DcR3与自身免疫及肿瘤免疫

最近发现的TNFR家族成员-DcR3/TR6，在某些肿瘤和自身免疫病中高度表达。它能竞争性地与LIGHT及FasL结合，并抑制了疱疹病毒侵入介体配体（LIGHT）及FasL介导的凋亡，可能与肿瘤的免疫逃逸和自身免疫病的发病有关，本文拟就有关内容作一综述。     

DcR3与自身免疫及肿瘤免疫

最近发现的TNFR家族成员—DcR3 TR6 ,在某些肿瘤和自身免疫病中高度表达 ,它能竞争性地与LIGHT及FasL结合 ,并抑制了疱疹病毒侵入介体配体 (LIGHT)及FasL介导的凋亡 ,可能与肿瘤的免疫逃逸和自身免疫病的发病有关。本文拟就有关内容作一综述。     

031 DcR3与自身免疫及肿瘤免疫

最近发现的TNFR家族成员-DcR3/TR6,在某些肿瘤和自身免疫病中高度表达,它能竞争性地与LIGHT及FasL结合,并抑制了疱疹病毒侵入介体配体(LIGHT)及FasL介导的凋亡,可能与肿瘤的免疫逃逸和自身免疫病的发病有关.本文拟就有关内容作一综述.     

DcR3及其配体的研究进展

DcR3／TR6是最近发现的可溶性TNFR超家族成员，在归类上属于第三类。其配体具有多样性。它可竞争性地与FasL、LIGHT及TLIA结合，在肿瘤免疫、移植免疫、自身免疫及抗感染免疫中都发挥着重要的作用。本文拟就DcR3及其配体的研究进展作一综述。     

DcR3及其配体的研究进展

DcR3/TR6是最近发现的可溶性TNFR超家族成员,在归类上属于第三类,其配体具有多样性。它可竞争性地与FasL、LIGHT及,TL1A结合,在肿瘤免疫、移植免疫、自身免疫及抗感染免疫中都发挥着重要的作用。本文拟就DcR3及其配体的研究进展作一综述。     

DcR3对人肺成纤维细胞合成Ⅳ型胶原的作用

目的:探讨诱骗受体3(DcR3)对人肺成纤维细胞(HLF)合成Ⅳ型胶原的作用.方法:Over-PCR方法构建DcR3的真核表达载体, 脂质体法转染HLF细胞, Western blot检测HLF细胞合成Ⅳ型胶原的含量.结果:成功构建了pvax1-DcR3真核表达载体并转染HLF细胞;转染组细胞Col Ⅳ表达量明显升高, 从12 h开始持续到72 h, 与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01);而转染 抗体组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);转染组不同时间Col Ⅳ表达量有统计学意义(F=34.25, P＜0.05).结论:DcR3促进HLF细胞合成Ⅳ型胶原的能力, 可能是加速肺纤维形成的因素之一.     

重组人DcR3腺相关病毒的构建和表达

目的克隆人DcR3基因于腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)载体pAAV-IRES-hrGFP中,以获得高感染滴度及纯度的重组人DcR3腺相关病毒,为将其用于感染移植肝,研究其对大鼠移植肝的保护作用打下基础。方法用基因重组的方法构建含全长人DcR3基因的重组腺相关病毒骨架质粒,利用脂质体法将腺相关病毒载体系统共转染入病毒包装细胞AAV-293细胞中,合成重组DcR3腺相关病毒,经PEG/氯仿纯化,用SDS-PAGE鉴定其纯度,扫描电镜观察病毒颗粒形态,倍比稀释法测定重组病毒的感染滴度。并用重组病毒感染COS-7细胞鉴定DcR3的表达。结果正确构建组装重组人DcR3腺相关病毒,纯化后病毒感染滴度为1.1×1010U/mL。在重组DcR3腺相关病毒感染的COS-7细胞上清液中检测到了DcR3的表达。结论成功构建了重组人DcR3腺相关病毒,为下一步研究DcR3对大鼠移植肝的保护作用打下基础。     

肝癌发展中FasL及其受体Fas/DcR3的表达分析

目的研究小鼠肿瘤发生早期肿瘤坏死因子超家族成员FasL及其受体的表达特点,及其与免疫调节相关分子表达的时空关系,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法建立小鼠实体瘤模型,采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中可溶型FasL、Fas及DcR3、TGF-β、IL-10在肿瘤发生不同时相的表达,同时,应用ELISA方法定量检测血清中TGF-β、IL-10的表达。结果在早期的肿瘤组织中,Fas的表达先于DcR3,其后DcR3大量表达,而Fas的表达则下调直至丢失,DcR3、FasL同时表达并上调,TGF-β和IL-10也随肿瘤的表达而上调。TGF-β同DcR3的表达具有空间位置的一致性。FasL、DcR3、TGF-β和IL-10的表达水平同肿瘤的生长呈正相关。结论随着肿瘤不断的生长,肿瘤局部的免疫应答逐渐趋向于负调节,FasL、DcR3在诱导肿瘤免疫耐受的过程中可能发挥着重要作用。     

DcR3 对肝纤维化动物模型的影响

目的:研究DcR3 基因对肝纤维化大鼠的预防性治疗的作用。方法:SPF 级健康雄性Wistar 大鼠30 只,体重范围180 ~220 g,随机分为3 组,每组10 只,分别为正常对照组、DcR3 基因预防性治疗组(1% DMN+DcR3 组)、造模组(1%DMN 组)。采用1%DMN 诱导大鼠肝纤维化模型,腹腔注射DcR3 质粒进行预防性干预。分别采用HE 染色和Masson 染色观察肝组织病理情况;qRT-PCR 和Western blot 法检测DcR3、Fas、FasL、-SMA 和TGF-1 的mRNA 和蛋白表达水平。结果:与模型组相比,DcR3 预防治疗组大鼠肝组织炎性细胞浸润及胶原类物质沉积有所改善;DcR3 基因可显著降低肝纤维化大鼠Fas、FasL、 SMA 和TGF-1 mRNA 和蛋白表达水平,DcR3 基因预防性治疗组与对照组和造模组有显著性差异(P<0.05);同时DcR3 基因预防性治疗组DcR3 mRNA 和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:DcR3 基因可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能是DcR3 通过降低肝脏炎症反应,减少胶原类物质沉积,抑制 SMA 和TGF-1 表达,从而抑制HSC 活化;下调Fas和FasL 表达,抑制Fas/ FasL 途径诱导的肝细胞凋亡。     

诱骗受体DcR3对佐剂型关节炎大鼠模型的作用分析

目的 研究诱骗受体DcR3 对佐剂型关节炎(AA)大鼠模型的作用及其机理.方法 注射弗式完全佐剂建立大鼠佐剂型关节炎(AA)模型,尾静脉注射DcR3蛋白,观察大鼠关节肿胀度、间接 ELISA 检测血清和滑膜液中细胞因子IL-1 β、TNF-α、IFN-γ的变化.RT-PCR检测滑膜和淋巴细胞中DcR3、Fas、FasL mRNA的表达以及脾脏中TGF-β、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 mRNA的表达.Western blot分析滑膜细胞中Caspase-8、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2蛋白的表达.结果 DcR3 治疗AA大鼠后,足肿胀度降低;血液和滑膜液的IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平下降;脾脏中TGF-β、IFN-γ、TNF-α mRNA 表达下调,IL-4、IL-10 mRNA表达上调;滑膜细胞中Caspase-8、Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调. 结论 DcR3 可以用于实验性大鼠AA的治疗,其治疗机制与调节滑膜细胞FasL、Fas mRNA的表达和血液淋巴细胞中 Fas mRNA的表达,促进滑膜细胞和自身反应性淋巴细胞的凋亡;调节脾脏细胞Th1/Th2细胞因子平衡相关.本研究为进一步阐明RA的发病机理奠定了重要基础,为有效治疗RA提供了新思路.     

HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响

目的 探讨HTLV-1病毒Tax蛋白对T淋巴细胞DcR3基因表达的影响.方法 构建pGL3-DcR3-luc( -1010 bp- +114 bp)荧光素酶报告基因;利用脂质体介导的方法将pGL3 -DcR3 -luc转染到MT-2、TaxP、Jurkat细胞中,48h后检测DcR3荧光素酶报告基因的活性;利用脂质体介导的方法将梯度剂量的pCMV -Tax转染入Jurkat细胞,48 h后提RNA逆转录,real-time PCR检测DcR3 mRNA 的表达的变化;选用流式细胞技术检测MT-2、TaxP、Jurkat细胞表面DcR3蛋白的表达.结果 成功构建DcR3基因调控序列荧光素酶报告基因pGL3-DcR3-luc;荧光素酶活性的检测显示,与对照组相比,MT2细胞荧光素酶活性升高了32.07± 12.43倍,TaxP细胞荧光素酶活性升高了13.27±4.04倍,Jurkat细胞荧光素酶活性升高了1.26±0.49倍.与Jurkat细胞相比,MT2细胞和TaxP细胞的相对荧光素酶活性明显升高(P＜0.01);Real-time PCR结果显示,4组Ct内参/Ct目的基因的值依次是0.40±0.02、0.44±0.01、0.47±0.02、0.53±0.02; DcR3 mRNA的表达与转染pCMV-Tax存在着剂量依赖性(P＜0.05).流式细胞技术检测,MT2和TaxP细胞实验组DcR3蛋白的表达较对照组Jurkat细胞表达的高(P＜0.05).MT2细胞的结果是33.1 ±9.9,TaxP细胞的结果是35.1 ±4.8,Jurkat细胞的结果是16.9±2.3.结论 Tax蛋白能够促进DcR3基因在T细胞中的表达.     

热休克蛋白65与免疫关系研究进展

原核生物的Hsp65与免疫的关系非常密切.它既具有免疫原性又具有反应原性,可作为一种保护性抗原,而且与人的Hsp60高度同源,与动脉粥样硬化、佐剂性关节炎、糖尿病等自身免疫病有关,在上述疾病的早期可诱导免疫反应,后期可产生保护作用.更为重要的是,它形成的二聚体结构可导致某些疏水区暴露在表面,有利于非特异性地结合抗原肽 作为分子佐剂,与其他抗原构建的复合物具有交叉递呈功能,尤其能激活细胞毒性T细胞,可用于肿瘤或病毒病的预防和治疗免疫.有研究者将.其应用于开发与其相关的预防或治疗分枝杆菌病、肿瘤或病毒性疾病的疫苗中,并取得了初步成效.     

泛素-蛋白酶体系统与免疫系统的关系

泛素-蛋白酶体系统是一种广泛存在于真核细胞内的依赖atp的高选择性的蛋白质降解体系,具有清除衰老、损伤以及错误折叠蛋白的功能,其在细胞周期调控、细胞凋亡、受体信号传导等过程中都有重要的作用。泛素-蛋白酶体系统与免疫系统之间联系密切,因而研究其在感染免疫、自身免疫和肿瘤免疫中的调控很有必要。     

DcR3重组蛋白对糖尿病大鼠心肌组织凋亡相关分子的表达及细胞凋亡的作用

目的:研究诱骗受体3(DcR3)在正常大鼠、糖尿病(DM)大鼠心肌组织的表达,DcR3重组蛋白对心肌组织凋亡相关分子表达以及心肌细胞凋亡的影响,探讨DcR3对DM大鼠心肌细胞凋亡的作用。方法:一次性腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠DM模型,尾静脉注射不同剂量的DcR3重组蛋白[1.2 mg/(鼠·d)、0.8 mg/(鼠·d)、0.4 mg/(鼠·d)]40 d。RTPCR检测心肌组织DcR3 mRNA、Fas mRNA、FasL mRNA的表达。Wester blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-8的表达。双抗夹心ELISA检测血液中IL-1β、TNF-α及LFN-γ水平的变化,HE染色观察心肌细胞凋亡的百分率。结果:DcR3治疗组大鼠与DM组比较心肌组织DcR3 mRNA高表达,Fas mRNA、FasL mRNA表达下调。Caspase-8蛋白水平下调,Bcl-2蛋白水平上调,以中剂量组的作用最明显。各DcR3治疗组血清IL-1β、TNF-α和IFN-γ水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01)。心肌细胞凋亡的百分率下降(P<0.05)。结论:DcR3重组蛋白有抑制DM大鼠心肌细胞凋亡的作用,其机制与竞争Fas,阻断FasL诱导细胞凋亡,心肌细胞表达DcR3,凋亡相关因子Caspase-8下调、Bcl-2上调及细胞因子水平的降低有关。     

诱骗受体3与肿瘤关系的研究进展

诱骗受体3(DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体超家族新成员,是一种可溶性受体,在一些疾病尤其是恶性肿瘤中过表达,与死亡受体3(DR3)相反,DcR3缺乏死亡结构域.过去对于DCR3的研究集中肿瘤,即DcR3可阻断细胞的凋亡进而造成免疫逃逸和化疗耐受,近来对于DcR3的研究多集中于炎症,以及DcR3及其类似物在特定疾病如自身免疫性疾病中的预防和治疗作用,本文综述了DcR3在肿瘤、炎症及其临床应用中的研究进展.     

LIGHT/TNFSF14研究进展

LIGHT／TNFSF14是近年来发现的肿瘤坏死因子超家族成员，具有共刺激T淋巴细胞、诱导iDC成熟、促进肿瘤细胞凋亡的生物学功能，在自身免疫病、移植物抗宿主病（GVHD）及抗肿瘤免疫中发挥重要的调节作用。     

抗人DcR3单克隆抗体的研制及其鉴定

目的:制备抗人DcR3单克隆抗体(mAb),并鉴定其特异性.方法:纯化的His-DcR3融合蛋白免疫小鼠,应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗人DcR3 mAb并进行纯化,纯化后的抗体经Western blot和ELISA方法鉴定其特异性、Ig亚型和效价.结果:获得5株稳定分泌抗DcR3 mAb的杂交瘤细胞,均属IgG1亚型,其腹水抗体效价为1×10-5 ～1×10-7,Western blot显示5株细胞分泌的mAb均可识别DcR3蛋白,其中1株(1B1)可与SW480细胞成分反应.结论:成功建立稳定分泌抗人DcR3 mAb的杂交瘤细胞株,其分泌的抗体特异性强、效价高,为研究DcR3在组织中的表达、分布及研制ELISA试剂盒奠定基础.     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3基因与肝癌关系的研究进展

原发性肝癌(PHC)是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一.肝癌的发生是由化学致癌物、病毒、遗传等多病因作用引起的.其恶性程度高,预后差,进展较快.早期诊断、治疗对肝癌患者的预后至关重要,目前临床诊断主要依靠影像学检查及肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP).但AFP的敏感性和特异性均不高.近年来,一种新的肝癌肿瘤学标志物磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)成为不少国内外学者研究热点,其在肝癌中无论mRNA水平还是蛋白质水平均为高表达,GPC3对PHC的诊断具有较高的敏感性和特异性,其在AFP阴性的肝癌中亦有表达.