NCAPG 促进成骨肉瘤细胞增殖的研究

目的:初步探究非染色体结构维护亚基凝聚素Ⅰ复合物亚基G（NCAPG）基因对成骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:选择商 丘市第一人民医院和烟台毓璜顶医院2010年7月—2021 年1月收治的成骨肉瘤患者58例,通过免疫组织化学染色法对成骨肉 瘤和正常组织中NCAPG 基因的表达水平进行比较。成骨肉瘤细胞MG-63 和U-2 OS, 通过转染慢病毒载体和对照载体的 shRNA,敲减NCAPG基因来抑制其表达,qRT-PCR、Western 印迹验证敲减效果,通过集落形成实验、CCK-8 检测其对成骨肉瘤 细胞MG-63与U-2 OS细胞增殖的影响。结果:免疫组织化学染色显示,与正常组织相比,成骨肉瘤组织中NCAPG蛋白表达水 平明显升高,并且NCAPG 基因的表达与临床分期（字2=6.375,P=0.042）和肿瘤大小（字2=4.169,P=0.012）密切相关。qRT-PCR、 Western 印迹显示,慢病毒载体明显抑制了NCAPG mRNA 及蛋白的表达（mRNA:tUG-63=20.7,tU-2 OS=22.9;蛋白质:tUG-63=18.7,tU-2 OS= 16.9,均P<0.001）。与NCAPG基因未敲减相比,NCAPG基因敲减后MG-63 与U-2 OS克隆形成细胞数量降低（tUG-63=18.3,tU-2OS= 15.9,均P< 0.01）。结论:成骨肉瘤组织NCAPG基因表达增加,敲减NCAPG基因可抑制成骨肉瘤细胞的增殖。     

薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制

目的探讨薯蓣皂苷元诱导人骨肉瘤U-2OS细胞凋亡的发生机制。方法用透射电镜、AO/EB染色法观察U-2OS细胞的形态学变化,用蛋白印迹法检测Caspase-8表达水平。结果经薯蓣皂苷元处理的U-2OS细胞呈典型的凋亡形态学改变,其Caspase-8蛋白表达增强。结论薯蓣皂苷元通过Caspase-8途径诱导U-2OS细胞凋亡而抑制其增殖。     

阻断Notch信号通路抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖的实验研究

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养骨肉瘤MG-63细胞株;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0 μmol/L)对骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用;透射电镜下观察不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞形态的影响;流式细胞术结合AnnexinV-FITC/PI双染分析不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞Notch1、HES1基因表达.结果 不同浓度的DAPT作用于骨肉瘤MG-63细胞后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05),1.0μmol/L DAPT即抑制细胞生长,随着DAPT浓度增加抑制效果明显增强,呈显著的浓度依赖关系,且随着DAPT作用时间延长,抑制效果也明显增强.细胞凋亡结果分析表明,DAPT能浓度依赖性地诱导骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡.RT-PCR显示随着DAPT量的增加,Notch 1、HES 1 mRNA的表达逐渐下降(均P＜0.05).结论 DAPT对骨肉瘤MG-63细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用可能与下调MG-63细胞中Notch 1、HES 1 mRNA的表达有关.     

补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的 体外观察补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用.方法 将浓度为640、320、160 μmol/L的补骨脂素与MG-63细胞体外培养, 采用苔盼蓝染色法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物的细胞毒作用,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,Hoechst33258细胞荧光染色法观察细胞凋亡的形态变化.结果 细胞生长曲线表明细胞增殖数量变化与药物浓度及时间有显著依赖性;MTT测定补骨脂素在72 h对MG-63细胞抑制率分别为77.74%、71.05%、61.15%,细胞荧光染色观察到MG-63细胞形态改变.结论 补骨脂素抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡.     

低分子量肝素抑制骨肉瘤LIVIN基因表达并诱导细胞凋亡的实验研究

目的 研究低分子量肝素(LMWH)对骨肉瘤Livin基因表达及细胞凋亡的影响.方法 体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,应用MTT法检测不同浓度LMWH不同时间段对骨肉瘤细胞系MG-63生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,SABC免疫组化法分析不同浓度LMWH对骨肉瘤细胞Livin基因表达的影响.结果 LMWH可抑制骨肉瘤细胞系MG-63生长,且随着LMWH剂量的增加,MG-63细胞凋亡率明显增加.免疫组化显示,骨肉瘤细胞系MG-63中LIVIN的表达较用药前明显下降.结论 LMWH对骨肉瘤细胞系MG-63有明显的抑制作用,其作用可能通过抑制抗凋亡基因Livin的表达,促进肿瘤细胞的凋亡而实现.     

不同浓度、作用时间白花蛇舌草注射液对MG-63细胞凋亡效果

目的:探讨白花蛇舌草注射液对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的诱导作用。方法:采用一定浓度的乙醇提取白花蛇舌草有效成分,将其配制成50、100、200、400μL/m L 4种不同浓度的白花蛇舌草注射液,并注入到体外培养的人骨肉瘤MG-63细胞的培养液中。采用MTT法检测不同浓度白花蛇舌草注射液对人骨肉瘤MG-63细胞作用12、24、48 h后的细胞增殖抑制率,并采用RT-PCR半定量检测凋亡相关基因Bax的mRNA表达情况。同时拟用流式细胞仪(FCM)检测白花蛇舌草注射液对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡率。结果:MTT法检测结果显示,随着白花蛇舌草注射液浓度和作用时间的不断增加,人骨肉瘤MG-63细胞增殖抑制率均明显增大;当白花蛇舌草注射液浓度达100μL/m L时,随着作用时间延长,Bax基因表达显著升高(P0.05)。流式细胞仪检测显示,经白花蛇舌草注射液处理后,人骨肉瘤MG-63细胞凋亡率随白花蛇舌草注射液浓度的增加而不断升高。结论:白花蛇舌草注射液通过上调Bax基因表达能诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,且随着白花蛇舌草注射液浓度增加,人骨肉瘤MG-63细胞凋亡率亦不断增加。     

不同细胞系在骨肉瘤动物模型中的成瘤差异性比较

目的:探讨不同细胞系在骨肉瘤动物模型中的成瘤差异性。方法:⑴对Mg-63和U-2 OS两系细胞分别行细胞划痕实验和transwell实验;⑵32只裸鼠随机分为Mg-63细胞悬液法、组织块法与U-2 OS细胞悬液法、组织块法4组,每组8只。两种细胞系分别采取细胞悬液法和组织块移植法进行股骨远端原位骨肉瘤重建,统计4组原位骨肉瘤模型成瘤率、瘤重以及肿瘤转移率等指标。结果:细胞划痕实验中,Mg-63和U-2 OS在划痕48 h后迁移距离分别为(381.2±23.6)、(591.9±35.1)μm。骨肉瘤细胞transwell实验中,Mg-63和U-2 OS 16 h后穿膜细胞数分别为24.0±2.6,81.9±3.1。骨肉瘤造模实验中,Mg-63悬液法组成瘤率、肺转移率、淋巴结转移率、4周瘤重分别为62.5%,10.4%,0,(2.1±0.1)g;Mg-63组织块法组分别为100%,76.8%,20.7%,(2.4±0.3)g;U-2 OS悬液法组分别为100%,45.8%,0,(2.4±0.6)g;U-2 OS组织块法组分别为100%,82.3%,41.1%,(2.6±0.4)g。结论:U-2 OS细胞系拥有较高的组织侵袭性和细胞增殖能力,是一种良好的骨肉瘤原位模型制作细胞系。     

人参皂苷Rh2对白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的探讨人参皂苷Rh2对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测人参皂苷Rh2对HL-60细胞增殖的影响，采用DNA的片段化实验，观察人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的影响。结果G—Rh2能明显抑制HL-60细胞增殖，呈浓度依赖性关系；人参皂苷Rh2能明显诱导HL-60细胞凋亡，呈浓度和时间依赖效应，DNA的琼脂糖凝胶电泳分析可见凋亡特征性的DNA梯状图谱。结论G—Rh2主要通过有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡从而发挥其抗白血病效应。     

二膦酸盐对MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的体外观察二膦酸盐对骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用。方法将不同浓度的二膦酸盐药物与MG-63细胞体外培养,采用MTT比色法测定其细胞活力,绘制细胞生长曲线;Hoechst33258细胞染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪进行细胞周期分析及凋亡检测。结果MTT比色法测得药物作用72h对MG-63细胞的ID50为52.37μmol/L;细胞生长曲线表明细胞增殖数量与药物浓度及时间有显著依赖性;细胞荧光染色观察实验组细胞形态改变;细胞流式观察细胞凋亡实验组较正常差异有显著性,72h后细胞凋亡率40.2%±2.1%相比正常细胞2.8%±0.7%有统计学意义;细胞周期分析实验组细胞SubG1相比正常组显著累积G2/M细胞被阻滞。结论二膦酸盐抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡。     

人参皂苷对人体骨肉瘤细胞U2OS增压的影响

目的：为寻找人参中抑制骨肉瘤细胞增殖的活性成分,方法：采用细胞计数法检测了27种从人参中得到的单体化合物对体外培养的人体骨肉瘤细胞U2OS增殖的影响。以流式细胞术分析DNA含量, 抑制肿瘤细胞增殖作用的化合物对肿瘤细胞的细胞增殖周期的变化进行研究,另外,以荧光染色法检测了人掺皂苷对细胞死亡率变化的影响。结果对骨肉细胞增殖的抑制作用研究表明,在5μmol/L浓度下,人参皂苷－Ro-Rh1,-Rh2,F1和－L8较明显地抑制了肿瘤细胞的增殖,人参皂苷－Rg1,F3,Rf,PPT和PT显著地抑制了肿瘤细胞的增殖,进一步对骨肉瘤细胞有抑制作用的化合物检测其对细胞增殖周期影响发现;人参皂苷－Ro,-Rf,-Rg1,-F1-Rh2,PPT和PT使处于G0／G1期的细胞数目明显增多,伴随着S期和G2＋M期的细胞明显减少,说明这些化合物抑制了肿瘤细胞增殖周期的进行,与对照相比人参皂苷－Rf1-,Rg1-F1和PPT显著地促进了肿瘤细胞的细胞死亡现象。结论人参皂苷是通过阻止细胞增殖周期的G0／G1期或促使细胞死亡两种方式抑制了肿瘤细胞U2OS的增殖。     

虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

PDTC影响骨肉瘤U-2 OS细胞凋亡的研究

目的:观察在NF-KB抑制剂PDTC诱导骨肉瘤细胞发生凋亡的过程中,NF-KB活性抑制后,Livin和aspase-3表达水平变化.方法:以不同浓度(0、50、100、200、400 μmol/L)PDTC作用于骨肉瘤U-2 OS细胞不同时间(24小时,48小时)后,采用MTT法和流式细胞仪测定U-2 OS细胞凋亡,采用Western Blot检测U-2 OS细胞Livin和caspase-3蛋白表达.结果:①不同浓度PDTC作用24小时、48小时后对U-2 OS细胞生长有明显抑制作用,并呈时间、剂量依赖性.②50、100、200和400μmol/L PDTC作用24小时后的凋亡率与对照组相比差异有显著性,且各浓度组之间差异均有显著性(P＜0.01).③PDTC作用于U-2 OS细胞后可降低Livin蛋白的表达,增加caspase-3蛋白表达,呈现剂量依赖性.结论:PDTC可明显抑制人骨肉瘤U-2 OS细胞,并使细胞周期受到阻滞,进一步诱导肿瘤细胞凋亡,抑制细胞与诱导凋亡呈剂量依赖关系.     

重组可溶性TRAIL联合顺铂诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的研究

目的 研究重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)与化疗药物顺铂 (CDDP)单独及联合使用诱导骨肉瘤细胞MG-63的凋亡作用.方法 常规培养骨肉瘤细胞系MG-63,用不同浓度rsTRAIL、CDDP和两药联用处理细胞,于处理后的不同时间观察细胞形态变化.应用四氮唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色法检测两药单独使用和联合使用诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用.结果 rsTRAIL对MG-63细胞的生长有明显的抑制作用,可见典型的细胞凋亡特点,细胞抑制率从6 μg/L的10.1%上升到800 μg/L的84.6%,细胞凋亡率从3 μg/L的19%提高到25 μg/L的69.7%,均具显著的剂量效应;亚毒性剂量的CDDP与低浓度的rsTRAIL合用,明显提高了MG-63细胞的生长抑制率和凋亡率(P＜0.05).结论 rsTRAIL具有诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用,并通过诱导凋亡的方式有效地杀伤肿瘤细胞;化疗药物CDDP能加强rsTRAIL的抗肿瘤活性.     

薯蓣皂苷元对U-2OS细胞MMP-9/TIMP-1 mRNA的影响

为探讨薯蓣皂苷元抗肿瘤作用,采用四氮唑盐还原法(MTT法)观察薯蓣皂苷元对人骨肉瘸U-2OS 细胞体外生长的作用,运用RT-PCR方法探讨人骨肉瘤U-2OS细胞在薯蓣皂苷元作用后,其基质金属蛋白酶- 9(MMP-9)和基质金属酶组织抑制剂-1(TIMP-1)mRNA所发生的变化,结果薯蓣皂苷元对U-2OS细胞的生长具有明显的抑制作用,IC50(24h)为45 μmol／L:薯蓣皂苷元抑制U-2OS细胞MMP-9基因转录,而TIMP-1基因转录不受影响。说明薯蓣皂苷元明显抑制U-2OS细胞生长,抑制其MMP-9基因转录,对骨肉瘤侵袭和转移有一定抑制作用。     

人重组α干扰素联合顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:探讨人重组α干扰素(rhIFN-α)及联合应用顺铂对骨肉瘤细胞(MG-63)凋亡的影响。方法:将rhIFN-α和顺铂分别和联合作用于MG-63细胞,光镜下观察细胞形态学改变,用MTT检测MG-63细胞增殖抑制情况,流式细胞仪法检测MG-63细胞凋亡情况,Hoechest 33258染色和DNAladder检测细胞凋亡。结果:10 000 IU/ml rhIFN-α对细胞增殖抑制情况较明显(34.12±2.11)%;单独应用顺铂组对细胞增殖抑制率为(24.74±2.22)%;顺铂联合应用干扰素可明显提高MG-63细胞的增殖抑制作用到(69.41±1.72)%、(58.81±2.23)%、(48.23±1.12)%。结论:rhIFN-α对MG-63细胞的增殖抑制效应具有剂量依赖性特点,10 000IU/ml rhIFN-α能明显诱导MG-63细胞凋亡,而且不同剂量的rhIFN-α均能明显促进顺铂诱导的细胞凋亡。提示化疗时联合应用rhIFN-α可提高骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响及其机制的研究

目的观察高良姜素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响并探讨其机制。方法体外培养人骨肉瘤MG-63细胞株,给予不同浓度的高良姜素处理24h,MTT法测定细胞活力,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡,Western blot分析Caspase-3、Cytochrome C及Bcl-2蛋白表达。结果高良姜素可导致人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡并抑制其增殖,其作用具有浓度依赖性,在80mM最为显著;同时可改变细胞周期分布。与对照组相比,80mM高良姜素处理24h后MG-63细胞活力降低、凋亡率增加（P〈0.01）;G0/G1期百分比增高,S＋G2＋M期百分比降低（P〈0.01）;Caspase-3、Cytochrome C表达增加,Bcl-2表达降低（P〈0.01）。结论高良姜素可诱导人骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡、抑制其增殖,并改变细胞周期分布,其作用与线粒体途径相关。     

RHPN2在骨肉瘤细胞中高表达并与较差的预后相关

目的 筛选骨肉瘤细胞中异常表达的基因,探究RHPN2对骨肉瘤细胞体外增殖、凋亡和迁移能力以及对体内成瘤能力的影响。方法 采用GEO2R分析GSE70414数据集中骨肉瘤细胞与正常细胞的基因差异表达,RT-qPCR和Western blot实验检测人骨肉瘤细胞系MG-63、143B和SAOS2中RHPN2的表达情况。分别采用两种RHPN2-shRNA和对照组NC-shRNA转染143B细胞,CCK8实验、CFU实验、Annexin V-FITC/PI染色以及划痕试验分别检测RHPN2沉默对143B细胞增殖能力、凋亡和迁移能力的影响。采用143B细胞和RHPN2-shRNA转染的143B细胞原位注射构建裸鼠骨肉瘤原位瘤模型,并对肿瘤组织进行HE染色来验证RHPN2沉默对骨肉瘤细胞体内成瘤的影响。采用KM生存曲线分析RHPN2的表达与骨肉瘤患者生存预后的相关性。结果 RHPN2在骨肉瘤细胞系MG-63、143B和SAOS2中的表达明显上调（P<0.01）;RHPN2的沉默能够显著抑制骨肉瘤143B细胞的体外增殖和迁移,促进凋亡过程（P<0.01）,并且抑制143B细胞的体内成瘤能...     

SP2509联合顺铂调控LSD1的表达而诱导骨肉瘤细胞的凋亡和自噬

目的:探究SP2509联合顺铂对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的影响及机制。方法:qRT-PCR检测LSD1在骨肉瘤细胞MG-63、Hu O9、U-2OS以及人成骨细胞h FoB1.19中的表达。CCK8法检测SP2509和顺铂的IC50值。MG-63细胞分为对照组、SP2509组(20μmoL/L)、顺铂组(10μmoL/L)、SP2509(20μmoL/L)联合顺铂组(10μmoL/L),流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞LSD1、LC3-Ⅱ、P62、Caspase3、Bcl-2表达。结果:LSD1在骨肉瘤细胞MG-63、HuO9、U-2OS中的表达显著高于其在hFoB1.19中的表达,MG-63中LSD1表达最高。SP2509和顺铂IG50值分别为40和20μmoL/L。相比于对照组,SP2509组和顺铂组MG-63细胞凋亡水平显著增加(P<0.05),Caspase 3表达显著增加(P<0.05),Bcl-2表达显著下调(P<0.05),LC3-Ⅱ表达显著增加(P<0.05),P62表达显著下调(P<0.001),LSD1表...     

氯化钴诱导HIF-1α增高拮抗过氧化氢引起的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡

[目的]验证氯化钴抑制过氧化氢诱导的人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡作用并探讨其可能的分子机制.[方法]将人骨肉瘤MG-63细胞分为正常对照组、过氧化氢组、过氧化氢+氯化钴预处理组、过氧化氢+氯化钴+YC-1组.应用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术测定细胞凋亡;免疫荧光染色、蛋白印迹法检测HIF-1α表达.[结果]与过氧化氢组比较,氯化钴预处理组细胞存活率明显增加(P<0.05);凋亡细胞比率降低.缺氧可激活HIF-1α的表达并诱导其转位,100μmol/L氯化钴可明显增加HIF-1α蛋白的表达(P<0.01).[结论]氯化钴可抑制过氧化氢诱导的人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡,其分子机制可能与激活HIF-1α的表达有关.     

PNKP沉默对骨肉瘤放疗的增敏作用

目的 研究多聚核苷酸激酶/磷酸酶(polynucleotide kinase/phosphatase,PNKP)在放疗诱导的细胞DNA损伤、细胞凋亡、细胞增殖和细胞周期中的调节作用.方法 将U2OS细胞系分为3组:骨肉瘤细胞对照组、阴性siRNA转染组(siC)和PNKP siRNA转染组(siPNKP).Western blot检测0、1、2、4、6、8 Gy6个剂量水平γ-射线照射后U2OS细胞中PNKP的变化,CCK-8分析不同剂量γ-射线照射后细胞的存活率,彗星实验检测辐射后骨肉瘤细胞DNA的损伤,MTT法检测辐射后细胞增殖情况,流式细胞仪分析辐射后细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞周期的变化.结果 4 Gy剂量的γ-射线可以显著降低骨肉瘤细胞U2OS中PNKP的表达(55.17％,P＜0.01)和细胞的存活能力(与对照组相比下降50.16％,P＜0.01).与单独辐射组(siC+ IR)对比,PNKP沉默可以抑制辐照后细胞的生长(抑制率增加到129.61％,P＜0.01),增加DNA的损伤(DNA迁移量增加58.94％,P＜0.01),使细胞周期停滞在S期,促进细胞凋亡以及降低线粒体膜电位水平.结论 PNKP沉默可以增加骨肉瘤细胞放射治疗的敏感性.