硝酸盐还原试验直接检测痰标本中结核分枝杆菌耐药性

WHO报道,在2005年,全球有880万结核病新发病例,死亡病例160万[1],而且,这种情况随着艾滋病及耐多药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的流行而日趋严峻[1-3].监测MTB耐药性是控制耐多药菌株流行的有效方法之一,然而,目前所用方法,受到检测费用高和检测时间长等不利因素的限制,因此,急需发展快速价廉的检测方法.     

液体培养基比色法快速检测结核分枝杆菌耐药性

目的探讨液体培养基比色法在结核分枝杆菌（MTB）耐药性快速测定中的应用价值。方法将MTB分别接种于含药和不含药的液体培养基中，37℃培养6d，然后加入NaNO3试剂，37℃培养1d，进行硝酸盐还原检测试验。根据液体培养基颜色变化情况，判断药敏结果。将检测结果与Bactec．960测定结果比较，分析硝酸盐还原酶比色法检测MTB耐药性的敏感性、特异性和准确性。结果以Bactee．960检测结果为判断标准，液体培养基比色法检测链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇耐药性结果与Bactec．960的符合率分别为100．0％、96．9％、98．1％和97．5％。结论液体培养基比色法检测MTB耐药性具有很高的敏感性和特异性，且需时较短、操作简便、结果准确、不需特殊仪器设备，可作为MTB耐药性的快速筛选方法。     

结核分枝杆菌耐药性不同检测方法的比较与评价

目的：探讨两种方法在结核分枝杆菌耐药性快速检测的应用可行性。方法：应用直接法与传统法进行耐药试验,比较两者的耐药结果。结果：与传统法耐药管培养结果比较,涂片≤2＋的痰标本的低浓度耐药试验直接法的结果RFP、INH、EMB耐药性符合率分别为28．6％、50．0％、12．5％,耐药性总符合率为30．4％,两者差异有统计学意义。结论：直接法应用于结核分枝杆菌耐药试验是可行的,对临床上肺结核病人耐药性的快速检测具有一定价值。     

结核分枝杆菌耐药检测及其临床意义

耐药结核病(TB)尤其是耐多药结核病(MDR-TB)、广泛耐药结核病(XDR-TB)的快速诊断和有效治疗是TB防控中亟需解决的难题。结核分枝杆菌(Mtb)耐药的主要机制是由于药物作用靶标或药物代谢酶编码基因突变所致。临床上常用的Mtb药物敏感性试验方法主要包括表型药敏方法和分子药敏方法,本文还简要地概述了通过药敏试验所揭示的一些值得临床医师关注的临床意义。     

结核酶联免疫斑点试验、结核分枝杆菌DNA测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的比较研究

目的比较结核酶联免疫斑点试验（T—SPOT-TB）、结核分枝杆菌DNA（TB—DNA）测定和痰涂片检测在肺结核诊断中的意义。方法选取2010年5月～2013年1月在本院做结核检测的患者,其中确诊肺结核的患者95例进行T—SPOT-TB、TB—DNA测定和痰涂片检测。结果T—SPOT-TB、痰涂片和TB—DNA测定的敏感性分别为92．22％、24．44％、67．78％,痰涂片的敏感性最低,T—SPOT-TB最高（P〈0．05）。结论T—SPOT-TB较痰涂片、TB—DNA检测对结核病诊断有较高的敏感性。     

59株耐药结核分枝杆菌DNA芯片检测结果分析

目的 探讨结核分枝杆菌基因突变和耐药性的关系。方法 用DNA芯片检测和测序对59株耐药结核分枝杆菌进行耐异烟肼(katG、inhA、ahpC)、耐利福平(rpoB)基因检测。结果 59株耐药分枝杆菌菌株中。分别有40株(40／59)测出ropB基因突变。有32株(32／59)测出katG基因突变。另有三株katG缺失．同时测出两种及两种以上基因突变32株，改良罗氏培养法检测出27株为耐异烟肼、利福平菌株中，基因芯片检测24株(24／27，占88．9％)有基因突变。其中18株存在两种或两种以上基因突变(18／27)。另抽取11株进行DNA测序，与芯片检测结果完全相符。结论 用DNA芯片检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平的耐药性有较高的特异性和灵敏度，与培养法检测结果基本吻合。     

结核分支杆菌异烟肼耐药性的杂交检测

目的通过检测结核分支杆菌KatG基因、inhA基因突变情况,分析核酸杂交检测方法在耐异烟肼耐药性测定中的应用价值。方法应用PCR扩增和核酸杂交检测方法对35例耐异烟肼肺结核患者痰标本和102株结核杆菌临床分离株KatG、inhA基因突变进行杂交检测。结果 102株结核杆菌临床分离株中,42株对异烟肼敏感的菌株中KatG、inhA基因突变率为4.8%、0。60株对异烟肼耐药菌株株中,KatG基因突变率为61.6%（38/60）;inhA基因突变率为5.0%（3/60）。结论应用PCR和核酸杂交检测技术检测结核杆菌KatG、inhA基因突变情况,可以提供结核杆菌对异烟肼耐药性的初步诊断。     

镇江地区结核分枝杆菌DNA指纹图谱分型及耐药性分析

目的：分析镇江地区结核分枝杆菌的DNA指纹图谱分型及耐药情况。方法收集174例疑似结核病患者痰液标本,通过鉴别培养基对硝基苯甲酸（ PNB）和噻吩－2－羟酸肼（ TCH）进行分枝杆菌菌型初筛,再通过本室建立的PCR－ELISA法明确鉴定结核杆菌菌种,用比例法进行药敏实验,用DNA随机扩增多态性（ RAPD）指纹分型法,对其中44株耐药人型结核分枝杆菌进行DNA指纹图谱分型。结果从174份标本中分离出人型结核分枝杆菌141株（81．03％）,牛型结核分枝杆菌20株（11．49％）,非结核分枝杆菌13株（7．47％）,总耐药率42．53％;耐药率由高到低依次为异烟肼（INH）＞氧氟沙星（OFX）＞利福平（RFP）＞链霉素（SM）＞乙胺丁醇（EMB）＞卡那霉素（KM）＞卷曲霉素（ CPM）＞阿米卡星（ AKM）;非结核分枝杆菌对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于结核分枝杆菌（ P＜0．01）。复治组对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于初治组的耐药率（P＜0．01）。中、老年患者耐药率明显高于青年患者（P＜0．05或P＜0．01）。将44株耐药人型结核杆菌,用RAPD－PCR分型,并用NTsys 2．10e软件作聚类分析,共分为5型（Ⅰ型-Ⅴ型）,其中以Ⅰ-Ⅲ型为主,占84．09％。各型的耐药率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论本地区肺结核以人型结核分枝杆菌为主,结核杆菌总体耐药率和耐多药率相对较高。 RAPD指纹分型结果显示,该地区结核分枝杆菌具有明显的基因多态性,成簇类型是主要流行菌株。各型与耐药性无明显相关性。     

应用单链探针反向杂交试验检测结核分枝杆菌耐药性分析

目的探讨单链探针反向杂交试验检测结核分枝杆菌耐药性,评价此方法在耐药性检测中的临床应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链探针反向杂交试验技术,PCR扩增50株结核分枝杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB耐药基因,将标记生物素的基因扩增产物与固定在硝酸纤维膜上的核酸探针杂交,通过链亲和素碱性磷酸酶,BICP/NBT显色系统检测分析基因突变,同时与传统药物敏感实验比对分析。结果 PCR-LiPA方法分析50株结核分枝杆菌临床分离株,耐RFP菌株中检出4株,耐INH菌株中检出5株,耐SM菌株中检出7株,SM敏感株检出1株,50株rrs基因均未检测到相应位点的突变;耐EMB菌株1株、EMB敏感株1株检测到embB基因突变。结论应用PCR-LiPA可快速、简便地检出部分结核分枝杆菌耐药株,可作为临床辅助诊断手段。     

2014-2015年西安市胸科医院结核分枝杆菌耐药性分析

目的 回顾性分析西安市胸科医院2014—2015年结核分枝杆菌的耐药情况,为本地区结核病的诊断、治疗以及预防提供参考.方法 收集西安市胸科医院2014—2015年门诊、住院患者结核分枝杆菌阳性菌株2583株,采用比例法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇、丙硫异烟胺、卷曲霉素、莫西沙星、利福喷丁、阿米卡星、对氨基水杨酸钠、左氧氟沙星共11种抗结核药物的耐药性进行测定.结果 共分离出2583株结核分枝杆菌,其中耐多药、广泛耐药、一线4种全耐药、二线7种全耐药、11种药物全耐药菌株分别为258、139、116、17、16株,耐药率分别为9.99%、5.38%、4.49%、0.66%、0.62%.对11种抗结核药物单一耐药率,由高到低分别为:异烟肼(23.96%)、链霉素(21.76%)、利福喷丁(14.83%)、利福平(14.05%)、左氧氟沙星(10.69%)、乙胺丁醇(9.33%)、莫西沙星(6.93%)、对氨基水杨酸钠(5.81%)、卷曲霉素(3.29%)、阿米卡星(2.09%)、丙硫异烟胺(1.55%).耐多药菌株对利福喷丁和左氧氟沙星的耐药率较高,分别为87.98%、53.88%.对利福喷丁+左氧氟沙星、莫西沙星+利福喷丁组合的耐药率分别高达51.94%、39.92%.广泛耐药菌株对对氨基水杨酸钠的耐药率最高,为32.37%.结论 2014—2015年西安市胸科医院抗结核病药物单一耐药率虽然呈下降趋势,但耐多药、广泛耐药和全耐药菌株的出现和增加提示还需要更加严格的执行结核病防控策略,防止各种耐药菌株的产生、增加和传播.     

基因突变与结核分支杆菌耐药性的研究进展

综述结核分支杆茵耐药分离株基因突变的规律，探讨耐药的分子机理。并通过对6例肺结核病人切除肺的组织学、免疫组织学、宿主细胞免疫反应的研究以及通过对所显示的细茵种群的描述，加深对该感染过程动态的了解。     

Drug resistance in Mycobacterium tuberculosis and targeting the l,d-transpeptidase enzyme

Tuberculosis (TB) is a disease that has afflicted mankind for thousands of years, but in the last seven decades, much progress has been made in anti-TB therapy. Early drugs, such as para-aminosalicylic acid, streptomycin, isoniazid, and rifamycins were very effective in combatting the disease, giving rise to the hope that TB would be eradicated from the face of the earth by 2010. Despite that optimism, TB continues to kill more than a million people annually worldwide. A major reason for our inability to contain TB is the emergence drug resistance in Mycobacterium tuberculosis. This commentary is based on our recent publication on the structure of l ,d -transpeptidase enzyme, relevant to drug resistance. As a background, we briefly outline the history and development of anti-TB therapy. Based on the crystal structure, we suggest a potential direction for designing more potent drugs against TB.     

251株耐多药结核分枝杆菌二线药耐药结果分析

目的了解耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药物的耐药情况。方法采用绝对浓度间接法检测251株耐多药结核分枝杆菌临床分离株对二线抗结核药物的耐药性,回顾性分析其耐药情况。结果 251例耐多药结核分枝杆菌分离株对二线抗结核药物耐药率从高到低为:左氧氟沙星>丙硫异烟胺>对氨基水杨酸>力克肺疾>丁胺卡那霉素>卷曲霉素,其中初治耐药率依次为:13.5%、7.2%、6.8%6、.4%、4.0%和2.4%;复治耐药率分别为42.2%、22.7%2、2.3%、21.9%1、5.5%和4.0%;以左氧氟沙星耐药率为最高。中、青年组耐药率共占74.5%。结论耐多药结核分枝杆菌对二线药物耐药情况严重,给耐多药结核病患者治愈带来严峻挑战。     

抗结核药物的作用机制及结核分枝杆菌的耐药机理

结核病是一个严重的全球性疾病,随着艾滋病病毒及耐药结核菌的出现及播散成为结核病控制的又一个威胁。虽然我们有结核疫苗及抗结核药物,但控制结核病仍是一件很棘手的事情。多重耐药结核菌的不断出现给结核病的治疗带来很大的困难。为有效控制耐药结核病,我们必须了解结核菌的耐药机理。本文讨论了抗结核药物的作用机制及结核菌的耐药机理。结核菌耐药机理的阐明对耐药菌的快速分子诊断及新药的开发有重要的意义。     

肺结核合并呼吸系统细菌感染病人的病原菌构成及其耐药性分析

目的了解肺结核合并呼吸系统细菌感染的病原菌构成及其耐药性分析。方法对住院肺结核合并呼吸系统非结核分枝杆菌感染的病人取合格痰标本进行普通细菌培养及药物敏感试验分析。结果痰标本中共分离出607株细菌。革兰阴性杆菌423株（69.7%）,前3位分别是：氧化酶阳性的非发酵菌151株、克雷伯菌属112株、肠杆菌属48株;革兰阳性球菌184株,其中凝固酶阳性53例,凝固酶阴性131例。耐药分析：葡萄球菌对青霉素的耐药率高达80%以上,对红霉素,阿奇霉素,克林霉素,环丙沙星、氧氟沙星耐药率超过60%,对万古霉素均敏感,替考拉林敏感率超过90%。革兰阴性杆菌对阿米卡星耐药率相对较低（18.4%～30%）,第3、4代头孢菌素,喹诺酮类药物对发酵菌的耐药率均达50%或以上;头孢他啶、头孢吡肟对非发酵类敏感率较高（62.5%、81,6%）,亚胺培南、美诺培南及酶抑制剂对革兰阴性杆菌耐药率较低,敏感性超过80%,其中亚胺培南耐药率为0。结论肺结核合并细菌感染及耐药情况较严重,建议及时进行痰细菌培养,结合药物敏感试验结果合理选择抗生素,避免不合理的用药,增加耐药的的几率。     

耐药肺结核患者结核分枝杆菌菌型分布及耐药研究

目的 研究肺结核耐药患者结核分枝杆菌菌型分布及耐药情况。方法 收集2011年4月至2012年7月肺结核患者痰液标本,分离培养后进行菌种鉴定和药敏试验。结果 人结核分枝杆菌约占83.91%,牛结核分枝杆菌约占15.70%;患者对一线抗结核药物耐药率显著高于对二线抗结核药物耐压率,差异有统计学意义(P<0.05);一类抗结核药物单一耐药率显著高于二类抗结核药物(χ²=4.281,P<0.05)。结论 肺结核耐药患者菌型以人结核分枝杆菌最多,对一线抗结核药物的耐药率显著高于对二线抗结核药物的耐药率。     

结核分枝杆菌对氧氟沙星、左氧氟沙星耐药性动态研究

目的 了解菌阳肺结核患者对氟喹诺酮类药物的耐药动态演变,为制定临床标准化治疗方案提供参考依据.方法 选取天津市海河医院门诊及住院菌阳肺结核患者,对其结核分枝杆菌(MTB)临床分离株,做氧氟沙星(OFLX)、左氧氟沙星(LVFX)药敏试验.试验分别于2000年、2005年和2009年进行三次.结果 初治敏感菌株中30%～...     

Emerging drugs and drug targets against tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), the causative agent of tuberculosis, uses various tactics to resist on antibiotics and evade host immunity. To control tuberculosis, antibiotics with novel mechanisms of action are urgently needed. Emerging new antibiotics and underlying novel drug targets are summarized in this paper.     

HPLC法测定硝酸异康唑软膏中的硝酸异康唑的含量及有关物质

目的：建立高效液相色谱法，测定硝酸异康唑软膏中的硝酸异康唑的含量及有关物质。方法：用ZORBAX Extend C18（250mm×4．6mm，5μm）色谱柱，2％醋酸铵溶液-甲醇-乙腈（270：375：355）为流动相，检测波K为235nm。结果：硝酸异康唑与硝酸益康唑的分离度大于5．0及检出灵敏度完全达到要求，最小检出量为0．02μg。浓度在40～250μg·mL^-1。内线性关系良好（r=1．0000，n=6）。平均回收率为101．1％，RSD为1．1％。结论：本方法准确、简便、快速，能有效控制硝酸异康唑软膏的质量。     

胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测手足口病患儿肠道病毒71型

目的探讨胶体金法检测EV71型病毒IgM抗体和检测EV71型病毒核酸的临床应用。方法胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测EV71型病毒并对结果进行比较。结果胶体金法检测EV71型病毒IgM抗体和PCR-荧光探针法检测EV71型病毒核酸相比无显著差异(P>0.05)。结论胶体金法和PCR-荧光探针法联合检测EV71型病毒既能保证快速检测,又能提高准确性。