NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用

目的:探讨NF-κB信号途径在小鼠狼疮性肾炎发病中的可能作用。方法:选取16周龄的雄性BXSB小鼠(狼疮性肾炎模型组)和同周龄C57BL/6小鼠(正常对照组)作为研究对象,透射电镜和PAS染色观察肾组织的超微结构形态改变;RT-PCR技术检测小鼠全血中HMGB1mRNA的表达变化。采用ELISA方法检测血清中HMGB1蛋白浓度;免疫组织化学检测肾组织中HMGB1和PCNA蛋白的表达变化;Western blot和流式细胞术检测肾组织中RAGE、p-NF-κB和IκB蛋白的表达。结果:16周时,与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠血清中BUN水平及尿中微球白蛋白水平明显升高;与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠全血中HMGB1mRNA水平和血清中HMGB1蛋白浓度明显升高;16周时,与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB基底膜明显增厚,部分足突融合,内皮细胞下可见团块状电子致密物沉积;与正常的C57BL/6小鼠相比,BXSB小鼠肾组织的肾小球中可见较多的PCNA阳性表达,肾小管上皮细胞核内也可见少量的表达;BXSB小鼠肾组织中HMGB1蛋白表达升高,HMGB1蛋白尤其在细胞增生明显而肥大的肾小球呈高表达,主要位于细胞浆和细胞外;而在C57BL/6小鼠肾脏组织中以小管细胞核表达为主;与对照组相比,BXSB小鼠肾组织p-NF-κB和RAGE蛋白表达明显升高;而IκB蛋白表达明显降低;HMGB1蛋白与p-NF-κB蛋白表达呈显著正相关(r=0.833,P=0.000);p-NF-κB蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.621,P=0.018);HMGB1蛋白与RAGE蛋白表达呈显著正相关(r=0.848,P=0.000);p-NF-κB蛋白与IκB蛋白表达呈显著负相关(r=-0.759,P=0.002)。结论:HMGB1在小鼠狼疮性肾炎中的致炎作用可能部分通过结合其受体RAGE,激活NF-κB信号途径,促进肾小球固有细胞的增生,从而导致增生性肾小球肾炎形成而实现的。     

黄芪甲苷对过敏性鼻炎小鼠HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路的影响

为探讨黄芪甲苷对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠的作用及对高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)/TLR4/NF-κB信号通路的影响,采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱发C57BL/6小鼠AR,并采用低(12.5 mg/kg)、中(25.0 mg/kg)、高(50.0 mg/kg)剂量的黄芪甲苷进行治疗。研究观察小鼠的行为学变化;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察小鼠鼻黏膜组织的病理变化;ELISA检测小鼠血清IL-4、IL-6、IL-10、IL-1β、IgE、TNF-α、细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)的浓度;Western blotting检测鼻黏膜组织HMGB1、TLR4、NF-κB及p-NF-κB蛋白表达。结果显示,AR模型小鼠出现剧烈抓鼻、打喷嚏等症状,鼻黏膜组织中炎症细胞严重浸润。黄芪甲苷治疗后,小鼠症状缓解,鼻黏膜组织中炎症细胞减少,HMGB1、TLR4和p-NF-κB蛋白表达水平及血清中IL-4、IL-6、IL-1β、IgE、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1浓度均显著降低(P0.05),IL-10浓度显著升高(P0.05)。由此黄芪甲苷对AR小鼠具有较好的治疗效果,通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB通路减少促炎因子的产生可能是黄芪甲苷治疗AR的重要分子机制之一。     

HMGB1在系统性红斑狼疮肾损害中的作用

目的 研究高迁移率族蛋白1(high mobility group protein box 1,HMGB1)在系统性红斑狼疮肾损害中的作用.方法 ELISA检测12例健康对照、16例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)无肾脏损害和14例合并肾脏损害的系统性红斑狼疮患者(lupus nephritis,LN)血清中HMGB1的表达情况.将体外培养的人系膜细胞分为正常对照组和HMGB1刺激组,于培养6、12、24 h后收集细胞,免疫细胞化学检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达变化;免疫细胞化学和流式细胞术检测Toll样受体2(TLR2)、NF-κB 065蛋白的表达变化.结果 血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组,且血清中HMGB1水平与LN患者的蛋白尿呈显著正相关;人重组HMGB1能够促进系膜细胞增殖;与正常对照组相比,HMGB1刺激组中TLR2、NF-κB p65蛋白表达增强;TLR2蛋白与NF-κB p65蛋白表达呈显著正相关(r=0.658,P=0.000);NF-κB p65蛋白表达与PCNA阳性表达率呈显著正相关(r=0.536,P=0.007).结论 HMGB1是狼疮性肾炎发病中的重要的细胞因子之一,可能部分通过与其受体蛋白TLR2结合激活NF-κB促进系膜细胞增生,从而引起肾脏损害.     

LTβR在MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎病理发生中的作用及其机制初探

目的研究淋巴毒素β受体(lymphotoxinβreceptor,LTβR)在狼疮性肾炎病理发生中的作用及其机制。方法选取12周龄、雌性的MRL/lpr小鼠作为狼疮性肾炎小鼠模型,将其随机分为3组:生理盐水处理组、Human-Ig处理组和LTβR-Ig处理组,分别腹腔注射生理盐水(100μl),Human-Ig(100μg/只,100μl)和LTβR-Ig(100μg/只,100μl),每周1次,连续8周。同周龄和性别的C57BL/6小鼠为狼疮性肾炎模型小鼠的正常对照,每周腹腔注射生理盐水1次(100μl),连续8周。Human-Ig和LTβR-Ig处理组小鼠在首次处理后第2、4、6、8周称体质量。最后一次处理1周后,处死以上4组小鼠,收集肾组织。qRTPCR,IHC和Western blot比较C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠肾组织中LTβR的表达情况。然后通过HE染色肾组织,qRT-PCR检测肾组织中LTβR、IL-6、MCP-1、TNF-α的表达水平;Western blot检测肾组织核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化情况,以C57BL/6小鼠肾组织作为正常对照,比较Human-Ig处理组和LTβR-Ig处理组小鼠(MRL/lpr小鼠)以上指标的变化。结果与C57BL/6小鼠相比,MRL/lpr小鼠肾组织中LTβR表达显著升高;与Human-Ig处理组相比,用LTβR阻断肽(LTβRIg)处理的MRL/lpr小鼠肾组织受损明显减轻,肾组织中炎症相关分子IL-6、MCP-1和TNF-α等的表达显著下降,NF-κB的活化明显下调。结论 LTβR可能通过促进狼疮性肾炎相关炎症因子的表达和NF-κB的活化,在狼疮性肾炎的病理发生中发挥重要作用。     

双氢青蒿素对狼疮模型MRL/lpr小鼠肾皮质Fractalkine表达的调节作用研究

目的通过研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对狼疮模型MRL/lpr小鼠肾脏病变和肾皮质Fractalkine(FKN)、NF-κB表达的作用,并与泼尼松的作用进行比较,以探讨青蒿素治疗狼疮性肾炎的可能作用机制,试图明了双氢青蒿素对狼疮性肾炎FKN表达的调节作用。方法选取32只12周龄的雌性MRL/lpr小鼠,随机分为4组:DHA组,每天给予DHA灌胃;泼尼松组,每天给予泼尼松(prednisone,P)灌胃;DHA+泼尼松组,每天给予DHA和泼尼松灌胃;正常对照组,每天给予生理盐水灌胃;共8周。通过光镜观察肾组织病理改变,通过RT-PCR检测肾皮质FKN和NF-κB p65 mRNA的表达,免疫组织化学染色法检测肾皮质FKN及NF-κB p65蛋白的表达。结果 MRL/lpr小鼠肾皮质中检测到FKN、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达,DHA可减少MRL/lpr小鼠的蛋白尿、改善肾功能、减轻肾脏病变。DHA下调MRL/lpr小鼠肾皮质中FKN、NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达。结论双氢青蒿素可通过调节FKN和NF-κB的表达实现其对狼疮性肾炎的治疗作用,与泼尼松联用效果更佳。     

黄芪甲苷对过敏性鼻炎小鼠HMGB1/TLR4/NF-KB信号通路的影响

为探讨黄芪甲苷对过敏性鼻炎(allergic rhinitis,AR)小鼠的作用及对高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)/TLR4/NF-κB信号通路的影响,采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱发C57BL/6小鼠AR,并采用低(12.5 mg/k...     

β-石竹烯通过作用于HMGB1/TLR4/NF-κB通路减轻小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的:研究β-石竹烯(β-caryophyllene,BCP)对脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia-reperfusion,CIR)小鼠的保护作用及可能的机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分组为假手术组(Sham)、模型组(CIR)、β-石竹烯组(62、124、248mg/kg)。采用线栓法建立小鼠CIR损伤模型,缺血1 h,再灌注24 h后,进行神经行为学评分和脑梗死体积测定;TUNEL法观察CIR后缺血区神经细胞的死亡情况;Western blot法检测脑组织中TLR4和NF-κB(p65)蛋白表达情况;免疫组织化学法检测缺血侧脑NF-κB(p65)的表达;ELISA法检测CIR小鼠血清中HMGB1和缺血侧脑组织中IL-1β、TNF-α的含量变化。结果:与模型组相比,BCP(248 mg/kg)可明显改善小鼠神经功能,减少脑梗死体积,降低缺血区神经元的死亡率(P0.01);降低血清中HMGB1浓度、TLR4的蛋白表达量(P0.01),抑制炎症通路NF-κB的激活并减少TNF-α、IL-1β的释放(P0.01)。结论:BCP能够减轻CIR诱导的小鼠脑组织损伤,其保护作用可能是通过抑制HMGB1/TLR4/NF-κB介导的炎症反应。     

HMGB1、TLR4和NF-B在子痫前期患者胎盘组织及血浆中升高

目的探讨高迁移率族蛋白(HMGB1)、TOLL受体4(TLR4)和NF-B信号通路在子痫前期中的相关作用。方法轻度子痫前期患者10例、重度子痫前期患者20例和同期正常妊娠者30例。免疫组织化学(SP法)检测胎盘中HMGB1、TLR4和NF-κB P65蛋白的表达变化及在组织中的定性、定位;用ELISA法检测血清中HMGB1、TLR4和NF-κB P65蛋白浓度。结果子痫前期患者胎盘中HMGB1、TLR4、和NF-κB P65蛋白表达高于正常对照组(P0.05);轻度和重度子痫前期患者间无差异。子痫前期患者血清中HMGB1、TLR4和NF-κB P65的含量较正常组明显升高(P0.05);且重度子痫前期患者血清中HMGB1、TLR4、和NF-κB P65蛋白表达高于轻度子痫前期患者(P0.05)。结论 HMGB1、TLR4及NF-κB P65蛋白表达水平在子痫前期患者胎盘及血清中显著升高,可能参与了子痫的发病过程。     

顺铂致小鼠急性肾损伤肾组织中炎症反应与Klotho蛋白表达相关性分析

目的分析由顺铂诱导小鼠急性肾损伤(AKI)肾组织中炎症与Klotho蛋白的表达变化及相关性,探讨Klotho在顺铂致AKI中的作用及可能机制。方法 18只雄性C57BL/6小鼠随机分为0 d组、 1 d组、 3 d组,每组6只。给予单次腹腔注射顺铂25 mg/kg,分别于0、 1、 3 d处死小鼠,留取血清、肾脏组织。生化分析仪检测肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)含量, HE染色观察肾脏组织病理变化, Western blot法检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、 Klotho、信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白表;采用Spearman秩相关检验进行相关性分析。结果与0 d组相比, 1 d和3 d组血清Scr、 BUN含量均显著性增高; 1 d和3 d组小鼠肾组织间质出现炎症细胞浸润,肾小管上皮细胞脱落、水肿、细胞碎片大量堆积; 3 d组肾组织NGAL、 TNF-α、 NLRP3、 p-STAT3、 STAT3、 p-NF-κB、 NF-κB蛋白含量明显增高,其中TNF-α、 p-STAT3、 STAT3表达量增高呈时间依赖性; 1 d和3 d组Klotho表达量降低呈时间依赖性; NGAL、 TNF-α、 NLRP3、 p-STAT3、 p-NF-κB与Klotho的表达均呈显著负相关。结论 Klotho激活STAT3/NF-κB通路参与调控顺铂诱导小鼠AKI的发生发展。     

核转录因子κB/环氧化酶-2参与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖

目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)/环氧化酶-2(COX-2)信号与糖尿病肾病大鼠肾细胞增殖的关系.方法 单侧肾切除大鼠ip链脲佐菌素诱发糖尿病模型,16周后切除左肾.用免疫组织化学检测肾皮质NF-κB和COX-2蛋白的表达;用正常糖和高糖培养基培养肾小管上皮细胞,24、48和72 h后收集细胞,用免疫细胞化学检测PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测NF-κB和COX-2蛋白的表达.结果 (1)糖尿病模型组肾脏肥大指数增加.肾小球体积增大,系膜基质增多;(2)糖尿病模型组肾组织中活化的NF-κB和COX-2蛋白表达高于对照组,两者呈显著正相关;(3)高糖组肾小管上皮细胞PCNA表达强于正常糖组;(4)高糖能够上调肾小管上皮细胞NF-κB和COX-2蛋白的表达,两者呈显著正相关;同时COX-2蛋白表达与PCNA阳性率呈显著正相关.结论 活化NF-κB,上调COX-2蛋白表达从而引起肾脏固有细胞的增殖可能是糖尿病肾脏损伤的机制之一.     

糖皮质激素对BXSB狼疮小鼠肾组织fractalkine/CX3CR1表达的影响

目的：研究BXSB狼疮小鼠肾组织趋化因子fractalkine及其受体CX3CR1的表达以及给予泼尼松治疗后的改变,探讨两者在狼疮肾炎发病机制中的可能作用。方法：12 周龄雄性BXSB狼疮小鼠随机分成泼尼松治疗组（n=6）和实验对照组（n=6）;另取同周龄雄性C57BL/6J小鼠6只作为正常对照组。正常对照组和实验对照组小鼠每天给予0.5 mL生理盐水灌胃;泼尼松治疗组小鼠每天给予0.18 mg/20 g BW的泼尼松溶于0.5 mL生理盐水灌胃。持续10周结束实验。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western印迹检测小鼠肾组织fractalkine和CX3CR1 mRNA和蛋白的表达,并检测小鼠实验室指标以及肾脏组织病理学的变化。结果： BXSB狼疮小鼠肾组织fractalkine以及CX3CR1 mRNA和蛋白表达均较C57BL/6J小鼠明显增高,而经过泼尼松治疗后的BXSB小鼠两者的表达均较未治疗组（实验对照组）明显下降,同时伴有血清免疫球蛋白G（IgG）、IgM、血清抗双链脱氧核糖核酸（dsDNA）抗体水平以及血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）水平的明显改善,尿蛋白减少;肾小球内免疫复合物沉积和肾脏组织病理学改变亦显著减轻。结论： 实验结果提示fractalkine/CX3CR1可能参与了小鼠狼疮肾炎的发病机制,且糖皮质激素可能通过抑制肾脏fractalkine的表达而发挥其治疗效应。     

贞芪扶正胶囊介导TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制慢性湿疹小鼠炎症反应

目的 探讨贞芪扶正胶囊对慢性湿疹小鼠炎症反应的抑制作用.方法 SPF级C57BL/6小鼠30只,按随机数字表法随机分为对照组(control组)、模型组(CAD组)与贞芪扶正胶囊组(ZQFZ组).观察各组小鼠双耳肿胀程度、双耳变应评分;HE染色观察病灶处皮肤病理学变化;ELISA法检测血清炎性因子TNF-α、IL-6及IL-1β水平;RT-PCR检测皮肤中TNF-α、IL-6及IL-1β mRNA表达;Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达;RT-PCR检测皮肤中TLR4、MyD88及NF-κB mRNA表达.结果 ZQFZ可以显著改善小鼠双耳肿胀程度,降低小鼠双耳变应评分(P＜0.05);减轻小鼠皮肤炎症浸润并降低血浆及皮肤中TNF-α、IL-6及IL-1β蛋白与mRNA表达(P＜0.05);同时ZQFZ还可显著下调小鼠皮肤组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白与mRNA表达(P＜0.05).结论 贞芪扶正胶囊可以通过抑制炎性反应达到治疗慢性湿疹作用,其作用机制可能与其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关.     

miR-143-3p 靶向TREM1 基因对狼疮性肾炎小鼠肾小球系膜细胞炎性因子分泌及凋亡的调控机制

目的:探讨miR-143-3p靶向髓细胞触发受体1(TREM1)基因对狼疮性肾炎(LN)小鼠肾小球系膜细胞炎性因子分泌及细胞凋亡的影响。方法:免疫组化检测模型及正常小鼠肾组织中TREM1的表达。双荧光素酶报告系统结合Western blot验证miR-143-3p与TREM1的靶向关系。分离纯化模型小鼠肾小球系膜细胞,Western blot检测各组处理后肾小球系膜细胞中NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和MCP-1的蛋白表达;CCK8法测定处理后的肾小球系膜细胞活力;流式细胞术检测各组细胞周期及细胞凋亡情况。结果:组织实验显示:与正常小鼠相比,狼疮性肾炎小鼠肾组织中TREM1高表达。同时,miR-143-3p靶向下调TREM1表达。细胞实验显示:与各自的阴性对照相比,sh-TREM1组和miR-143-3p mimic组中NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和MCP-1蛋白表达显著下调,系膜细胞活力明显降低,更多细胞停滞在G0/G1期,但凋亡情况无显著变化。结论:miR-143-3p能下调TREM1表达从而抑制LN小鼠肾小球系膜细胞炎性因子生成以及细胞活力的增强,但对其凋亡无显著影响。     

五味子乙素通过抑制 TLR4/NF-κB 信号通路减轻 PD 小鼠炎症反应及 DA能神经元凋亡

目的：探讨五味子乙素（Sch B）对帕金森病（PD）模型小鼠炎症反应及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法：30只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组和Sch B组,10只/组。腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）建立PD模型,Sch B组小鼠给予Sch B灌胃14 d。步态实验观察各组小鼠行为学表现;免疫荧光染色检测小鼠黑质区酪氨酸羟化酶（TH）荧光强度;ELISA法测定黑质区IL-1β、IL-6和TNF-α水平;Western blot检测黑质区TH、Bcl-2、Bax、TLR4和p-NF-κB p65表达。结果：与正常组相比,模型组小鼠左前爪步幅显著减小,后爪步宽明显增大,中脑黑质中TH荧光强度显著减弱、表达量减少,IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显升高,Bcl-2与Bax蛋白表达比值显著减少,TLR4和p-NF-κB p65表达明显增加。与模型组相比,Sch B组小鼠的步幅明显增大、步宽显著减小,中脑黑质TH荧光强度增强、表达量增加,IL-1β、IL-6和TNF-α水平明显降低,同时Bcl-2与Bax蛋白表达比值显著增加,TLR4和...     

干扰素-γ水平影响系统性红斑狼疮小鼠体TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路的初步研究

目的 探究干扰素-γ(IFN-γ)水平对系统性红斑狼疮(SLE)小鼠体内Toll样受体9/髓样分化因子88/核因子κB亚基p65(TLR9/MyD88/NF-κB p65)信号通路的影响.方法 将30只SLE MRL/lpr小鼠随机分为模型组、空质粒组和IFN-γ siRNA组,空质粒组和IFN-γsiRNA组采用活体电转染技术分别转入空质粒、IFN-γsiRNA质粒,并鉴定转染后SLE小鼠外周血IFN-γγ的表达;另取10只C57BL/6小鼠作为正常组,ELISA检测IL-6、TNF-α和自身抗体[抗双链DNA(ds-DNA)抗体、抗组蛋白抗体(IgM)]水平,观察各组小鼠肾组织病理变化及肾功能情况[血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)],Western blot检测肾组织中TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组血清IFN-γγ、 IL-6、TNF-α、抗ds-DNA抗体、抗IgM抗体、SCr、BUN、肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65磷酸化水平显著升高(P＜0.05);与模型组比较,IFN-γsiRNA组IFN-γγ、IL-6、TNF-α、抗ds-DNA抗体、抗IgM抗体、SCr、BUN、肾组织TLR9、MyD88、NF-κB p65磷酸化水平显著降低(P＜0.05);但空质粒组与模型组上述指标的比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 转染IFN-γγsiRNA质粒后,可减轻SLE小鼠炎症反应与肾损伤,可能与抑制TLR9/MyD88/NF-κB p65信号通路有关.     

过表达APMAP减轻阿霉素肾病肾小球足细胞损伤

目的 探讨脂肪细胞膜相关蛋白质(APMAP)过表达对阿霉素(ADR)肾病肾小球足细胞损伤的影响。方法 采用尾静脉注射ADR构建阿霉素肾病大鼠模型，免疫组化观察肾组织中APMAP、NF-κB p65蛋白表达情况。构建APMAP基因过表达的鼠源肾小球足细胞MPC-5细胞株，并以0.5μmol/L ADR体外诱导构建足细胞损伤模型，再联合NF-κB信号通路激活剂CU-T12-9进行处理。CCK-8检测细胞增殖活性；ELISA检测乳酸脱氢酶(LDH)活性；流式细胞术检测细胞凋亡率；Western blot检测NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达。结果 APMAP在阿霉素肾病大鼠肾组织中低表达，而NF-κB p65高表达(P<0.05)。APMAP过表达可提高ADR暴露下MPC-5细胞增殖活性，降低LDH活性及细胞凋亡率，下调NF-κB p65、p-NF-κB p65、TNF-α等蛋白表达(P<0.05);联合CU-T12-9处理可显著抑制APMAP过表达对ADR暴露下MPC-5细胞损伤的改善作用。结论 过表达APMAP可抑制ADR诱导的肾小球足细胞损伤，...     

TLR4/NF-κB信号通路对CBS~(+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病的影响

目的:探讨TLR4/NF-κB信号通路对胱硫醚β-合成酶(CBS)基因杂合敲除(CBS+/-)小鼠非酒精性脂肪性肝病形成的影响。方法:随机选取4周龄CBS基因正常(CBS+/+)小鼠(n=6)及CBS+/-小鼠(n=6),均给予高蛋氨酸饮食12周。应用全自动生化分析仪检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及同型半胱氨酸(Hcy)水平;分离肝脏并计算肝指数(肝重/体重);ELISA法检测小鼠肝脏组织TC及TG含量变化;苏木精-伊红(HE)和油红O染色观察小鼠肝脏结构和脂质改变;RT-qPCR和Western blot检测小鼠肝组织中TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达;Pearson相关性分析评估小鼠肝脏中TLR4和NF-κB表达与TC和TG含量的相关性。结果:与CBS+/+组小鼠相比较,CBS+/-组小鼠血清Hcy水平升高(P0.05),肝指数升高(P0.05),肝组织及血清中TC和TG含量增加(P0.05或P0.01);HE和油红O染色结果表明CBS+/-组小鼠肝脏脂肪变性明显;TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);TLR4和NF-κB分别与小鼠肝脏中TC和TG含量呈正相关。结论:TLR4/NF-κB信号通路在CBS+/-小鼠非酒精性脂肪性肝病的形成过程中发挥重要作用。     

NF-κB/IκB信号通路在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)/IκB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用。方法采用免疫组化染色法,检测42例HBVGN、20例原发性膜性肾病及5例正常肾组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白在HB-VGN组织中的表达,明显高于在原发性膜性肾病(P<0.01)及正常肾组织(P<0.05)中的表达,且细胞核和细胞质中都可检测到NF-κBp65的表达;相反IκB-α在HBVGN组织中的表达低于原发性膜性肾病肾组织(P<0.05)。结论HBVGN肾组织可能有IκB-α蛋白降解及NF-κB核转移。NF-κB/IκB可能参与了肾组织的病理损害过程。     

Toll样受体4及相关炎性信号分子在高脂饮食诱导的肥胖小鼠肾脏组织水平升高

目的探讨Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κBp65(NF-κBp65)在高脂饮食(HFD)诱导的肥胖小鼠肾脏组织中的表达。方法 45只健康C57BL/6雄性小鼠随机分为HFD组(n=39)和对照组(n=6)。HFD组给予高脂高糖饲料,对照组给予普通饲料,均喂养20周。每周测量小鼠体质量,取体质量增长值最高的13只为饮食诱导肥胖(DIO)组,称量内脏脂肪质量。检测血清肌酐、尿素氮(BUN)及内毒素水平。HE染色、显微镜观察肾脏形态。实时定量PCR(qRT-PCR)检测小鼠肾脏组织TLR2、TLR4、My D88、NF-κBp65及TNF-αmRNA水平,Western blot法检测小鼠肾脏组织TLR4、My D88、NF-κBp65蛋白水平。结果成功构建DIO小鼠模型;与对照组相比,DIO小鼠血内毒素水平升高,血肌酐、BUN水平无显著性差异,2组小鼠肾脏结构未见明显异常;与对照组小鼠相比,DIO小鼠肾脏TLR4、My D88、NF-κBp65、TNF-αmRNA水平升高,TLR2 mRNA水平无显著性差异;DIO小鼠肾脏TLR4、My D88、NF-κBp65蛋白水平升高。结论 TLR4及相关炎性信号分子在饮食诱导肥胖小鼠肾脏组织表达水平增加。     

姜黄素抑制肺上皮细胞BEAS-2B真菌产生炎症细胞因子的作用

目的探讨姜黄素(Cur)抑制肺上皮细胞BEAS-2B真菌产生炎症细胞因子的作用。方法黄曲霉菌(AFT)感染肺上皮细胞BEAS-2B后,用不同浓度的姜黄素(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)进行抗炎抑制作用。采用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4和NF-κB的表达水平;采用Western blot和Real-time PCR检测重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、TLR4和NF-κB蛋白和m RNA表达。结果随着姜黄素剂量的升高,细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4和NF-κB的表达显著降低(P0.05);HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白和m RNA表达明显降低(P0.05)。结论姜黄素调节TLR4/NF-κB信号通路来产生抗炎作用,可以抑制真菌刺激肺上皮细胞BEAS-2B产生炎症细胞因子。