牙骨质活性蛋白的组成、提取及其作用机理

牙骨质基质中有机成分主要由胶原和糖蛋白组成,其中糖蛋白对牙骨质周围牙龈组织和牙周组织的形成及再生起着非常重要的作用。近年来,国外不少学者对牙骨质基质中活性蛋白的组成和提取以及牙骨质活性蛋白对成纤维细胞的生成、移行、粘附等作用进行了深入的研究,本文就目前牙骨质活性蛋白的组成、来源、提取、活性测定、作用和作用机理研究状况作一综述。     

牙骨质附着蛋白的研究进展

目的：牙骨质是维持牙齿稳固及牙周组织健康的重要矿化组织，但由于其局部解剖结构独特等原因导致日前对其仍缺乏了解，也在很大程度上限制着我们对于成牙骨质细胞生物学特性的认识。本文综述了近年来日益受到关注的牙骨质特异性蛋白—牙骨质附着蛋白（CAP）的相关研究进展，就其发现、历史、生物活性以及作用机制等方面进行介绍，以供我国学者参考。     

人牙骨质基质提取物的提取及蛋白组分分析

目的：探讨制取牙骨质某质提取的可行性并分析提取物的蛋白组分，方法：收集因正畸而拔除的牙周末感染的恒牙，用钝性刮匙去除牙根表面的结缔组织，在解剖显微镜下从牙本质表面刮下牙髓质，分别制取牙髓质基质醋酸和胍2种取物。采用SDS－聚苯烯酰胺凝电泳法分析2种提取物的蛋白组分。结果：牙骨质基质醋酸提取物主要含有Mr55000和Mr68000 2种蛋白，而牙骨质基质胍提取物则含Mr62000、Mr60000、Mr55000及Mr41000 4种蛋白。结论：所采用的蛋白质提取方法是可行的。     

牙骨质附着蛋白对牙囊细胞增殖的影响

目的:了解牙骨质附着蛋白对牙囊细胞增殖的作用。方法:分别采用MTT比色法和酶动力学方法观察牛牙骨质附着蛋白对体外培养人牙囊细胞增殖及其碱性磷酸酶活性影响。结果:牙骨质附着蛋白对牙囊细胞的增殖无显著影响,但高浓度的牙骨质附着蛋白可增强牙囊细胞碱性磷酸酶活性。结论:牙骨质附着蛋白对牙囊细胞的增殖无促进作用。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞增殖和牙骨质相关蛋白基因表达的影响

目的 通过研究釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMP)对人牙周膜细胞增殖及牙骨质相关蛋白基因表达的影响,探讨EMP促进牙骨质形成的机制.方法 分别用质量浓度为0(对照组)、50、100、200、300 mg/L的EMP作用于培养的人牙周膜细胞(periodontal ligament cells,PDLC),在培养的第1、3、5、7天用甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖活性;在培养的第7天用荧光实时定量反转录聚合酶链反应法检测各组细胞牙骨质附着蛋白(cementum attachment protein,CAP)和牙骨质蛋白23(cementum protein-23,CP-23)mRNA表达量.结果 EMP质量浓度在50 ～ 200 mg/L范围内可以促进人PDLC增殖,在300 mg/L时抑制细胞增殖;EMP质量浓度为100、200 mg/L时可以显著促进CAP mRNA(分别为4.661 ±0.154、5.923±0.788)和CP-23mRNA的表达(分别为1.222±0.089、3.795±0.640)与对照组(CAP:1.006±0.062,CP-23:1.012±0.163)相比差异均有统计学意义(P＜0.05),且以200 mg/L EMP的促表达效果最佳.结论 EMP在一定浓度范围内能促进人PDLC增殖及CAP和CP-23基因表达,提示EMP可能通过促进细胞增殖和牙骨质相关蛋白的表达促进牙骨质的形成.     

甲状旁腺激素相关蛋白与成牙骨质细胞

成牙骨质细胞主要位于牙骨质表面,是由牙囊细胞分化而来。牙骨质覆盖于牙根表面,具有保持牙周组织平衡的作用。能否促进成牙骨质细胞形成新的牙骨质是评价牙周疾病治疗效果的重要方面。近年来一些研究对多肽类生长分化因子调控成牙骨质细胞生物活性的作用和机制进行了探讨,取得了新的进展,该文对甲状旁腺激素相关蛋白对成牙骨质细胞的调控作用进行综述。     

骨形态发生蛋白2对成牙骨质细胞中硬化蛋白表达调控机理的研究

目的 探索成牙骨质细胞OCCM-30中骨形态发生蛋白2（BMP2）对硬化蛋白（SOST）表达的调控机制。方法 用2种质量浓度的BMP2（50、100 ng·mL^-1）处理成牙骨质OCCM-30细胞3、5、7 d,相同体积的PBS液为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹法检测SOST mRNA和蛋白的表达情况。将OCCM-30细胞分为5组：空白对照组、BMP2组、BMP2+dorsomorphin组、BMP2+SB202190组、BMP2+PD98059组,根据分组分别加入100 ng·mL^-1的BMP2和相应的试剂共培养,于3、5 d时检测SOST mRNA和蛋白的表达情况。结果 100 ng·mL^-1 BMP2对SOST表达的上调作用强于50 ng·mL^-1 BMP2,且有时间依赖性（P<0.05）。BMP2+dorsomorphin组、BMP2+ SB202190组、BMP2+ PD98059组的SOST mRNA水平和蛋白质水平均降低,其中BMP2+dorsomorphin组降低最明显（P<0.05）。结论 成牙骨质细胞中BMP2主要是通过Smad信号通路介导上调SOST的表达。     

牙骨质附着蛋白对猴骨髓基质细胞增殖和矿化能力的影响

目的观察牙骨质附着蛋白（CAP）对体外培养的猴骨髓基质细胞增殖及矿化能力的影响。方法抽取猴髂骨骨髓，全血培养法获得骨髓基质细胞。培养液中CAP的浓度分别为0．125、0．25、0．5、1、2μg／ml，以不加CAP为空白对照。MTF法测定各组细胞的增殖活性，同时检测细胞内碱性磷酸酶活性。采用SAS6．12软件对实验数据行单因素方差分析。结果从第3天开始，0．5、1、2μg／ml CAP组与对照组相比能显著促进细胞增殖。对照组与不同浓度CAP实验组对细胞内碱性磷酸酶合成差异无统计学意义。结论0．5～2μg／ml的CAP都能显著促进体外培养的猴BMSCs增殖，但各浓度组CAP对细胞内碱性磷酸酶合成无影响。     

釉基质蛋白对人牙周膜细胞群在牙骨质上附着与增殖的影响

目的研究釉基质蛋白(emdogain,EMD)对体外培养的人牙周膜细胞群(human periodontal ligament cellpopulations,hPDLPs)在牙骨质片上附着、增殖的影响,为EMD联合hPDLPs应用于牙周组织缺损修复提供实验依据。方法采用组织块法分离培养hPDLPs,制备人牙骨质片,实验组用含100 mg/mL EMD的培养液包被处理牙骨质片,对照组用不含EMD的培养液处理。分别于细胞接种牙骨质片上16 h(观察附着情况)和72 h(观察增殖情况),用噻唑蓝比色法检测牙骨质片上的细胞数;同时,用扫描电镜观察牙骨质片上的细胞数。结果噻唑蓝比色法检测,实验组细胞附着数(t=-3.318,P=0.008)、增殖数(t=-6.499,P<0.001)明显多于对照组,两组之间差异有统计学意义。扫描电镜观察计数,实验组hPDLPs附着数(t=8.001,P<0.001)、增殖数(t=13.046,P<0.001)较对照组多,差异有统计学意义。结论 EMD可促进hPDLPs在牙骨质表面的附着和增殖,提示EMD和hPDLPs可联合应用修复牙周组织缺损。     

Emdogain诱导人牙周膜细胞群向成牙骨质细胞分化的研究

目的探讨人牙周膜细胞群（human periodontal ligament cell populations,hPDLPs）在Emdogain（EMD,商品化的猪釉基质蛋白）诱导下生物学特性的改变。方法组织块法分离培养牙周膜细胞,用含100 mg/L EMD的培养液诱导6 d,光镜下观察细胞形态改变,扫描电镜观察细胞在牙骨质片上的形态变化。免疫细胞化学检测成牙骨质细胞相关矿化蛋白：骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）、Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ,COLⅠ）的表达。结果EMD诱导后细胞由长梭形向多角形的类成牙骨质细胞分化。免疫组织化学检测结果显示诱导后BSP、COLⅠ的表达增强。结论EMD可以诱导人牙周膜细胞群向类成牙骨质细胞方向分化。     

DAPT对成牙骨质细胞增殖活性的影响

目的:探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT对成牙骨质细胞株OCCM30的Notch信号通路是否有抑制作用,及对成牙骨质细胞增殖活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法:γ-分泌酶抑制剂DAPT作用于OCCM30细胞,分别培养2、4、6 d,采用RT-PCR检测Notch信号通路下游基因(Hes-1、Hey-1)和细胞周期相关基因(Cyclin D、Cyclin E)的表达,采用流式细胞术检测DAPT对OCCM30细胞周期的影响;DAPT作用于OCCM30细胞后,连续培养8 d,采用CCK-8法测定细胞增殖活性。结果:实验组Hes-1、Hey-1、Cyclin D、Cyclin E mRNA的表达下降,G1/G0期细胞百分比增高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);第2~8天,实验组细胞增殖活性(A₄₅₀值)显著降低,呈浓度依赖性,且与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DAPT能有效抑制成牙骨质细胞株OCCM30的Notch信号通路,抑制OCCM30细胞的增殖活性,其机制可能与DAPT下调细胞周期相关基因(Cyclin D、Cyclin E)表达有关。     

骨形成蛋白在化牙骨质纤维瘤中的分布及意义

本文首次应用抗骨形成蛋白单克隆抗体(简称BMP—McAb)研究了骨形成蛋白在化牙骨质纤维瘤中的细胞定位。ABC染色显示,在化牙骨质纤维瘤中,骨形成蛋白主要分布于纤维组织中,其中以纤维母细胞纤维细胞中骨形成蛋白的含量为丰富,在牙骨质小体周围围绕着的一些胞体较大的细胞显示出强阳性反应。本文结果显示,利用这种免疫组化方法,可以有助于对化牙骨质纤维瘤作出更准确的诊断。此外,本文还初步探讨了在化牙骨质纤维瘤中的牙骨质小体的形成方式及骨形成蛋白骨诱导的环境影响因素,进一步证实了与机体硬组织的关系。     

釉基质蛋白对牙周膜细胞在牙骨质根面上生长的影响

目的观察釉基质蛋白(EMP)对牙周膜细胞(PDLC)在牙周炎患牙牙骨质根面上附着和增殖的影响。方法用EMP处理的牙周炎患牙根片为实验组,用生理盐水处理的患牙根片和健康牙根片分别作为对照。扫描电镜下观察PDLC在根面上的生长状况,用噻唑蓝比色法分析细胞在根片上的附着和增殖。结果实验组与健康对照组根片上,可见细胞间大量丝状伪足相连,优于病变对照组。实验组PDLC的附着和增殖显著多于病变对照组(附着:0·45±0·03与0·37±0·05,P<0·05;增殖:0·71±0·02与0·55±0·08,P<0·01),但低于健康对照组(附着:0·67±0·08,P<0·05;增殖:1·05±0·09,P<0·05)。结论EMP能促进PDLC在牙周炎患牙牙骨质根面上的附着和增殖。     

根龋中牙骨质和牙本质其质蛋白的降解相关蛋白酶及再矿化调节

由于牙骨质和牙本质相对较高的有机成分，导致龋具有冠 同的特点，但目前在此领域尚有待进一步探索。本文对根龋有机基质降解相关蛋白酶的来源，基质蛋白与再矿化之间的关系进行了综述。     

机械应力刺激对成牙骨质细胞骨涎蛋白mRNA表达影响的体外研究

目的研究机械应力刺激对成牙骨质细胞矿化相关基因骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）mRNA表达的影响。方法利用四点弯曲细胞力学加载装置,以体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30为研究对象,运用实时荧光定量技术,比较2 000、4 000μstrain张应力和压应力加载组和不加力组OCCM-30在3 h、6 h、12 h、24 hBSP mRNA表达差异。结果和对照组相比,2 000、4 000μstrain的张应力和压应力在4个时间点均抑制OCCM-30 BSP mRNA的表达,且差异有统计学意义（F=5.614,P〈0.05）。结论成牙骨质细胞是力学敏感性细胞,机械应力刺激通过影响其BSP mRNA的表达,进而可能影响成牙骨质细胞在牙根吸收和修复中的作用。     

机械压应力下骨硬化蛋白对成牙骨质细胞功能影响及机制的体外研究

目的 探究骨硬化蛋白（SOST）对处于机械压应力中的永生化成牙骨质细胞（OCCM-30）的功能影响及其相关的机制。方法 用不同浓度SOST培养液（0、25、50、100 ng·mL ^-1）处理细胞后依靠四点弯曲细胞力学加载器对细胞加载大小为2 000 μstrain、频率是0.5 Hz的单轴压应力6 h,用免疫印迹法检测β-连环蛋白（β-catenin）、磷酸化的细胞信号转导分子p-smad1/5/8、细胞信号转导分子smad1/5/8的蛋白水平;用碱性磷酸酶（ALP）活性检测法检测ALP活性;用荧光实时定量PCR检测核心结合蛋白因子2（Runx-2）、骨钙素（OCN）、骨涎蛋白（BSP）以及细胞核因子κB受体活化因子（RANKL）、骨保护因子（OPG）的表达。结果 p-smad1/5/8随着SOST浓度增加,呈减低的趋势,而β-catenin、smad1/5/8未有显著差异性。在仅对细胞加力时ALP活性降低,随SOST浓度升高,ALP活性逐渐发生下降,Runx-2、OCN和BSP的表达也都呈现降低趋势,RANKL的表达随着SOST增加而升高,OPG则随之下降。结论 压应力下,SOST的升高会对骨形态发生蛋白（BMP）/smad 通路产生抑制作用,对β-catenin表达未产生明显改变。外源性SOST对于BMP存在反馈性的负向调节作用。压应力下SOST对OCCM-30的矿化功能是抑制的,其机制或许是一方面利用BMP信号通路对成骨相关因子Runx2、OCN、BSP等实现下调,另一方面提高了与破牙骨质有关分子 RANKL/OPG的比率。     

重组人成纤维细胞生长因子21调节成牙骨质细胞矿化作用及其机制研究

目的 探讨重组人成纤维细胞生长因子21 (rhFGF21)对成牙骨质细胞增殖和矿化的作用及其机制。方法 采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光法检测成纤维细胞生长因子21 (FGF21)在大鼠牙周组织和成牙骨质细胞OCCM-30中的表达和分布;采用CCK-8法检测经不同浓度rhFGF21处理OCCM-30的增殖情况;采用碱性磷酸酶染色和茜素红染色分别检测OCCM-30矿化诱导3、7 d后的矿化状态;通过实时定量聚合酶链反应（PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测成骨相关基因Runx2和Osterix的转录及蛋白表达情况;通过PCR阵列分析评估OCCM-30内转化生长因子β (TGFβ)/骨形态发生蛋白（BMP）信号通路基因的表达变化。结果 FGF21在大鼠牙周组织和OCCM-30中存在表达;rhFGF21对OCCM-30的增殖能力无明显影响,但50 ng/mL rhFGF21能促进OCCM-30矿化能力增强（P<0.001）;实时定量PCR结果显示Runx2和Osterix的转录水平在50 ng/mL rhFGF21矿化诱导3 d时上升,5 d时下降;...     

骨形成蛋白(BMP)的实验研究——BMP提取及生物学活性检查

自从1965年Urist证实了脱钙骨质具有诱导骨形成的特性后,人们在这方面又作了大量的研究,发现骨基质具有这种骨诱导性是因为其中含有一种蛋白——骨形成蛋白(又称骨形态发生蛋白,Bone Morphogenetic Protein,BMP)。现已证实BMP是一种酸性多肽,它能够诱导血管周围的未分化间质细胞向骨和软骨细胞分化。     

纯钛表面牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白的表达

目的以牙骨质附着蛋白为分化指标，分析牙周韧带细胞在纯钛表面的分化趋势，并探讨诱导矿化对牙周韧带细胞牙骨质附着蛋白表达的影响。方法第三代牙周韧带细胞在商用纯钛表面接种后，分别进行常规培养和矿化液诱导矿化培养，通过免疫荧光原位检测牙骨质附着蛋白的表达，并比较诱导矿化对牙骨质附着蛋白表达的影响。结果牙周韧带细胞在纯钛表面初期呈条纹状生长，常规培养和诱导矿化培养务件下均能表达牙骨质附着蛋白，诱导矿化对牙骨质蛋白的表达无明显影响。结论在常规培养务件和诱导矿化培养条件下，纯钛表面生长的牙周韧带细胞能高度表达牙骨质附着蛋白，提示纯钛表面体外培养的牙周韧带细胞具有形成牙骨质的分化趋势，从而可为种植体周构建牙周韧带结构提供在种植体侧的锚着点。     

熊果酸对成牙骨质细胞增殖及矿化功能的影响

目的:观察熊果酸对鼠成牙骨质细胞系OCCM-30增殖、周期、凋亡及矿化功能的影响。方法:一定浓度熊果酸处理成牙骨质细胞后,cck-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,微量酶标法检测碱性磷酸酶活性,茜素红染色法定量及定性检测矿化结节量。结果:熊果酸组(2.5 μmol/L)相比于对照组,细胞增殖率和细胞周期增殖指数升高,早期凋亡率降低,碱性磷酸酶活性和矿化结节量上调。结论:一定浓度熊果酸可促进成牙骨质细胞增殖,G1期百分比降低,抑制早期凋亡,增强碱性磷酸酶活性,促进矿化结节的形成。