人β防御素-2基因的克隆及原核表达载体的构建

目的构建人β-防御素2的融合性原核表达载体，为今后基因工程手段表达纯化及生产人β-防御素-2奠定基础。方法体外基因合成人β-防御素2（HBD-2）的基因片段，并克隆人pMD18T中间载体中，经酶切鉴定后再克隆人pET32a原核表达载体中，与载体中所固有的TrX—A形成融合基因。结果构建的融合性原核表达载体经酶切鉴定无突变发生。结论成功地构建了pET-32a-（HBD-2）。     

反复肺炎患儿血清β-防御素-2水平及临床意义

目的:探讨血清中β-防御素-2 (human β-defensins 2,hBD-2)在反复肺炎发病中的可能作用.方法:收集50例5～ 14岁反复肺炎和50例健康儿童的血清,处理后应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测hBD-2和IL-8浓度,应用电阻法检测血液中性粒细胞比例,并分析hBD-2与IL-8、中性粒细胞比例之间的相关性.结果:(1)反复肺炎组和健康对照组hBD-2浓度比较差异无显著性(F=1.12,P=0.727).(2)反复肺炎组IL-8浓度和中性粒细胞比例显著高于健康对照组,两组比较差异有显著性(F=1.25,P=0.00;F=1,P=0.00).(3)反复肺炎组hBD-2与IL-8、中性粒细胞比例无相关性(r=0.02,P＞0.05;r=0.13,P＞ 0.05);IL-8与中性粒细胞比例呈正相关(r=0.62,P=0.00).结论:反复肺炎患儿急性感染期血清hBD-2表达水平没有升高,提示呼吸道防御功能存在障碍,这可能是反复肺炎患儿呼吸道容易发生微生物感染的原因之一.     

人β-防御素2在女性生殖周期中的变化

目的:观察血清人β-防御素2(HβD-2)水平在女性生殖周期中的变化,了解并分析促排卵过程中大剂量外源性人绝经期促性腺激素(HMG)影响下血清HβD-2水平的变化。方法:选择因无排卵或稀发排卵应用HMG促排卵行宫腔内人工授精(IUI)者30例为IUI组,15例健康女性为对照组。IUI组于用药周期月经第2天、IUI当日,对照组于月经第2天、围排卵期采集空腹晨血,RIA法测定促卵泡生成激素、促黄体生成激素、雌二醇基础水平,夹心ELISA法测定血清HβD-2水平,并B超监测卵泡发育、子宫内膜厚度。结果:IUI组和对照组月经期血清HβD-2水平与围排卵期相比,均显著增高(P<0.05)。围排卵期血清HβD-2水平与成熟卵泡数量、子宫内膜厚度及外源性HMG用量均无明显的相关性,r分别为0.09(P>0.05)、0.04(P>0.05)、0.28(P>0.05)。结论:血清HβD-2水平在女性生殖周期中可能呈周期性变化,月经期较高,围排卵期降低。外源性HMG对血清HβD-2无明显影响。     

生长激素调素在幽门螺杆菌阳性的慢性胃炎患者胃窦黏膜中的表达

目的检测生长激素调素在幽门螺杆菌(Hp)阳性的慢性胃炎患者胃窦黏膜组织中的表达。方法随机选择门诊慢性胃炎患者18例,取胃窦黏膜组织,以快速尿素酶及改良Giemsa染色两种方法判断Hp感染。以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测标本中生长激素调素mRNA的表达。结果18例患者中,Hp阳性者10例,阴性者8例;10例Hp阳性患者中7例呈现生长激素调素的高表达,8例Hp阴性患者中仅3例呈现生长激素调素的低表达(P=0.004)。结论生长激素调素在Hp阳性的慢性胃炎患者胃窦黏膜中呈高表达,提示生长激素调素可能是介导Hp阳性的慢性胃炎患者胃肠功能紊乱的原因之一。     

细胞因子在幽门螺杆菌相关胃炎中的分泌及临床意义

目的探讨幽门螺杆菌(HP)相关胃炎血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素8(IL-8)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平及临床意义。方法选择110例慢性浅表性胃炎患者为研究对象,其中HP阳性者58例,HP阴性者52例。比较两组患者TNF-α、IL-8及hs-CRP水平及根除HP治疗前后炎症因子的改变。结果 HP阳性者TNF-α、IL-8及hs-CRP水平显著高于HP阴性者(P<0.01);HP阳性组活动期胃炎患者TNF-α、IL-8及hs-CRP水平显著高于非活动期患者(P<0.01);根除HP治疗后TNF-α、IL-8及hs-CRP水平显著下降(P<0.01)。结论细胞因子TNF-α、IL-8及hs-CRP水平的升高与胃黏膜HP感染密切相关,可作为活动期胃炎及治疗效果的判断指标之一。     

幽门螺杆菌感染胃炎患儿胃黏膜ASICs表达在胃肠道动力中的作用

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染患儿胃黏膜中酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)的表达及其在Hp 感染胃炎胃肠功能中的作用.方法 将22例经内镜诊断的胃炎患者分为幽门螺杆菌阳性组[Hp(+),n = 11]和阴性组[Hp(-),n = ...     

幽门螺杆菌感染对胃黏膜三叶因子2表达的影响

目的探讨幽门螺杆菌感染(Hp)对慢性胃炎胃黏膜三叶因子2(TFF2)表达的影响。方法采用免疫组化及半定量的分析方法检测Hp阳性组与Hp阴性组,以及Hp根除前后胃窦黏膜TFF2表达量的变化。结果TFF2阳性物质表达于胃黏膜上皮近基底部的胃腺细胞的细胞质内,呈棕黄色颗粒;与Hp阴性组比较,Hp阳性组的TFF2染色评分显著减少(P<0.05);根除Hp后的胃黏膜较根除前TFF2的表达量显著增加(P<0.05)。结论Hp感染导致胃黏膜TFF2表达减少,提示TFF2在Hp相关性胃炎的发病机制中起一定作用。     

幽门螺杆菌感染对胃黏膜局部IL-2及IL-1O表达的影响

目的 探计幽门螺杆菌(H.pylori)感染对患者胃黏膜局部IL-2及IL-10表达的影响.方法 联合胃镜检测以及病理检查将患者分为对照组和胃炎组、溃疡组和胃癌组,胃炎、胃癌或溃疡的诊断依据胃镜下所见和病理检测结果,H.pylori感染以镜下组织学观察找到H.pylori为依据,IL-2和IL-10的表达采用免疫组化方法检测.结果 胃炎组和胃癌组与对照组相比,IL-2表达降低(P＜0.05),IL-10在各组患者中表达也有差异,但差异无统计学意义(P＞0.05);所有患者H.pylori总的感染率为49.57％(57/115),H.pylori感染的胃癌组IL-2表达率仅为11.11％,明显低于对照组(P＜0.05).结论 胃炎、溃疡和胃癌患者胃黏膜中普遍存在IL-2表达降低,H.pylori感染可能进一步加重IL-2表达降低的现象.     

人β防御素2基因在衣原体感染女性生殖道组织中的表达

【目的】检测人β防御素-2基因(hBD-2)在正常及衣原体感染的女性宫颈的表达情况及与炎症程度的关系。【方法】采用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测正常及衣原体感染的女性宫颈中hBD-2基因的表达情况,用-βactin作内参照。【结果】在正常及衣原体感染女性宫颈中hBD-2基因均有表达,且衣原体感染的女性hBD-2基因表达比正常女性的强,差异有显著性(P<0.01)。【结论】hBD-2在正常及衣原体感染的女性宫颈中的高表达,提示hBD-2在正常女性宫颈及在衣原体感染中有着重要的防御作用。     

幽门螺杆菌感染儿童胃粘膜IL-8含量的研究

目的探讨IL-8在儿童幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关性胃炎中的作用。方法82例患儿在胃镜下取胃窦粘膜活检标本,行组织病理学检查,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测胃窦粘膜中IL-8的含量。结果H.pylori阳性患儿胃粘膜IL-8含量为(15.2±5.4)pg/mg,H.pylori阴性患儿胃粘膜IL-8含量为(3.3±1.3)pg/mg,两组比较差异有统计学意义(t=13.315,P<0.001)。不同的H.pylori定植密度其IL-8含量差异无统计学意义(t=1.831,P=0.074)。H.pylori阳性患儿活动性炎症及淋巴滤泡检出率和阴性患儿比较差异有统计学意义(χ2值分别为12.286、6.413,P均<0.01)。活动性胃炎胃粘膜IL-8含量为(20.0±5.0)pg/mg,非活动性胃炎胃粘膜IL-8含量为(12.8±3.8)pg/mg;有淋巴滤泡形成胃粘膜IL-8含量为(21.1±3.4)pg/mg,无淋巴滤泡形成胃粘膜IL-8含量为(13.5±4.7)pg/mg;差异有统计学意义(t值分别为5.306、4.942,P均<0.01)。结论儿童感染H.pylori后胃粘膜上皮组织可检测到高浓度的IL-8,IL-8能引起中性粒细胞浸润及淋巴滤泡形成,提示IL-8在H.pylori感染后胃粘膜组织的炎症反应中具有重要作用。     

幽门螺杆菌感染胃黏膜组织的DNA及RNA氧化损伤水平比较及致癌机制探讨

目的通过检测幽门螺杆菌(Hp)感染患者及正常对照人群胃黏膜组织DNA及RNA氧化损伤水平,探讨氧化应激因素在HP感染致癌中的作用。方法 60例Hp感染及无Hp感染胃黏膜组织石蜡包埋,切片免疫组织化学法染色,研究级显微镜下观察采集图像,IPP软件定量分析,检测DNA及RNA氧化产物水平,并行统计学分析。结果 Hp感染患者与正常人胃黏膜局部RNA氧化水平标记物8-oxo Gsn的免疫组化阳性染色OD值分别为0.117±0.015和0.073±0.012,差异有统计学意义;Hp感染患者与正常人胃黏膜局部DNA氧化水平标记物8-oxod Gsn的免疫组化阳性染色OD值分别为0.220±0.036和0.210±0.055,差异无统计学意义。结论 Hp感染致人胃黏膜局部RNA氧化水平增高,可能与Hp致癌发病机制相关。     

幽门螺杆菌感染与胃癌组织中hMSH2、p27蛋白表达的关系

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染与错配修复基因hMSH2和抑癌基因p27蛋白在胃癌组织中表达的相关性。方法用免疫组化SP法对65例胃癌患者癌组织进行hMSH2和p27蛋白检测,其中Hp感染32例,非Hp感染33例。结果65例胃癌患者癌组织中hMSH2蛋白表达率为66.15%,在非Hp感染组为81.82%,明显高于Hp感染组的50.00%(P<0.05);65例胃癌患者癌组织中p27蛋白的表达率为47.69%,非Hp感染组与Hp感染组的表达率分别为48.48%与46.88%,两组比较无显著性差异(P>0.05)。结论Hp感染可导致hMSH2蛋白表达降低,可能使hMSH2识别碱基错配的能力下降,从而使失活的p27基因得不到有效修复,导致胃癌的发生、发展及向恶性转化。     

在胃癌前病变中幽门螺杆菌的联合检测

目的 阐明幽门螺杆菌在胃癌前病变中的感染情况。方法 应用ＣＬＯ－ｔｅｓｔ、组织学和分子生物学方法联合检测患者胃粘膜活检标本中幽门螺杆菌感染。结果 不典型增生、肠化生组织中ＨＰ的检出率显著高于正常胃粘膜。ＨＰ感染和患者年龄、性别无关。结论 ＨＰ可能在从浅表性胃炎→肠化生→不典型增生→胃癌的发生过程中起一定作用。     

胃癌变过程中幽门螺杆菌感染与Ki67和P27蛋白表达的意义

目的探讨胃癌变过程中胃黏膜上皮细胞幽门螺杆菌（Hp）感染与细胞增生及抑癌基因P27蛋白表达的意义。方法用快速尿素酶法、美蓝法及免疫组化法联合检测312例胃镜活检标本Hp感染率,其中慢性浅表性胃炎（CSG）112例、慢性萎缩性胃炎（CAG）100例、胃癌（GC）100例。并采用免疫组化技术分别检测标本中Ki67和P27蛋白的表达,观察Hp感染对Ki-67和P27蛋白表达的影响。结果运用三种方法联合检测,所有病例、CSG、CAG和GC中Hp感染率分别为49．0％（158／312）、25．9％（29／112）、53．0％（53／100）、71．0％（71／100）。CAG组明显高于CSG组（P〈0．05）;GC组明显高于CAG组和CSG组P〈0．05,P〈0．01）。所有病例中均能检测到Ki=67和P27蛋白的表达,Ki67在CSG、CAG、GC中的阳性表达率为35．7％（40／112）,58．0％（58／100）,64．0％（64／100）。且GC组明显高于CSG组（P〈0．05）;P27在CSG、CAG、GC中的表达率为36．6％（41／112）,32．0％（32／100）,29．0％（29／100）。随着病变进展,P27的表达逐渐下降,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论Hp在癌组织阳性率明显高于非癌组织,胃癌可能是Hp长期感染与其他因素共同作用的结果。Hp感染可诱导胃黏膜Ki-67和P27的表达异常,使抑制上皮生长与调节细胞凋亡信号传导的转化因子受体数目减少,引起胃黏膜上皮细胞的过度增生,同时也与抑癌基因P27的失活有关。     

Gastrokine2在胃癌中的表达及临床意义

目的探讨Gastrokine 2在胃癌的发生、发展过程中的作用。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹法检测76例诊断明确的胃癌患者的癌组织及癌旁组织中Gastrokine2的表达,并分析胃癌组织中mRNA和蛋白的表达与临床病理特征之间的关系。结果 Gastrokine 2 mRNA和蛋白在胃癌组织中的表达均低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0.01）。胃癌组织中Gastrokine 2 mRNA的表达与肿瘤的位置、浸润深度、分化程度、Lauren分型、淋巴结转移及患者的性别和年龄均无关（P〉0.01）,而幽门螺杆菌（HP）阳性胃癌患者的癌组织中Gastrokine 2 mRNA表达低于HP阴性者（P〈0.01）,Ⅰ期胃癌患者的Gastrokine 2 mRNA表达量高于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者（P〈0.01）。胃癌组织中Gastrokine 2蛋白的表达与肿瘤的位置、浸润深度、分化程度、Lauren分型、淋巴结转移、TNM分期、幽门螺杆菌感染及患者的性别和年龄均无关（P〉0.01）。结论 Gastrokine 2在胃癌组织中的表达显著降低,它作为一种保护性基因在胃癌的发生和发展中扮演着重要角色,随着胃癌的进展,其抑制肿瘤的作用降低,同时HP感染可能减弱其对胃黏膜的保护作用。     

产细胞毒素幽门螺杆菌感染与胃黏膜肠上皮化生的关系：附180例检测结果

目的：探讨产细胞毒素幽门杆菌（Ｈｐ）感染与慢性萎缩性胃炎肠化生之间的关系。方法：测定１８０例伴幽门螺杆菌感染的慢性萎缩性胃炎患者的抗Ｈｐ细胞毒素相关蛋白Ａ免疫球蛋白Ｇ（ＣａｇＡＨｐ－ＩｇＧ）,并将结果与胃黏膜肠化生程度进行比较。结果：单纯萎缩性胃炎４０例中,ＣａｇＡＨｐ－ＩｇＧ阳性１２例,占３０％,萎缩伴轻度肠化生９０例中阳性６１例占６８％;萎缩伴中度肠化生３８例中阳性２８例占７４％;萎缩伴重度肠     

胃黏膜病变组织中RASAL_1基因的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的探讨RASAL1基因在幽门螺杆菌(Hp)感染胃黏膜组织中的变化及其在胃癌发生发展中的意义。方法内镜及活检病理证实的慢性胃炎58例(慢性胃炎组)、肠化生及异型增生58例(肠化生及异型增生组)和胃癌58例(胃癌组),分别用13C-呼气试验及Giemsa染色检测Hp,链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)免疫组化检测RASAL1,比较各组及组内Hp阳性亚组和Hp阴性亚组中RASAL1的表达。结果慢性胃炎组、肠化生及异型增生组和胃癌组中RASAL1的阳性率分别为89.66%、56.90%和13.79%,呈递减趋势。各组Hp阳性亚组与Hp阴性亚组中RASAL1的阳性率分别为,慢性胃炎组:73.33%和96.43%,肠化生及异型增生组:40.63%和76.92%,胃癌组:14.29%与13.51%,两两比较均有显著差异。结论 Hp感染可降低胃黏膜RASAL1表达,削弱其对胃黏膜损伤的保护作用,促进了胃癌的发生发展。     

胃癌患者幽门螺杆菌感染和Smad4表达及其临床病理学意义的研究

目的 检测幽门螺杆菌(Hp)阳性和阴性胃癌患者的病变组织中Smad4的表达分布,并分析其与胃癌患者临床病理学特征之间的关系.方法 选取39例胃癌患者的胃镜活检组织标本,采用快速尿素酶试验(RUT)结合Giemsa染色判断Hp感染,采用冰冻切片免疫组化染色方法在蛋白水平检测Smad4的表达分布.结果 胃癌组织中Hp阳性者Smad4表达(42.9%)显著低于其阴性者(90.9%,P<0.05),胃癌患者Hp的感染与Smad4的表达呈负相关(r=-0.436,P<0.05).Smad4在胃癌组织中的表达(56.4%)显著低于其在正常胃黏膜中的表达(100%,P<0.05).Smad4的表达与胃癌的浸润及细胞分化程度相关,浸润程度越重、分化程度越低,其阳性表达率亦越低(P<0.05);而Smad4蛋白的表达与性别、年龄、TNM分期、淋巴结及远处转移无关.结论 胃癌患者中Hp感染与Smad4的表达有相关性,Smad4在胃癌发生、发展中发挥着重要作用,可能作为胃癌诊断和预后的分子标志,Hp可能通过Smad4而在胃癌的发生发展中起到重要作用.