IL-6对沙眼衣原体K血清型诱导细胞凋亡的影响

目的探讨IL-6对沙眼衣原体(Ct)K血清型诱导细胞凋亡的影响。方法用ELISA双抗体夹心法检测衣原体感染细胞分泌IL-6水平变化;用流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞百分率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡“梯状带”,观察anti-IL-6抗体拮抗IL-6活性对沙眼衣原体K血清型感染的McCoy细胞凋亡的影响。结果沙眼衣原体K血清型感染细胞分泌IL-6水平明显升高(P<0.05);感染同时加anti-IL-6抗体组在感染36、48、60 h细胞凋亡百分率均显著高于相应的无感染对照组及沙眼衣原体K血清型感染组(P<0.01),且呈时间依赖性(P<0.01)。结论IL-6可部分抑制沙眼衣原体K血清型诱导的McCoy细胞凋亡。     

蛋白质组学筛选沙眼衣原体感染依赖性免疫优势抗原

目的：采用蛋白质组学方法筛选沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）感染依赖性免疫优势抗原。方法：将纯化的Ct D型标准株EB经紫外线照射制备UV-EB,然后将未经处理的活EB和紫外线处理的UV-EB分别感染体外培养的HeLa细胞,间接免疫荧光法检测紫外线对EB的灭活效果;分别将低剂量活EB滴鼻感染小鼠或将较高剂量UV-EB经肌肉接种免疫小鼠,首先检测两种接种方式下Ct在体内的增殖情况,然后收集两组小鼠的血清,分别与Ct D型全基因组908个开放读码框编码的GST-Ct融合蛋白进行ELISA反应,蛋白质组学筛选仅与活EB感染组小鼠血清反应且反应频率高的Ct感染依赖性免疫优势抗原;最后用筛选到的抗原体外刺激Ct生殖道感染小鼠的脾细胞,ELISA法检测细胞因子IFN-γ的产生情况。结果：经紫外线灭活的UV-EB体外不能感染HeLa细胞,肌肉接种免疫小鼠后也不能在小鼠肌肉组织内增殖,而活EB滴鼻感染组小鼠的肺组织中可检出大量的Ct;活EB滴鼻感染组小鼠与UV-EB肌肉接种免疫组小鼠的血清抗Ct抗体滴度差异无显著统计学意义;将两组小鼠血清分别与Ct全基因组编码的蛋白反应,通过蛋白质组学方法共鉴定出60个抗原能被至少1份小鼠血清识别;22个抗原能同时被两组或任一组血清以≥50%的频率识别,为Ct免疫优势抗原,其中5个抗原仅被活EB滴鼻免疫组血清优势识别,即为Ct感染依赖性免疫优势抗原;该类抗原体外刺激小鼠脾细胞,能诱导良好的Th1型细胞免疫回忆应答。结论：筛选获得了Ct D型感染依赖性免疫优势抗原,为Ct亚单位疫苗研究提供了新的研究靶标。     

衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1对沙眼衣原体的作用研究

目的 将原核表达纯化的衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1作用于沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct),以期发现该Vp1蛋白对Ct生长的影响.方法 原核表达并纯化噬菌体phiCPG1的衣壳蛋白Vp1,将纯化后的蛋白复性后与Ct的标准株或临床野生株(终浓度为53μg/ml)室温孵育3h后接种至单层致密McCoy细胞中,培养过程中均加入了了 Vp1蛋白,48 h后碘染色包涵体计数和透射电镜观察Vp1蛋白对Ct生长的影响;MTT法检测Vp1蛋白对McCoy细胞系的细胞毒性作用;液体培养基稀释法检测Vp1蛋白对大肠杆菌BL21和DH5α的抗菌作用.结果 衣壳蛋白Vp1对Q标准株E和D型的抑制率分别为78％和72％,对Ct临床野生株的抑制率为40％～70％,透射电镜结果显示Vp1蛋白能够抑制Ct的正常发育,使包涵体内出现异常增大的网状体.而该Vp1蛋白对非衣原体的其他生物体如大肠杆菌BL21、DH5α和真核细胞McCoy的生长没有影响.结论 噬菌体衣壳蛋白Vp1对Ct的生长具有明显的抑制作用,为临床上Ct感染的治疗提供了新的思路.     

1,25-二羟维生素D_3对胰岛β细胞免疫保护作用

目的研究1,25-二羟维生素D3对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下4组作用：①（IL-1β＋IFN-γ）组,②（IL-1β＋IFN-γ＋D3）组,③D3组,④对照组（DMEM）。采用酶联免疫吸附分析（ELISA）检测培养上清液中IL-4、IFN-γ水平,用硝酸还原酶法检测上清液NO水平,用化学发光法检测上清液胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）、IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）;②IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）;③IL-1β＋IFN-γ＋D3刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,胰岛素分泌增加（P〈0.05）。结论 1,25-二羟维生素D3可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

IFN—γ与TNF联合治疗结核菌感染小鼠疗效及机理的研究

目的 研究IFN-γ和TNF对结核分枝杆菌感染小鼠的疗效及作用机制。方法 小鼠感染结核分枝杆菌后第5d给予IFN-γ和/或INF治疗,观察治疗后半数死亡时间、一定时间内的死亡率、脾脏内活菌数,检测脾细胞分泌IFN-γ和IL-4水平（ELISA法）及Mφ产生NO水平（用Griess试剂）。结果 与单纯攻毒组比较,联用IFN-γ和TNF组感染小鼠半数死亡时间明显延长、35d内的死亡率从100%降低到20%、脾脏内活菌数显著减少,脾细胞IFN-γ分泌水平明显升高,IL-4分泌水平显著降低,Mφ产生NO水平明显增加。结论 IFN-γ和TNF联合诱导Mφ产生NO,促进TH1细胞反应,抑制TH2细胞反应,改变了TH1/TH2平衡,对结核分枝杆菌感染小鼠产生保护效应。     

Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb抑制由IL-23诱导PBMC IFN-γ的产生

目的：探讨重组人白介素23（IL-23）诱导正常人PBMC IFN-γ的产生，细胞亚群和调节因素。方法：正常人PBMC在不同条件下与IL-23进行培养，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪，分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的细胞亚群。结果：IL-23呈剂量依赖性诱导PBMC IFN-γ产生，并可与IL-2协同诱导IFN-γ的产生。细胞亚群分析的结果表明，IL-23诱导高表达CD56^＊NK细胞产生IFN-γ，对CD4^＊和CD8^＊T细胞无明显作用。Th2细胞因子和抗IL-12受体β1 mAb（IL-12Rβ1）抑制IL-23诱导IFN-γ产生。结论：IL-23可直接作用于CD3^＊CD56^＊NK细胞，诱导产生IFN-γ。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制IL-23诱导IFN-γ产生，提示可以用于由IL-23引起自身免疫病的治疗。     

雷公藤单体T4对胰岛β细胞免疫保护作用的机制探讨

目的探讨雷公藤单体T4对胰岛β细胞的免疫保护作用,为胰岛β细胞的免疫保护治疗提供实验依据。方法培养胰岛β细胞株NIT细胞及正常对照外周血单个核细胞,分别与以下6组作用：①IL-1β＋IFN-γ组;②IL-1β＋IFN-γ＋DXM组;③IL-1β＋IFN-γ＋T4组;④T4组;⑤DXM组;⑥对照组（DMEM）。ELISA法检测培养上清IL-4、IFN-γ水平,硝酸还原酶法检测上清一氧化氮水平,化学发光法检测上清胰岛素水平。结果①IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞分泌IL-4水平较其他各组减少（P〈0.01）,IFN-γ分泌比其他各组增多（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ比其他各组降低（P〈0.01）。②T4＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ刺激组相比,分泌IL-4水平增高（P〈0.01）,IFN-γ减少（P〈0.01）,IL-4/IFN-γ增高（P〈0.01）。③IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞分泌NO较其他各组增高（P〈0.01）,胰岛素分泌减少（vsIL-1β＋IFN-γ＋T4组、IL-1β＋IFN-γ＋DXM组,P〈0.05;vsT4组、DXM组、对照组,P〈0.01）。④T4＋IL-1β＋IFN-γ刺激的NIT-1细胞与IL-1β＋IFN-γ组相比,分泌NO水平减少（P〈0.01）,Ins增加（P〈0.05）;与IL-1β＋IFN-γ＋DXM组相比,NO分泌减少（P〈0.05）。结论 T4可减轻IL-1β＋IFN-γ对NIT细胞的损伤作用,保护NIT细胞的胰岛素分泌功能。     

单链双特异性抗体(BHL-I)介导的细胞毒作用及其可能机制研究

目的：观察单链双特异性抗体（BHL-I）介导的PBL对靶细胞SKOV3的杀伤作用，并研究其细胞毒作用的可能机制。方法：MTT法检测在不同效靶比、不同作用时间、不同靶细胞（SKOV3、BEL-7402）、不同BHL-I浓度等条件下，BHL-I介导PBL对靶细胞的杀伤作用；RT-PCR检测杀伤过程中PBL的穿孔素（Perforin）、颗粒酶（GranzymeB）mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ含量变化。结果：BHL-I介导的PBL对SKOV3细胞毒作用明显高于对BEL-7402的，并且在效靶比10∶1、作用36小时、BHL-I浓度为25μg/ml时，PBL对靶细胞SKOV3的细胞毒作用最为显著；在IL-2存在下，BHL-I可引起Perforin、GranzymeB mRNA较高表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ含量升高，当作用时间为72小时时，这些细胞因子的表达有所下降。结论：BHL-I能介导PBL对表达有相应靶抗原的SKOV3细胞具有高效杀伤作用，其细胞毒作用可能与效应细胞表达Perforin、GranzymeB、TNF-α、IFN-γ等有关。     

IFN-γ在沙眼衣原体呼吸道感染中免疫防御机制的探讨

目的:检测与IFN-γ作用相关的酶吲哚胺2,3二氧化酶(IDO)、诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)和NADPH氧化酶(ox)gp91在沙眼衣原体呼吸道感染中的表达及与机体防御的关系,探讨衣原体感染中IFN-γ免疫防御作用的机制.方法:用沙眼衣原体小鼠肺炎株(MoPn)通过鼻腔感染C57BL/6(H-2b)小鼠,用过氧化物酶连接的鼠抗衣原体脂多糖单抗染色HeLa 229细胞,检测衣原体在肺组织的生长;用RT-PCR检测衣原体感染后第7及14天小鼠肺组织IFN-γ、IDO、iNOS和gp91NADPH ox mRNA表达.结果:MoPn呼吸道感染后小鼠肺组织匀浆衣原体活性测定,于感染后第2天,HeLa 229细胞内可见有衣原体包涵体生长,IFU值增高,于感染后第7天IFU达最高水平,以后逐渐下降,至感染后21天基本恢复到基线水平.与未感染的对照组比较,Th1细胞因子IFN-γ于感染后第7天表达显著增高,感染后14天有所降低,但仍维持较高水平;同时衣原体感染可显著诱导与IFN-γ作用相关的三种酶IDO、iNOS和gp91 NADPH ox在小鼠肺组织的表达,感染后第7及14天,IDO,iNOS及gp91 NADPH ox的表达与对照组比较均有显著差异,其中IDO和gp91 NADPH ox于感染后第7天mRNA表达增高显著(P＜0.01),14天略有下降(P＜0.05).结论:衣原体呼吸道感染诱导Th1细胞因子IFN-γ mRNA高表达,参与宿主对衣原体的清除及机体免疫防御,此作用可能与其相应的酶IDO、iNOS和gp91 NADPH ox表达增高有关.     

大鼠脑缺血后IFN-γ mRNA的表达

目的：检测SD大鼠脑缺血后缺血脑组织和外周免疫淋巴细胞干扰素-γ（IFN-γ）mRNA的表达，探讨IFN-γ在脑缺血中的作用。方法：用线拴封闭大脑中动脉的方法制作脑缺血动物模型，采用原位杂交的方法检测缺血脑组织及外周淋巴组织中IFN-γ mRNA动态的变化情况。采用免疫组织化学方法检测缺血脑组织中浸润的T淋巴细胞数量。结合免疫组化和寡核苷酸探针杂交方法，检测T细胞表达IFN-γ。结果：①缺血脑半球IFN-γ mRNA含量较假手术组明显增高（P〈0．001），且随着脑缺血时间延长其表达量增加；②IFN-γ mRNA表达数量随损伤面积扩大而增加（R=0．9780，P〈0．001）；③缺血组外周血单核细胞IFN-γ mRNA水平较假手术组明显增高，12小时达高峰（P〈0．001），而脾淋巴细胞、淋巴结细胞IFN-γ mRNA水平也均比假手术组明显增高，且随着脑缺血时间延长表达量增加（P〈0．05、P〈0．01、P〈0．001）；④随着脑缺血时间的延长，脑内浸润的T细胞数量显著增加（P〈0．05、P〈0．01、P〈0．001）。结论：IFN-γ mRNA表达主要参与大脑损伤后期反应过程，可能加重脑缺血后期的炎症反应。