粘性放线菌菌毛的研究进展

粘性放线菌具有两种菌毛:Ⅰ型和Ⅱ型,其功能和抗原性均不相同。Ⅰ型菌毛介导粘放菌粘附在有唾液包被的羟基磷灰石表面,受体是富脯蛋白和富酪蛋白,故Ⅰ型菌毛是通过蛋白质—蛋白质立体化学作用的模式而促进细菌的附着。Ⅱ型菌毛具有一种对乳糖特异性敏感的植物凝集素作用,介导粘放菌与血链菌的种间凝集反应。本文就粘性放线菌菌毛的提取方法,菌毛的化学及氨基酸组成,亚单位结构,稳定性等研究结果作一概述,并且就近年对粘放菌Ⅰ型和Ⅱ型菌毛粘附性能、粘附机制的研究进展进行综述。     

粘放菌5519Ⅰ型菌毛兔抗血清的分离及鉴定

本实验在纯化粘性放线菌５５１９Ⅰ型菌毛的基础上，以粘放菌Ｉ型菌毛蛋白作为抗原，采用多途径免疫方法进行了兔抗Ｉ型菌毛抗血清的分离和提取，并以免疫扩散和琼脂凝胶免疫电泳进行了鉴定。实验结果显示，粘放菌５５１９Ｉ型菌毛蛋白的分子量大部分为５４ＫＤ，少量为３８ＫＤ，抗体效价可达１：３２，且与粘放菌５９５１Ⅱ型菌毛无交叉反应出现。     

粘放菌5519I型菌毛兔抗血清的分离及鉴定

本实验在纯化粘性放线菌５５１９Ｉ型菌毛的基础上，以粘放菌Ｉ型菌毛蛋白作为抗原，采用多途径免疫方法进行了兔抗Ｉ型菌毛抗血清的分离和提取，并以免疫扩散和琼脂凝胶免疫电泳进行了鉴定。实验结果显示，粘放菌５５１９Ｉ型菌毛蛋白的分子量大部分为５４ＫＤ，少量为３８ＫＤ，抗体效价可达１：３２，具有粘放菌５９５１Ⅱ型菌毛无交叉反应出现。     

粘性放线菌5519Ⅰ型菌毛的分离,鉴定

目的：对粘性放线菌５５１９Ⅰ型菌毛进行分离和部分特性研究。方法：采用超声粉碎方法从粘放菌５５１９细胞壁上分离Ⅰ型菌毛，然后经１６００００×ｇ２４ｈ高速离心，硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶Ｇ１００过柱后取得纯化菌毛，并经电镜和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检查。结果：粘放菌５５１９Ⅰ型菌毛大部分分子量为５３５７３．４ｕ，少量为３７６９９．８ｕ。经电镜检查证实为Ⅰ型菌毛。结论：通过超声，结合高速离心，沉淀和葡聚糖凝胶Ｇ１００过程可得到纯化的粘放菌５５１９Ⅰ型菌毛     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究Ⅲ.粘性放线菌菌毛粘附与凝集活性的研究

目的：了解粘放菌两种菌毛在粘附牙面和与血链球菌３４凝集中的生物活性。方法：采用粘放菌Ⅰ型和Ⅱ型菌毛提取物及两种抗菌毛抗体,通过它们对粘放菌粘附唾液包被的羟磷灰石（ＳＨＡ）的抑制实验来判断两种菌毛的粘附活性,通过粘放菌与血链球菌３４的凝集实验及两种抗菌毛抗体对凝集反应的抑制实验来确定两种菌毛的凝集活性。结果：①粘放菌Ⅰ型和Ⅱ型菌毛提取物及两种抗菌毛抗体均能抑制粘放菌对ＳＨＡ的粘附;②只有Ⅱ型菌毛能间接引起肉眼可见的血链球菌３４的凝集反应,抗Ⅱ型菌毛抗体能抑制凝集反应,抗Ⅰ型菌毛抗体无此抑制作用。结论：Ⅰ型和Ⅱ型菌毛均有粘附性能;Ⅱ型菌毛有凝集性能,Ⅰ型菌毛无凝集性能;本课题所采用的菌毛分离法未破坏菌毛的生物活性。     

粘性放线菌对芽面粘附机理的研究：Ⅳ.粘性放线菌唾液蛋白受…

采用＾３Ｈ－标主民的粘性放线菌不同菌株，对７种唾液蛋白包被羟基磷灰石的粘附实验，来筛选菌毛Ⅰ及菌毛Ⅱ的路液蛋白受体。结果发现：富脯糖蛋白、酸性富脯蛋白及富酪蛋白是粘性放线菌菌毛Ⅰ的受体；ＰＲＰＧ、ＳＩｇＡ是菌毛Ⅱ的受体。     

抗Ⅰ型菌毛单克隆抗体粘附作用机制的研究

目的 探讨Ⅰ型菌毛粘附机理和抗Ⅰ型菌毛单克隆抗粘附作用。方法 应用提取的抗粘放菌Ⅰ型菌毛单克隆抗体,采用＾３Ｈ标记法,在体外测定细菌对ＳＨＡ的粘附率及抗体的粘附抑制率。结果 抗粘放菌Ⅰ型菌毛单抗抑制细菌对ＳＨＡ的粘附达８０％,与多克隆抗体无显著差异。结论 Ⅰ型菌毛主要介导粘放菌对ＳＨＡ的粘附,抗Ⅰ型菌毛抗体可以有效地阻抑细菌的粘附。     

抗Ⅰ型菌毛单克隆抗体抗粘附作用机制的研究

目的探讨Ⅰ型菌毛粘附机理和抗Ⅰ型菌毛单克隆抗体抗粘附作用.方法应用提取的抗粘放菌Ⅰ型菌毛单克隆抗体,采用3H标记法,在体外测定细菌对SHA的粘附率及抗体的粘附抑制率.结果抗粘放菌Ⅰ型菌毛单抗抑制细菌对SHA的粘附达80%,与多克隆抗体无显著差异.结论Ⅰ型菌毛主要介导粘放菌对SHA的粘附,抗Ⅰ型菌毛抗体可以有效地阻抑细菌的粘附.     

粘放菌5519Ⅰ型菌毛氨基酸组成分析

为阐明粘放菌Ⅰ型菌毛的粘附作用,在对粘放菌５５１９Ⅰ型菌毛进行提取和鉴定的基础上,进行了菌毛的氨基酸组成分析,结果表明Ⅰ型菌毛含有大量的天冬氨酸,甘氨酸,丙氨酸和赖氨酸以及少部分其它氨基酸,其中非极性氨基酸为３４％,极性不带电荷氨基酸为２１．２２％。这些结果提示Ⅰ型菌毛亚单位具有高度的疏水片断和较强的粘附能力。     

抗粘放菌Ⅰ型菌毛单克隆抗体抗粘附作用的研究

目的 :为了解抗粘放菌 Ⅰ型菌毛单抗的抗粘附机理 ,在提取和鉴定抗粘放菌 Ⅰ型菌毛单克隆抗体和多克隆抗体的基础上 ,进行了抗粘附作用的研究。方法 :实验采用体外抗体阻断粘放菌 5 5 19和 5 95 1对牙釉质片的粘附 ,并结合扫描电镜和Ca+ + 测定方法进行。结果 :结果显示 ,单克隆和多克隆抗体能有效地阻断粘放菌 5 5 19对牙釉质片的粘附。扫描电镜发现未经抗体处理的牙釉质片表面粘附大量的细菌 ,而经抗体处理的牙釉质片表面细菌粘附明显减少 ,与牙釉质表面脱矿程度及钙离子浓度差异结果相吻合。结论 :这些结果提示 ,Ⅰ 型菌毛主要介导细菌对牙釉质片的粘附 ,抗 Ⅰ型菌毛的抗体可以有效地阻断细菌的粘附。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究：Ⅰ.粘性放线菌菌毛？…

本实验旨在建立一套提取和鉴定粘性菌菌毛的方法。方法采用粘性放线菌变异株５５１９（１＾＋２＾－）和５９５１（＾－２＾＋）分别提取Ⅰ型菌毛和Ⅱ型菌毛。首先用机械搅动法分离菌毛与菌体,进一步用凝胶过滤柱层析提取、纯化两种菌毛,并通过电镜观察和对流免疫电泳进行初步鉴定。     

粘性放线菌Ⅱ型菌毛粘附与凝集活性的研究

目的:研究粘放菌Ⅱ型菌毛在细菌粘附与凝集过程中的作用。方法:制备粘放菌Ⅱ型菌毛多克隆抗体抗血清,检其对粘放菌变异株5519、5951、T14V的粘附抑制率,同时肉眼观察它对粘放菌与血链菌34间凝集反应的影响。结果:抗Ⅱ型毛多克隆抗体能减少5519、5951、T14V对玻壁的粘附量,并抑制5951、T14V与血链菌34间的凝集反应。结论:粘放菌Ⅱ型菌具有粘附与凝集的活性。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究Ⅰ.粘性放线菌菌毛的提取和鉴定

目的：本实验旨在建立一套提取和鉴定粘性放线菌菌毛的方法。方法：采用粘性放线菌变异株５５１９（１＋２－）和５９５１（１－２＋）分别提取Ⅰ型菌毛和Ⅱ型菌毛。首先用机械搅动法分离菌毛与菌体,进一步用凝胶过滤柱层析提取、纯化两种菌毛,并通过电镜观察和对流免疫电泳进行初步鉴定。结果：证实分别提取到Ⅰ型菌毛和Ⅱ型菌毛。结论：两种菌毛的提取为进一步分析研究它们的生化特征和生物活性奠定了基础。     

粘放菌5951Ⅱ型菌毛多克隆抗体抗血清的制备

目的制备粘放菌５９５１Ⅱ型菌毛兔抗血清。方法采用物理,化学方法提纯Ⅱ型菌毛,多途径免疫制备兔抗血清,双向免疫扩散法鉴定兔抗血清。结果提纯的Ⅱ型菌毛分子质量主要为３４ｋｕ,多途径免疫后效价棕右１：６４。结论粘放菌５９５１Ⅱ型菌毛蛋白分子质量为３４ｋｕ,抗体效价为１：６４,与Ⅰ型菌毛间有轻度交叉反应。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究Ⅱ.粘性放线菌菌毛化学组成的分析

目的：了解采用机械搅拌法提取的粘性放线菌Ⅰ型、Ⅱ型两种菌毛的化学组成。方法：首先制备出抗Ⅰ型菌毛抗血清和抗Ⅱ型菌毛抗血清,鉴定两种菌毛纯化物纯度后,采用考马斯亮蓝法和蒽酮法分别测定两种菌毛中蛋白质和糖的含量,并进行氨基酸组成分析。结果：两种菌毛的主要成分是蛋白质,糖含量较低。两种菌毛均是天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸和甘氨酸含量较多。两种菌毛中,非极性氨基酸百分含量最高,碱性氨基酸百分含量最低。结论：本实验结果有助于了解两种菌毛的化学组成与其生物性能的关系。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究──Ⅱ．与牙面粘附有关的粘性放线菌粘结素的研究

本实验通过采用粘性放线菌不同菌株（包括培养上清液蛋白）对唾液包被羟基磷灰石的粘附实验及抗菌毛Ⅰ，Ⅱ的ＩｇＧ的粘附抑制实验来判断粘性放线菌粘结素存在部位，并确定不同菌毛在粘附中的作用。结果发现：１．粘性放线菌的粘结素主要位于菌毛上，并进一步证实两种菌毛共同参与粘性放线菌对牙面的粘附；２．上清蛋白中不含粘结素成份，可能含有有利于细菌凝集的成份；３．粘性放线菌地方株与参考株的菌毛有相同的抗原决定簇，为预防粘性放线菌地方株的粘附提供了实验依据。     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究：Ⅲ.粘性放线菌变异株的鉴…

利用粘性放线菌的变异株制备全菌抗血清，采用免疫吸附、疏酸铵沉淀及离子交换层析制备了抗菌毛Ⅰ、ⅡＩｇＧ，并用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳测定其分子量，ＥＬＩＳＡ证明其特异性，为确定菌毛Ⅰ、Ⅱ在粘附中的作用，筛选粘性放线菌的粘结素成份奠定基础。     

粘性放线菌菌毛生物性能的研究：Ⅲ.粘性放线菌菌毛粘附与凝 …

目的 了解粘放菌两种菌毛在粘附牙面和与链球菌３４凝集中的生物活性,方法 采用粘放菌Ｉ型和ＩＩ型菌毛提取及两种抗菌毛抗体,通过它人对粘放菌粘附唾液包被的羟磷灰石（ＳＨＡ）的抑制实验来判断两种菌毛的粘附活性,通过粘放菌与血链球菌３４的凝集实验及两种抗菌毛抗体对凝集反应的抑制实验来确定两种菌毛的凝集活性。结果 （１）粘放菌Ｉ型和ＩＩ型菌毛提取物及两种抗菌毛抗体均能抑制粘放菌对ＳＨＡ的粘附,（２）只有ＩＩ     

粘性放线菌对牙面粘附机理的研究Ⅳ.粘性放线菌唾液蛋白受体的研究

采用 3H-标记的粘性放线菌不同菌株 ,对 7种唾液蛋白包被羟基磷灰石的粘附实验 ,来筛选菌毛 及菌毛 的唾液蛋白受体。结果发现 :富脯糖蛋白 (PRPG)、酸性富脯蛋白及富酪蛋白是粘性放线菌菌毛 的受体 ;PRPG、SIg A是菌毛 的受体 ;PRPG是两种菌毛共同的受体 ;同时还发现不同唾液蛋白成份对不同的菌株粘附影响有差异 ,新分离的粘性放线菌菌株的粘附能力比参考株强。     

粘性放线菌T14V突变菌株粘附机制的探讨

为进一步了解牙菌斑形成的机理，本实验含Ⅰ、Ⅱ型菌毛的口腔粘性放线菌Ｔ１４Ｖ的３种突变株１４７（１／２）、５５１９（１＾＋／２＾－），吸附于玻璃管壁的能力以及与变链菌Ｉｎｇｂｒｉｔｔｅ、远缘链球莲６７１５、血链菌３４、血链菌ｂｌａｃｋ ｂｏｖａ发生共凝集反应的不同结果。并对３种突变株壁化学成分进行分析，显著细菌表面的特异性菌毛及疏水性大小对其吸附、凝集产生影响。