黑色素瘤与MAPK信号通路

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是细胞内介导细胞外信号到细胞内反应的信号转导系统中最重要的一员,参与细胞生长、分化、凋亡等多种生理过程.其中丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)与黑色素瘤关系最密切,对该信号通路的深入研究,除了探讨新的调节机制,还为临床早期诊断及新的分子靶向治疗提供依据.     

增生性瘢痕中磷酸化丝裂素活化蛋白激酶蛋白表达的变化

目的　探讨磷酸化细胞外信号调节激酶 1/ 2 (p ERK1/ 2 )、磷酸化应激活化蛋白激酶 (p SAPK)和磷酸化P38MAPK(p P38MAPK)在增生性瘢痕发生和成熟过程中蛋白表达的特征。方法　用免疫组化方法和常规病理技术检测 p ERK1/ 2、p SAPK和p P38MAPK在 16例增生性瘢痕和 8例正常皮肤组织中的表达和分布规律。结果　在正常皮肤中 ,p ERK1/ 2、p SAPK和p P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞内 ,三种蛋白的阳性细胞率均较低。随着增生性瘢痕不断成熟 ,p ERK1/ 2和 p SAPK表达逐渐增强。在成熟的增生性瘢痕中 ,这两种蛋白主要存在于表皮基底层细胞和部分成纤维细胞中 ,阳性细胞率分别为正常皮肤的 1 8和 1 7倍 ,蛋白表达明显升高 (P <0 0 5 )。p P38MAPK的阳性细胞率在生长活跃的增生性瘢痕中升至最高 ,在成熟的瘢痕中虽有所下降 ,但仍明显高于正常皮肤(P <0 0 5 ) ,含有 p P38MAPK蛋白的细胞主要为表皮细胞和部分成纤维细胞。结论　在增生性瘢痕中 ,p ERK1/ 2、p SAPK和p P38MAPK蛋白表达均高于正常皮肤 ,提示这三种蛋白介导的信号传导通路可能参与了调控增生性瘢痕的发生和成熟。     

Erk信号传导通路与细胞周期调控

近年来 ,丝裂原激活蛋白激酶 (Mitogenactivatedproteinkinase,MAPK)信号传导通路的研究引人注目 ,细胞外信号调节蛋白激酶 (extracellularregulatedprotein ,ERk)为MAPK家族重要成员 ,围绕肿瘤、血液等细胞领域的研究表明 :ERK信号通路是多数生长因子、细胞因子调控细胞增殖的重要途径。进一步研究证实 ,ERK信号传导通路参与了细胞周期调控。本文对近期ERK信号传导通路调控细胞周期的研究扼要综述如下 :1　ERk信号传导通路　　ERK为MAPK家族重要成员 ,它具有MAPK家族两个显著特征 :(1)通过VIII区域苏氨酸、丝氨酸双位点磷酸…     

Z-没药甾酮经ERK/MAPK通路对糖尿病大鼠皮肤溃疡的祛腐生肌作用及机制

目的 探讨Z-没药甾酮(Z-GS)通过细胞外调节蛋白激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路对糖尿病大鼠皮肤溃疡的祛腐生肌作用及机制.方法 65只大鼠留取10只作为健康组,其余大鼠建立糖尿病皮肤溃疡模型.将建模成功的44只大鼠随机分为模型组、抑制剂+Z-GS组、Z-GS组、阳性对照组(n=11).健康组不做任...     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在急性胰腺炎中的作用

丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信号通路能够接受多种细胞外刺激,是真核生物细胞传递细胞外信息到细胞内,调节细胞生命活动的重要信号转导系统。p38MAPK信号通路是迄今发现的重要MAPK通路之一,在炎症、细胞分化、细胞周期、细胞凋亡和发育等多方面发挥重要调节作用。     

RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路在高磷环境调节内皮细胞凋亡的机制

目的 研究高磷环境下内皮细胞凋亡的可能调控机制和信号通路。方法 人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）在正常磷（1.0 mmol/L）、高磷（3.0 mmol/L）、正常磷+辛伐他汀（simvastatin,SV,1.0 mmol /L+SV）及高磷+SV (3.0 mmol /L+SV）培养基中培养24 h,Western Blot评价Ras同源物基因家族成员A（ Ras homolog gene family, member A, RhoA）,Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1/2 ( rho-associated coiled coil forming protein kinase 1/2, ROCK1/2 ),细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase-mitogen activated protein kinase, ERK-MAPK）、磷酸化细胞外信号调控激酶-丝裂原活化蛋白激酶（ phosphorylated-ERK-MAPK, p-ERK-MAPK）、p38丝裂原活化蛋白激酶 ( p38-Mitogen Activated Protein Kinase , p38-MAPK)、磷酸化 p38-丝裂原活化蛋白激酶 （phosphorylated-p38-MAPK, p-p38-MAPK ）、以及精氨酸酶1（arginase1,ARG1）和一氧化氮合成酶（nitric oxide synthase, NOS ）蛋白的表达,比色法和膜联蛋白V/碘化丙啶双染法 ( Annexin V-FITC/ propidium iodide, Annexin V-FITC/PI ) 检测ARG活性和细胞凋亡率。结果 高磷组RhoA,ROCK1/2,p-ERK MAPK,ARG1表达均上调, ARG活性升高,NOS表达下调,细胞凋亡增加;RhoA抑制剂SV能抑制高磷环境下p-ERK MAPK的活化和ARG1 的表达,降低ARG1活性,促进NOS表达,减少内皮细胞凋亡。结论 高磷环境HUVECs可通过RhoA/ROCK途径激活p-ERK MAPK的表达, 增加ARG活性,抑制NOS表达,引起内皮细胞凋亡;SV可以通过抑制RhoA/ROCK/ERK-MAPK通路,改善内皮细胞凋亡。     

MAPK和SAPK信号途径的不同激活决定辐射的细胞效应

不同的细胞外刺激因素通过细胞内的信号转导途径传到细胞内的靶分子产生相应的细胞效应。辐射作为一种特殊的贯穿性损伤因子,它的信号转导有其特殊性。辐射既能激活SAPK/JNK(应激活化蛋白激酶/c-Jun NH₂末端激酶)信号途径介导细胞凋亡,又能激活MAPK/ERK(有丝分裂原活化激酶/细胞外相关激酶)信号途径促进细胞增殖、分化或保护细胞受到应激刺激而导致的损伤性效应,这两条通路的不同激活,决定了受辐射细胞的命运。     

晚期糖基化终产物促进血管外膜成纤维细胞迁移机制及坎地沙坦的干预作用研究

目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管外膜成纤维细胞(AF)迁移的影响及坎地沙坦的干预作用.方法 组织贴块法培养SD大鼠的AF细胞,用Transwell小室检测AGEs对AF迁移的影响.RT-PCR及免疫印迹技术观察AGEs对AF晚期糖基化终产物受体(RAGE)及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路磷酸化的影响.结果 不同浓度的AGE(50、100、150、200、300mg/L)均可从基因和蛋白水平上调RAGE的表达,且均在200mg/L时达到峰值(P<0.05).p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂、坎地沙坦可以抑制由糖基化人血清白蛋白(AGE-HAS)刺激引起的RAGE表达(P<0.05).AGEs可促进p38、ERK1/2、JNK的磷酸化,JNK在20min,p38、ERK1/2在30min时磷酸化达峰值(P<0.05).p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、JNK拮抗剂可分别抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化,RAGE中和抗体、坎地沙坦可抑制p38、ERK1/2、JNK磷酸化.不同浓度AGE(50、100、150、200、300mg/L)可促进AF细胞的迁移,该作用于200mg/L时达到峰值(P<0.05).RAGE中和抗体、p38拮抗剂、ERK1/2拮抗剂、坎地沙坦均可抑制AGE所致成纤维细胞的迁移(P<0.01).结论 AGEs经由RAGE影响MAPK通路而促进AF细胞迁移,坎地沙坦可通过阻断此途径抑制AF细胞迁移,这可能是其血管保护作用的机制之一.     

p38MAPK信号转导通路和蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛

蛛网膜下腔出血引起的脑血管痉挛是患者死亡和致残的主要原因之一.丝裂原活化蛋白激酶是细胞内主要的信号转导系统,它在炎症、细胞增殖分化、细胞凋亡等方面起着重要作用.本文就丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与蛛网膜下腔出血引起脑血管痉挛的关系作一综述.     

阿伦膦酸钠对去势大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

目的 探讨阿伦膦酸钠(Alendronate,Aln)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化的影响,并阐明丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在该过程中的作用. 方法 BMSCs取自9个月龄去势SD大鼠,分别暴露于0.01,0.1,1,10 μmol/L Aln.成脂诱导2周后进行油红O染色和镜下计数分析,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(PPARγ2)表达;使用MAPK通路特异性抑制剂并诱导2周后再观察PPARγ2表达情况,Western blot观察Aln对MAPK通路表达的影响. 结果 BMSCs成脂诱导2周后,油红O染色阳性细胞数随着药物浓度的增高而显著减少(P<0.01).PPARγ2表达随着药物浓度的增高而显著降低.分别使用ERK1/2、JNK抑制剂PD98059和SP600125并诱导2周后,PPARγ2表达上调;使用p38抑制剂SB203580并诱导2周后,PPARγ2表达下调.Western blot结果显示,Aln在5,15,30 min时上调P-ERK1/2和P-JNK的表达,分别使用抑制剂后,表达下调. 结论 Aln通过激活ERK1/2和JNK信号通路,而不是p38,发挥抑制去势大鼠来源的BMSCs成脂分化作用,其效应具有浓度依赖性.     

乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用

目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用。方法低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes。采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的表达水平。结果乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8%±3.37%)较对照组(15.34%±0.71%)增加(P<0.05),G1/S期细胞比例(2.22%±0.37%)与对照组(4.67%±0.47%)比较下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P<0.05)。结论乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关。     

原儿茶醛对脂多糖损伤的血管内皮细胞的作用机制研究

目的:研究复方丹参方中水溶性单体原儿茶醛对血管内皮细胞炎症反应的药理作用及机制.方法:使用脂多糖(LPS,0.5 μg/ml)刺激人脐静脉内皮细胞,造成炎症模型,用原儿茶醛(0.25 mmol/L,0.5 mmol/L,1.0 mmol/L)加以干预;用RT-PCR和ELISA方法检测细胞间黏附分子-1和纤连蛋白的表达水平以及单核细胞趋化蛋白-1的分泌量;用Western印迹方法观察了丝裂原激活的信号转导通路中ERK1/2、JNK和p38的活化情况.结果:原儿茶醛呈剂量依赖性地降低LPS导致的细胞间黏附分子-1及纤连蛋白的高表达,减少了单核细胞趋化蛋白-1的过度分泌,并能抑制ERK1/2、JNK和p38分子的活化.结论:原儿茶醛能通过抑制NF-κB-MAPK信号通路抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症反应.     

脱氧佛波醇乙酸酯通过激活PKC/ERK通路诱导急性髓系白血病细胞分化

目的研究脱氧佛波醇乙酸酯（12-deoxyphorbol 13-acetate,Prostratin,DPA）对人急性髓系白血病（AML）细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并证明其通过激活蛋白激酶C/胞外信号调节激酶（PKC/ERK）通路诱导细胞分化。方法 1μmol/L DPA作用HL-60细胞3 d后观察细胞形态的改变;不同剂量的DPA作用HL-60、NB4、U937细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞分化表面标志变化;Western印迹检测ERK蛋白磷酸化的改变;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂和PKC抑制剂对细胞分化表面标志的影响;Western印迹检测MEK抑制剂和PKC抑制剂对ERK蛋白磷酸化的影响。结果 DPA可诱导HL-60细胞出现白血病细胞分化的形态。DPA剂量依赖性地诱导AML细胞CD11b表达。DPA在诱导分化剂量范围内可剂量依赖性地引起ERK磷酸化。MEK化学小分子抑制剂U0126可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达;PKC非选择性抑制剂GFX可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达。结论 DPA其通过激活PKC/ERK通路能够明显诱导白血病细胞分化。     

乏氧和辐射对中国仓鼠V79细胞蛋白激酶C-α和丝裂原活化的蛋白激酶的诱导及磷酸化作用

蛋白激酶C(PKC)和丝裂原活化蛋白(MAP)激酶(又称为细胞外信息调节激酶,ERK)的活化在细胞增殖、分化和肿瘤启动中起重要作用。实验研究了乏氧和辐射对PKC-α及MAP激酶的表达、磷酸化和细胞内分布的影响。     

中药抗休克合剂对Ⅲ度烫伤大鼠早期肺损伤的影响机制研究

目的 研究探讨中药抗休克合剂对Ⅲ度烫伤大鼠早期肺损伤的影响机制。方法 选取32只健康SD大鼠适应性饲养1周后,按照随机数表法将其随机分为假伤组、烫伤组、LR组、LR+中药组,每组8只,其中假伤组大鼠备皮后做假伤处理,烫伤组大鼠备皮后建立Ⅲ度烫伤模型,LR组大鼠备皮后建立Ⅲ度烫伤模型并予以乳酸钠林格注射液(LR)补液,LR+中药组大鼠备皮后建立Ⅲ度烫伤模型并予以LR补液联合中药抗休克合剂灌胃,对比观察各组大鼠血清炎症因子水平以及肺组织湿重/干重(W/D)比值、氧化应激水平与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路活化程度。结果 烫伤后各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-10、IL-18、髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)水平以及W/D比值均明显升高(F=112.352、80.455、40.716、79.321、270.356、60.784,P均<0.001),超氧化物歧化酶(SOD)水平明显降低(F=157.977,P<0.001),p38MAPK与ERK1/2通路活化程度均明显增加(F=402....     

嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞中p38 MAPK信号转导通路的活化作用观察

目的探讨嗜酸性粒细胞在与支气管上皮细胞接触共培养过程中对后者炎性介质释放的影响。方法用CD16抗体磁珠法分离嗜酸性粒细胞,免疫印迹(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管上皮细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、激活转录因子(ATF)-2蛋白含量,微珠免疫沉淀结合免疫印迹法检测p38MAPK活性。结果经与嗜酸性粒细胞共同培养活化后,支气管上皮细胞中磷酸化p38MAPK蛋白含量及其活性均显著上升,p38MAPK信号转导通路链中下级底物蛋白质ATF-2(细胞内调控某些基因表达的转录因子)量也显著上升;多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞同样可以活化支气管上皮细胞,增加其细胞内p38MAPK蛋白质磷酸化。p38MAPK酶选择性抑制剂SB203580可有效抑制p38MAPK诱导其底物ATF-2磷酸化。结论嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞接触共培养过程中对炎性介质表达和释放的调控作用可能是通过活化支气管上皮细胞内p38MAPK信号传导通路未实现的。     

缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在胃癌细胞系SGC7901中的表达及其意义

丝裂原活性蛋白激磷酸酶 - 1 (Mitogen -activatedproteinkinasephosphatase - 1 ,MKP - 1 )属于MKP家族 ,是由早期应答基因编码的双特异性磷酸酶 ,主要分布于细胞核内 ,在丝裂原蛋白活化激酶MAPK(细胞外信号调节激酶ERK ,p38和c -jun氨基末端激酶JNK)的去磷酸化方面发挥重要作用。本文探讨了MKP - 1在缺氧胃癌细胞系SGC790 1的表达及对HIF - 1转录活性的影响。作者采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)和Western印迹检测MKP - 1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC790 1中的表达 ;借助DNA重组技术构建MKP - 1其因的正…     

体外诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

目的 建立表皮细胞去分化体外模型,探索与去分化过程有关的信号通路.方法 分离培养人表皮细胞,分别用双氧水、ERK阻断剂PD98059加双氧水处理细胞,采用免疫细胞化学染色法和Western blot法检测不同方式处理后表皮细胞表型的变化情况,Western blot法检测双氧水处理后ERK信号通路相关蛋白的表达情况.结果 双氧水处理后,表皮细胞干细胞标志物(CK19、β1整合素、Oct4和p63)表达增加,分化细胞标记物(CK10)表达减少,ERK信号通路中相关的磷酸化蛋白表达增强.以PD98059阻断ERK通路的活化后,双氧水诱导的表皮细胞表型逆转受到了抑制.结论 ERK通路参与了双氧水诱导的表皮细胞去分化过程.     

永生化人支气管上皮细胞中TGF-β1对MAPK家族ERK通路的活化效应

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在永生化人支气管上皮细胞BEP2D信号转导中MAPK家族ERK通路的激活情况及其引起的细胞增殖、凋亡和形态学的改变.方法 用Western blot方法检测TGF-β1对ERK的活化特点;用荧光染料染色分析和流式细胞术检测TGF-β1引起ERK活化时细胞的凋亡变化;用细胞克隆形成率分析TGF-β1引起ERK活化时细胞的增殖情况;观察TGF-β1引起ERK活化时细胞的形态改变.结果 TGF-β1可在短时间内激活ERK1/2,1h达峰值,然后逐渐减弱;TGF-β1诱导BEP2D细胞凋亡,抑制其增殖,使其体积和间距增大;用U0126抑制ERK通路,能促进TGF-β1对细胞在凋亡、增殖方面的作用,但抑制其对细胞形态的影响.结论 TGF-β1诱导的ERK1/2的磷酸化在调节BEP2D细胞的增殖和凋亡间的平衡方面起着重要作用.     

TNF-α对人牙囊细胞表达单核细胞趋化蛋白-1的影响及其信号传导通路

目的研究不同浓度肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养人牙囊细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响及其信号传导通路。方法取第5代人牙囊细胞,分别与浓度为0(对照组)5、1、02、55、0、100ng/ml的TNF-α共孵育6h,夹心ELISA法检测上清液中MCP-1的含量,RT-PCR法检测MCP-1 mRNA表达的变化。另取第5代人牙囊细胞,分别加入25μmol/L SB203580、50μmol/L PD98059、15μmol/L SP600125,以阻断p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MARK)、细胞外信号调节激酶(ERK)J、un氨基端激酶(JNK),培养30min后加入10ng/ml TNF-α,孵育6h后,RT-PCR检测MCP-1 mRNA含量。结果 ELISA结果显示,与对照组比较,TNF-α浓度为10～100ng/ml时,可显著增强MCP-1的分泌(P<0.05);RT-PCR结果显示,与对照组比较,TNF-α浓度为10～50ng/ml时,MCP-1表达增强,且此作用可被阻滞剂SP600125阻断。结论 TNF-α可增强MCP-1的基因表达、蛋白合成和分泌,此作用通过JNK信号转导途径实现。