p21WAF1/CIP1基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系

p21WAF1/CIP1基因是在1993年由不同的实验室用不同的方法克隆出来的.Harper JW等[1]运用酵母双杂交的方法发现一种可与细胞周期依赖性蛋白激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)相互作用的蛋白,并经蛋白测序和PCR 的方法将其克隆,命名为CDK相互作用蛋白1(cyclin-dependent kinase interacting protein 1,CIP1).     

脑胶质瘤组织p21WAF1/CIP1基因表达与p53基因的关系

目的 探讨抑癌基因、细胞周期调控与胶质瘤发生、发展的关系,方法 采用免疫化学技术对６３例脑胶质瘤组织及１０例正常脑组织标本中Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１与Ｐ５３基因的表达状况进行检测,并进行相关性分析,结果 （１）１０例正常脑组织均为Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性表达,６３例脑胶质瘤组织中Ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１的表达阳性率与肿瘤分化程度呈正相关;（２）１０例正常脑组织中仅１例为突变型Ｐ５３弱阳性     

反义p21WAF1/CIP1基因转染对肾癌细胞凋亡抑制作用的影响

目的 探讨p21^WAF1/CIP1基因在顺铂诱导的GRC-1肾癌细胞凋亡过程中的作用。方法 使用脂质体转染方法将正义p21^WAF1/CIP1基因及反义p21^WAF1/CIP1基因基因分别导入GRC-1肾癌细胞系中，对所获转染细胞进行形态学观察和流式细胞仪检测。结果 在正义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用增强；在反义p21^WAF1/CIP1基因基因转染后GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导细胞凋亡的作用受到抑制。结论 在GRC-1肾癌细胞中，顺铂诱导的细胞凋亡至少部分是通过p21^WAF1/CIP1基因基因发挥作用。p21^WAF1/CIP1基因基因作为一个与细胞凋亡的相关基因可能参与肾癌细胞凋亡的调控。     

转染p21^WAF1／CIP1对肾癌细胞系GRC—1促凋亡作用

研究转染ｐｗｑ＾２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１对肾癌失足 凋亡作用。方法：采用脂质体介导的逆录病毒载体将ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１转入无Ｐ２１蛋白表达的肾癌细胞ＧＲＣ－１中,通过是,流式细胞仪,ＤＮＡ梯电泳检测细胞凋亡。结果：电镜检测到凋亡细胞,ＤＮＡ电泳呈梯状。所检测细胞中１５．３％出现凋亡。结论：ｐ２１＾ＷＡＦ１／ＣＩＰ１过表达有促进ＧＲＣ－１细胞凋亡作用。     

重组腺病毒介导P21WAF1/CIP1诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的体外实验研究

目的：研究基因转移P21^WAF1/CIP1过量表达对人脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法：构建缺陷型重组腺病毒载体：在CMV启动子控制下的p21 cDNA(Ad-P21)，其编码人P21蛋白。通过流式细胞仪，RT－PCR进行P21表达检测；应用TUNEL法，荧光显微镜和流式细胞仪进行相关凋亡检测，分析。结果：RT－PCR检测5株亲本胶质瘤细胞表达p21 cDNA，而流式细胞仪未检测到P21表达；Ad-P21转染的胶质瘤细胞株均过量表达P21；在体外通过细胞形态学，分子生物学检测均证实Ad-P21能诱导胶质瘤2细胞向终末分化并诱导细胞凋亡。结论：基因转移P21^WAF1/CIP1为研究基因治疗恶性脑胶质瘤提供了有效的手段。     

MDM2、p53和p21WAF1/CIP1蛋白在胃癌中的表达及意义

目的：探讨MDM2在胃癌中的表达情况以及MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1在胃癌发生发展中的作用。方法：应用免疫组化SABC法检测94例胃癌MDM2、p53和p21^WAF1/CIP1蛋白的表达情况，并对三者之间的关系及其与胃癌临床病理特征的关系进行统计分析。结果：94例胃癌中未发现有MDM2的表达。p53及p21^WAF1/CIP1的阳性表达率分别为56.38%（53／94）和41.49%（39／94），阳性表达位于癌细胞核。在癌旁不典型增生灶中，p53有3例，p21^WAF1/CIP1有5例阳生，癌旁正常黏膜均为阴性。p53和p21^WAF1/CIP1两者的阳性表达率之间无显著相关性。在性别、年龄、部位、浸润深度、局产淋巴结转移及组织学类型等临床病理指标中，p53或p21^WAF1/CIP1的阳性表达率的差异均无统计学意义。结论：MDM2在胃癌的发展中不起重要作用，而在胃癌发展中起主要作用的是抑癌基因p53的突变。p21^WAF1/CIP、在胃癌中可能是以不依赖p53的途径增高，说明癌细胞增生已不受G1期检查点的控制。     

p21WAF1/CIP1的功能研究新进展

细胞周期由周期蛋白和周期蛋白依赖激酶(cyclin2dependent kinase,CDK)的相互作用而完成.尤其是G1期过渡到S期受细胞周期负调节因子家族周期蛋白依赖激酶抑制因子(eyclin-dependent kinase inhibitots,CDKI)的调节,其在体外通过与CDKs,cyclins或cyclin-cdks复合物的结合达到抑制CDK催化外源性底物的活性.两个家族:CIP家族和INK4家族.p21WAF1是CIP家族中的一员.转化细胞中p2lWAF1/CIP1的表达对增长停滞起关键性作用[1].     

抑癌基因p21~(WAF1/CIP1)在肾癌细胞GRC-1中的表达

引言ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因是新近发现的一种抑癌基因［１，２］．定位于６Ｐ２１．２，由三个外显子组成，表达蛋白分子质量为２１ｋｕ，故也称Ｐ２１．Ｐ２１生物学功能是通过与ｃｄｋ２或其它众多的ｃｄｋ相结合并抑制其活性，使细胞在Ｇ１期处于停滞状态，并使...     

骨肉瘤p21^WAF1／CIP1基因DNA序列分析及其mRNA、p21蛋白表达

【目的】通过检测骨肉瘤组织中p21^WAF1/CIP1基因的表达及其DNA序列变化，探讨它们与骨肉瘤生物学特性之间的关系及其对预后的评价。【方法】采用原位杂交及免疫组化法检测45例人骨肉瘤p21^WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达。采用PCR-SSCP方法检测骨肉瘤p21^WAF1/CIP1基因DNA变化。采用双脱氧核苷酸末端终止法进行DNA的直接测序。【结果】①p21蛋白表达阳性率在骨肉瘤中为18％(8／45)；②p21^WAF1/CIP1基因mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42％(19／45)；③DNA序列分析结果显示，骨肉瘤中p21^WAF1/CIP1基因第三外显子(exon3)的cDNA全长序列的609位碱基处发生C→T改变，发生率为47％(17／36)。exon2a的cDNA全长序列的187位、303位碱基处发生p T改变，发生率为6％(2／36)。exon2b的cDNA全长序列的522位碱基处发生G→A改变，发生率为2．7％(1／36)。【结论】①随着骨肿瘤恶性度的升高，p21^WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达下降。②p21^WAF1/CIP1基因mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响。③本实验对中国人群骨肉瘤p21^WAF1/CIP1基因DNA多态性位点进行了新的定位，这些位点可能会对今后对该基因的研究提供有意义的参考。     

p21WAF1／CIP1基因及p53蛋白在大肠癌的表达及意义

用免疫组织化学方法对４２例大肠癌组织ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１基因及ｐ５３蛋白的表达进行检测,结果表明：ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性率４２．９％,ｐ５３蛋白阳笥率６４．１％;两者与大肠癌批发化。淋巴结转移及术后生存率之间有关,并随着肿瘤恶性程度的增加,;ｐ２１ＷＡＦ１／ＣＩＰ１阳性率下降,ｐ５３蛋白阳性率增加。     

重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21WAF1/CIP1表达的影响

目的：将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21^WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法：HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21^WAF1/CIP1 mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21^WAF1/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达。结果：RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21^WAF1/CIP1 mRNA表达的灰度比值均高于对照组 (P<0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21^WAF1/CIP1 蛋白质表达的灰度比值也高于对照组 (P<0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组 (P<0.05)。结论：成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21^WAF1/CIP1mRNA和蛋白质的表达。     

p21WAF1/CIP1 gene DNA sequencing and its expression in human osteosarcoma

Background Mutation and expression change of p21^WAF1/CIP1 may play a role in the growth of osteosarcoma. This study was to investigate the expression of the p21^WAF1/CIP1 gene in human osteosarcoma, p21^WAF1/CIP1 gene DNA sequence change and their relationships with the phenotype and clinical prognosis.Methods p21^WAF1/CIP1 gene in 10 normal people and the tumours of 45 osteosarcoma patients were examined using polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism (PCR-SSCP) with silver staining. The PCR product with an abnormal strand was sequenced directly. The p21^WAF1/CIP1 gene mRNA and P21 protein of 45 cases of osteosarcoma were investigated by using in situ hybridization and immunohistochemistrv, respectively.Results The occurrence of P21 protein in osteosarcoma was 17. 78% (8/45), and p21^WAF1/CIP1 mRNA expression in osteosarcoma was 42.22% (19/45). The p21^WAF1/CIP1 gene DNA sequencing of amplified production showed that in p21^WAF1/CIP1 gene exon 3 of 36 cases of human osteosarcoma,there were 17 cases (47.22%) with C→T at position 609; 10 normal blood samples‘ DNA sequence analysis yielded 8 cases (80.00%) with C→T at the same position.Conclusions Along with the increase of malignancy, the expression of p21^WAF1/CIP1 mRNA and P21 protein in osteosarcoma tends to decrease. It is uncommon for the p21^WAF1/CIP1 gene mutation to occur in human osteosarcoma. As a result, the possible existence of tumour subtypes of p21^WAF1/CIP1 gnemutation should be investigated. Our research leads to the location of p21^WAF1/CIP1 gene polymorphism of Chinese osteosarcoma patients, which can provide a basis for further research.     

EGFR、TGF-β1、P21WAF1／CIP1在胃癌中的表达及意义

目的:探讨表皮生长因子受体 (EGFR)、转化生长因子 -β1(TGF-β1)、p2 1WAF 1 /CIP1 与胃腺癌发生、发展、转移的关系。方法:采用免疫组织化学方法对 6 4例胃腺癌组织和 15例正常胃组织 EGFR、TGF-β1、p2 1WAF 1 /CIP1 蛋白的表达进行检测。 结果 :EGFR、TGF-β1、p2 1WAF1 /CIP1 在正常胃组织及胃腺癌组织中阳性表达差异均有统计学意义(P均 <0 .0 5 ) ,三者在伴有或不伴有淋巴结转移的胃腺癌组织中阳性表达差异均有统计学意义 (P均 <0 .0 5 )。结论 :EGFR、TGF- β1表达、p2 1WAF1 /CIP1缺失与胃癌的发生、淋巴结转移密切相关 ;EGFR、TGF- β1、p2 1W AF 1 /CIP1表达的检测对胃腺癌的早期诊断及判断预后有重要意义。     

胃肠道类癌中MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白表达的意义

目的 探讨MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白阳性表达与胃肠道类癌组织分化、浸润和转移的关系.方法 采用免疫组化S-P法对36例胃肠道类癌组织MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白的表达进行检测.结果 36例类癌组织中,MMP-2蛋白在低分化类癌组高表达,MMP-2和p21WAF1/CIP1蛋白在高分化类癌组高表达(P＜0.05),随着肿瘤的浸润和淋巴结转移MMP-2阳性表达率显著增加(P＜0.01),MMP-2和p21WAF1/CIP1阳性表达降低(P＜0.05).结论 MMP-2和MMP-2和p21WAF1/CIP1在类癌组织中的表达与组织分化、浸润和淋巴结转移关系密切,可用于临床对病人进行预后判断.     

稳定高效表达p21WAF1/CIP1蛋白的Hela细胞株的建立

目的：建立高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。方法：应用脂质体(lipofectin)将质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1分别转入人宫颈癌细胞系Hela细胞；经G418筛选，转染阳性细胞连续传代培养，并应用免疫荧光技术监测重组基因p21WAF1/CIP1翻译水平的表达活性。结果：经G418筛选，Hela细胞全部死亡，转染质粒pcDNA3和重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞存活，并可连续传代培养30代；免疫荧光技术监测p21WAF1/CIP1表达结果显示：转染重组质粒pcDNA3-WAF1的Hela细胞p21WAF1/CIP1表达阳性细胞率（92.83%）显著高于转染质粒pcDNA3（12.26%）和Hela细胞组（5.63%）（F=17 218.22，P<0.001）；各代间差异无显著性（F=1.562，P>0.05）。 结论：建立一株高效、稳定表达p21WAF1/CIP1人宫颈癌细胞株Hela-pcDNA3-WAF1。     

前列腺癌p21CIP1/WAF1和PCNA的表达及相关性研究

目的：研究p21CIP1/WAF1及PCNA在人前列腺癌标本中的表达及相关性，阐述它们与前列腺癌病理分级及临床分期的关系。方法：以36例确诊前列腺癌石蜡包埋存档标本作为研究对象，采用免疫组化SABC法对其p21CIP1/WAF1及PCNA进行检测，并应用图像分析仪判定，统计学处理，对前列腺癌的病理分级及临床分期进行了对比分析及相关性研究。结果：p21CIP1/WAF1及PCNA的免疫组化阳性染色为棕黄色和／或棕褐色，定位于细胞质或细胞核。所得数据均经统计学处理。在不同病理分级及临床分期之间差异均有显著性，同时还发现PCNA与p21CIP1/WAF1存在显著负相关性。结论：p21CIP1/WAF1表达与前列腺癌组织的病理分级及临床分期呈负相关性，在发病机制中可能涉及到p21CIP1/WAF1和PCNA调节通路的异常。同时，作为一种检测方法，可用于判定前列腺癌恶性程度及进程的有价值的指标。