雷帕霉素对PAN肾病小鼠肾脏病变和VEGF及受体表达的影响

目的 探讨雷帕霉素对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)肾病模型小鼠肾脏病变和肾小球VEGF及受体(VEGFR)表达的影响.方法 24只BALB/c小鼠随机分为PAN 组(单次尾静脉注射PAN造模,n=8)、雷帕霉素干预组(单次尾静脉注射PAN造模+雷帕霉素干预,n=8)和对照组(单次尾静脉注射PBS,n=8).各组动物留取24 h尿液,BCA蛋白定量试剂盒测定24 h尿蛋白排泄量.于造模后第10天处死动物取肾脏制备肾组织标本,透射电子显微镜观察各组肾小球足突结构改变;分别采用Real-time PCR、Western b1otting和免疫组织化学方法检测各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA以及VEGF、VEGFR2蛋白表达.结景24 h尿蛋白排泄量为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05).电子显微镜观察发现PAN 组肾小球上皮细胞足突广泛融合.各组肾组织VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及蛋白表达为PAN组>雷帕霉素干预组>对照组(P<0.05),且各组VEGF、VEGFRI、VEGFR2 mRNA及VEGF蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关(P<0.05).结论 雷帕霉素能减轻PAN肾病小鼠蛋白尿的程度,作用机制可能与下调肾小球VEGF及其受体基因表达有关.     

雷帕霉素对糖尿病大鼠肾脏病变和VEGF及其受体表达的影响

目的 研究雷帕霉素对糖尿病大鼠早期肾脏病变的影响,探讨血管内皮生长因子（VEGF）在糖尿病肾病发病中的作用。方法 SD大鼠经链脲佐菌素（STZ,65 mg/kg）一次性腹腔注射建立糖尿病模型。建模成功后分为雷帕霉素治疗组（建模后12周开始用雷帕霉素治疗4周,n=9）、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体拮抗剂L-158809治疗组（阳性对照组,建模后12周开始用L-158809治疗4周,n=5）和糖尿病肾病组（建模12周后用等量蒸馏水灌胃4周,n=9）,以未建模SD大鼠作为正常对照组（n=9）。采集各组大鼠血、尿样本和肾脏组织标本,观察和分析各组大鼠肾小球结构和功能的改变;Western blotting和免疫组织化学法检测肾脏组织VEGF及其受体VEGFR2的表达。结果 与正常对照组比较,糖尿病肾病组大鼠24 h尿白蛋白增加、内生肌酐清除率升高、肾小球体积增大、肾小球基膜增厚,两组间比较差异均有统计学意义（P<0.01）。与糖尿病肾病组比较,雷帕霉素治疗组和阳性对照组大鼠24 h尿白蛋白较少,且肾小球体积增大和基膜增厚均不明显。大鼠肾脏组织VEGF和VEGFR2表达,糖尿病肾病组明显高于正常对照组（P<0.01）,雷帕霉素治疗组和阳性对照组显著低于糖尿病肾病组（P<001）。结论 雷帕霉素具有减少糖尿病肾病大鼠蛋白尿和缓解肾小球肥大和基膜增厚的作用。抑制肾脏组织VEGF和VEGFR2蛋白表达可能是雷帕霉素延缓糖尿病肾病发病的可能机制之一。     

雷帕霉素对糖尿病大鼠肾脏病变和VEGF及其受体表达的影响

目的 研究雷帕霉素对糖尿病大鼠早期肾脏病变的影响,探讨血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病肾病发病中的作用.方法 SD大鼠经链脲佐菌素(STZ,65mg/kg)一次性腹腔注射建立糖尿病模型.建模成功后分为雷帕霉素治疗组(建模后12周开始用雷帕霉素治疗4周,n=9)、血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)受体拮抗剂L-158809治疗组(阳性对照组,建模后12周开始用L-158809治疗4周,n=5)和糖尿病肾病组(建模12周后用等量蒸馏水灌胃4周,n=9),以未建模SD大鼠作为正常对照组(n=9).采集各组大鼠血、尿样本和肾脏组织标本,观察和分析各组大鼠肾小球结构和功能的改变;Western blotting和免疫组织化学法检测肾脏组织VEGF及其受体VEGFR2的表达.结果 与正常对照组比较,糖尿病肾病组大鼠24 h尿白蛋白增加、内生肌酐清除率升高、肾小球体积增大、肾小球基膜增厚,两组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).与糖尿病肾病组比较,雷帕霉素治疗组和阳性对照组大鼠24 h尿白蛋白较少,且肾小球体积增大和基膜增厚均不明显.大鼠肾脏组织VEGF和VEGFR2表达,糖尿病肾病组明显高于正常对照组(P<0.01),雷帕霉素治疗组和阳性对照组显著低于糖尿病肾病组(P<0.01).结论 雷帕霉素具有减少糖尿病肾病大鼠蛋白尿和缓解肾小球肥大和基膜增厚的作用.抑制肾脏组织VEGF和VEGFR2蛋白表达可能是雷帕霉素延缓糖尿病肾病发病的可能机制之一.     

雷帕霉素对白血病SUP-B15细胞株HIF-1α、VEGF表达的影响

目的:观察雷帕霉素对人急性淋巴细胞白血病SUP-B15细胞的生长及HIF-1α、VEGF表达的影响.方法:实验分为雷帕霉素处理组和对照组,雷帕霉素处理组以含不同终浓度雷帕霉素( 10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/C)的IMDM培养处理,对照组以相同体积细胞IMDM培养液培养,并于处理后24 h、48 h、72 h观察各组细胞形态,实时荧光定量PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达.结果:雷帕霉素处理后SUPB15活细胞数量减少,死细胞数量增加,可见细胞抱团生长、胞膜出泡、细胞破碎等现象,随药物浓度升高和作用时间增加变化程度明显.瑞氏染色观察可见,雷帕霉素处理组早期无明显变化,处理后期(72 h)细胞出现明显空泡样改变,并呈浓度依赖关系;雷帕霉素处理组细胞HIF-1α mRNA的表达在24h变化不明显;48 h时,10 nmol/L、100nmol/L雷帕霉素处理细胞HIF-1 αmRNA的表达上调,20 nmol/L、50 nmol/L雷帕霉素处理细胞HIF-1α表达下调;72 h时,各浓度的雷帕霉素对HIF-1αmRNA的表达均呈上调趋势;在雷帕霉素处理后,除较低浓度(10 nmol/L、20 nmol/L)雷帕霉素处理72 h外,SUP-B15细胞的VEGF mRNA表达均呈显著下调.结论:雷帕霉素可抑制SUP-B15细胞生长,导致形态明显改变,并能下调SUP-B15细胞VEGF mRNA的表达.     

糖尿病大鼠肾脏内皮生长因子及受体的表达意义

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义。方法 将Wistar雌性大鼠随机分为正常对照组（NC组）和糖尿病模型组（DM组）各16只，于成模后第2，4周各处死8只。采用特异性抗体和免疫组化染色方法，对每例大鼠肾组织中VEGF中VEGFR表达的分布范围及强度变化进行观察，并结合生化指标及肾脏病理进行了分析。结果 糖尿病大鼠肾组织中VEGF及VEGFR表达的分布范围及强度与正常对照组比较，第2周组有升高趋势，第4周组升高呈显著性差异（P＜0．01），尿白蛋白排泄率（UAER）亦显著升高（P＜0．01），且肾组织中呈现肾小球内皮细胞增生，典型的结节性变等病理改变。结论 肾局部VEGF及VEGFR表达的增加参与也糖尿病肾病（ND）的发生。     

雷帕霉素对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其分子机制

目的 观察雷帕霉素对人胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其对缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响.方法 SGC-7901细胞经雷帕霉素处理后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检HIF-1α、VEGF基因的表达.结果 体外雷帕霉素可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并下调人胃癌SGC-7901细胞HIF-1α、VEGF基因的表达.结论 雷帕霉素可抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,并且可能是通过下调人胃癌SGC-7901细胞HIF-1α、VEGF基因的表达而起到抑制作用的.     

雷帕霉素对肥胖小鼠卵巢功能的影响

目的：研究雷帕霉素对母源性肥胖导致的卵巢功能异常的干预作用以及药物的安全性评估。方法：建立一种高脂饮食的雌性肥胖小鼠模型,然后随机分为注射雷帕霉素的处理组和注射PBS的对照组,24周后统计其排卵数目,收集卵母细胞进行纺锤体免疫荧光染色,以评估雷帕霉素对肥胖小鼠排卵功能及卵母细胞质量的影响,并通过蛋白免疫印迹分析和RT?qPCR分析检测卵巢相关基因在蛋白和mRNA表达水平的变化。结果：雷帕霉素处理的肥胖小鼠体重下降,其卵巢磷酸化核糖体蛋白（phosphorylated ribosomal protein 6,P?rps6）和磷酸化起始因子4E结合蛋白（phosphorylated 4E binding protein 1,P?4EBP1）的表达明显降低,且超排的卵母细胞数目与对照相比有增加趋势,但卵母细胞纺锤体染色结果显示卵母细胞质量无明显差异;处理后的卵巢肿瘤坏死因子（tumor necrosis factorα,TNF?α）的mRNA表达水平增加;血清中雌激素和促卵泡激素都无明显变化。结论：雷帕霉素有改善排卵功能的趋势,尚未发现对卵母细胞质量有明显影响,为未来研究雷帕霉素对肥胖女性生育力的影响提供了实验基础。     

博莱霉素诱发大鼠肺间质纤维化VEGF及其受体的表达及意义

目的 :探讨血管内皮生长因子 (VEGF)及其受体 (Flt ,Flk)在博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织中的表达及意义。方法 :采用免疫组化方法结合图像分析处理系统 ,研究VEGF及其受体在博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织中的免疫反应。结果 :VEGF在正常对照组大鼠肺组织中呈弱表达 ,在肺纤维化大鼠肺组织中呈高表达。Flt及Flk在正常对照组大鼠肺组织中呈弱表达 ,在肺纤维化大鼠肺组织中呈较高表达。结论 :VEGF及其受体在博莱霉素致大鼠肺纤维化肺组织中的高表达与肺纤维化的发生发展有     

Toll样受体4抑制剂联合雷帕霉素对小鼠移植心脏存活的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对小鼠心脏移植后移植物存活的影响.方法 采用小鼠腹部异位心脏移植模型,供者为BALB/C小鼠,受者为C57BL/6小鼠.受者分为4组:对照组、雷帕霉素(Rapa)组、TAK-242组及Rapa+TAK-242组,术后移植后观察移植物存活情况;部分受者于术后7 d或15 d获取移植心脏用于组织病理学检测.结果 TAK组移植心脏平均生存时间稍延长但未达到统计学意义[(8.2±0.2)d vs(7.6±0.2)d,P=0.086].Rapa+TAK-242组移植心脏平均生存时间较对照组显著延长[(56.1±3.7)d vs(7.6±0.2)d,P<0.001],并且优于Rapa组[(56.1±3.7)d vs(19.2±1.5)d,P<0.001].组织病理学结果 提示Rapa+TAK-242组移植物排斥反应最轻,组织中CD11c阳性树突状细胞减少,CD3阳性淋巴细胞浸润减少,C4d沉积减轻.结论 TAK联合Rapa能够减少移植心脏组织内炎症细胞浸润,减轻排斥反应,延长移植心脏存活.     

不同发育阶段恒牙牙髓组织中VEGF及受体的表达

目的: 探讨人年轻恒牙和成熟恒牙牙髓组织中VEGF及其受体Flt-1、Flk-1的组织学和分子水平的表达。方法: 将因正畸治疗需要而拔除的人健康前磨牙分为根尖开放的年轻恒牙和根尖闭合的成熟恒牙,每组各15例。采用免疫组织化学方法检测VEGF及受体Flt-1、Flk-1蛋白的表达;RT-PCR法检测人年轻恒牙和成熟恒牙牙髓组织中VEGF、Flt-1、Flk-1的mRNA表达情况。 结果: 免疫组化显示年轻恒牙牙髓VEGF,Flk-1阳性表达的平均光密度（D）值高于成熟恒牙（P <0.05）,而Flt-1的表达低于成熟恒牙（P <0.05）。RT-PCR结果显示人年轻恒牙和成熟恒牙牙髓组织均可表达VEGF、Flt-1、Flk-1的mRNA,产物大小分别为145 bp、169 bp和162 bp,且年轻恒牙牙髓组织VEGF、Flt-1、Flk-1的mRNA相对含量分别是成熟恒牙的1.7倍、0.6倍和1.5倍（P <0.05）。结论: 在人健康恒牙的牙髓组织中,VEGF、Flt-1、Flk-1的表达随根尖孔的闭合与否呈现不同表达特征,提示在恒牙的不同发育阶段可通过调控上述基因诱导修复性牙本质形成。     

SRT1720对实验性肾病大鼠足细胞的保护作用

目的:探讨沉默信息调节因子2相关酶1(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)激活剂SRT1720对嘌呤霉素氨基核苷肾病(puromycin aminonucleoside nephrosis,PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用?方法:雄性SD大鼠一次性腹腔注射150 mg/kg嘌呤霉素氨基核苷建立PAN肾病大鼠模型,设正常对照组?模型组?SRT1720治疗组[模型组大鼠给予SRT1720 100 mg/(kg?d)灌胃]?Bradford法检测大鼠的24 h尿蛋白总量;应用透射电镜观察足细胞超微结构;实时定量RT-PCR?Western blot 检测足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin及Podocin的表达?结果:①与正常对照组相比,PAN注射后第3天,模型组大鼠尿蛋白的排泄量开始增加(P < 0.01),至第7天达最高峰,尿蛋白总量达259.73 mg/24 h;SRT1720治疗组在治疗3 d后尿蛋白明显降低(P < 0.01),第7天则降到52.47 mg/24 h;②模型组大鼠血清白蛋白显著降低[(22.14 ± 3.05)g/L]而胆固醇则显著升高[(7.03 ± 1.64)mmol/L],SRT1720治疗后显著提高模型组大鼠血清白蛋白水平[(35.48 ± 3.96)g/L]并降低胆固醇水平[(2.81 ± 0.41)mmol/L];③透射电镜结果显示模型组大鼠肾小球足细胞足突广泛融合?消失,SRT1720治疗显著减轻足细胞足突的融合;④与正常对照组相比,模型组大鼠肾组织中Nephrin和Podocin核酸和蛋白表达均显著降低,SRT1720治疗组肾组织中Nephrin和Podocin表达显著上调,能够恢复到正常组的85%~90%?结论:SRT1720能够降低PAN大鼠蛋白尿,改善低蛋白血症和高胆固醇血症,并明显减轻足细胞损伤?     

肺纤方对肺间质纤维化大鼠VEGF及VEGFR1、VEGFR2基因表达的影响

目的 探讨肺纤方提取物对肺间质纤维化大鼠血管新生的影响.方法 将大鼠分为假手术组、模型组、泼尼松组、氯沙坦组、肺纤方大剂量组、肺纤方中剂量组、肺纤方小剂量组7组,除假手术组外,其余6组采用气管插管灌注博莱霉素3 mg/kg进行大鼠肺间质纤维化造模;造模第2天各组予以相应药物灌胃干预.于第14天及第28天分2批进行取材,HE染色观察肺泡炎程度、MAS-SON染色观察肺纤维化程度,RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)l、VEGFR2mRNA表达.结果 肺纤方大中剂量均能抑制肺泡炎和纤维化程度、下调VEGF及VEGFR1、VEGFR2mRNA表达水平(P＜0.05).肺纤方中剂量作用更显著.结论 肺纤方通过下调VEGF及VEGFR1、VEGFR2基因表达水平,抑制血管新生,发挥抗肺纤维化作用.     

Effects of shRNA Targeting VEGF on VEGF mRNA Expression in Gastric Cancer Cells

In order to investigate the inhibitory effect of plasmid-mediated short hairpin RNA tar-geting vascular endothelial growth factor (VEGF) on the expression of VEGF mRNA in human gas-tric cancer cells, a plasmid vector for transcribing specific short hairpin RNA targeting VEGF ( pU6-VEGF ) was constructed, and then transfected into human gastric cancer cells using Lipofec-tamine2000. The VEGF mRNA expression level was detected by RT-PCR. RPMI1640 was used for blank control, and pSilencer 1.0-U6 empty plasmid for the negative control. Results showed the clone and sequence analysis revealed that the recombinant plasmid vector of pU6-VEGF was successfully constructed. The VEGF mRNA expression levels in blank control group, experimental group (pU6-VEGF) and negative control group (pSilencer1.0-U6) were 100%, 49% and 94%, respectively, indicating VEGF mRNA expression in the cells transfected with pU-VEGF vector was inhibited sig-nificantly as compared with blank control group and negative control group. It was concluded that the short hairpin RNA could significantly inhibit the expression of VEGF mRNA, which provided an experimental basis for treating human cancer with anti-angiogenesis.     

RNA干扰对HeLa细胞VEGF表达和细胞增殖的影响

目的：探讨RNA干扰对HeLa细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达和细胞增殖的影响,为人宫颈癌的治疗提供理论依据。方法：构建针对VEGF165的RNA干涉质粒,稳定转染HeLa细胞,设HeLa组、对照组和干涉组,用RT-PCR方法检测稳定细胞株中VEGF mRNA的表达,Western blotting和ELISA方法检测VEGF165蛋白的表达,MTT及流式细胞术检测VEGF siRNA作用下的细胞增殖,Hoechst33342染色检测VEGF siRNA作用下细胞凋亡的变化。结果：成功建立了VEGF siRNA的稳定细胞株,与对照组比较,干涉组VEGF的mRNA 和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。 与对照组比较,稳定转染VEGF siRNA的细胞株在24 、48 和72 h的 细胞生长抑制率分别为12.8%±5.4%、17.4%±3.7%和27.2%±5.7%,细胞增殖明显受到抑制(P＜0.01)。与对照组比较,Hoechst33342染色显示VEGF siRNA对HeLa细胞的细胞凋亡率没有影响。结论：VEGF siRNA可以有效抑制HeLa细胞中VEGF mRNA和蛋白的表达,抑制细胞的增殖,提示VEGF在宫颈癌的发生、发展中具有重要作用,抑制VEGF的表达有望成为一种治疗宫颈癌的途径。     

胃癌组织中血管内皮生长因子-C及其受体-3的表达与意义

[目的] 探讨血管内皮生长因子 C(vascular endothelial growth factor C,VEGF C)其受体 3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR 3)与胃癌临床病理因素的关系. [方法] 应用免疫组织化学(SP)方法测定胃癌及胃良性病变中 VEGF C与 VEGFR 3表达,计数 (200×视野下淋巴管数密度 (number density of lymph vessel,/200× nDLV).[结果] VEGF C阳性率胃癌组:60.00%,胃良性病变组 15.00%(P =0.000);淋巴结转移组 68.97%,无淋巴结转移组 36.36%(P =0.008);低分化组 72.73%,高 中分化组 44.44%(P =0.010) ;伴有远处转移组 100%,不伴有远处转移组 53.62%(P=0.02);pTNM分期Ⅰ Ⅱ组 43.75%,Ⅲ Ⅳ组 70.83%(P=0.015). 淋巴管数密度 (显微镜下每 200×视野 ):胃癌组为(5.800± 2.318 9),胃良性病变组为(2.3800± 0.462 9) (P=0.000);淋巴结转移组为 (6.948 3± 1.583 1),无淋巴结转移组为 (2.772 7± 0.428 9)(P=0.000);低分化组为 (7.681 8± 0.982 9),高 中分化组为 (3.500± 1.028 2)(P=0.000) ;pTNM分期,Ⅰ Ⅱ组为 (4.291 7± 1.688 0),pTNM分期,Ⅲ Ⅳ组为 (8.062 5± 0.759 4)(P=0.000). VEGF C与淋巴管数密度相关 (P=0.002).[结论] VEGF C刺激淋巴管生成,有利于胃癌淋巴道与远处转移.     

bFGF对兔骨髓基质细胞VEGF因子表达及细胞生物行为的影响

目的: 观察兔骨髓基质细胞经bFGF刺激后,其VEGF因子表达及细胞生物行为的变化. 方法: 取兔双侧股骨骨髓基质细胞,采用骨髓基质细胞体外培养技术,分别以不同剂量bFGF刺激细胞,并设立空白对照组. 培养5 d后,进行细胞形态(HE染色)、增殖情况(细胞记数法与MTT法)、碱性磷酸酶(改良钙钴法染色)、成骨结节(图像分析)、VEGF阳性细胞率(免疫组化染色)等项目的检测. 结果: 不同剂量组间各项观测指标差异均显著,结果均优于空白对照组. bFGF促进细胞增殖与VEGF表达最佳剂量为1200 kU*L-1. 结论: bFGF能促进骨髓基质细胞增殖,促进VEGF的表达,其剂量与效果间存在明显相关关系. bFGF为1200 kU*L-1时,促进骨髓基质细胞表达VEGF及促进细胞增殖作用同时达到最佳效果.     

血管内皮生长因子受体在皮肤病中的研究进展

血管内皮生长因子（VEGF）通过其特异性受体VEGF受体（VEGFR）发挥生物学功能。VEGFR包括VEGFR1-3和Neuropilins,VEGFR除分布于内皮细胞外,还表达于正常表皮、某些皮肤肿瘤和炎症性皮肤病中。VEGF-VEGFR信号传导通路可能在治疗这些皮肤疾病中成为重要的靶目标。