高糖环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达的影响

目的 探讨高糖培养环境及雷帕霉素干预对肾小球足细胞Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响.方法 体外培养的小鼠肾小球足细胞分为空白对照组、高渗对照组、高糖组和高糖+雷帕霉素干预组.Real-time PCR和Western blotting检测各组肾小球足细胞Ⅳ型胶原α3链(COL4A3)、α5链(COL4A5)mRNA及MMP-9 mRNA和蛋白的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Ⅳ型胶原的含量.结果 与对照组比较,高糖组足细胞COL4A3、COL4A5 mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均升高(P<0.05),而足细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05).与高糖组比较,雷帕霉素干预组足细胞COL4A3、COL4A5 mRNA表达及培养上清液中Ⅳ型胶原含量均降低(P<0.05),足细胞MMP-9 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05).结论 雷帕霉素对高糖环境中足细胞Ⅳ型胶原和MMP-9表达异常具有逆转作用.     

雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响

目的:观察雷帕霉素对高糖诱导肾小球系膜细胞增生、肥大及细胞外基质合成的影响.方法:在高糖状态下培养系膜细胞,予以不同剂量雷帕霉素进行干预,采用MTT的方法观察细胞增生能力,并用流式细胞仪检测各组系膜细胞体积,以前向角散射光平均强度表示细胞大小,Western印迹法检测细胞中纤维连接蛋白(FN)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)的表达变化.结果:同正常糖及甘露醇组比较,高糖可使肾小球系膜细胞增生且发生肥大,同时高糖环境下系膜细胞分泌的FN及ColⅣ显著增加(P＜0.05),而雷帕霉素能显著抑制高糖的上述作用(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:雷帕霉素可以抑制高糖状态下系膜细胞的增生、肥大及细胞外基质的合成,且呈剂量依赖性,有望用于糖尿病肾病的防治.     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法：应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变；应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果：高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内N型胶原的含量；茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论：高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加，而茶多酚可有效干预此过程。     

茶多酚对高糖所致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响

目的 :探讨高糖对人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成的影响及茶多酚的干预作用。方法 :应用放射免疫法检测高糖条件下体外培养的系膜细胞上清液中Ⅳ型胶原含量及茶多酚干预后其含量的改变 ;应用免疫细胞化学法检测高糖条件下系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及茶多酚干预后的变化。结果 :高糖可增加系膜细胞上清液及细胞内Ⅳ型胶原的含量 ;茶多酚可抑制高糖条件下上清液中及细胞内Ⅳ型胶原的增加。结论 :高糖可导致人肾小球系膜细胞Ⅳ型胶原合成增加 ,而茶多酚可有效干预此过程。     

黄体酮对局灶性脑缺血大鼠脑组织MMP-9和Ⅳ型胶原表达的影响

目的：观察黄体酮对脑梗死大鼠脑组织基质金属蛋白酶9（MMP-9）和Ⅳ型胶原（collagenⅣ）表达水平的影响。方法：用线栓法制作大脑中动脉局灶性脑缺血模型（pMCAO）,将成模大鼠随机分成模型组、环糊精（HBC）溶剂治疗组和黄体酮治疗组,每组设12、24、48及72h4个时间点,每个时间点6只大鼠,另选6只大鼠作为假手术组。用免疫组织化学技术检测各组大鼠脑组织MMP-9蛋白和collagenⅣ的表达情况。结果：脑梗死发生后大鼠脑组织MMP-9蛋白的表达水平均明显升高,经黄体酮治疗后其表达水平有所下降;4组间在不同时间点比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。collagenⅣ的表达随着缺血时间的延长而逐渐减少,经黄体酮治疗后其丢失程度有所减轻;4组间在不同时间点比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：黄体酮可通过抑制MMP-9的表达、减少collagenⅣ的降解来减轻脑水肿。     

Ⅳ型胶原及MMP-9在不同类型甲状腺肿瘤组织中的表达及临床意义

目的 研究人体不同类型甲状腺肿瘤组织中基膜胶原水平的变化规律及其与恶性肿瘤的关系.方法 甲状腺肿瘤手术切除术标本(癌旁正常甲状腺组织、甲状腺乳头状癌组织、甲状腺腺瘤组织、结节性甲状腺肿组织)做组织羟脯氨酸(HYP)含量测定、Ⅳ型胶原(ColⅣ)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白免疫组化染色.结果 与癌旁正常甲状腺组织比较,甲状腺乳头状癌组织中HYP含量显著升高(P＜0.01),其余两种组织中HYP含量没有显著改变(P＞0.05);甲状腺肿瘤组织中ColⅣ蛋白表达显著下调而MMP-9蛋白表达呈显著增多的趋势(P＜0.01或P＜0.05);且甲状腺乳头状癌组织中MMP-9蛋白水平显著高于其余2组(P＜0.05).结论 甲状腺肿瘤组织中,基膜成分的减少反馈性启动了细胞内胶原蛋白的大量合成.结果提示,组织内HYP含量升高及基膜成分的减少与恶性甲状腺肿瘤相关.     

茶多酚对高糖所致人肾系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响及其茶多酚的干预作用。方法：系膜细胞在高糖(35mmoL／L D-糖)条件下加入或不加入茶多酚(20μg／ml)培养至36h．运用化学比色法，放射免疫法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中活性氧(SOD和MDA)、Ⅳ型胶原的含量以及加入茶多酚后其含量的改变：应用免疫细胞化学法检测高糖作用后系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及加入茶多酚后其表达的改变。结果：高糖使系膜细胞上清液中SOD含量减少．MDA含量增加，使培养的系膜细胞上清液中及细胞内Ⅳ型胶原含量增加；茶多酚可提高上清液中SOD活性．降低MDA含量．抑制系膜细胞合成和分泌Ⅳ型胶原。结论：高糖致人肾小球系膜细胞活性氧产生增加．促进Ⅳ型胶原合成和分泌．茶多酚可有效干预高糖的作用．     

过敏性紫癜患儿尿中Ⅳ型胶原和MMP-9的检测及临床意义

目的 检测过敏性紫癜(HSP)患儿尿中Ⅳ型胶原和MMP-9水平的变化,并评价其临床意义.方法 将60例过敏性紫癜患儿按照尿白蛋白排泄率(UAER)分成正常白蛋白尿组(A组,n=20)、微量白蛋白尿组(B组,n=20)和大量白蛋白尿组(C组,n=20),检测各组尿液Ⅳ型胶原和MMP-9的水平,并与20例健康对照儿童进行比较.结果 各组HSP患儿尿液Ⅳ型胶原排泄率[A组:(15.35±5.05)ng/min,B组:(33.94±17.54)ng/min,C组:(102.44±50.23)ng/min]显著高于对照组(4.98±2.10)ng/min,P＜0.05.HSP患几各组间比较有显著差异(P＜0.05),且随着尿白蛋白排泄率的增加呈递增趋势;各组HSP患儿尿MMP-9的排泄率[A组:(51.06±15.44)ng/min,B组:(146.08±51.43)ng/min,C组:(352.94±105.53)ng/min]显著高于对照组(20.24±7.30)ng/min,P＜0.05,HSP患儿各组间比较有显著差异(P＜0.05),且随着尿白蛋白排泄率的增加呈递增趋势;尿Ⅳ型胶原与MMP-9及UAER均呈显著正相关(r=0.595,P＜0.01:r=0.632,P＜0.01),尿MMP-9与UAER呈显著正相关(r=0.831,P＜0.01).结论 Ⅳ型胶原和MMP-9在紫癜性肾炎(HSPN)的发生发展中起一定的作用,其尿中水平的变化与尿蛋白程度密切相关.     

葛根素对大鼠受损颈总动脉 MMP-2和Ⅳ型胶原 mRNA 表达的影响

目的：研究葛根素对大鼠颈动脉球囊损伤后新生血管内膜内基质金属蛋白酶-2（ MMP-2）和Ⅳ型胶原（ COL-Ⅳ） mRNA表达的影响,进一步探讨其对血管重塑的干预作用。方法：将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组和葛根素低、高剂量组,每组各12只。模型组和葛根素组均建立颈动脉球囊损伤模型;葛根素组术前7 d开始给予葛根素灌胃至实验结束,以生理盐水给模型组灌胃。各组分别于术后第14和28天处死6只大鼠,取动脉损伤段,HE染色观察血管形态学变化,采用RT-PCR法检测动脉内MMP-2和COL-Ⅳ mRNA的表达。结果：术后14和28 d,模型组大鼠颈总动脉血管内膜比正常组增厚,用葛根素干预后新生内膜增生有所减轻;与正常组相比,模型组MMP-2和COL-ⅣmRNA表达增高（P＜0．05）;与模型组相比,葛根素组MMP-2 mRNA表达下降,COL-Ⅳ mRNA表达升高（ P＜0．05）。结论：葛根素在大鼠颈动脉内皮细胞损伤后可能是通过下调MMP-2和增强COL-Ⅳ mRNA的表达,抑制平滑肌细胞从中膜到内膜的迁移,从而减轻新生内膜的增生。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾皮质中基质金属蛋白酶-2、9和Ⅳ型胶原表达的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和Ⅳ型胶原在糖尿病大鼠肾皮质中的表达及罗格列酮干预后的影响.方法：将40只SD大鼠随机分为3组：正常对照组（C组）,糖尿病组（DM组）,糖尿病罗格列酮干预组（DR组）.腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型,罗格列酮对DR组进行治疗性灌胃.应用免疫组化法检测各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达.分别在光镜、透射电镜下观察各组大鼠肾小球病理改变.结果：DM组MMP-2、MMP-9的表达较C组显著下降,Ⅳ型胶原显著升高（P＜0.01）,出现糖尿病肾病（DN）典型的病理改变.DR组MMP-2、MMP-9的表达较DM组增高,Ⅳ型胶原表达下降,有显著统计学差异（P＜0.01）病理改变较DM组明显改善.结论：罗格列酮可通过逆转糖尿病大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9的表达,降低Ⅳ型胶原的堆积,对DN起保护作用.     

PGF2α类抗青光眼药Unoprostone对培养猴睫状肌细胞中胶原Ⅲ、Ⅳ及MMP-1表达的影响

目的：探讨前列腺素F2α（prostaglandin F2α,PGF2α）类抗青光眼药Unoprostone对猴的降眼压作用机制是否与睫状肌中基质金属蛋白酶（matric metalloproteinase,MMP）及细胞外基质(extracellular matrix,ECM）的表达有关。方法：采用免疫细胞化学方法对培养猴睫状肌细胞中胶原Ⅰ，Ⅲ，Ⅳ及MMP－1的分布进行观察，比较10^-6mol/L PGF2α、Unoprostone代谢物M1及M2对睫状肌细胞作用前后胶原Ⅲ，Ⅳ及MMP－1的染色变化。结果：胶原Ⅲ，Ⅳ及MMP－1在培养猴睫状肌细胞内外分布各异，胶原Ⅰ未见明显染色；10^-6mol/L PGF2α、Unoprostone代谢物M1及M2分别使猴睫状肌细胞中胶原Ⅲ，Ⅳ减少，MMP－1表达增强。结论：Unoprostone增强猴睫状肌MMP表达，引起ECM降解加强，表明其降眼压机制为使睫状肌束间隙增大，葡萄膜巩膜房水流出加强。     

高糖对小鼠足细胞TRPC6表达的影响

【摘要】 目的 研究高糖对小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）表达的影响。方法 体外培养条件永生化小鼠足细胞,分为高渗对照组(甘露醇30mmol/L+葡萄糖5mmol/L),正常对照组(葡萄糖5mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15mmol/L、25mmol/L和35mmol/L);高糖(葡萄糖25mmol/L)刺激足细胞,以刺激后0、12、24、48 h为时间观察点,光镜下观察足细胞形态变化,免疫细胞化学检测小鼠足细胞TRPC6表达及分布,RT PCR和Western Blot分别检测小鼠足细胞TRPC6 mRNA和蛋白的表达。结果 随着葡萄糖浓度的增加,光镜下足细胞胞体明显缩小,足突明显减少或消失,免疫细胞化学检测可见TRPC6主要表达于足细胞胞膜,沿足突分布明显增多,RT PCR和WB检测到TRPC6表达逐渐增加,以25mmol/L变化最明显。糖刺激足细胞后,与0h相比,随着刺激时间的延长,足细胞TRPC6蛋白和mRNA表达量明显增加（P＜005）,在48h达到高峰,呈一定的时间依赖性。结论 高糖可导致足细胞形态学明显改变,引起细胞损伤,随着葡萄糖浓度增加和时间延长,均可导致足细胞TRPC6表达增加,呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。     

强力霉素对OA模型软骨中Ⅱ型胶原和MMP-13表达的影响

目的：通过观察强力霉素对兔膝关节制动骨关节炎模型软骨Ⅱ型胶原含量和基质金属蛋白酶-13表达的影响,探讨其对骨关节炎的治疗作用及其作用机制。方法：健康成年新西兰大白兔18只,随机分为正常组、对照组和给药组,每组各6只。对照组和治疗组兔左下肢以石膏固定于伸直位4周,然后治疗组每日给予口服强力霉素治疗。4周后同时处死,观察股骨内髁关节面的病理改变,并检测软骨Ⅱ型胶原含量和基质金属蛋白酶-13水平。结果：治疗组关节软骨增生性反应较对照组明显减轻。Mankin评分和Ⅱ型胶原含量增高（P〈0．01）,基质金属蛋白酶-13表达减少（P〈0．01）。治疗组与对照组和正常组三组之间相互比较均有显著统计学差异。结论：强力霉素可增高Ⅱ型胶原含量,改善软骨结构,其作用与强力霉素抑制软骨基质金属蛋白酶-13的表达有关。     

Ⅳ型胶原在肾积水中的表达及意义

目的 :研究Ⅳ型胶原在肾积水中的表达及意义 ,并探讨其沉积与小管间质纤维化程度的相关性。方法 :采用免疫组织化学方法 (S P法 ) ,检测Ⅳ型胶原在 31例肾积水和 1 3例正常肾组织中的表达情况。结果 :Ⅳ型胶原在积水肾肾小管胞浆和肾间质表达明显增高 ,积水肾与正常肾组织中的光密度值分别为 0 .2 2 75± 0 .0 0 1 9和0 .1 6 4 0± 0 .0 0 1 3,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。Ⅳ型胶原与间质纤维化病变程度呈正相关 (r=0 .6 31 4 ,P <0 .0 5 )。结论 :Ⅳ型胶原沉积可能造成小管功能改变 ,是梗阻肾小管间质纤维化进程中的一个重要因素     

IFN-γ对大鼠肾小球系膜细胞Smad7及Ⅳ型胶原表达的影响

目的为阐明IFN-γ抗纤维化机制及治疗器官纤维化提供理论和实验依据。方法终浓度为10ng/mL的IFN-γ作用MsC不同时间,又分别采用RT-PCR与Western blot法检测各时间点MsCSmad7与Ⅳ型胶原mRNA及蛋白表达情况。结果IFN-γ可显著增加MsC Smad7 mRNA及其蛋白的表达,而明显下调MsC ColⅣmRNA及其蛋白的表达。经Spearman等级相关检验显示Smad7蛋白与ColⅣ蛋白间的变化存在高度负相关性。结论IFN-γ可能通过上调Smad7而减少MsC ColⅣ的生成,从而抑制肾小球硬化进展。     

TGF-β1反义寡核苷酸对高糖下肾小球系膜细胞分泌MMP-9、TGF-β1、collⅣ的影响

目的观察TGF-β1反义寡核苷酸(antioligodeoxynucleotide,antiODN)对高糖下肾小球系膜细胞分泌MMP-9、TGF-β1、collⅣ的影响。方法采用逆转录PCR(RT-PCR)、酶谱分析法及ELISA法观察TGF-β1antiODN对高糖下系膜细胞表达细胞因子TGF-β1mRNA以及MMP-9、ECM主要成分COLLⅣ等蛋白的调控。结果TGF-β1antiODN可阻止高糖引起的TGF-β1mRNA表达增加,尤其高浓度的TGF-β1antiODN作用明显,48h基本接近正常(与对照组比较p>0.05);TGF-β1antiODN可以阻止高糖下系膜细胞分泌MMP-9蛋白减少及collⅣ增加;TGF-β1正义寡核苷酸(senseoligodeoxynucleotide,senseODN)、TGF-β1错义寡核苷酸(missoligodeoxynucleotide,missODN)无论高浓度还是低浓度都没有上述作用。结论TGF-β1antiODN可以通过减少TGF-β1mRNA的表达而使MMP-9表达接近正常,从而减少系膜细胞外基质的堆积,在糖尿病肾病的治疗方面有重要的参考价值。     

MMP-9和TIMP-1在高氧致CLD新生大鼠肺组织的动态变化及其对Ⅳ型胶原的影响

目的 探讨MMP-9(基质金属蛋白酶-9)和TIMP-1(基质金属蛋白酶抑制物-1)在高氧致CLD新生大鼠肺组织中的动态变化和在Ⅳ型胶原重塑中的作用.方法 足月新生大鼠在生后12 h内分别持续吸入浓度为0.90～0.95的高氧和空气,于1,3,7,14和21 d,应用免疫组化的方法分别检测肺组织MMP-9和TIMP-1蛋白表达的动态变化,同时采用ELISA法动态检测肺组织中Ⅳ型胶原蛋白含量.结果 MMP-9在高氧3 d时的表达较空气组增强,蛋白平均灰度值为:(126.23±6.95) vs (130.38±7.36),P<0.05,其余时间点两组比较差异无显著性;TIMP-1在3 d后高氧组肺组织的表达均高于空气组,3 d和7 d时平均灰度值为:(126.22±6.49)vs(129.49±4.75),(119.70±7.33)vs(124.99±6.83)(P<0.05),14 d和21 d差异有显著性,值为(112.35±10.29)vs(120.08±7.77),(109.19±10.56)vs(118.22±6.32)(P<0.01);高氧组ColⅣ含量在14 d[(24.78±5.42)vs(14.90±2.44),P<0.05]和21 d[(40.27±1.94)vs(26.13±1.94),P<0.01]均高于空气组.结论 新生大鼠随着吸入高氧时间的延长,MMP-9/TIMP-1的平衡状态遭到破坏,Ⅳ型胶原降解失衡,促进了早期基膜损伤的加重和晚期伴有Ⅳ型胶原沉积的肺纤维化.     

雷帕霉素对高糖诱导的肾系膜细胞自噬抑制、氧化损伤和衰老的影响

目的探讨雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤(3-MA)对高糖诱导的原代大鼠系膜细胞自噬、氧化损伤及衰老的影响。方法从大鼠肾分离培养原代肾小球系膜细胞(GMCs),分为正常对照组、高糖组、高糖+雷帕霉素(自噬增强剂)及高糖+3-甲基腺嘌呤(自噬抑制剂)干预组。在细胞培养24 h、72 h及10 d时,Western blotting观测自噬标志物-自噬相关基因LC3及泛素结合蛋白p62/SQSTMI的表达变化;硫代巴比妥酸法检测细胞脂质损伤产物-丙二醛(MDA)水平,2,4-二硝基苯肼(DNPH)比色法测定细胞蛋白质损伤产物-羰基含量,通过进行衰老相关β-半乳糖苷酶活性(SA-β-gal)染色及衰老相关异染色质斑块(SAHF)分析检测细胞的衰老程度。结果与对照组相比,细胞经高糖处理72 h和10 d后,自噬标志物LC3表达降低,p62/SQSTMI升高,MDA及羰基含量上升(均P<0.05);处理72 h细胞SA-β-gal染色阳性率增加(P<0.05),细胞核异染色质斑块形成增加。高糖培养的细胞用雷帕霉素干预72 h和10 d后,LC3表达升高,p62/SQSTMI表达下降,MDA及蛋白质羰基含量均下降(均P<0.05),72 h后细胞SA-β-gal染色阳性率下降(P<0.05),细胞核异染色质斑块形成减少;高糖培养的细胞用3-MA干预72 h和10 d后,LC3表达下降,p62/SQSTMI表达升高,MDA及蛋白质羰基含量升高(均P<0.05),72 h细胞SA-β-gal染色阳性率上升(P<0.05),细胞核斑块形成增多。结论高糖可抑制系膜细胞自噬功能,促进系膜细胞氧化损伤,加速细胞衰老;雷帕霉素干预可减轻高糖对系膜细胞自噬功能抑制,减少氧化损伤,延缓衰老;3-MA加重高糖对系膜细胞自噬功能的抑制,进一步加重细胞氧化损伤,加速衰老。