半定量分析方法用于评估脊髓损伤后细胞凋亡程度的可行性研究

目的：探讨免疫组化半定量分析方法用于评估大鼠脊髓损伤后细胞凋亡程度的可行性,为进一步实验研究提供基础依据。方法：成年SD大鼠6只,采用改良Allen法致T9-T10脊髓损伤,伤后1周处死,取脊髓损伤节段及其上、下节段以及膀胱,另处死2只同批健康SD大鼠2只,取T9-10脊髓节段以及膀胱作正常对照。HE染色观察脊髓和膀胱壁的病理学变化,Nissal染色观察神经元数目的变化,并通过免疫组织化学技术标记caspase-3蛋白阳性细胞,用半定量分析方法评估脊髓损伤后脊髓内和膀胱内膜中细胞凋亡的程度。结果：HE染色发现脊髓损伤后脊髓内空洞形成、炎性细胞浸润等病理学变化,膀胱壁中可见到肌束断裂、肌细胞肥大增生、胶原增生、炎性细胞浸润等病理学改变;Nissal染色显示脊髓损伤后损伤节段及其上、下节段均出现神经元数量的减少;免疫组化结果表明3组均有不同程度的caspase-3表达,损伤组脊髓和膀胱内膜caspase-3表达较正常组显著增加（P<0.01）,损伤上段及下段caspase-3表达较损伤节段为少（P<0.01）,但均高于正常对照组（P<0.01）。损伤上段和下段caspase-3表达差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：免疫组化半定量分析方法可以用于评估脊髓损伤大鼠脊髓及膀胱内细胞凋亡的程度。     

脊髓损伤后大鼠阴茎组织中神经型一氧化氮合成酶的变化

目的：观察SD大鼠脊髓损伤(SCI)后阴茎组织中神经型一氧化氮合成酶（nNOS）的变化。方法： 12只雄性SD大鼠分为SCI组与对照组。采用改良的重物坠落法（Allen法）制作大鼠T9-T10脊髓节段不完全损伤模型。伤后7天行阴茎勃起功能检测和nNOS免疫组化,观察脊髓损伤后阴茎勃起潜伏期、勃起次数以及阴茎组织中nNOS神经纤维的变化。结果：SCI 组大鼠阴茎勃起潜伏期明显缩短,阴茎勃起次数明显减少（P<0.05）;对照组和SCI组大鼠阴茎中nNOS阳性神经纤维数目分别为90.42±3.66、10.13±1.78;平均光密度分别为0.18±0.01、0.11±0.01;积分光密度分别为2.37±0.08、1.08±0.13。与对照组相比较,SCI组大鼠阴茎内nNOS 阳性纤维的数量及光密度明显降低,差异具有显著性意义（P<0.05）。结论：SD大鼠脊髓损伤后阴茎内nNOS表达减弱,导致勃起功能障碍。     

2-甲氧基雌二醇对脊髓损伤大鼠运动功能及神经细胞凋亡的影响

摘要 目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能及细胞凋亡的影响。 方法：将成年雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、脊髓损伤组(n=24)、2ME2治疗组(n=24)。采用改良的 Allen法制作脊髓损伤模型,造模成功后1、3、7、14、21、28d应用BBB运动评分系统对各组大鼠运动功能进行评估,造模成功后连续7天对2ME2治疗组大鼠腹腔注射2ME2(24mg/kg),第7天应用免疫荧光技术检测各组大鼠caspase-3表达,应用TUNEL染色进行凋亡细胞计数。 结果：脊髓损伤组及2ME2治疗组损伤后随时间延长BBB评分升高,其中2ME2治疗组损伤后第14、21、28天BBB评分显著高于脊髓损伤组,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（4.583±2.234）比较,脊髓损伤组（33.417±4.274）及2ME2治疗组（22.250±4.048）免疫荧光染色caspase-3蛋白表达阳性细胞数显著增加,2ME2治疗组caspase-3蛋白表达阳性细胞数较脊髓损伤组显著减少,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（12.25±2.67）相比,脊髓损伤组（49.17±4.75）及2ME2治疗组（38.67±4.44）凋亡细胞数显著增多, 2ME2治疗组凋亡细胞数较脊髓损伤组显著减低,差异具有显著性意义（P<0.05）。 结论：2ME2改善脊髓损伤大鼠模型脊髓损后的运动功能,具有神经保护作用;2ME2降低脊髓损伤大鼠模型脊髓损后caspase-3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。     

跑台训练对脊髓损伤后大鼠小脑浦肯野细胞的影响

摘要 目的：探讨跑台运动训练对脊髓损伤（SCI）后大鼠小脑细胞脑浦肯野细胞的影响及其机制研究。 方法：选取108只雌性SD大鼠,随机分成3组,包括假手术组、SCI组、SCI运动组。SCI运动组大鼠于术后开始跑台运动训练,BBB评分评定大鼠脊髓损伤后后肢运动功能。分别在术后第3天、第7天、第14天取小脑组织,通过HE染色、尼氏染色检测大鼠小脑浦肯野细胞数量和形态变化;免疫组化检测小脑中浦肯野细胞caspase-9、mGluR1表达情况;免疫荧光检测小脑中浦肯野细胞caspase-3、mGluR1表达情况;Western Blot检测小脑组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3蛋白表达水平变化。 结果：与假手术组比较,SCI组、SCI+TT组BBB评分均显著下降（P<0.05）;小脑组织中浦肯野细胞数量减少,体积缩小、失去正常形态;小脑中凋亡相关蛋白Bax、Cyt-C、活化caspase-9、活化caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2表达显著降低;浦肯野细胞caspase-9和caspase-3表达增加,mGluR1表达降低（P<0.05）。与SCI组相较,SCI+TT组评分BBB评分结果比较无显著性差异（P>0.05）;小脑组织中浦肯野细胞数量、正常形态占比增加;凋亡相关蛋白Bax、Cyt-C、活化caspase-9 、活化caspase-3蛋白表达水平下降（P<0.05）,Bcl-2表达升高;浦肯野细胞caspase-9和caspase-3表达下降,mGluR1表达水平显著升高（P<0.05）。 结论：跑台运动训练可通过线粒体凋亡途径抑制脊髓损伤后大鼠小脑浦肯野细胞的凋亡。     

脊髓损伤后白细胞介素-1β、caspase-3的表达和细胞凋亡的相关性

目的研究大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β（IL-1β）、easpase-3表达和细胞凋亡的规律及三者之间的关系。方法成年SD大鼠随机分为假手术组和损伤组，于伤后1h、8h、24h、72h处死，用免疫组化染色检测IL-1β、caspase-3阳性细胞。TUNEL法标记凋亡细胞。结果假手术组仅表达少量IL-1β和caspase-3阳性细胞；损伤组两者均在8h表达最多，24h减少，72h减少至略多于假手术组水平。TUNEL标记阳性细胞的时间分布特点与IL-1β和caspase-3相似；IL-1β、caspase-3阳性细胞率和细胞凋亡指数三者间存在正相关（P〈0．01）。结论大鼠脊髓损伤后，IL-1β和caspase-3表达增强，凋亡细胞大量出现，三者间存在正相关。     

高压氧对大鼠继发性脊髓损伤保护作用的实验研究

目的探讨高压氧（HBO）治疗对继发性脊髓损伤（SCI）的保护作用及其机制。 方法96只SD大鼠采用Allen打击法造成SCI后分为HBO组、常氧高压氮组、常压吸氧组和常压空气组,分别于损伤后第1,3,7,14天取材,采用原位末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞,PV-9000二步法免疫组化检测caspase-3表达,光镜下观察,并对结果进行统计学分析;神经功能评价采用BBB评分。 结果HBO组在各时间点caspase-3表达均低于其他各组;TUNEL结果亦显示,HBO组凋亡细胞数低于其他各组;HBO组大鼠神经功能明显改善。 结论HBO能通过下调caspase-3的表达抑制SCI后细胞凋亡,其作用与氧有关。     

大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达及意义 继发性脊髓损伤适宜干预时间窗的选择

背景：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族被认为是细胞凋亡的执行因子，脊髓损伤后可发生神经细胞凋亡。目的：观察大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达变化，探讨其与神经细胞凋亡发生的关系，为判定减轻继发性脊髓损伤的适宜干预时间窗提供依据。设计：自身对照、相互对照动物实验。单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院创伤外科、骨科。材料：实验于2001-09／12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科实验室完成。54只SD大鼠，雌雄不限，体质量220～250g，由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供。方法：①动物模型建立及分组：将大鼠分为对照组和损伤组，对照组仅做T8，T9椎板切除术，损伤组于4、8h和1，2，3，7，14和21d取材共9组，每组6只。以30g／L戊巴比妥钠腹腔麻醉后，按Nystrom法暴露T8，T9节段胸髓，将50g重物通过2．2mm&;#215;5．0mm弧型光滑金属垫片压迫该段脊髓后正中部5min，损伤后每天10：00，16：00和22：003次人工膀胱排尿，直至建立反射性膀胱排空。②取材及切片准备：在脊髓损伤后各时间点完整取出脊髓全长，将每组4只损伤段脊髓组织块，长约8mm，石蜡包埋，连续切片，分别行苏木素伊红染色、免疫组化及原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法（TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling，TUNEL）标记；每组2只在冰上处死，将损伤脊髓中心组织置入液氮罐中保存备用。③检测指标：以免疫组化法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达，以逆转录-聚合酶链反应半定量测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA的表达变化，以TUNEL法检测神经细胞的凋亡水平，并以直线相关分析半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达和神经细胞凋亡的相关性。主要观察指标：①光镜下各组大鼠脊髓损伤观察。②免疫组化结果。③各组大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达变化。④各组大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡情况及与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达的相关性。结果：纳人结果分析的各组动物数均为6只。①光镜下各组大鼠脊髓损伤观察结果：损伤段1h有广泛出血；4～8h脊髓结构开始破坏，大量的神经元死亡；24h脊髓破坏严重；7-21d损伤范围确定，脊髓内有空洞形成。②免疫组化检测的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果：正常大鼠脊髓神经细胞中很少有半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达（2．1&;#177;0．5）；脊髓损伤后8h，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达阳性的神经细胞明显增加（89．2&;#177;10．5），3d达到高峰（189．6&;#177;12．7）；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的阳性细胞与凋亡细胞出现的时限相似，呈正相关（r=0．941）。⑧逆转录-聚合酶链反应检测的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3mRNA4h开始增高（0．442&;#177;0．024），48h达到高峰（0．634&;#177;0．028），7d后恢复正常（0．351&;#177;0．013），早于凋亡出现的时期，与神经细胞凋亡水平呈正相关（r=0．622）。④TUNEL标记及计数的各组大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的结果：对照组及4h组仅见偶染细胞，8h后开始出现阳性细胞，主要位于灰质中；此后阳性细胞逐渐增多，3d达到高峰，7d灰质中凋亡染色的阳性细胞逐渐减少，主要在周围白质中，14和21d可见少量的阳性细胞。结论：在正常的脊髓组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3是以活性很低的酶原形式存在；大鼠脊髓损伤后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达增强，8h开始大量表达，24-48h达到高峰，与TUNEL所检测的阳性凋亡细胞在时间上相重叠，从半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞先后出现的区域上看，与脊髓损伤阳性凋亡细胞一致，可见半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3参与了脊髓损伤细胞凋亡的调节。从本实验可以看出，从脊髓损伤后到半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活化这段时间是脊髓损伤干预细胞凋亡、减轻继发性脊髓损伤治疗时间窗，应用基因干预或特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶抑制剂宜在48h内应用。     

自噬相关基因及蛋白在急性脊髓损伤后大鼠膀胱表达的实验研究

目的 观察自噬相关基因、蛋白在急性期脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌组织中的表达。 方法 选取24只雄性Wistar大鼠并随机分为模型组（12只）及对照组（12只）。模型组采用改良Allen′s法建立脊髓损伤模型,对照组仅予以椎板切除处理。于术后6h对2组大鼠进行BBB运动评分,采用尼氏染色观察2组大鼠脊髓形态学变化,采用Western blotting和免疫荧光染色法检测膀胱平滑肌细胞微管相关蛋白1轻链3(LC3)及P62表达,采用RT-PCR检测膀胱平滑肌自噬相关基因LC3、P62、Beclin1 mRNA表达。 结果 模型组大鼠下肢运动功能BBB评分较对照组明显降低（P<0.05）。尼氏染色观察可见模型组神经元及尼氏小体数量减少;Western blotting染色提示模型组LC3-Ⅱ表达较对照组增高（P<0.05）,P62表达较对照组降低（P<0.05)。免疫荧光染色法提示模型组膀胱平滑肌LC3阳性细胞率较对照组增高（P<0.05),P62阳性细胞率较对照组降低（P<0.05）。RT-PCR检测发现模型组LC3及Beclin1 mRNA水平较对照组升高(P<0.05）,P62 mRNA水平较对照组降低(P<0.05）。 结论 自噬在急性脊髓损伤大鼠膀胱平滑肌中表达活跃,可能与脊髓损伤后神经源性膀胱发病机制有关。     

不同用药途径促红细胞生成素用于治疗大鼠急性脊髓损伤的研究

目的：观察经不同给药途径给予重组人红细胞生成素(EPO)治疗脊髓损伤后大鼠神经功能行为,caspase-3表达以及凋亡的变化,探讨其脊髓保护的作用机制。方法：30只SD大鼠随机分成假手术组、对照组、蛛网膜下腔给药组(治疗A组),尾静脉给药组(B组),腹腔给药组(C组),每组6只。观察药物治疗前后大鼠的神经功能行为变化,应用HE染色观察神经元病理变化,免疫组化染色检测caspase-3表达,TUNEL法标记凋亡细胞;比较各组间差异。结果：HE,免疫组化染色示各EPO治疗组脊髓损伤程度小,神经元细胞破坏少;c     

Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的：观察Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK对大鼠脊髓损伤后细胞凋亡的影响。方法：将36只SD大鼠以改良Allen法制作大鼠急性脊髓损伤（SCI）模型（脊髓中度损伤），分为对照组（单纯损伤A组18只，按时间段又分为A1，A2，A3），治疗组（应用Z-DEVD-FMK治疗B组18只，按时间段又分为B1，B2，B3）。损伤后6h，3d，8d对脊髓损伤区进行组织学HE染色，细胞凋亡TUNEL标记，Fas凋亡因子检测，免疫组化检测Caspase-3的表达变化，同时采用BBB评分方法和斜板试验观察神经功能恢复情况。结果：对照组和治疗组均见TUNEL阳性的凋亡细胞和Caspase-3表达。Z-DEVD-FMK治疗组神经细胞的凋亡数减少，Caspase-3表达降低，神经功能增强，两组相比差异有显著性（P〈0．05）。结论：Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK能减少继发性脊髓损伤细胞凋亡和促进神经功能的恢复。     

持续性脊髓压迫对脊髓损伤程度的影响

目的 探讨脊髓损伤(SCI)后脊髓压迫时间对损伤程度的影响。方法 以大脑皮层诱发电位(CSEP)和不同压迫时间为参数,自行设计一种犬的运动—静止压迫型SCI模型,选择T13为损伤中心,压迫脊髓,当 CSEP波幅下降达基础值的 50%时,维持静止压迫。将28只犬随机分为A、B、C、D 4组,A、B、C组脊髓分别受压30 min、90 min和180 min,D组为对照组,观察各组动物的组织病理学、影像学和行为学变化。结果 损伤组脊髓组织学均有损害,MRI显示损害程度随脊髓受压时间的延长逐渐加重( P<0.01);至术后28 d,各损伤组动物后肢功能均有恢复,BBB分级评分法评估组间有显著性差异( P <0.05)。结论 SCI后持续性脊髓压迫能加重损伤程度,应尽早解除脊髓压迫。     

胚胎脊髓对损伤脊髓的修复作用研究

目的探讨不同条件下胚胎脊髓移值修复成鼠急性脊髓损伤(SCI)的能力。方法成鼠胸髓损伤后分别移植孕14d胚胎脊髓(FSC组)、游离正中神经加胚胎脊髓(P＋F组)、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓(V＋F组),术后8周行组织学检查。结果V＋F组胚胎脊髓与受体融合佳,体积增长速度、神经纤维和神经元数目显著高于P＋F、FSC组（P<0.01）,细胞分化比较好,突触较成熟,界面区也无明显的胶质增生。结论带血管蒂周围胚胎脊髓联合移植,对FSC的生长发育、对损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓神经组织损伤的早期保护作用

目的 探讨脊髓损伤后,联合应用胚胎脊髓（FSC）移植和外源性碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对损伤脊髓组织早期Ca^2＋、Mg^2＋的影响.方法利用Wistar大鼠建立脊髓损伤模型;造模后,A组经蛛网膜下腔导管注入5 ml FSC细胞悬液;B组注入20 μl bFGF与FSC细胞悬液;C组（对照组）不做处理.术后6 h、24 h取A组、B组和C组动物损伤区脊髓组织测定水和Ca^2＋、Mg^2＋含量;术后5 d取损伤脊髓组织电镜下观察结构变化.结果 C组损伤区脊髓组织水含量增多,Ca^2＋水平升高,Mg^2＋水平下降,白质内髓鞘结构紊乱,囊性变严重;A组和B组上述变化均较C组改善.结论脊髓损伤后应用FSC移植和bFGF可减轻离子失衡,从而对继发性损害有抑制作用.     

The spinal cord independence measure: how much change is clinically significant for spinal cord injury subjects

Abstract

Purpose: To calculate the clinical significance of the SCIM III according to distribution-based approaches. Method: Retrospective review of the charts of 255 patients with registration of the total SCIM and of the four subscales. Clinical significance was calculated per several distribution-based approaches. The calculated clinical significance was compared with improvements by the patients to determine the percentage of patients who achieved significant improvement. Results: An improvement of at least 4 points of the total SCIM is needed to obtain a small significant improvement and of 10 points to obtain a substantial improvement. Based on these results, the percentages of patients who achieved an improvement varied from 60% to 100%. Conclusions: The results provide benchmarks for clinicians and researchers to interpret whether patients’ change score on the SCIM III can be interpreted as true or clinically meaningful and to make clinical judgments about the patients’ progress.

• Implications for Rehabilitation

• An improvement of at least four points of the total SCIM is needed to obtain a small significant improvement and of 10 points to obtain a substantial improvement.

• The results provide benchmarks for clinicians and researchers to interpret whether patients’ change score on the SCIM III can be interpreted as true or clinically meaningful and to make clinical judgments about the patients’ progress.

     

Atypical presentation of intramedullary spinal cord lesion

We report a patient who presented with atypical clinical manifestations including worsening abdominal pain from an intramedullary spinal cord lesion. It is important to consider non‐abdominal causes of abdominal pain for patients with an atypical presentation. The described case demonstrates the challenges facing the physician with the early diagnosis of acute abdominal pain. Spinal cord lesions, although uncommon, remain a potentially disabling and life‐threatening cause of abdominal pain.     

三氟啦嗪对脊髓损伤后脊髓血流量的影响

目的：观察三氟啦嗪对脊髓损伤后脊髓血流量的影响,探讨吩噻嗪类药物对脊髓损伤保护作用的机制。方法：Allen's重锤打击法致伤大鼠脊髓,采用三氟啦嗪治疗,利用氢清除法测量脊髓血流量,观察三氟啦嗪对脊髓损伤后平均系统动脉压和脊髓血流量的影响。结果：在肾上腺素维持系统动脉压的条件下,三氟啦嗪可明显改善脊髓损伤后脊髓血流量,单一肾上腺素无此效应。结论：三氟啦嗪可以改善脊髓损伤后脊髓血流量,吩噻嗪类药物对脊髓损伤的保护作用可能与其改善脊髓血流量的作用有关。     

强直性脊柱炎并发脊柱脊髓损伤的治疗

目的 探讨强直性脊柱炎并发脊柱脊髓损伤的治疗方法。方法 回顾12例强直性脊柱炎并发脊柱脊髓损伤患者的临床治疗过程与结果,比较不同的治疗方案。结果与结论 积极防治并发症尤其是肺部感染是治疗的首要任务,应先进行保守治疗,有手术指征者尽早接受手术治疗。     

系统护理在脊柱骨折合并脊髓损伤患者中的应用效果

目的探讨系统护理在脊柱骨折合并脊髓损伤患者中的应用效果。方法随机将2017年10月至2018年10月68例脊柱骨折合并脊髓损伤患者分为观察组(34例,系统护理)与对照组(34例,常规护理)。比较两组患者的护理效果。结果观察组出院后3、6个月的SCIM-Ⅲ评分高于对照组(P<0.05)。观察组患者的并发症总发生率低于对照组(P<0.05)。出院后3个月,两组患者的各项生活质量评分均升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。结论将系统护理应用于脊柱骨折合并脊髓损伤患者中,可降低患者的并发症发生率,提高患者生活质量。     

12例急性脊髓刀扎伤的MRI表现

目的 研究急性脊髓刀扎伤的磁共振成像（MRI）特征。方法 对12例急性脊髓刀扎伤患者的MRI进行回顾性分析。结果 12例均可见入路信号,椎管外一椎管内的刀迹金属伪迹影;此外,亦可见脊髓内的刀迹金属伪迹影、脊髓损伤信号、水肿信号、脊髓出血信号、硬膜外、下血肿出血信号。硬膜下、外血肿的鉴别可通过硬膜在血肿与脊髓间的关系来鉴别;矢状T1、T2加权相可以清晰地显示黄韧带、后纵带及硬膜的损伤或断裂。结论 MRI可准确诊断脊髓刀扎伤的部位,髓内、髓外及韧带、硬膜的损伤,尤其是矢状T2W相可清晰、准确地显示刀扎入的路径。