NO供体V-PYRRO/NO抑制大鼠肝脏I/R损伤早期LTC4S基因表达

目的探讨肝脏特异性NO供体V-PYRRO/NO对肝脏缺血再灌注(I/R)早期白三烯C4合酶(LTC4S)基因表达的作用机制。方法将大鼠随机均分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)(70%左右肝脏缺血60 min再灌注5 h模型)和V-PYRRO/NO+缺血再灌注组(V-PYRRO/NO)[经静脉给予V-PYRRO/NO 1.06μmol/(kg·h)]。用RT-PCR法检测肝脏组织LTC4S mRNA的表达,Western blot法检测肝细胞胞质和细胞核提取物中NF-κB p65、p50和IκB蛋白表达。结果 I/R组肝脏组织中LTC4S mRNA的表达显著高于假手术组(P0.05),而V-PYRRO/NO干预组LTC4S mRNA的表达则明显降低(P0.05);与假手术组相比,I/R组肝细胞核提取物中NF-κB p65和p50蛋白表达上调(P0.01),而胞质中的相关蛋白明显下调(P0.01);V-PYRRO/NO组则完全逆转了I/R期间肝细胞核提取物中NF-κB p65和p50蛋白表达增强(P0.05),以及胞质中的相关蛋白降低(P0.01,P0.05)。但各实验组IκB蛋白的表达无显著差异。正常大鼠肝脏中,胞质和胞核内NF-κB p65几乎不着色;I/R组肝细胞胞质和胞核中NF-κB p65表达强阳性,但V-PYRRO/NO I/R组肝细胞胞质和胞核中NF-κB p65阳性反应明显减弱。结论在大鼠肝脏I/R损伤早期,V-PYRRO/NO下调了LTC4S mRNA的表达,其机制可能涉及抑制不依赖于IκB降解的NF-κB信号传导途径。     

肝X受体激动剂对脂多糖诱导的炎症反应相关因子IRAK-4和NF-κB的影响

目的:观察在枯否细胞中人工合成的肝X受体激动剂在脂多糖(LPS)诱导的炎症反应中,对白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK-4)和核因子NF-κB的影响.方法:雄性昆明小鼠,用胶原酶原位灌注法分离和培养肝脏Kupffer细胞,获得的细胞随机分为正常对照组、 LPS处理组、 LXR人工合成激动剂T0901317处理组和LPS+T0901317共同处理组.实时-聚合酶链式反应和蛋白Western blot检测各组细胞LXR、 IRAK-4和NF-κB的 mRNA和蛋白表达水平;凝胶电泳迁移率(EMSA)检测NF-κB活性水平.结果:LXR mRNA和蛋白在T0901317组表达都是最高的,而在LPS处理组最低.IRAK4和NF-κB的mRNA和蛋白水平在LPS处理组最高,联合处理组要低于LPS处理组.NF-κB的活性在LPS最高,联合处理组和T0901317处理组都较LPS组降低.结论:LXR激动剂能有效的上调LXR基因和蛋白水平,同时抑制TLR4信号通路中IRAK-4和NF-κB的mRNA水平和蛋白表达水平,并且能抑制NF-κB的活化.     

丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质TNF-α和NF-κB表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法选取36只健康雄性大鼠,随机分为假手术组(Sham,12只),缺血再灌注组(I/R,12只)和丹参酮ⅡA治疗组(TanⅡA,12只),用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,脑缺血2h再灌注24h后,应用免疫组织化学方法与Western blot方法检测大鼠手术侧顶叶皮质TNF-α和NF-κB的表达。结果与Sham组相比,I/R组大鼠顶叶皮质TNF-α与NF-κB蛋白的阳性表达的平均光密度值显著升高(0.05);而与I/R组相比,TanⅡA组大鼠顶叶皮质TNF-α与NF-κB蛋白的阳性表达的平均光密度值显著降低(0.05)。结论丹参酮ⅡA能够降低脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质TNF-α与NF-κB蛋白的表达水平。     

富氢液对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨富氢液(HRS)对大鼠肾缺血再灌注肾功能及TLR4/NF-κB信号通路表达的影响。方法SPF级雄性SD大鼠30只,随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、富氢液组(HRS组),每组10只。S组麻醉开腹后右肾切除;I/R组行右肾切除,左肾缺血45min,再灌注60min,造肾缺血再灌注模型;HRS组于术前口服40 ml/kg富氢液,连续3d后建立I/R模型。每组于I/R后6h取取血样,分离血浆,多功能生化仪检测肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;ELISA检测IL-1β和TNF-α含量;另取肾脏,HE染色观察病理组织学变化,Western-blot检测TLR4、Myd88、NF-κB表达变化。结果 HRS可减轻由I/R造成的肾损伤,减低血浆中Scr、BUN、IL-1β和TNF-α含量,抑制肾脏TLR4、Myd88、NF-κB表达(P0.05)。结论 HRS减轻由I/R引起的肾功能障碍,抑制炎性反应,对肾脏有一定的保护作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。     

NF-κB参与七氟烷预处理所致延迟性抗大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的 观察七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的延迟性保护作用,探讨NF-κB参与保护作用的机制.方法 雄性SD大鼠随机分为:对照组(CON组);缺血再灌注组(I/R组);七氟烷延迟性组(SWOP组);七氟烷对照组(SEVO组);PTN(NF-κB特异性阻断剂)组;DMSO组以及PTN+ SWOP组.用TTC染色法测定心肌梗死范围;Western blot法检测NF-κB(P65,P50)蛋白表达.结果 与I/R组相比SWOP组梗死范围减小,且该作用可被PTN所阻断;SWOP组缺血前NF-κB(P65,P5O)蛋白表达(56±4,58±3)高于CON组(34±4,40 ±1);I/R和SWOP组再灌注后NF-κB(P65,P50)蛋白表达均上调,SWOP组蛋白上调幅度低于I/R组.结论 七氟烷预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用;NF-κB可能参与了其延迟性保护机制.     

肿瘤坏死因子-α预处理与缺血预处理在减轻肝脏缺血再灌注损伤的作用

目的研究采用肿效瘤坏死因子-α(TNF-α)预处理与采用缺血预处理两种方法对减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)的作用效果,并探讨采用TNF-α预处理减轻大鼠肝脏IRI的机制。方法将40只Wistar大鼠随机分为4组:假手术组(SO组)仅行开腹及游离肝十二指肠韧带;缺血再灌注组(IR组)采用Pringle’s法阻断肝门30 min,再灌注6 h;缺血预处理组(IPC组)采用Pringle’s法阻断肝门10 min,开放血流10 min,此后操作同IR组;TNF-α预处理组(TPC组),术前30 min给予TNF-α1μg/kg腹腔注射,此后操作同IR组。检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST),采用免疫组织化学检测Bcl-2蛋白和NF-κB p65蛋白表达情况,以及肝细胞凋亡指数(AI)。结果 IPC组血清ALT、AST水平为(316.4±90.6)U/L、(316.4±90.6)U/L,TPC组为(336.8±79.4)U/L、(392.7±109.3)U/L,与IR组(642.8±149.3)U/L、(730.6±103.0)U/L比较明显降低,P0.05差异有统计学意义;肝细胞凋亡评分AI在IPC组(4.36+0.88)和TPC组(4.94+2.04)明显降低,与IR组(9.48+2.42)比较,P0.05差异有统计学意义;肝组织内Bcl-2蛋白阳性表达在IPC组(62.30+9.20)和TPC组(60.99+6.30)升高,与IR组(11.45+11.97)比较,有显著性差异(P0.05);NF-κB p65阳性表达在IPC组(31.56+4.85)和TPC组(32.80+5.30)明显降低,与IR组(68.33+6.07)比较,有显著性差异(P0.05)。上述各项指标在IPC组与TPC组间,差异无统计学意义(P0.05)。结论采用TNF-α预处理与缺血预处理对减轻大鼠肝脏IRI的效果一致,TNF-α预处理通过抑制NF-κB p65蛋白表达、激活凋亡抑制基因Bcl-2蛋白表达,减轻了大鼠肝脏IRI。     

1,2-二甲磺酸乙烷预处理对雄性SD大鼠肾脏缺血再灌注损伤的影响

目的:探究1,2-二甲磺酸乙烷(EDS)预处理是否对雄性SD大鼠缺血再灌注肾脏损伤有保护作用及其可能机制。方法:夹闭双侧肾蒂45 min,构建雄性SD大鼠肾脏缺血再灌注模型;48只雄性SD大鼠随机分为6组:空白对照组(blank)、假手术组(sham)、肾脏缺血再灌注组(I/R)、EDS预处理+肾缺血再灌注组(EDS+I/R)、EDS预处理+睾酮+肾缺血再灌注组(EDS+TST+I/R)和阉割+肾缺血再灌注组(Cast+I/R)。术前1 h及再灌注后24 h采血检测血清黄体生成素、睾酮、血肌酐、血尿素氮以及尿液肾损伤分子1(KIM-1)水平;取肾脏组织,检测TNF-α水平、Fas mRNA与caspase-3蛋白表达情况。结果:(1)EDS+I/R与Cast+I/R组比较,血肌酐和尿素氮无显著差异(P0.05),但KIM-1水平却低于Cast+I/R组(P0.05),2组血肌酐、血尿素氮和KIM-1均高于另外3组(P0.05)。(2)与术前1 h相比,再灌注术后24 h,EDS+I/R、Cast+I/R及EDS+TST+I/R组均伴睾酮及黄体生成素下降(P0.05)。(3)EDS+I/R组TNF-α水平、Fas mRNA及caspase-3蛋白表达水平均显著低于Cast+I/R与I/R组(P0.05)。结论:EDS预处理可大幅降低血清睾酮水平,从而减轻雄性SD大鼠肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能与TNF-α介导的Fas/Fas L通路有关。     

槐定碱抑制脂多糖诱导巨噬细胞系NF-κB表达

目的观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组及槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS 100μg/L孵育1 h,弃去LPS后加入槐定碱15.63 mg/L,作用5、30、60和120 min,分别获取细胞与培养液。RT-PCR与Western blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P<0.01),IκBαmRNA低于同时间点对照组(P<0.01或P<0.05);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P<0.01或P<0.05),而IκBαmRNA则显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF-α分泌是其抗内毒素作用机制之一。     

槐定碱抑制LPS诱导巨噬细胞株NF-κB表达

 摘 要：目的 观察槐定碱对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞IKKβ,IκBα,NF-κB P65及TNF-α表达的影响,探讨其抗内毒素机制。方法 培养RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱干预组。槐定碱干预组加入LPS100μg/L孵育1h,弃去LPS后加入槐定碱15.63mg/L,作用5、30、60、120min,分别获取细胞与培养液。RT - PCR与Western Blot分别检测NF-κB等的mRNA与蛋白表达,放免法检测培养液中TNF-α含量。结果 LPS组各时间点IKKβ、pIκBα、NF-κB P65 mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均显著高于同时间点对照组(P < 0.01);槐定碱干预组以上因子mRNA和/或蛋白表达及TNF-α含量均较同时间点LPS组显著回落(P < 0.01)。结论 槐定碱调控LPS激活的巨噬细胞NF-κB通路IKKβ、IκBα、NF-κB P65等分子的表达,进而抑制下游TNF – α分泌是其抗内毒素作用机制之一。     

匹诺塞林缓解大鼠肝细胞系BRL-3A低氧/复氧损伤

目的探讨匹诺塞林(PIN)对低氧/复氧(H/R)诱导的大鼠肝细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法将大鼠肝细胞(BRL-3A细胞系)分为正常对照组、PIN实验组、低氧复氧损伤模型组和PIN预处理组。CCK-8检测细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞计量术检测细胞凋亡;检测细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)活性;ELISA检测TNF-α和IL-1β含量;Western blot检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65蛋白水平;RT-q PCR检测细胞中TLR4、IκB-α和NF-κB P65mRNA表达。结果在H/R条件下细胞存活率明显降低(P0.01),细胞凋亡率增高(P0.001),ALT活性升高(P0.01),IL-1β和TNF-α含量增多(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平显著提高(P0.01)而IκB-α降低(P0.05);经PIN预处理后,细胞存活率显著提高(P0.01),细胞凋亡率显著减小(P0.001),ALT活性降低(P0.01),IL-1β和TNF-α含量降低(P0.01),TLR4和NF-κB P65蛋白与mRNA表达水平明显降低(P0.01)而IκB-α升高(P0.05)。结论 PIN对H/R诱导的BRL-3A肝细胞的损伤具有保护作用,且该作用可能是通过TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

“失血加LPS”大鼠肺脏IκBα和TLR4基因表达及参麦的肺脏保护作用

目的： 探讨参麦注射液的抗休克效果及其作用机制。 方法： 大鼠随机分为单纯失血性休克（HS）组、失血加脂多糖（HS+LPS）组、地塞米松（HS+LPS+Dex）组和参麦注射液（HS+LPS+SM）组。HS+LPS组大鼠模型复制：首先，大鼠放血至MAP 40 mmHg,维持10 min（失血性休克），然后舌下静脉注射LPS（1.5 mg/kg）。4h后留取肺脏组织,RT-PCR法测定IκBα和TLR4 mRNA表达、ELISA法测TNF-α含量，并进行肺脏组织电镜观察。 结果： HS+LPS+SM组TLR4 mRNA表达明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组IκBα mRNA表达明显高于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺脏组织匀浆TNF-α含量明显低于HS+LPS组（P<0.05）；HS+LPS+SM组肺组织病理损伤显著轻于HS+LPS组。 结论： 参麦注射液能够下调肺脏组织中TLR4 mRNA表达，同时上调IκBα的表达，进而抑制促炎介质TNF-α释放，提示参麦注射液可能通过调节NF-κB信号转导途径抑制炎症反应而对机体细胞起保护作用。     

丙酮酸乙酯对LPS致急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB p65及TNF-α和IL-lβ的影响

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核转录因子-κB(NF-κB)p65表达及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)含量的影响,探讨EP可能的肺保护机制。方法:雄性SD大鼠30只随机分为三组(n均=10):正常对照组,静脉注射与其它二组等量生理盐水;LPS组,静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg复制大鼠ALI模型;EP+LPS组,于静脉注射LPS前1h腹腔内注射EP(40mg/kg)。所有动物于注射LPS或生理盐水后4h颈动脉放血处死,取肺组织用Westernblot测定其NF-κBp65的表达,用ELISA测定其TNF-α和IL-1β的含量。结果:与对照组相比,LPS组、EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达增加,肺组织TNF-α和IL-lβ含量升高(P0.05);与LPS组相比,EP+LPS组肺组织NF-κBp65表达降低,肺组织TNF-α和IL-lβ含量降低(P0.05)。结论:EP通过下调大鼠LPS诱导的肺组织NF-κBp65表达,降低了TNF-α和IL-lβ的释放。EP可减轻ALI大鼠肺的炎症反应。     

灯盏细辛对肺缺血-再灌注损伤时核转录因子-κB表达的影响

目的：探讨灯盏细辛对肺缺血-再灌注（I/R）损伤时核转录因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法: 建立大鼠在体肺原位I/R损伤模型，将32只大鼠随机分为假手术组（I组）、缺血-再灌注组（II组）、小剂量灯盏细辛组（25 mg/kg,III组）、大剂量灯盏细辛组（50 mg/kg,IV组）；观察各组肺湿干重比（W/D），检测各组肺组织髓质过氧化物酶（MPO）活性，应用免疫组化及Western blotting法检测肺细胞核内NF-κB活性及含量，光镜下HE染色观察病理形态学改变、电镜观察肺组织超微结构变化。结果: III、IV组W/D、MPO活性及细胞核内NF-κB含量均明显低于II组，肺水肿程度及肺超微结构损害显著轻于II组；III、IV组之间比较差异显著（P<0.05）。结论: 灯盏细辛对肺缺血-再灌注损伤具有防治作用，其机制可能与其抑制NF-κB活化，从而减少中性粒细胞浸润、抑制炎症损伤有关。     

WDR5在大鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的:探讨WDR5基因在肾脏缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法:成年雄性SD大鼠48只,按照随机数表法分为对照组、缺血再灌注损伤组(IR组)、药物溶剂组(DMSO组)、WDR5-0103低剂量组(1mg/kg)、WDR5-0103中剂量组(5mg/kg)、WDR5-0103高剂量组(25mg/kg).对照组:仅切除大鼠...     

肠缺血再灌注损伤小鼠髓样细胞触发受体-1表达的改变及意义

目的 建立小鼠肠缺血再灌注（I/R）损伤模型,观察小鼠小肠I/R损伤后髓样细胞触发受体-1（TREM-1）的表达及其与炎症因子水平变化的关系。方法 将72只小鼠按数字表法随机分为3组,对照组（N组）8只、假手术组（S组）32只、I/R损伤组（I/R组）32只。制备肠I/R损伤模型,制模后S组与I/R组分别于6、12、24、48 h处死8只小鼠取标本：ELISA测定外周血清中可溶性（s）TREM-1、TNF-α的水平并进行相关性分析;免疫组织化学检测小肠组织中TREM-1的表达。结果 I/R组24 h时TREM-1浓度达峰值为（1 272.88±295.52）pg/ml,各时段浓度均高于N组[（168.99±22.79） pg/ml]和S组[24 h（178.58±10.98） pg/ml],差异均有统计学意义（P值均〈0.01）。I/R组TNF-α值 12 h[（33.03±4.12） pg/ml]开始升高, 24 h[（94.01±9.44） pg/ml]达峰值。sTREM-1表达和TNF-α浓度的变化呈正相关（r=0.840,P=0.000）。免疫组化显示在I/R损伤后小鼠肠sTREM-1表达增高,24 h组染色积分最高为（3.38±0.66）分,且阳性部位主要是小肠黏膜固有层和上皮细胞。结论 小肠组织sTREM-1的表达上调可能是导致肠黏膜屏障功能下降及系统性炎症反应的重要环节;sTREM-1可作为判断肠I/R肠黏膜损伤严重程度的的检测指标。     

NBD多肽预处理对局灶脑缺血再灌注大鼠脑内核因子-κB核转位活化的影响

目的探讨NBD多肽预处理对局灶脑缺血再灌注大鼠大脑缺血皮质细胞内核因子-κB活化的影响。方法将SD健康雄性大鼠（280～300g）共36只随机分为假手术组（n=6）、模型组（n=15）、药物组（n=15）。缺血模型制备前2h经右侧侧脑室注射NBD多肽25μl进行预处理。运用改良线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞再灌注大鼠模型。运用免疫组化检测再灌注后72hNF-κBp65在胞浆／胞核的蛋白表达变化;运用免疫荧光定位及Western印迹（半定量）检测NF-κB p65及IκBα的蛋白表达情况。结果免疫组化结果显示与假手术组比较,再灌注72h模型组胞浆／胞核内NF-κB p65大量表达（P〈0．05）;NBD多肽预处理后NF-κB p65主要在胞浆表达,胞核内表达明显减少（P〈0．05）;免疫荧光双标定位及Western印迹半定量检测显示模型组胞浆／胞核内NF-κB p65蛋白均大量表达（P〈0．05）,IκBα蛋白呈现低表达（P〈0．05）;NBD多肽预处理后胞核内NF-κB p65蛋白表达明显减少,主要以胞浆表达为主（P〈0．05）,IκBα胞浆／胞核内表达显著增加（P〈0．05）。结论局灶脑缺血再灌注72hNF-κB p65蛋白胞核表达明显增加．NF-κB核转位／活化过程被激活：NBD多肽预处理后通过增加胞核／胞浆内IκBα表达有效阻止NF-κB的核转位／活化过程,从而有效地减轻再灌注后72h局灶脑缺血再灌注对脑组织的损害。     

乙酰半胱氨酸对小鼠缺血再灌注损伤肝肺组织的保护作用及机制

目的:研究抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型中肝肺组织的保护作用及机制.方法:制备BALB/c小鼠肝部分缺血再灌注损伤模型, 将小鼠随机分为3组: 假手术组(SH组), 缺血再灌注组(I/R组)和NAC组(I/R-NAC组).分别于再灌注后1 h、 3 h取静脉血测定血清TNF-α浓度和ALT水平;取肺组织标本测湿干质量比及病理.同时取肝、肺组织行RT-PCR以观测Toll样受体2/4(TLR2/4)表达.结果:肺组织病理结果显示I/R组肺组织毛细血管充血, 肺泡结构破坏, 肺泡间质中性粒细胞浸润, 肺泡腔内不同程度渗出及少量红细胞.肺湿干质量比显示肺水肿.缺血再灌注后静脉血清TNF-α浓度和ALT水平较假手术组显著升高.受损肝叶和肺组织内均出现TLR2/4 mRNA高表达, NAC干预后, 肺水肿明显减轻;TLR2/4 mRNA表达受到抑制;血清TNF-α浓度和ALT水平较I/R组明显下降.结论:N-乙酰半胱氨酸抑制再灌注后TLR2/4的活化, 降低TNF-α的分泌, 从而减轻缺血再灌注肝、肺组织的损伤.     

氧控制性再灌注抗犬体外循环肺缺血再灌注早期损伤过程中高迁移族蛋白1的表达

目的 探讨氧控制性再灌注抗犬体外循环肺缺血再灌注早期损伤过程中高迁移族蛋白1(HMGB1)的表达.方法 健康犬14只按完全随机法分为对照组(n=7)和实验组(n=7),均进行体外循环肺缺血再灌注.对照组全程吸入氧浓度(FiO2)80%;实验组在主动脉开放即刻调整FiO2至40%,随后每5 min依次上调10%,最后达80%,其余时段均维持FiO2 80%.观察2组犬在麻醉后、主动脉开放前、主动脉开放后5、10、15、20、25 min以及停机前动脉血氧分压(PaO2)的变化.在开胸后即刻(T1)、主动脉开放25 min(T2)、主动脉开放90min(T3)分别留取血液标本及肺组织标本,检测肺组织HMGB1及NF-κB的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-6和TNF-α含量;检测肺组织湿干质量比及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量;观察肺组织病理学变化.结果 实验组PaO2在主动脉开放后5、10、15、20min均显著低于对照组(均P＜0.05).与对照组比较,在T2和T3时点实验组HMGB1 mRNA表达(T2:0.9260±0.013 9比1.0496±0.0306;T3:0.832 5±0.0154比0.9894±0.0144,均P＜0.05)和蛋白表达(T2:0.434 5±0.074 8比0.551 2±0.047 4;T3:0.449 0±0.054 1比0.545 5±0.040 6,均P＜0.05)均降低.实验组肺组织NF-κB蛋白表达在T2和T3时点低于对照组(均P＜0.05).实验组血清IL-6和TNF-α含量在T2和T3时点低于对照组(均P＜0.05).实验组肺组织湿干质量比、MPO活性、MDA含量在T2和T3时点均低于对照组(均P＜0.05).实验组肺损伤评分在T2和T3时点均低于对照组[T2:(2.0±0.7)分比(3.8±0.5)分;T3:(2.6±0.6)分比(4.2±0.8)分,均P＜0.05].结论 氧控制性再灌注对体外循环肺缺血再灌注早期损伤具有保护作用,其机制可能与下调HMGB1表达有关.     

CCK-8抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞NF-κB活性的cAMP-PKA通路研究

目的： 用cAMP激动剂forskolin和PKA抑制剂H-89，探讨八肽胆囊收缩素（CCK-8）抑制LPS作用下大鼠肺间质巨噬细胞（PIMs）核因子-κB （NF-κB）活性的cAMP-PKA信号通路机制。 方法： 分离纯化大鼠PIMs。用电泳迁移率改变分析（EMSA）法检测大鼠PIMs中NF-κB活性，用Western blotting分析IκB-α蛋白水平。 结果： 正常对照组大鼠PIMs核内未检测到与特异性寡核苷酸探针相结合的NF-κB，LPS组细胞内NF-κB活性明显高于正常对照组（P<0.01），胞浆中IκB-α水平显著低于正常对照组（P<0.01）。CCK组和Fsk组细胞内NF-κB活性和胞浆中IκB-α含量均无明显差异（P>0.05）。CCK+LPS组和Fsk+LPS组，细胞内NF-κB活性均低于LPS组（P<0.05），IκB-α含量均高于LPS组（P<0.01）。LPS+CCK+H-89组NF-κB活性高于CCK+LPS组（P<0.01），而IκB-α蛋白水平低于CCK+LPS组（P<0.01）。 结论： cAMP-PKA信号通路的活化可抑制LPS诱导的大鼠PIMs细胞内NF-κB活性升高和IκB-α蛋白水平的降低，CCK-8的抗炎作用是通过激活cAMP-PKA信号通路进而抑制NF-κB活性来实现的。