比较均降低(P＜0.05);其中50、100 μmol/L组与对照相比较具有非常显著性差异(P＜0.01).HS成纤维细胞三维培养组织持续收缩,加入Genistein作用后,组织块的收缩现象减弱,第48、72小时,50 μmol/L与100 μmol/L组收缩指数(CI)显著低于对照组(P＜0.01),呈现明显的时效-剂量关系.结论 Genistien能抑制HS成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化,可能是其抗组织纤维化的作用机制之一.     

rhIFN-α对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构影响的实验研究

目的 研究细胞因子rhIFN-α对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响，以探讨细胞因子对增生性瘢痕的作用机理．方法 对增生性瘢痕成纤维细胞进行体外培养，采用透射电子显微镜观察、分析，以研究细胞因子rhIFN-α对增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响以及病理改变．结果 加入rhIFN-α后细胞表现为生长趋势及增殖活性被明显抑制，部分细胞见空泡样及残体样结构，线粒体肿胀，嵴溶解，并出现细胞凋亡现象、结论 细胞因子rhIFN-α对成纤维细胞的生长趋势及增殖活性有明显抑制作用，促进成纤维细胞凋亡,提示rhIFN-α是成纤维细胞负性调节因子，在增生性瘢痕的治疗中有一定的应用价值.     

A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及机制

目的 探讨A型肉毒毒素(BTXA)对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用及机制.方法 0(对照组)、0.2、0.4、0.8U/mL的BTXA作用于增生性瘢痕成纤维细胞48 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Hoechst染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,免疫印违法分析细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路的激活状况.结果 与对照组(0,75±0.07)比较,0.2、0.4、0.8 U/mL的BTXA(0.59±0.06、0.43±0.04、0.34±0.03)可明显降低增生性成纤维细胞活力;与对照组[(2.38±0.24)％]比较,可显著提高细胞凋亡率[(15.79±1.54)％、(27.32士2.69)％、(38.46±3.90)％];下调Cyclin D1及PCNA表达,降低PI3K表达及AKT磷酸化水平,并使细胞周期阻滞在G1期,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论BTXA可通过阻断PI3K/AKT信号通路及细胞周期蛋白表达,进而抑制增生性细胞增殖.