福辛普利拉对脂多糖诱导的单核细胞TLR4表达的抑制作用

目的 研究福辛普利拉(Fos)对人白血病单核细胞系THP1 Toll样受体4(TLR4)表达的抑制作用.方法 培养THP1细胞,并将其浓度调整为1×10~+/mL,分为8组:对照组(正常THP1细胞)、脂多糖(LPS)刺激组(THP1细胞+LPS)、DMSO组(THP1细胞+LPS+DMSO)及Fos干预组(THP1细胞+LPS+Fos,Fos质量浓度分别为0.25、0.5、1、5、10 μmol/L).分别采用Real-time PCR法检测THP1细胞TLR4 mRNA的表达;Western blotting检测TLR4和NF-kB蛋白的表达;流式细胞仪检测TLR4蛋白的表达.结景LPS刺激组THP1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达均高于对照组(P<0.05);Fos干预组TLR4 mRNA和蛋白的表达均低于LPS刺激组,其中1、0.5 p.mol/L的Fos作用最明显.LPS刺激组NF-kB蛋白表达明显高于各Fos干预组(P<0.05).结论 Fos能有效下调LPS诱导的THP1细胞中TLR4的表达,并可有效抑制NF-kB的活性.     

HT-29细胞Toll通路相关分子表达与调控的研究

目的 探讨HT-29结肠癌细胞系经细胞因子TNF-а、IL-1β、IFN-γ及脂多糖(LPS)刺激后,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白2(MD2)及人β防御素2(HBD2)在转录和蛋白水平的表达变化及其与NF-kB激活的关系.方法 HT-29细胞分为8组,分别加入RPMI 1640、TNF-а(20 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)、IFN-7(20 ng/mL)、LPS(50rig/mL)、TNF-а(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)干预.ELISA测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平,RT-PCR检测各组细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA水平,免疫印迹检测各组细胞TLR4和NF-kB蛋白表达.结果 细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达高于对照组(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,IL-8的表达进一步升高(P<0.01).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和MD2 mRNA的水平(P<0.01);HBD2 mRNA水平在IL-1β,LPS协同TNF-а、IL-1β、IFN-γ组升高(P<0.05).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和NF-kB蛋白表达(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,NF-kB蛋白表达进一步增高(P<0.05).结论 细胞因子(TNF-а、IL-1β、IFN-γ)能够增加肠上皮细胞(IEC)的TLR4和MD2表达、增强其对LPS的反应性,造成IEC对常驻菌的过度反应,从而启动或加重肠道炎症;炎症信号(IL-1β、LPS+TNF-а、LPS+IFN-γ)刺激可诱导IEC的HBD2基因转录表达,增强肠道获得性免疫反应,影响肠道炎症进程.     

丙泊酚对内毒素诱导人单核细胞释放细胞因子和表达SOD1蛋白的影响

目的观察丙泊酚对内毒素（LPS）诱导人单核细胞（THP-1）表达超氧化物歧化酶（SOD1）的影响及对细胞因子释放的影响。方法将体外培养的人单核细胞THP1细胞分为四组：正常对照组（C组）、LPS刺激组（L组）、丙泊酚处理组（P组）和丙泊酚预处理合并LPS刺激组（P＋L组）,并用Western blot法检测各组内SOD1含量的变化。采用ELISA法检测四组不同处理因素对THP1细胞分泌IL6、IL8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响。结果在LPS刺激12 h后收集细胞,与对照组比较L组中SOD1的表达量明显降低,IL6、IL8、肿瘤坏死因子α（TNF-α）均明显增高（P〈0.01）;L＋P组中SOD1的表达量明显高于L组,IL6、IL8、TNF-α均明显降低（P〈0.01）。结论体外THP1细胞培养下,丙泊酚可以明显抑制LPS刺激THP1细胞IL6、IL8、TNF-α的大量释放和逆转LPS刺激下对THP1细胞内SOD1表达的抑制。     

Toll样受体4介导抑制Bewo细胞中乙型肝炎病毒的复制

目的探讨Toll样受体4（TLR4）介导的天然免疫对Bewo细胞中乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响。方法首先用TLR4配体LPS处理Bewo细胞,观察细胞TLR4 mRNA表达的动力学。然后将2μg 1.3倍HBV全基因重组质粒pcDNA3.1（＋）-HBV1.3转染Bewo细胞,12h后,以LPS处理3d。最后,用抗TLR4处理Bewo细胞1h后,加入10μg/ml LPS刺激。采用荧光定量RT-PCR、微粒子酶免疫分析法（MEIA）和荧光定量PCR法分别检测细胞TLR4 mRNA表达、HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平。结果 LPS可显著诱导Bewo细胞TLR4 mRNA表达（P〈0.05）,呈时间和剂量依赖性;与对照组比较,LPS可显著抑制HBV复制（P〈0.001）,LPS对HBV DNA、HBsAg及HBeAg的抑制率（%）分别为29.70±6.03、32.12±5.98和33.89±1.28。抗TLR4可显著逆转LPS对HBV复制的抑制作用（P〈0.01）。结论 TLR4介导的天然免疫可一定程度地抑制Bewo细胞中HBV复制,为防治HBV宫内感染提供了新的途径。     

地塞米松和福莫特罗对THP-1细胞分化的巨噬细胞表面TLR4表达的影响

目的通过体外实验测定地塞米松和福莫特罗对人单核细胞系（THP一1）分化的巨噬细胞表面Toll样受体4（TLR4）表达的影响。方法用不同浓度地塞米松和（或）福莫特罗刺激THP．1细胞系分化的巨噬细胞,采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和蛋白质印迹法（Westernblotting）测定细胞在有或没有脂多糖刺激时TLR4mRNA和蛋白表达水平。结果脂多糖浓度依赖性上调TLR4mRNA和蛋白表达水平。单用地塞米松（10^-10～10^-6mol／L）下调TLR4表达,单用福莫特罗（10^-7和10^-6moL／L）上调TLR4水平。联合刺激时,福莫特罗（10^-6mol／L）能部分逆转地塞米松（10^6mol／L）对TLR4表达的下调作用。结论福莫特罗和（或）地塞米松对TLR4的影响可能是联合作用的机制之一,对治疗革兰阴性细菌引起的气道炎症有重要意义。     

JNK通路介导LPS诱导脐静脉内皮细胞PD—L1表达的实验研究

目的探讨脂多糖（LPS）刺激脐静脉内皮细胞表达程序性死亡因子配体1（PD—L1）与C—JUN氨基末端激酶（JNK）信号通路的关系。方法体外培养脐静脉内皮细胞,按2x107／m1种植在6孔培养板中,在无血清培养基中静止24h后随机分成阴性对照组、LPS组及SP600125＋LPS组,其中阴性对照组不加干预因素;LPS组先用DMSO（0．1％V／V）作用1h,再用LPS（1．0}xg／m1）刺激24h;SP600125＋LPS组先用SP600125（20μmol／L）作用1h后再用LPS刺激24h,Western．blot测定各组PD．L1及P．JNK蛋白表达。结果SP600125＋LPS组PD—L1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;而SP600125＋LPS组和对照组PD．L1蛋白表达与LPS组比较均明显减少,差异均有统计学意义（P〈0．05）。SP600125＋LPS组细胞P．JNK蛋白表达与对照组和LPs组比较均减少,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论LPS可能通过JNK信号通路调控脐静脉内皮细胞表达PD．L1。     

大黄素对脂多糖所致肾脏炎症的抑制作用

目的探讨大黄素对脂多糖（LPS）诱导的肾小管上皮细胞（TECs）免疫炎症的抑制作用。方法原代培养的BALB/C小鼠肾小管上皮细胞,模型组用100 ng/mL的LPS诱导,干预组在LPS诱导的同时,分别用0.1、0.2、0.4μg/mL浓度的大黄素干预,于24 h后分别提取细胞总RNA及蛋白。用流式细胞术检测TEC TLR4膜蛋白水平,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测样受体（TLR）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白介素-6（IL-6）mRNA的表达。结果正常肾小管上皮细胞可见TLR4表达,用100 ng/mL LPS刺激后TLR4 mRNA的表达由（0.25±0.22）上调至（0.62±0.11）,且TNF-α、IL-6因子表达亦分别上调6.4倍和2.1倍,与正常组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。不同浓度大黄素干预后则TLR4、TNF-α、IL-6 mRNA表达较模型组下降2.0～5.7倍,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,下降程度与大黄素浓度相关,部分存在一定的量效依赖关系。结论大黄素能够下调LPS诱导的肾小管上皮细胞TLR4的表达,并减少下游炎症因子TNF-α及IL-6的激活,从而减轻肾脏局部免疫炎症反应、保护肾功能。     

丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制研究

目的 探讨丙泊酚对小胶质细胞炎症因子的影响及其机制。方法 将小胶质BV-2 细胞分为对照组、丙泊酚组、脂多糖（LPS）组、LPS+ 丙泊酚组,对照组细胞加入PBS 液,丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L,LPS 组细胞加入LPS 1μg/ml,LPS+ 丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μmol/L+LPS 1μg/ml。采用MTT 比色实验测定细胞活性,采用酶联免疫吸附法测定细胞上清液中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用逆转录- 聚合酶链反应测定细胞p38MAPK 和TLR4mRNA 的表达,采用Western blot 检测细胞p38MAPK 和TLR4 蛋白表达量。结果 LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性低于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞活性高于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平低于LPS 组（P <0.05）;LPS 组和LPS+ 丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量高于对照组和丙泊酚组（P <0.05）,LPS+ 丙泊酚 组小胶质细胞p38MAPK、TLR4 mRNA 和蛋白表达量低于LPS 组（P <0.05）;丙泊酚组和对照组小胶质细胞各指标比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 丙泊酚能抑制小胶质细胞过度活化和炎症反应,其机制可能与丙泊酚可下调TLR4-p38MAPK 信号通路有关。     

溶血磷脂酸对THP-1细胞Toll样受体4表达的影响

目的 观察溶血磷脂酸(lysophosphatidie acid,LPA)对人单核细胞株THP-1细胞Toll-样受体4(toll like receptor 4,TLR4)mRNA、核蛋白NF-kB p65表达的影响以及细胞因子TNF-α的变化.探讨TLR4/NF-kB在LPA致动脉粥样硬化中的作用.方法 以不同浓度水平LPA(0-10μM)刺激人THP-1细胞4h,RT-PCR法测定TLR.4 mRNA表达,Westembiot检测核蛋白NF-kB p65表达变化.ELISA法测定细胞因子TNF-α.结果 LPA以剂量依赖的方式上调THP-1细胞TLR4表达,激活NF-kB,促进TNF-α分泌.结论 LPA致粥样硬化作用可能部分是由TLR4/NF-kB信号途径介导的,干预TLR4/NF-kB可能抗粥样硬化治疗的一个新的靶点.     

内毒素脂多糖对胰岛细胞株INS-1细胞活力及胰岛素分泌的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)在胰岛细胞株(INS-1)中的表达情况,探讨内毒素脂多糖(LPS)对INS-1细胞活力、胰岛素分泌功能以及TLR4表达的影响.方法 采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测INS-1细胞和经1 mg/L LPS刺激的INS-1细胞中TLR4 mRNA和蛋白的表达变化;分别用不同质量浓度的LPS (0.01、0.1、1、5、10 mg/L)刺激INS-1细胞,CCK8法检测细胞活力,GSIS法测定胰岛素分泌功能.结果 RT-PCR和Western blotting检测结果显示:LPS刺激使INS-1细胞TLR4mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜0.05).当LPS在0.1～ 10 mg/L时,INS-1细胞活力受到抑制,且呈剂量时间依赖性(P＜0.05);1 mg/L LPS刺激可使高糖环境下的INS-1细胞的胰岛素分泌量显著减少(P＜0.05).结论 一定浓度范围内的LPS刺激可抑制INS-1细胞活力,并减少高糖培养条件下细胞胰岛素的分泌量.LPS刺激能上调INS-1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达.内毒素可能通过直接作用损伤胰岛β细胞.     

Effects of Propofol on The mRNA Expression of Toll-like Receptor 4 in BV-2 Cells During Mimic Ischemia-Reperfusion Injury In Vitro

This study investigated the effects of propofol on the mRNA expression of Toll-like receptor-4 (TLR4) in BV-2 cells during mimic ischemia-reperfusion (I/R) injury in vitro. BV-2 cells, a mouse microglia line, were cultured and divided into 4 groups at random: control group (group C), ischemia/reperfusion group (group I/R), low-dose propofol (25 μmol/L) intervention group (group PF25) and high-dose propofol (100 μmol/L) intervention group (group PF100). The mRNA expression of TLR4 and NF-κB was measured by means of RT-PCR. TNF-α levels in the supernatants of BV-2 cells were detected by ELISA. The results showed that the mRNA expression of TLR4 and NF-κB was significantly higher in groups I/R, PF25 and PF100 than in group C (P<0.01). And the TNF-α level in the supernatants was elevated in groups I/R, PF25 and PF100 as compared with that in group C (P<0.01). After pre-treatment with propofol, the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and the TNF-α level were significantly decreased in groups PF25 and PF100 in comparison to those in group I/R (P<0.01). And the decrease in those indicators was more significant in group PF100 than in group PF25 (P<0.01). It was concluded that propofol exerted brain-protecting effects during I/R injury by suppressing the mRNA expressions of TLR4 and NF-κB and deceasing the TNF-α level.     

Toll样受体4在人肺泡上皮细胞株中的表达及其在细胞炎症反应中的作用

目的 明确人Ⅱ型肺泡上皮细胞是否表达Toll样受体4(TLR4),探讨TLR4在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用.方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒(E1A+组)和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组(E1A-组),分别以不同浓度的脂多糖(LPS,0、0.1、1、10μg/ml)、白细胞介素1β(IL-1β,0、0.1 ng/ml)、香烟提取物(CSE,0、10%、20%、40%)刺激.刺激后12、24 h,用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞IL-8 mRNA和TLR4 mRNA的表达,用蛋白质印迹技术测定核因子κB(NF-κB)亚单位P65蛋白的表达.结果 10μg/ml LPS、0.1 ng/ml IL-1β或20%CSE刺激24 h后,E1A+组IL-8 mRNA表达量(2.82、1.87、4.70)明显高于正常对照组(0.95、0.78、1.02,均P<0.05)和E1A-组(0.97、0.81、1.12,均P<0.05).10μg/ml的LPS刺激后12、24 h,E1A+组细胞TLR4 mRNA表达水平分别为4.52、7.99,明显高于正常对照组(1.91、3.81,均P<0.05)和E1A-组(2.00、3.88,均P<0.05);IL-1β也可增加TLR4 mRNA表达.CSE刺激对各组细胞TLR4 mRNA表达水平均无明显影响.3种刺激因子均可引起各组细胞NF-κB亚单位P65蛋白表达水平增高.结论 人Ⅱ型肺泡上皮细胞表达TLR4,LPS、IL-1β引起IL-8释放可能与TLR4介导的NF-κB激活有关.     

冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变.结果 冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10 μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少.结论 冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关.     

红花提取物对柯萨奇病毒感染心肌微血管内皮细胞的保护作用

目的探讨柯萨奇病毒B3(coxsackie virus B3,CVB3)对心肌微血管内皮细胞(cardiac myocardial microvascular endothelial cell,CMEC)的感染途径及红花提取物(主要有效成分为红花黄色素B,Safflower Yellow B,SYB)是否通过该途径对感染过程起到保护作用。方法将CMEC分为四组,分别为CVB3组、SYB组、CVB3+SYB组、对照组,采用TCID50浓度为10^-6.285/mL的病毒液对CVB3组及CVB3+SYB组的细胞进行干预,采用100 nmol/L的SYB对SYB组及CVB3+SYB组的细胞进行干预,分别在0 min、20 min、40 min、60 min提取细胞总蛋白和RNA,采用WB及RT-PCR方法测定每组细胞中Toll-样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)及核转录因子-B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达,进...     

丙泊酚抑制内毒素血症中巨噬细胞发生焦亡的分子机制

目的 探讨丙泊酚抑制巨噬细胞发生焦亡的分子机制。方法 提取小鼠骨髓来源巨噬细胞,分为对照组、脂多糖（LPS）+三磷酸腺苷（ATP）刺激组以及丙泊酚+LPS+ATP组。对照组不给予任何处理;LPS+ATP组先给予脂多糖(LPS) 1 μg/mL刺激4 h,再加三磷酸腺苷（ATP）4 mmol/L刺激1 h;丙泊酚+LPS+ATP组先同时给予50 μmmol/L丙泊酚+LPS 1 μg/mL刺激4 h,再加ATP刺激1 h。处理完毕则收集细胞培养上清液和细胞。分别通过CCK8、流式分析检测细胞活力,酶联免疫吸附测定法法检测细胞上清炎症因子IL-1β、IL-18含量;用免疫印迹检测细胞caspase-1蛋白表达及细胞膜Toll样受体-4（TLR4）表达;流式分析及免疫组化荧光检测细胞焦亡情况。结果 LPS+ATP可导致小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）活力显著降低（P<0.05）;炎症因子IL-1β、IL-18升高（P<0.05）;活化的caspase-1蛋白增加,细胞膜表面TLR-4表达升高（P<0.05）;予丙泊酚处理后,可改善LPS+ATP诱导的上述指标变化。结论 LPS+ATP可诱导BMDM发生焦亡,丙泊酚有效抑制这种细胞死亡,提示丙泊酚麻醉有益于临床脓毒症患者的手术,有效调节患者免疫状态。     

呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

目的 探讨呼吸道合胞病毒( RSV)合并肺炎克雷伯菌( Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系. 方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数( LI )的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α( TNF-α)和白细胞介素-1β( IL-1β)含量的变化.结果 与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重, LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB 蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组 LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧. 结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过 TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等.     

三磷酸腺苷对脂多糖诱导内皮祖细胞表达炎症因子的影响及其机制

目的：分析三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells,EPCs)表达炎症细胞因子的影响,并探讨其机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐 血单个核细胞,用RT-PCR检测LPS(1 mg/mL)诱导EPCs表达炎症细胞因子的情况,低浓度的ATP(5 μmol/L)对LPS诱 导EPCs表达细胞炎症因子的影响,不同浓度(5,50 μmol/L)的ATP对EPCs中TLR4,MyD88和CD14 mRNA表达的影 响;Western印迹检测LPS(1 mg/mL)对EPCs表达TLR4调节蛋白MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况,低浓 度ATP(1,5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达TLR4,MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况。结果：EPCs高表达 TLR4,其配体LPS(1 mg/mL)显著上调IL-1β,MCP-1和ICAM-1的mRNA表达(均P<0.01),并呈时间依赖性上调MyD88和 CD14蛋白的表达,同时活化ERK和NF-κB信号通路。低浓度ATP抑制LPS诱导的IL-1β,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达 (均P<0.05),同时也下调LPS诱导的TLR4,MyD88和CD14蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),并抑制LPS诱导的NF-κB信号 通路的活化(P<0.05)。结论：ATP在低浓度时通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在EPCs中的 表达。     

脂多糖促进人近端肾小管上皮细胞TLR4的表达

目的:研究人近端肾小管上皮细胞(HKC)在脂多糖(LPS)刺激下Toll样受体4(TLR4)的表达及作用。方法:实验细胞分两组,LPS刺激组(50mg/LLPS加入体外培养的HKC)和正常对照组;应用免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察LPS刺激24h后TLR4在HKC中的分布及表达强弱;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测各组TLR4及内参照β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量;Annexin V-FITC结合流式细胞仪检测各组细胞的早期凋亡率情况。结果:LPS刺激组TLR4的免疫荧光强度显著高于正常对照组,TLR4主要分布于HKC的胞膜及胞质区;刺激组TLR4 mRNA表达高于正常对照组(1.051±0.082比0.38±0.036),差异有显著性(P<0.01);刺激组TLR4蛋白表达高于正常对照组(0.371±0.033比0.105±0.008),差异有显著性(P<0.01);LPS刺激组细胞的早期凋亡率(41.29%)显著高于正常对照组(2.36%)。结论:LPS能刺激HKC高表达TLR4,且促进HKC的早期凋亡,TLR4可能在LPS诱导的HKC凋亡中发挥一定的作用。     

内毒素休克大鼠肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达

目的 探讨内毒素休克大鼠肾组织Toll样受体2(TLR2) mRNA和TLR4 mRNA的表达变化,以及血管活性肠肽(VIP)和甲基泼尼松龙(MP)的作用及可能机制.方法 采用大肠杆菌脂多糖(LPS)(E coli O55:B5)10 mg/kg静脉注射,建立大鼠内毒素休克模型(LPS组,n=16);LPS+VIP组(n=16)建模后注射VIP(5 nmol/kg),LPS+VIP+MP组(n=16)注射VIP(5 nmol/kg)和MP(3 mg/kg);另设生理盐水对照组(n=8).透射电子显微镜观察LPS注射6 h和24 h大鼠肾组织病理学变化;RT-PCR测定肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达.结果 建模后6 h,电子显微镜下见LPS组肾小球毛细血管内皮细胞肿胀,线粒体空泡变性;建模后24 h,可见LPS组肾小管细胞线粒体肿胀、空泡变性,细胞核轻度固缩;LPS+VIP组及LPS+VIP+MP组肾组织病变轻于同期LPS组.LPS注射6 h,LPS组、LPS+VIP组及LPS+VIP+MP组肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达均高于对照组(P<0.01);LPS注射24 h,LPS组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达高于其他组(P<0.01).结论 内毒素休克大鼠肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达增强;VIP和MP干预可减轻肾脏损伤,可能与其下调TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达有关.     

内毒素休克大鼠肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达

目的 探讨内毒素休克大鼠肾组织Toll样受体2（TLR2） mRNA和TLR4 mRNA的表达变化,以及血管活性肠肽（VIP）和甲基泼尼松龙（MP）的作用及可能机制。方法 采用大肠杆菌脂多糖（LPS）（E coli O55:B5）10 mg/kg静脉注射,建立大鼠内毒素休克模型(LPS组,n=16);LPS+VIP组(n=16)建模后注射VIP（5 nmol/kg）,LPS+VIP+MP组（n=16）注射VIP（5 nmol/kg）和MP（3 mg/kg）;另设生理盐水对照组（n=8）。透射电子显微镜观察LPS注射6 h和24 h大鼠肾组织病理学变化;RT-PCR测定肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达。结果 建模后6 h,电子显微镜下见LPS组肾小球毛细血管内皮细胞肿胀,线粒体空泡变性;建模后24 h,可见LPS组肾小管细胞线粒体肿胀、空泡变性,细胞核轻度固缩;LPS+VIP组及LPS+VIP+MP组肾组织病变轻于同期LPS组。LPS注射6 h,LPS组、LPS+VIP组及LPS+VIP+MP组肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达均高于对照组（P<0.01）;LPS注射24 h,LPS组TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达高于其他组（P<0.01）。结论 内毒素休克大鼠肾组织TLR2 mRNA和TLR4 mRNA表达增强;VIP和MP干预可减轻肾脏损伤,可能与其下调TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达有关。