抗人C1q杂交瘤细胞中一未知DNA片段的克隆与分析

使用一对ＩｇＶＨ通用引物，应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，从分泌抗人Ｃ１ｑＭｃＡｂ的Ｂ６杂交瘤细胞株总ＲＮＡ扩增出－３８７ｂｐ的ＤＮＡ片段。通过计算机网络系统对其进行序列的类似性检索，未发现与之一致或显著相似的序列。     

抗人C1—抑制物单链抗体的构建

由一株抗人Ｃ１－抑物单克隆抗体鼠杂交瘤细胞提取总ＲＮＡ，合成２对与免疫蛋白可变区ＦＲ１和ＦＲ４互补的通用引物，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出抗体的重链可变区和轻链可变区基因。     

CEA单抗轻重链可变区基因的克隆和序列分析

从分泌具有高亲和力和特异性的小鼠抗癌胚抗原（ＣＥＡ）的单抗杂交瘤细胞株Ｃ５０中提取总ＲＮＡ，通过ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了抗体的轻、重链可变区基因。核苷酸序列分析表明所克隆基因分别为抗体轻、重链可变区基因。     

抗CD4单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析

抗ＣＤ４单抗可延长灵长类动物模型同种器官移植物的存活时间和改善实验性自身免疫疾病的病情［１］。在人类，抗ＣＤ４单抗已被成功地用来治疗类风湿性关节炎［２］、系统性红斑狼疮［３］等自身免疫性疾病和肾移植患者的急性和慢性排斥反应［４］。本文对抗ＣＤ４单克隆...     

巴西利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因的克隆化与序列分析

根据硕大利什曼原虫无鞭毛体蛋白的编码基因序列 ,设计并合成无鞭毛体蛋白基因特异性引物 ,以巴西利什曼原虫基因组为模板 ,进行多聚酶链反应 ( PCR)技术扩增 ,获得 550 bp的基因片段 ,经测序证实 ,巴西利什曼原虫无鞭毛体蛋白的基因含有唯一的开放读码框架 ( ORF) ,为 552 nt,编码的无鞭毛体蛋白由 1 83个氨基酸残基 ( aa)组成。与硕大利什曼原虫及亚马逊利什曼原虫无鞭毛体蛋白一级结构的同源性分别为1 0 0 %和 93.4 4%。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体重链可变区DNA的克隆及序列分析

作者从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单抗的杂交瘤细胞１Ａ１２／４Ｄ５中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ。用合成的寡核苷酸引物从中扩增了抗体的重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑取两个阳性克隆进行核苷酸序列分析，见所克隆基因确可编码小鼠抗体的重链可变区。     

人补体C_1－抑制物基因在COS－7细胞中的表达

利用全长人Ｃ１－ＩＮＨｃＤＮＡ片段构建成功可在ＣＯＳ－７细胞中瞬间表达重组人Ｃ１－ＩＮＨ的表达质粒ｐＳＶＬＣ１。通过ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ－７细胞，经体外标记、免疫沉淀和Ｗｅｂｔｅｒｎ印迹后发现，转染细胞可分泌─条分子量约１１０ｋＤ的免疫活性蛋白带。ＥＬＩＳＡ测定其表达水平，在转染后７２ｈ可达２μ／（ｍｌ·１０７细胞）。功能活性测定表明重组Ｃ１－ＩＮＨ具有抑制Ｃ１ｓ酯裂解的作用。     

杜氏利什曼原虫酸性核糖体蛋白—1基因的克隆化与序列分析

根据杜氏利什曼原虫（Ｌ．ｄｏｎｏｖａｎｉ）与婴儿利什曼原虫（Ｌ．ｉｎｆａｎｔｕｍ）基因组核苷酸序列之间具有高度的同源性的特点，设计合成了酸性核糖体蛋白－１（ＡＲＰ－１）基因序列特异性的引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术，以杜氏利什曼原虫的基因组ＤＮＡ为模板，扩增获得了杜氏利什曼原虫的ＡＲＰ－１基因克隆。序列分析表明，杜氏利什曼原虫与婴儿型利什曼原虫ＡＲＰ－１基因的核苷酸序列之间的同源性为９３％，编码的氨基酸残基序列的同源性为９８．０％。     

人单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）基因的PCR扩增、克隆及序列分析

本文报道用植物血凝素（ＰＨＡ）诱导健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ，包括单核细胞和淋巴细胞），提取细胞总ＲＮＡ，反转录合成ｃＤＮＡ第一链，再以其为模板进行ＰＣＲ，得到了编码成熟单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的ｃＤＮＡ。该ｃＤＮＡ用ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切后，回收含ＭＣＰ－１基因的长约２８０ｂｐ的ＤＮＡ片段，插入到经ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ双酶切的ｐＵＣ１９载体中，进行序列分析。结果表明，ＭＣＰ－１中第１２个氨基酸的编码序列与国外报道的不同。由ＴＧＴ变成了ＴＧＣ，但编码相同的氨基酸即半胱氨酸，其余的编码序列则完全相同，说明ＭＣＰ－１的基因型可能存在着多态性。     

一例46,XY女性SRY基因开读框架的克隆及序列分析

采用ＰＣＲ、基因克隆及次克隆和序列分析等分子生物学技术，对一例４６，ＸＹ女性ＳＲＹ基因的开读框架进行了序列分析。结果表明该例患者ＳＲＹ开读框架未发生突变，提示后者不是造成此类性反转的唯一原因。     

HBV Pre S2 3B9单抗轻、重链可变区基因的分离,序列分析及单链可变区抗体基因的构建

3B9(杂交瘤细胞)是一株分泌HBV Pre S2抗原的单抗细胞,为从分子水平分析、了解3B9株进而为制备新一代基因工程抗体奠定基础,用分子生物学技术,提取3B9杂交瘤细胞总RNA,经反转录、PCR分离获得了3B9单抗的轻、重链可变区基因,并利用PCR及双脱氧核苷酸链末端终止法对3B9单抗的可变区基因的核苷酸序列进行了分析。结果表明,3B9单抗轻链隶属小鼠Ig Kappa轻链第Ⅱ亚组,JK_1基因重排;而3B9单抗重链隶属小鼠Ⅰg重链第Ⅱc亚组。在此基础上,作者用一编码疏水性多肽接头的DNA片断将3B9单抗轻、重链可变区基因连接,成功地构建了3B9单抗单链可变区抗体基因。为下一步克隆、表达有抗原结合活性的单链抗体打下了良好的物质基础。     

人Nurr1基因克隆及其在真核细胞中的表达

为探讨Nurr1基因治疗Parkinson病的可行性,本研究克隆了中国人核相关受体1(nuclearrelatedreceptor1,Nurr1)基因,并重组携带Nurr1基因的真核表达载体,为该研究提供分子生物学基础。实验采用反转录聚合酶链式反应(RTPCR)方法从人胎儿脑中获取Nurr1cDNA,将其克隆至pGEMTEasy载体中;测序鉴定后,重组携带Nurr1基因的逆转录病毒载体pLNCX2Nurr1;通过脂质体将重组载体转染PT67包装细胞系,用病毒上清感染NIH3T3细胞系以检测病毒滴度。结果发现,RTPCR扩增得到人Nurr1cDNA片段,序列与GenBank登录的序列一致;将Nurr1基因亚克隆至逆转录病毒载体得到插入方向正确的重组载体pLNCX2Nurr1,病毒上清滴度为2×105CFU/ml。结果表明本实验获得人Nurr1基因cDNA序列,检测到Nurr1基因在真核细胞中表达,并得到较高滴度的病毒上清。     

大鼠Fas配体基因的克隆

目的 研究Ｆａｓ配体（Ｆａｓ ｌｉｇａｎｄ,ＦａｓＬ）在移植免疫方面的作用,克隆其编码的全部ｃＤＮＡ序列,并添加Ｋｏｚａｋ序列,以便在直核细胞高效表达大鼠ＦａｓＬ。方法 从大鼠的睾丸组织中提取总ＲＮＡ。下游引物以ＲＴ－ＰＣＲ的方法扩增出－９３１ｂｐ的ＤＮＡ征段,将这一片段重组于ｐＢＲ－ＲＳＶ载体中,酶切鉴定插人片段正确后进行全列分析。结果 证实该研究所克隆的ｃＤＮＡ是编码正确的大鼠ＦａｓＬ基因,与     

THP—1细胞CD14基因片段的克隆及亚克隆

ＣＤ１４作为革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖的受体，表达在吞噬细胞表面上。虽然已报道有几种脂多糖受体存在，量已充分证明ＣＤ１４为其主要受体。为了进一步研究ＣＤ１４在革兰氏阴性菌感染中的作用机理以及其它受体之间的相互关系，拟通过灭活ＣＤ１４的研究方法以达此目的。为此，首先克隆了ＴＨＰ－１细胞的ＣＤ１４基因片段，通过测序已予确认，并已亚克隆于真核表达载体中，为进一步研究提供了可靠的物质基础。     

培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析

目的 研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。方法 应用免疫组织化学和腺位杂交的方法进行定位研究；从壁细胞中提取总RNA，应用RT-PCR的方法扩增GnRH基因，并对产物进行纯化回收，连接入pUC19载体中扩增，经PCR和酶切鉴定后进行序列分析。结果 大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质，细胞核为阴性；壁细胞内亦可检测到GnRH mRNA杂交信号，信号物质位于细胞质，细胞核为阴性；同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带，经序列分析发现，扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致。结论 大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因，其序列和下丘脑的完全一致，并能自身合成GnRH，说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节。     

人可溶型IL－4受体在大肠杆菌中的基因克隆与表达

利用ＰＣＲ技术从ＴＦＩ细胞中克隆和扩增人ＩＬ－４ＲｃＤＮＡ胞外片段。经ＤＮＡ测序证实后，定向插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０中，井获得了高效表达。表达蛋白经纯化和复性后具有ＩＬ－４结合活性。     

微小隐孢子虫18SrRNA部分基因克隆和序列分析

分别从长春小白鼠、徐州人和南京黄牛的粪便中分离纯化了 3株微小隐孢子虫 (C .parvum)卵囊 ,根据C .parvum 18SrRNA基因序列设计合成引物 ,用PCR扩增卵囊基因组DNA ,其大小为 5 86bp的片段 ,PCR产物用试剂盒回收纯化后直接测序。将测得的序列用DNASTAR软件分析并与国外已发表的相应序列进行同源性比较 ,并绘制系统发育进化树。结果表明 ,徐州人源株与长春鼠源株及徐州人源株与南京黄牛源株同源性均为 97 6 % ;长春鼠源株与南京黄牛源株相应序列同源性为 99 6 %。此 3株C .parvum与国外株相应序列同源性为 81 4 %～ 10 0 0 %。限制性内切酶酶切位点分析仅发现徐州株有 1个特殊的DdeⅠ位点。本研究为人源及动物源微小隐孢子虫病诊断及人隐孢子虫感染来源和该病分子流行病学研究提供重要依据     

埃及伊蚊钠通道基因克隆与序列分析

电压依赖性钠离子通道是许多神经毒性药物的作用靶标。本研究采用RT PCR技术 ,利用简并引物从埃及伊蚊中扩增的钠通道基因片段为460 9bp ,编码 1 5 3 6个氨基酸 ,经Clustal软件分析发现与黑尾果蝇钠通道基因 (para)和家蝇钠通道基因 (Vssc1 )有很高的相似性 ( 80 % ,78% )。     

人BDNF成熟肽基因克隆及序列分析(英文)

为研究人脑源性神经营养因子在大肠杆菌中的表达及其在治疗 Alzheimer病中的作用 ,本文作者等克隆了其成熟肽基因并进行了序列分析。提取健康成人末梢血白细胞基因组 DNA作为模板 ,应用 PCR技术扩增人脑源性神经营养因子成熟肽基因片段 ,并将其插入 p GEM-T质粒。限制性内切酶鉴定重组质粒并进行序列测定和分析。与 Gen Bank提供的已知序列(M61181)比较 ,所克隆的人脑源性神经营养因子成熟肽基因片段长 3 5 7bp,序列完全相同。人脑源性神经营养因子成熟肽基因的克隆 ,为其在原核细胞中的表达、抗体的制备及神经系统疾病的治疗奠定了基础