MMP-9及TIMP-1在内毒素诱导性葡萄膜炎大鼠中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其组织型抑制剂(tissue inhitor of metallopoteinase-1，TIMP—1)在内毒素诱导性葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型中的表达及意义。方法 200μg伤寒杆菌内毒素注射于SD大鼠双后足垫。建立EIU模型。在内毒素注射后的不同时间点处死大鼠。采用免疫组织化学方法和计算机图像分析系统检测MMP-9和TIMP-1在不同时间点的表达及其积分吸光度(A)值。结果内毒素注射6h开始出现炎症，以后炎症加重。于24h达到炎症高峰，以后炎症减轻。7d时基本消退。虹膜上皮细胞，睫状体上皮细胞和渗出的炎症细胞表达MMP-9和TIMP-1。MMP-9在6h出现表达，18～24h达高峰，以后逐渐下降，7d消失。TIMP—1于24h出现表达，72h达高峰，以后逐渐下降。结论 大鼠EIU模型炎症早期MMP-9活性增高，继而TIMP-1分泌增多，MMP-9活性受抑，炎症减轻。提示MMP-9可能是参与EIU的重要调控因子，而TIMP-1则在炎症的抑制过程中发挥了重要作用。     

结膜瓣覆盖治疗角膜碱烧伤中MMP-9和TIMP-1的表达

目的：研究结膜瓣覆盖术治疗兔角膜碱烧伤中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织型基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的表达机制。方法：将50只兔随机分成实验组及对照组,每组分别25只,建立兔角膜烧伤模型。实验组在角膜烧伤后当天行结膜瓣覆盖术。采用免疫组化法测定两组角膜碱烧伤后不同时间点MMP-9和TIMP-1的表达。结果：MMP-9在角膜碱烧伤后的3d开始升高,14d达到最高,之后逐渐下降;而TIMP-1在伤后即有表达,7d有所下降,于14d达到最低,21d达到峰值。实验组MMP-9的表达均明显低于对照组,且角膜碱烧伤后的3,14,21d和28d差异有统计学意义（P〈0.05）;而TIMP-1则明显高于对照组,且角膜碱烧伤后3,14d和21d差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：角膜碱烧伤的病理损伤及修复过程中,MMP-9及TIMP-1的表达密切相关。结膜瓣覆盖治疗重度角膜碱烧伤的疗效确切。     

小鼠角膜碱烧伤行羊膜移植对MMP-9、TIMP-1在新生血管形成中的影响

目的探讨小鼠角膜碱烧伤行羊膜移植对基质金属蛋白酶9(matrixmetalloproteinase9,MMP9)、金属蛋白酶组织抑制剂1(tissueinhibitorofmetalloproteinase1,TIMP1)在新生血管形成中的影响以及MMP9及TIMP1在角膜新生血管形成中的作用。方法昆明小鼠40只,随机分为实验组和对照组,每只鼠均取右眼为实验眼。采用1mol·L-1NaOH溶液烧伤小鼠角膜,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型。对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植,对照组不行羊膜移植。分别在羊膜移植后的0d、2d、7d、14d处死2组小鼠,摘除右眼球,行免疫组织化学染色并用计算机图像分析系统检测2组小鼠MMP9及TIMP1在角膜中的分布及其平均吸光度值的变化。结果免疫组化结果:对照组碱烧伤角膜后第2d,可见MMP9出现表达,第7dMMP9的染色较第2d增强,基质层可见大量新生血管,且血管内皮细胞可见表达,14d达高峰;TIMP1开始表达不明显,第7d出现表达,14d达高峰。羊膜移植组各时间点MMP9表达低于对照组,而TIMP1表达高于对照组。结论碱烧伤后小鼠角膜中MMP9表达增加,在新生血管形成的过程中起一定作用。羊膜可能具有抑制MMP9在碱烧伤小鼠角膜中表达的作用,而且羊膜同时促使TIMP1在后期表达水平升高,从而抑制MMP9的活性,抑制和减缓碱烧伤后角膜新生血管的发生和发展。     

MMP-9、TIMP-1在大鼠视网膜缺血-再灌注损伤中的表达

目的 探讨高眼压视网膜缺血-再灌注(retina ischemia-reperfusion，RIR)损伤时大鼠视网膜基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9，MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1，TIMP-1)的动态变化及意义。方法 利用前房高压灌注法造成大鼠视网膜缺血1h，再恢复其供血，并于再灌注0h、3h、12h、24h、48h和72h后处死，采用免疫组化SP法和计算机图像分析系统检测视网膜MMP-9和TIMP-1的表达和分布。结果 RIR 0h视网膜MMP-9表达极弱，MMP-9阳性染色于RIR3h出现，12h迅速增加，24h达高峰，以后逐渐下降，72h接近正常。RIR各时段TIMP-1水平无明显改变。结论 MMP-9是参与RIR损伤的重要因素．     

MMP-9、TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用

目的：研究MMP-9及TIMP-3 mRNA在实验性小鼠CNV形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用。 方法：使用半导体二极管激光器（810nm）对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射（120mW,75μm,0.1s）以诱导CNV形成,分别于激光后1,3d;1,2,4wk取出眼球,采用原位杂交技术及图象分析对MM-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。 结果：MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,MMP-9 mRNA水平1,2,4wk〉3d〉1d（P〈0.05）,而TIMP-3mRNA表达3d;1,2,4wk〉1d（P〈0.05）。 结论：MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

MMP-2和MMP-9在视网膜母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)中基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及其与临床病程的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测41例Rb组织中MMP-2和MMP-9的表达;用HMIAS-2000型全自动医学彩色图像分析系统测量其平均光密度值。统计学方法比较不同临床和病理阶段Rb表达MMP-2和MMP-9的差异。结果在41例Rb组织切片中均有MMP-2和MMP-9的表达。有视神经浸润的肿瘤MMP-2和MMP-9表达水平明显高于无视神经浸润的肿瘤(P<0.01),处于眼外期的肿瘤MMP-2和MMP-9的表达水平明显高于眼内期和青光眼期的肿瘤(P<0.01)。结论Rb细胞内有MMP-2和MMP-9的表达。MMP-2和MMP-9的表达水平与视神经浸润和临床分期存在密切的关系,提示其表达水平与该肿瘤的浸润与发展有关。     

MMP-9、TIMP-3在小鼠脉络膜新生血管形成中的作用(英文)

目的:研究MMP-9及TIMP-3 mRNA在实验性小鼠CNV形成过程中的表达,探讨二者在CNV发生机制中的作用。方法:使用半导体二极管激光器(810nm)对C57BL/6J小鼠视网膜进行照射(120mW,75μm,0.1s)以诱导CNV形成,分别于激光后1,3d;1,2,4wk取出眼球,采用原位杂交技术及图象分析对MM-9、TIMP-3 mRNA的表达情况进行检测。结果:MMP-9、TIMP-3 mRNA表达在CNV形成过程中均有一动态过程,MMP-9 mRNA水平1,2,4wk>3d>1d(P<0.05),而TIMP-3mRNA表达3d;1,2,4wk>1d(P<0.05)。结论:MMP-9与TIMP-3 mRNA表达变化的失衡促使基质降解作用的发挥,在CNV的形成中可能发挥了一定作用。     

不同浓度重组Canstatin蛋白对碱烧伤后角膜MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的：探讨不同浓度重组Canstatin蛋白对碱烧伤后小鼠角膜基质金属蛋白酶－2（ matrix metalloproteinase－2,MMP－2）及其组织抑制剂－2（ tissue inhibitor of metalloproteinase－2, TIMP－2）表达的影响及其调节作用。方法：BALB／c小鼠60只随机分为实验组A、实验B及对照组C,每组20只。采用1mol／L氢氧化钠溶液烧伤小鼠右眼角膜,建立炎症性角膜碱烧伤动物模型,分别予以A组、B 组重组 Canstatin 蛋白3μg／mL、5μg／mL 点右眼,4次／d,对照组C组予以生理眼水点右眼。在碱烧伤后第1、3、7、14d以形态学分析评价角膜上皮损伤面积及新生血管生长的情况,并于碱烧伤后第1、3、7、14 d 应用Western－blot检测角膜MMP－2和TIMP－2的表达,增强化学发光法（ ECL）对结果进行分析。结果：形态学分析显示,A组和B组小鼠在碱烧伤后第3d起各时间点角膜上皮缺损面积均小于对照组（P＜0．01）,角膜新生血管均得到抑制,CNV面积明显小于对照组（ P＜0．01）。 Western－blot结果显示,碱烧伤后各时间点MMP－2的表达,A组和B组均明显低于对照组（P＜0．01）,TIMP－2的表达高于对照组（P＜0．01）,且A组和B组间MMP－2的表达在第14d比较差异有统计学意义（P＜0．05）,TIMP－2的表达在第7d及第14d比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：重组Canstatin蛋白可通过抑制角膜细胞及浸润的炎性细胞产生MMP－2,促进TIMP－2表达,从而抑制和延迟碱烧伤后角膜融解的发生和发展,对碱烧伤后角膜的重塑起着重要作用。     

Ets-1、MMP-1及TIMP-1在视网膜母细胞瘤中的表达

目的探讨E26转录因子-1(E26 transformation-specific-1,Ets-1),基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)及其抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)在视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma Rb)中的表达及其与肿瘤的浸润及转移的关系.方法以免疫组织化学法检测视网膜母细胞瘤中的Ets-1,MMP-1和TIMP-1的表达,并以免疫组织化学法检测视网膜母细胞瘤中CD34的表达,计算肿瘤的微血管密度值(microvessel density,MVD).并依肿瘤的分级进行统计学处理.结果Ets-1和MMP-1在视网膜母细胞瘤中呈高表达,TIMP-1呈低表达.Ets-1和MMP-1主要表达于癌细胞胞浆中.Ets-1和MMP-1高表达组的微血管密度明显高于Ets-1和MMP-1低表达组(P＜0.01).结论Ets-1和MMP-1的高表达及TIMP-1的低表达可能与视网膜母细胞瘤的转移浸润有关.     

外伤性PVR大鼠视网膜中MMP-9、TIMP-1的表达及意义

目的:为研究外伤性PVR和外伤后应用GM6001干预大鼠视网膜组织MMP-9及TIMP-1、在不同病程中的表达变化。方法:360只SD大鼠随机分为正常对照组、外伤性PVR组和外伤后应用GM6001组。正常对照组玻璃体腔内注射生理盐水;外伤性PVR组玻璃体腔内注射PRP血浆制成外伤性PVR大鼠动物模型;外伤后应用GM6001组在外伤后12h玻璃体腔内注射GM6001。应用免疫组化染色方法分别于1,3,7,14,21,28d对各组大鼠视网膜组织MMP-9及TIMP-1的表达检测。结果:免疫组化结果示MMP-9、TIMP-1蛋白均主要表达于视锥视杆层、视网膜内外网状层、神经纤维层。MMP-9在正常对照组、外伤后应用GM6001组的各个亚组微弱表达。MMP-9在外伤性PVR组1,3,7d显著表达,与正常对照组和外伤后应用GM6001组的差异有显著性(P(0.01),随着病程的延长,MMP-9的表达呈进行性减弱的趋势;TIMP-1在外伤性PVR组与外伤后应用GM6001组的各个亚组均有明显表达,与正常对照组的差异均有显著性(P(0.01)。MMP-9/TIMP-1比率在外伤性PVR组1,3,7d增高,与正常对照组和外伤后应用GM6001组的差异均有显著性(P(0.05)。结论:MMP-9、TIMP-1参与了PVR发生发展的病理过程,MMP-9/TIMP-1比率增高促进PVR发生发展的进程。人工合成基质金属蛋白酶抑制剂GM6001可促进MMP-9/TIMP-1动态平衡的重新建立,从而在外伤性PVR的防治中起重要作用。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制剂与白内障

基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是一类金属依赖的水解酶家族,是细胞外基质(extracelluarmatrix,ECM)降解的主要介质,其主要功能是降解细胞外基质,在细胞迁移、组织重建和修复等病理生理过程中发挥作用。MMPs的蛋白水解活性主要靠与其抑制剂(tissueinhibitorofMMPs,TIMPs)之间平衡来调节。近年来研究表明,MMPs/TIMPs功能异常同眼部许多疾病有关,如原发开角型青光眼、白内障、翼状胬肉、年龄相关性黄斑变性等有关。     

羊膜移植对实验性单疱病毒角膜炎中MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的探讨羊膜移植对单疱病毒性角膜炎中基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制剂(TIMP-1)在小鼠角膜中的表达影响及意义。方法将40只Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,将5μL含有100×103pfuHSV-1病毒的DMEM滴于2组小鼠右眼划伤角膜表面建立单疱病毒性角膜炎模型,对实验组小鼠右眼角膜行羊膜移植术;对照组不行羊膜移植。在羊膜移植术后0、2d、7d、14d处死动物,用免疫组织化学染色方法和计算机图像分析系统检测2组小鼠MMP-9及TIMP-1在角膜中的分布及其平均光度值。结果羊膜移植组临床评分显示各时间点角膜上皮病变、角膜混浊和新生血管明显低于对照组。免疫组织化学染色对照组角膜中MMP-9在第2d出现表达,第14d达高峰。TIMl-1开始表达不明显,第7d出现表达,14d达高峰。羊膜移植组各时间点MMP-9表达低于对照组,而TIMP-1表达高于对照组。结论羊膜移植术可通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达平衡,从而抑制和延迟HSV感染后单纯疱疹病毒性角膜炎的发生和发展。     

基质金属蛋白酶及其组织抑制因子与后发性白内障

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)是一类金属依赖的水解酶家族,是细胞外基(extracelluar matrix,ECM)降解的主要介质,其主要功能是降解细胞外基质,在细胞迁移、组织重建和修复等病理生理过程中发挥作用。MMPs的蛋白水解活性主要靠与其抑制剂(tissueinhibitor of MMPs,TIMPs)之间平衡来调节。组织中MMPs与TIMPs之间保持着相对平衡状态,它们的平衡和相互影响决定着细胞外基质是降解还是聚集。ECM不但可作为晶状体上皮细胞(LECs)生长增殖的支架,而且还起促进LECs增殖、移行和黏附作用,最终导致晶状体后囊膜的混浊和纤维化。     

GM6001对碱烧伤角膜组织中基质金属蛋白酶表达及活性的影响

目的 检测正常和碱烧伤后不同时间角膜组织中明胶酶(MMP-2，MMP-9)和胶原酶(MMP-1)的表达，探讨在角膜融解发生中的作用．方法 兔角膜碱烧伤20眼，分为对照组和GM600l治疗组，于伤后12、24、48、72h，1、2周和1个月取材，酶谱法检测角膜组织中明胶酶MMP-2、MMP-9的表达，Western blot检测胶原酶MMP-1的表达。结果 在正常兔角膜中，仅检测到微弱的明胶酶原MMP-2，碱烧伤后1周后开始明显升高，至烧伤后1个月维持较高水平，并在2周时出现MMP-2活性酶的表达，并持续至烧伤后1个月。明胶酶MMP-9在正常角膜组织中检测不到，但烧伤后24h开始表达，于烧伤后1周达到最高，然后逐渐下降，至伤后1个月已检测不到。胶原酶MMP-1在正常组织中检测为阴性，从伤后24h开始升高，1个月内无下降。GM6001治疗组角膜组织MMP-2、MMP-9及MMP-1的表达均明显低于对照组。结论 基质金属蛋白酶参与碱烧伤角膜组织的融解，GM6001可抑制MMPs的活性，进而抑制角膜融解的发生。     

TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞基质金属蛋白酶2及其抑制剂表达

目的观察转染基质金属蛋白酶2抑制剂(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase2,TIMP-2)基因的豚鼠巩膜成纤维细胞不同时间增生能力及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP-2)和TIMP-2的表达,探讨基因治疗近视的可行性。方法随机选取三色健康豚鼠,组织块法体外培养原代巩膜成纤维细胞,免疫组织化学法进行波形蛋白的鉴定,取第3～6代细胞进行实验。分子克隆构建携带TIMP-2基因的真核表达载体,转染豚鼠巩膜成纤维细胞,MTT法观察转染后12h、24h、48h、3d、5d、7d细胞增生能力。提取总RNA,二步法逆转录-聚合酶链反应检测MMP-2mRNA及TIMP-2mRNA的表达水平。结果豚鼠巩膜成纤维细胞原代、传代培养生长良好,波形蛋白鉴定阳性。转染3d、5d、7d TIMP-2基因转染组成纤维细胞的增生速度分别为0.6724±0.0092、0.7963±0.0060、0.8462±0.0064,明显快于正常对照组成纤维细胞(0.5810±0.0120、0.6525±0.0072、0.7129±0.0132),差异均具有显著统计学意义(均为P<0.01)。转染48h MMP-2mRNA表达即开始减少,转染3d时表达明显减少,达到最低,除转染12h与24h之间外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间MMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。TIMP-2mRNA表达在转染48h时即开始增加,除12h与24h外,转染组与正常对照组、各转染不同时间组间TIMP-2mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论转染TIMP-2基因对豚鼠巩膜成纤维细胞有促增生作用,TIMP-2基因转染豚鼠巩膜成纤维细胞抑制MMP-2mRNA的表达,可在一定程度上阻止近视发展中巩膜组织的丢失与重塑。     

基质金属蛋白酶抑制剂对视网膜新生血管化抑制作用的实验研究

目的 探讨基质金属蛋白酶（PPMS）抑制剂对视网膜新生血管化抑制作用的应用价值。方法 将新生7天的C57BL／6J小鼠暴露75％高氧中5天,再置于一般空气中5天,造成视网膜新生血管化的动物模型,分成3组,其中1组为对照组。实验组中1组给予Batimastat腹腔注射,另1组注射生理盐水作对照。用免疫组化染色,并用显微镜下微血管计数方法研究视网膜新生血管及其使用MMPS抑制剂的情况。同时采用酶谱法,分析MMPS在各组中含量的变化。结果 注射Batimastat的试验组微血管的数量明显低于注射生理盐水的对照组,同时MMPS的表达也减少,具有统计学显著性差异。结论 Batimastat作为一种新的MMPS抑制可以抑制视网膜新生血管化,并减低MMPS的表达。