细胞外ATP和腺苷及其受体与细胞凋亡

细胞外ATP(ATPo)和腺苷是细胞内外重要的信号分子,对包括肿瘤细胞在内的多种组织细胞具有细胞毒和诱导凋亡的作用。腺苷及其受体诱导细胞凋亡的机制主要涉及腺苷酸环化酶(AC)、cAMP、Ca2+等。ATP的诱导细胞凋亡作用与多个嘌呤受体有关,包括P2X1、P2X2、P2X7、P2Y1、P2Y2等,进一步的作用机制可能涉及FasL/FasR死亡受体、T细胞受体(TCR)、bcl-2和bax的基因调控等。     

外源性腺苷三磷酸和腺苷对食管癌TE-13细胞株凋亡的影响

目的　探讨腺苷三磷酸 (ATP)和腺苷 (ADO)是否具有诱导人食管低分化鳞癌细胞株TE 13凋亡的作用。方法　MTT法 ,AO/EB双荧光染色法 ,琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞仪方法。结果　ATP在0 .1～ 1.0mmol·L- 1或ADO在 0 .0 1～ 1mmol·L- 1浓度范围内 ,可不同程度地抑制TE 13细胞的增殖 ,ATP和ADO作用 72h后 ,对TE 13细胞的最大抑制率分别达 (80 .5± 6 .2 ) %和 (74 .0± 5 .3) %。细胞经0 .3mmol·L- 1的ATP或ADO处理 4 8h后 ,细胞形态出现了凋亡特征 ;电泳可见明显的“梯状”条带 ;ATP和ADO可浓度依赖性地诱导细胞的凋亡 ,1mmol·L- 1的ATP和ADO诱导细胞的凋亡率分别为 (16 .6± 1.1) %和 (16 .9± 1.2 ) %。结论　ATP和ADO均有诱导食管癌TE 13细胞凋亡的作用     

外源性三磷酸腺苷和腺苷对肿瘤细胞增殖的影响

目的　研究三磷酸腺苷 (ATP)和腺苷 (ADO)对人红白血病细胞株K5 6 2、人胃中分化腺癌细胞株HGC 2 7、人食管低分化鳞癌细胞株TE 13细胞增殖的影响。方法　采用MTT法测定ATP和ADO抑制肿瘤细胞增殖的作用 ,Wright’s Giemsa染色观察细胞形态学的改变。结果　在 0 0 1～ 1 0mmol·L-1浓度范围内 ,ATP和ADO可不同程度地抑制TE 13、HGC 2 7和K5 6 2细胞的增殖 ,其中对TE 13的作用最强 ;ATP和ADO作用 72h后 ,对TE 13细胞的抑制率分别为80 5 2 %和 74 0 3%。细胞经高浓度 (1mmol·L-1)的ATP和ADO处理后 ,细胞形态出现了凋亡的特征。结论　ATP抗TE 13和HGC 2 7肿瘤细胞增殖的作用与其代谢产物ADO部分相关 ,ATP和ADO的作用机制可能涉及细胞凋亡     

三磷酸腺苷对国人食管癌Eca-109和肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的研究三磷酸腺苷(ATP)对人食管癌细胞株Eca-109和人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响。方法采用MTT法测定ATP、腺苷(ADO)和三磷酸尿苷(UTP)抑制肿瘤细胞增殖的作用,W rights-G iem sa染色观察细胞形态学的改变。结果ATP(0.03~0.3 mmol.L-1)和ADO(0.1~0.3 mmol.L-1)可不同程度地抑制Eca-109和SMMC-7721的增殖,ATP对两株肿瘤细胞增殖的抑制作用均强于ADO。ATP和ADO对Eca-109细胞的最大抑制率分别为86.36%和29.88%,IC50分别为0.056和0.823 mmol.L-1;对SMMC-7721细胞的最大抑制率分别为82.06%和52.84%,IC50分别为0.218和0.517 mmol.L-1。UTP对Eca-109细胞有很弱的抑制增殖作用,最大抑制率仅为18.27%;对SMMC-7721无抗增殖作用。两株细胞经高浓度(0.3 mmol.L-1)ATP处理后,部分SMMC-7721细胞形态出现了明显的凋亡特征,而Eca-109细胞凋亡特征不明显。结论ATP具有较强的抗Eca-109细胞增殖作用,其抗增殖作用主要由ATP自身所致,代谢产物ADO也具有一定的作用;而对于SMMC-7721细胞,ATP可能较大程度地通过降解为ADO而发挥抗增殖作用。     

氟对大鼠脑组织蛋白激酶A的影响及硒、锌制剂的拮抗作用

本室以往研究表明 ,氟 (Ｆ)可诱导脑神经细胞凋亡。细胞凋亡涉及到极其复杂的信号转导过程 ,各种促凋亡因素往往需要通过细胞内第二信号系统 ,最终将凋亡信号传递至凋亡的最终共同通道 ,即改变细胞某些基因表达从而导致细胞凋亡的发生[1] 。环磷腺苷(ｃＡＭＰ)———蛋白激酶Ａ(ＰＫＡ)途径是细胞内一条重要的信号转导通路 ,在大多数情况下 ,该途径中ｃＡＭＰ是通过ＰＫＡ催化底物蛋白质磷酸化启动一系列级联反应的 ,故ＰＫＡ催化效应蛋白质磷酸化是产生下游效应的核心[2 ] 。ＰＫＡ在神经系统中作用广泛 ,其作用的底物有电压门控和配体门控…     

线粒体与细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡 (apoptosis)是一种普遍的生理现象 ,是指在一定的生理或病理条件下 ,按程序进行的细胞死亡过程 ,亦称程序性细胞死亡 (programmedcelldeath ,PCD) ,对于维持多细胞机体的完整性和自身稳态具有重要作用。线粒体是所有真核细胞内腺苷三磷酸(ATP)产生中心 ,对维持细胞能量代谢和正常功能活动起重要作用。新近研究发现 ,线粒体内包含一些与细胞凋亡有密切关系的物质 ,如细胞色素C(CytC、凋亡诱导因子 (AIF)、Ca2 + 和活性氧自由基 (ROS)等。在凋亡信号的刺激下 ,线粒体膜通透性增加 ,由此产生一系列关键性变化 ,包括CytC的释放…     

腺苷二步法生产三磷酸腺苷研究

目的对三磷酸腺苷生产工艺进行改进。方法采用二步法利用糖和磷酸盐诱导酵母产生足够量的胞外酵解酶和生产 1,6 二磷酸果糖 ,通过离心去除酵母菌体后 ,添加底物腺苷 ,使其转化为三磷酸腺苷。结果二步法杂质少 ,转化率高 ,可大幅降低生产成本。结论此法对三磷酸腺苷等的生产工艺改进具有一定的参考作用。     

腺苷三磷酸通过P1受体影响兔窦房结起搏细胞电生理活动(英文)

目的:研究腺苷三磷酸(ATP)对兔离体窦房结起搏细胞动作电位的作用,分析相关受体。方法:利用细胞内微电极技术记录兔离体窦房结细胞跨膜电位。结果:ATP 0.1-3.0mmol/L浓度依赖性减慢窦房结自发搏动速率16％-43％,降低舒张期除极速率33％-67％,增大动作电位幅值6％9％,加快最大除极速率30％-76％,APD_(50)和APD_(90)分别缩短7％-12％和6.3％-9％,等浓度ATP、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷(Ado)的效应相比时,各组间无显著性差异,尿苷三磷酸(UTP)和α,β-meATP对动作电位各参数均无影响,P1受体拮抗剂氨茶碱(0.1mmol/L)显著拮抗ATP和Ado的作用(P<0.05),且拮抗程度相同,P2受体拮抗剂反应兰2 (0.05mmol/L)不影响ATP的作用(P<0.05)。结论:兔窦房结不存在功能性P2X,和P2Y_2受体,ATP对兔窦房结的作用主要通过其降解产物Ado,由P1受体介导而发挥。     

海嘧啶注射剂对SGC-7901人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的：揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机理。方法：采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响，采用激光扫描共聚焦技术观测海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i变化时Ca^2 的来源，结果：海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡，升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i浓度，[Ca^2 ]i升高来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放，结论：海嘧啶的抗肿瘤作用机理为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜钙通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i，启动细胞凋亡机制，从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂与心肌再灌注损伤

心肌缺血再灌注损伤与缺血诱发膜除极、电解质及电生理紊乱、能量代谢障碍、细胞内钙超负荷和自由基损伤有关。三磷酸腺苷 (adenosinetriphosphate ,ATP)敏感性钾通道活化 ,可使膜超极化 ,恢复紊乱的电解质 (主要是K+ 离子 )及电生理平衡 ,降低能耗 ,减轻钙超载和自由基损伤而具有心肌保护作用。     

氨茶碱对三磷酸腺苷诱发兔窦房结电生理反应的抑制作用

目的　分析氨茶碱对三磷酸腺苷 (ATP)诱发兔窦房结电生理反应的抑制作用。方法　细胞内微电极技术记录兔离体窦房结细胞动作电位。结果　ATP( 0 3～ 3 0mmol/L)单次槽内注入给药 ,浓度依赖性减慢窦房结自发搏动速率 2 2 %～ 4 3% ,降低舒张期除极速率 4 2 9%～ 6 6 7% ,增大动作电位幅值 7 1%～ 9 2 % ,加快最大除极速率 32 0 %～ 75 5 % ,使动作电位复极 5 0 %和 90 %的时程 (APD50 和APD90 )缩短 7 1%～ 11 8%和7 3%～ 9 3%。P1受体阻断剂氨茶碱 ( 0 1mmol/L)显著拮抗ATP的作用 ,P2受体阻断剂反应蓝 2( 0 0 5mmol/L)则不影响ATP的作用。结论　ATP的上述电生理学效应可能通过P1受体介导     

8—氯腺苷抗肿瘤作用研究

（Sp)-8-氯腺苷3‘,5‘-环磷酸辛酯（OCC）是8－氯腺苷3‘,5‘－环磷酸的新衍生物，对人白血病细胞HL－60有很强的抑制作用和诱导分化作用，用细胞流式光度术发现OCC阻断HL－60细胞周期于G1期，OCC对HL－60－细胞DNA合成有显著抑制作用。但不影响RNA和蛋白质合成。OCC能激活HL－60细胞浆中蛋白激酶A，8－氯腺苷是OCC的活性代谢产物，能在体外和体内实验中明显抑制肿瘤的生长。8－氯腺苷也能诱导人胃癌MGc80-3细胞分化和人T淋巴母细胞MOTL－4的凋亡，本文讨论了8－氯腺苷抗肿瘤作用的机理。     

三磷酸腺苷生物发光法分析莪术油等中药抑制肝、胃癌细胞增殖活性的研究

目的 研究抗癌中药莪术油、华蟾素、龙葵碱与肝癌绌胞株SMMC7721、胃癌绌胞株NKM45作用后的ATP水平,探讨药物对瘤细胞增殖活性的抑制作用。方法 应用三磷酸腺苷生物发光法（ATP—BLA法）测定莪术油、华蟾素和龙葵碱与肝、胃癌细胞作用后的ATP含量,并与5-氟脲嘧啶（5-FU）的作用进行比较。结果 莪术油、华蟾素、龙葵碱与SMMC7721、NKM45作用后的ATP含量明蛀下降（P〈0．05～P〈0．01）;与5-FU作用后的ATP含量比较,无明显差异（P〉0．05）。结论 应用ATP—BLA研究抗癌中药对肿瘤细胞增殖活性的抑制作用,对于筛选抗肿瘤药物具有广阔的应用前景。     

腺苷体外对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其作用机制

目的研究腺苷及其代谢途径对人肝癌HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法将腺苷2.0mmol.L-1作用于HepG2细胞24和48h,采用流式细胞术(FCM)测定细胞周期及凋亡率;观察腺苷膜转运体抑制剂双嘧达莫、腺苷脱氨酶抑制剂红-9-(2-羟基-3-壬烷基)腺嘌呤(EHNA)和腺苷激酶抑制剂5′-氨基5′-脱氧腺苷(AMDA)对腺苷抑制细胞存活的影响,应用MTT法测定细胞存活率;应用Western蛋白印迹法检测P53和Bcl-2蛋白的表达。结果腺苷与HepG2细胞作用24和48h,HepG2细胞出现特征性的亚二倍体凋亡峰,细胞凋亡百分率分别由对照组的(1.2±0.4)%和(4.1±1.6)%增加到(24.3±4.8)%和(38.6±7.4)%,细胞周期阻滞于G0/G1期。腺苷与HepG2细胞作用24h明显抑制细胞存活,P53表达明显增强,Bcl-2表达降低。预先分别给予双嘧达莫,AMDA和AMDA+双嘧达莫处理后,各处理组HepG2细胞存活率较腺苷组升高,细胞凋亡百分率和P53表达降低,Bcl-2表达无明显变化;EHNA预处理组细胞存活率、细胞凋亡百分率、P53和Bcl-2表达与腺苷组比较均无明显变化。结论腺苷可诱导HepG2细胞凋亡,腺苷在胞内可能通过腺苷激酶而不是通过转氨酶的代谢途径参与诱导细胞凋亡的过程。腺苷对HepG2细胞凋亡的诱导作用还可能与其增加P53蛋白表达有关。     

环磷酸腺苷的研究进展

环磷酸腺苷(cyclic Adenosine-3',5'-monophosphate,简称cAMP)是核苷酸的衍生物,为蛋白激酶致活剂,是有机体中广泛存在的一种具有生理活性的重要物质,由ATP在腺苷活化酶催化下生成,是细胞内传递激素和递质作用的中介因子,因此被称为"第二信使".其灭活酶为磷酸二脂酶.它对很多酶催化的反应具有调节作用,可调节与细胞内贮藏的糖和脂肪反应的一系列酶的活性,对蛋白质的生物合成也具有调节控制作用.可广泛参与细胞功能的调节,能舒张平滑肌、扩张血管、改善肝功能、促进神经再生、抑制皮肤外层细胞分裂和转化异常细胞的功能、促进呼吸链氧化酶的活性、改善心肌缺氧等.国外对其生理活性、作用机理进行了大量研究,涉及疾病治疗、信号表达、基因复制等方面.环磷酸腺苷(cAMP)可以通过化学合成、生物发酵、天然产物分离提取等方法获得.     

黄芪注射液对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用

目的:研究黄芪注射液对人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞株的抑制作用.方法:以不同浓度的黄芪作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷-肿瘤化疗药敏试验(ATP-TCA)法测定黄芪注射液对NACC细胞的体外增殖抑制作用;应用PI细胞染色法在流式细胞仪上测定细胞凋亡.结果:研究发现作用48 h后,黄芪浓度为0.065 g·mL-1时已对体外培养的细胞株有抑制作用,NACC抑制率达8%,可高度诱导NACC细胞的凋亡.经黄芪作用的癌细胞在显微镜下表现为细胞稀疏、收缩,胞质拉长.HE染色可见明显的细胞内空泡和细胞出泡等凋亡形态学变化现象.结论:黄芪注射液能抑制NACC细胞株增殖并诱导细胞凋亡,有较好的抗癌作用.     

三磷酸腺苷二纳制剂的质量分析

目的：对三磷酸腺苷二钠(ATP)制剂的质量进行分析。方法：采用电泳法测定制剂中ATP含量。结果：ATP含量下降与其分解产物二磷酸腺苷二钠(ADP)、一磷酸腺苷二钠(AMP)有关。结论：ATP质量好坏与生产工艺、贮藏保管有关。     

三磷酸腺苷和肌苷在葡萄糖液中的配伍研究

为了临床安全合理用药,本文采用纸电泳—紫外分光光度法研究了三磷酸腺苷(ATP)和肌苷在葡萄糖液中以及ATP、肌苷分别与葡萄糖液配伍的稳定性。现报道如下:1 供试液ATP 和肌苷葡萄糖混合液,每毫升含ATP5mg、肌苷25mg、葡萄糖5%;ATP 葡萄糖混合液,每毫升含ATP5mg、葡萄糖5%;肌苷     

三磷酸腺苷脂质体鼻用凝胶制备及其抗缺氧作用

制备三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)脂质体,评价其对缺氧性脑损伤的治疗作用。采用离子对薄膜分散法制备ATP脂质体,其最优处方:三磷酸腺苷二钠、十六烷基三甲基溴化铵、大豆磷脂、胆固醇的质量比为1∶1.98∶8∶3,此时ATP脂质体包封率为(81.50±0.82)%,载药量为(6.79±0.07)%。通过体外释放实验与流变学测定分别考察ATP脂质体与空白凝胶的理化性质;将ATP脂质体、ATP水溶液分别加入甲基纤维素凝胶中,以甲基纤维素凝胶为阴性对照,进行小鼠鼻腔给药。动物实验获得军事医学研究院伦理委员会批准。连续给药9天后,与空白凝胶或ATP水凝胶相比, ATP脂质体水凝胶显著提高了血中红细胞与血红蛋白数值(P<0.01);连续给药13天后,在常压密闭缺氧实验中,与ATP水凝胶或空白凝胶相比, ATP脂质体鼻用凝胶能显著提高小鼠标准缺氧耐受时间(P<0.05)。小鼠海马促凋亡基因p53免疫组化染色显示, ATP脂质体对脑组织有明显保护作用。结果表明, ATP脂质体鼻用凝胶预防给药能明显提高小鼠耐缺氧能力,是一种前景广阔的抗缺氧制剂。