大黄素对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响

目的探讨大黄素对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响.方法选取32例非胰岛素依赖型糖尿病伴肾损害患者和健康对照24例,PBMC提取采用Ficoll梯度密度离心法,细胞被分成4组,观察4种不同浓度的大黄素(0、10、50、100μg/ml)对糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1的影响,MCP-1测定采用ELISA法.结果糖尿病肾病外周血单个核细胞MCP-1水平高于正常对照(78.40±35.67vs 29.30±17.31pg/ml,P＜0.05),且与24h尿蛋白定量、尿白蛋白水平呈正相关关系(r=0.633,P＜0.05;r=0.701,P＜0.05;).大黄素(30～100μg/ml)均明显降低了糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1水平(78.40±35.67 vs 61.00±28.90,P＜0.05;78.40±35.67 vs 41.00±18.00,P＜0.01;78.40±35.67vs 21.00±6.90,P＜0.01),大黄素浓度越大,抑制效应越明显(P＜0.01).结论糖尿病肾病尿MCP-1水平是增高的,大黄素能抑制糖尿病肾病患者外周血单个核细胞MCP-1水平,大黄素下调MCP-1的表达可能是其降低蛋白尿、改善肾功能的重要环节.     

外周血单个核细胞Blimp1、IFN-γ、IL-10水平与重症肺结核患者预后的相关性分析

目的 探讨外周血单个核细胞(PBMC)Blimp1、干扰素γ(IFN-γ)、白介素10(IL-10)水平与重症肺结核患者预后的相关性.方法 收集2017年8月-2019年8月本院的重症肺结核患者92例的临床资料进行回顾性分析,根据临床预后的不同将其分为存活组(n=60)与死亡组(n=32),比较两组一般资料情况,观察临...     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞IL-21R mRNA的检测及其临床意义

目的建立检测类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-21R mRNA的巢式实时荧光定量PCR的方法,研究IL-21R mRNA在RA PBMC中的表达水平并探讨其临床意义。方法根据IL-21R mRNA序列,跨内含子设计外引物,采用巢式实时荧光定量PCR方法。首次扩增以增加原始模板浓度,并以减少引物、酶的浓度及循环次数的方法保持扩增片段的特异性,再以首次扩增产物为模板,进行二次PCR扩增作实时荧光定量检测;以β-actin作内参,以二者比值作为IL-21R mR-NA表达水平的指标。结果60例RA患者与30例健康人对照相比,RA患者组IL-21R mRNA表达上调(P<0.01);将RA患者关节功能分级作IL-21R mRNA表达水平比较,Ⅰ级、Ⅱ级相比无显箸差异(P(0.05);Ⅰ级、Ⅱ级分别与Ⅲ级以上相比,差异显著(P(0.01);RA活动期IL-21R mRNA水平较非活动期增高,治疗后IL-21R mRNA的表达明显下降,治疗前后比较有显著差异(P<0.01)。结论IL-21R mRNA在RA患者PBMC中高表达,其表达水平对RA的诊断和治疗具有重要的参考价值。本文建立的检测方法重复...     

IL-10 对 IL-6诱导外周血单个核细胞组织因子表达的调节作用

为了观察抗炎因子白细胞介素10(IL10)对炎症因子白细胞介素6(IL6)诱导人外周血单个核细胞(PBMNC)组织因子(TF)表达的影响,以探讨抗炎因子在急性冠状动脉综合征(acutecoronarysyndrome,ACS)发病机制的作用,用一期凝固法、ELISA和细胞发色底物分析检测不同浓度的人重组IL10(rhIL10)作用下,人重组IL6(rhIL6)诱导PBMNC的促凝活性(procoagulantactivity,PCA)、TF表达及活性的改变。结果表明:rhIL6培养PBMNC的PCA、TF表达及活性均较对照组显著增加(P<0.01);不同浓度的rhIL10作用PBMNC后,可对PBMNC的PCA、TF表达和活性起不同的抑制作用;在500ng/LrhIL10的作用下,rhIL6诱导的PBMNC的PCA、TF表达和活性均显著降低(P<0.01)。结论:IL10对PBMNC的TF表达和活性抑制可能是ACS重要保护机制,炎症因子和抗炎因子的平衡失调可能是冠状动脉血栓形成的重要因素。     

体外培养人单个核细胞分泌IFN-γ水平的观察

目的对体外培养的人脐带血和外周血单个核细胞(MNC)以植物血凝素(PHA)刺激,观察培养上清中IFNγ含量变化。方法常规Ficoll离心法分离人MNC,接种24孔培养板,同时加入PHA,体外培养5d,计数不同培养时间的细胞总数;ELISA法测定不同培养时间上清中的IFNγ含量。结果经PHA刺激后,脐血MNC数量约扩增了12倍,单位细胞量所分泌的IFNγ是健康人血浆水平的30倍。而健康人外周血MNC数量约扩增了5倍。单位细胞量所分泌的IFNγ是健康人血浆水平的15倍。结论与人外周血MNC相比,人脐带血MNC对PHA刺激具有良好的反应性,经PHA刺激后可分泌更高水平的IFNγ,表明其在移植物抗白血病(GVL)效应中起一定作用。     

IL-17和IFN-γ在红内期间日疟原虫感染者外周血T细胞亚群中的表达

目的：观察分析间日疟原虫感染患者外周血T细胞亚群中分泌IL-17和IFN-γ的细胞的表达水平。方法采用流式细胞术检测分析患者组（PV）和健康对照组（HD）外周血CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD8-和γδT细胞中分泌胞内因子IL-17、IFN-γ的细胞的百分比。结果在所有检测的细胞亚群中,分泌IFN-γ的CD3＋CD8-和γδT细胞在其所属亚群中所占比例明显高于健康对照组,分泌IL-17的γδT细胞的比例明显高于健康对照组。结论本研究对于理解机体抗疟原虫的细胞免疫的功能状态具有一定意义。     

2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞分泌IL-10、IFN-γ的影响

目的:观察2型单纯疱疹病毒时人永生化角质形成细胞株分泌IL-10、IFN-γ的影响,探讨角质形成细胞对HSV-2病毒感染初期的免疫防御机制.方法:用2型单纯疱疹病毒感染人永生化角质形成细胞,采用荧光实时定量PCR检测感染后24,48,72 h的IL-10、IFN-γ mRNA的表达量.结果:与对照组比较,经2型单纯疱疹病毒感染后人永生化角质形成细胞分泌IL-10的表达量在24 h内下降,24～48 h上升,48～72 h下降,而IFN-γ则相反,24 h内上升,24～48 h下降,48～72 h上升,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论:在2型单纯疱疹病毒感染角质形成细胞初期,角质形成细胞具有类淋巴细胞的功能,能分泌IL-10、IFN-γ,在不同的时段产生不同的免疫反应,并且IL-10、IFN-γ的表达互为抑制.     

FQ-PCR技术对慢性乙肝患者血清与外周血单个核细胞HBV-DNA定量的对比分析

目的探讨慢性乙肝患者血清和外周血PBMC的HBV-DNA定量间的关系。方法采用FQ-DNA技术检测90例慢性乙肝患者血清和外周血单个核细胞的HBV-DNA含量。结果HBeAg阳性时,血清和PBMC的HBV-DNA阳性率均为100%,HBeAg阴性时,血清HBV-DNA阳性率为60.9%,PBMC阳性率为66.7%。另外当HBeAg( )、HBV-DNA( )时,PBMC阳性率为100%,HBeAg(-),HBV-DNA( )时,PBMC阳性率为85.7%,HBeAg(-),HBV-DNA(-)时,PBMC阳性率为48.1%。结论同时进行HBV-DNA的血清学以及PBMC内检测十分重要,其检测结果在临床上对慢性乙肝患者的病情判断,治疗措施以及治疗效果的评价具有举足轻重的作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞IFN-α和IL-12的表达及临床意义

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)α干扰素(IFN-α)的诱导表达及白细胞介素12(IL-12)表达,评价慢性乙肝患者PBMC的细胞免疫功能。方法poly IC体外刺激正常对照组和慢性乙肝病人PBMC,取培养上清利用病毒保护试验测定干扰素治疗前后病人PBMC表达的干扰素抗病毒生物学活性。同时在IFN-α治疗前后,用RT-PCR检测慢性乙肝患者不同干扰素应答组病人PBMC IL-12表达的变化。结果干扰素治疗前应答组病人(n=4)和无应答组病人(n=12)PBMC分泌的干扰素生物学活性显著低于正常对照组(n=10)(P<0.01)。应答组病人PBMC分泌的干扰素活性随治疗时间延长而增加,1个月时已显著高于无应答组病人(P<0.01);无应答组病人PBMC分泌的干扰素活性始终处于低水平。治疗前,应答组和无应答组病人PBMC的IL-12 mRNA水平都显著高于正常对照组(P<0.01);治疗后,应答组病人IL-12水平随治疗时间延长而降低,1个月时已显著低于无应答组病人(P<0.05),无应答组病人IL-12水平始终处于较高水平。结论慢性乙型肝炎病人的细胞免疫功能受损,PBMC不能正常表达IFN-α,但应答组病人经干扰素治疗后IFN-α表达能力逐渐恢复。慢性乙肝患者PBMC IL-12表达与肝脏炎症活动有关。慢性乙肝患者PBMC IFN-α活性检测结果也许可以作为干扰素治疗效果的预测指标。     

乙型肝炎病毒感染者血清HBV DNA与IL-21及IFN-γ水平的相关性

目的探讨乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者血清乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)与白细胞介素21(IL-21)及γ-干扰素(IFN-γ)水平的相关性。方法选取我院收治的119例慢性乙肝患者,其中乙型肝炎(CHB)46例,乙肝后肝硬化(LC)41例,原发性肝癌(PHC)32例,同期选取35例肝功能检查表面抗体为阳性的健康正常者作为对照,采用荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)方法检测HBV感染者血清HBV DNA,利用酶联免疫吸附实验(Enzymes linked immunosorbent assay,ELISA)检测受试者血清IL-21及IFN-γ水平。结果 CHB、LC、PHC三组患者之间血清IL-21、IFN-γ水平比较无显著差异(P0.05),与健康对照组比较差异显著,且三组HBV感染者血清IL-21、IFN-γ水平明显高于健康对照组(P0.05);阴性组血清IL-21水平明显高于对照组(P0.05),且随着HBV DNA载量增加呈现明显升高趋势;阴性组血清IFN-γ水平明显低于对照组(P0.05),且随着HBV DNA载量增加呈现明显降低趋势;相关性分析结果显示,IL-21水平与HBV DNA载量呈较强正相关(rs=0.641,P0.05),IFN-γ水平与HBV DNA载量呈现负性相关(rs=-0.372,P0.05)。结论IL-21、IFN-γ与HBV感染者血清HBV DNA持续感染密切相关,推测IL-21、IFN-γ有望成为HBV感染者免疫治疗新靶点。     

新诊断2型糖尿病患者外周血单个核细胞蛋白酪氨酸磷酸酶1B的表达

目的探讨蛋白酪氨酸磷酸酶1B（proteintyrosinephosphatase1B,PTPIB）在新诊断的2型糖尿病患者外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）中的表达水平及意义。方法采用实时荧光定量PCR法检测20例新诊断2型糖尿病患者（糖尿病组）和20例血糖正常者（对照组）PBMC中PTPIBmRNA的表达,分析其与体质量指数（bodymassindex,BMI）、空腹血糖（fastingplasmaglucose,FPG）、空腹胰岛素（fastinginsulin,FINS）、稳态模型的胰岛素抵抗指数（homeostasismodelassessmentofinsulinresistance,HOMA—IR）、血脂的相关性。结果糖尿病组PBMC中PTPIBmRNA水平（1．05±0．19）明显高于对照组（0．53±0．17）（P〈0．01）,且PTPIBmRNA表达与BMI、FPG、FINS、HOMA—IR、三酰甘油和总胆固醇呈正相关（r=0．58,r=0．78,r=0．55,r=0．73,r=0．68,r=0．59,P均〈O．01）。结论PTPIB在新诊断2型糖尿病患者PBMC中表达较血糖正常者增加,其高表达与新诊断2型糖尿病胰岛素抵抗相关。     

老年鼻窦炎患者鼻腔结构异常与IFN-γ、IL-5、IL-17相关性分析

目的分析鼻腔结构异常与老年鼻窦炎患者干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-5、IL-17的相关性。方法选择2016年10月-2018年10月我院耳鼻喉科收治的鼻窦炎患者48例为鼻窦炎组,鼻腔结构异常患者48例为结构异常组,同期在院健康体检者48例为对照组,测检测三组鼻腔分泌物IL-5、IFN-γ、IL-17水平并分析其相关性。结果与对照组比较,结构异常组、鼻窦炎组IL-5、IFN-γ、IL-17水平显著升高(P0.05);与结构异常组比较,鼻窦炎组IL-5、IFN-γ、IL-17水平显著升高(P0.05);与鼻窦炎不伴鼻息肉患者比较,鼻窦炎伴鼻息肉患者IL-5、IFN-γ、IL-17水平显著升高(P0.05);与轻度鼻窦炎患者比较,中、重度鼻窦炎患者IL-5、IFN-γ、IL-17水平明显升高(P0.05);与中度鼻窦炎患者比较,重度鼻窦炎患者IL-5、IFN-γ、IL-17水平明显升高(P0.05);与结构异常组比较,鼻窦炎组鼻涕、鼻塞、鼻痒、喷嚏症状评分显著升高(P0.05);鼻腔结构异常、鼻窦炎发病与IFN-γ、IL-5、IL-17水平呈正相关(P0.05)。结论 IL-5、IFN-γ、IL-17在鼻窦炎患者中表达水平显著升高,且鼻腔结构异常、鼻窦炎发病与IFN-γ、IL-5、IL-17水平呈正相关。     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞特异产生γ-干扰素的研究

目的:研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血单个核细胞(PBMC)经HBV表面抗原(HBsAg)刺激后产生γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应.方法:选择免疫清除期、免疫耐受期慢性乙肝患者和HBsAb阳性健康体检者各10例,Ficoll分离液法分离PBMC,用HBsAg刺激培养.利用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ的含量;用酶联免疫斑点实验(ELISPot)检测PBMC中IFN-γ产生细胞的频率;用流式细胞术检测PBMC中IFN-γ+的细胞亚群.结果:经HBsAg刺激培养后,免疫耐受组PBMC产生IFN-γ含量、IFN-γ产生细胞的频率明显低于正常对照组、免疫清除组(均P<0.05),免疫清除组则明显高于正常对照组(P<0.05).免疫清除组、正常对照组PBMC中IFN-γ+的细胞亚群以CD4-CD8+、CD4-CD8-细胞为主,且免疫清除组高于正常对照组;免疫耐受组仅CD4-CD8-表达IFN-γ,且低于另两组.结论:免疫清除期与免疫耐受期慢性乙肝患者PBMCs经HBsAg刺激后产生IFN-γ的免疫反应不同.     

RA患者外周血DcR3表达水平与疾病活动性相关分析

目的探讨DcR3在类风湿性关节炎(RA)发病过程中表达水平的变化及其与疾病活动性关系.方法选择39例RA患者为实验组,26例健康体检者为对照组,采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测RA患者外周血单个核细胞DcR3mRNA的基因表达水平,采用 ELISA法检测患者血清中DcR3、IL-4和IFN-γ水平,并将检测结果与DAS28评分进行相关性分析.结果活动期RA患者PBMC中DcR3mRNA表达水平高于缓解期RA患者和健康对照组,差异有显著性(P<0.05);活动期RA患者血清DcR3和IFN-γ水平显著高于缓解期RA患者和健康对照组(P均<0.01);IFN-γ/IL-4比值显示,活动期RA患者显著高于健康对照组和缓解期RA患者(P均<0.01);RA患者外周血DcR3mRNA水平和血清IFN-γ/IL-4比值与DAS28评分呈显著正相关趋势.结论活动期RA患者外周血DcR3蛋白与PBMC中DcR3mRNA表达水平显著升高,可能通过促Th2等作用参与RA的发生发展,与疾病的活动性密切相关.     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞培养上清液Th1/Th2细胞因子检测与临床意义

目的检测慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBM C)培养上清液T h1/T h2类细胞因子(IFN-γ/IL-4)表达,探明T h1/T h2类细胞因子在慢性乙型肝炎发病机制中的作用。方法分离64例慢性乙型肝炎患者及20例正常人群外周血单个核细胞(PBM C),分别于PHA和HB cA g/HB eA g体外培养48 h,双抗体夹心EL ISA法检测PBM C培养上清液IFN-γ/IL-4水平。结果在PHA诱导下,HBV慢性感染者PBM C产生IFN-γ水平低于正常对照组,IL-4水平高于正常对照组,谷丙转氨酶(ALT)异常组和ALT正常组相比较,IFN-γ水平异常组大于正常组。HB cA g诱导下,HBV慢性感染者PBM C产生IFN-γ水平高于正常人群,IL-4水平两组间无差异,HB eA g诱导下,IFN-γ水平无显著性差异,而IL-4水平明显高于正常对照组。结论T h1/T h2类细胞平衡失调与HBV感染慢性化有关;T h1类细胞因子优势表达引起肝脏炎症反应,HB cA g倾向诱导T h1类细胞因子表达,HB eA g倾向诱导T h2类细胞因子表达。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞和血浆中人疱疹病毒6型的表达

目的探讨人疱疹病毒6型(HHV6)感染在类风湿关节炎(RA)病因学中的作用。方法采用巢式PCR技术检测62例RA患者(其中3例同时合并干燥综合征)和138名健康献血者外周血单个核细胞和血浆中HHV6DNA表达现状。同期运用美国德灵公司血浆特定蛋白分析仪定量检测RA患者血浆中类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)。结果RA患者组外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)HHV6DNA阳性率与正常对照组比较无差异显著性(P=0.7992);RA患者PBMC中HHV6DNA阳性率与其性别、年龄、病情严重程度等无显著相关性(P>0.05);RA患者组RF阳性(浓度≥20IU/ml)率与PBMC中HHV6DNA阳性率之间无明显一致性(P=0.7502)。RF浓度≥50IU/ml的RA患者组PBMCs中HHV6DNA阳性率明显高于RF浓度<50IU/ml的RA患者组(P=0.0295);部分RA患者血浆中可检出HHV6DNA,而对照组血浆中HHV6DNA阴性。结论HHV6DNA在RA患者PBMCs中有较高检出率,部分RA患者血浆中存在HHV6DNA,提示该组患者中可能存在HHV6活动性感染;HHV6感染可能与RA患者血浆中RF滴度增高有关。     

miR-205在ITP患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 研究micro-RNA(miR-205)在原发性免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)患者外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMC)中的表达和意义。方法 收集43例ITP患者和38例健康人的外周静脉血2 ml,分离PBMC,提取细胞总RNA,逆转录合成cDNA,以U6为内参,应用实时荧光定量PCR(Real time PCR)的方法检测miR-205的表达量; 分析miR-205与血小板计数结果之间的相关性。结果 ITP初诊患者(Naive ITP)PBMC miR-205的表达水平与健康对照组相比上调(1.81±0.48 vs 0.92±0.25,t=10.31,P<0.01); 治疗后不完全缓解组(incmplete remissiongroup,IR group)和初诊患者相比,miR-205的表达水平差异无统计学意义(P=0.112),和正常对照组相比,则表达升高(1.63±0.65 vs 0.92±0.25,t=7.2,P<0.01); 14例治疗后完全缓解组(complete remission group,CR group)治疗后(After treatment)PBMC miR-205的表达低于治疗前(before treatment)的表达水平(1.07±0.43 vs 1.91±0.34,t=5.68,P<0.01); ITP患者PBMC中miR-205的表达量与血小板计数呈负相关(r=-0.0696,P<0.05)。结论 miR-205在ITP初诊患者PBMC中高表达,而治疗完全缓解后表达水平又降低,并且表达水平与血小板数量呈负相关,表明其可能与ITP的发生发展相关,或许会成为ITP诊疗新的标志物。     

慢性HCV感染者外周血单个核细胞IL-18和IFNAR1检测的临床意义

目的 分析慢性丙肝（CHC）患者外周血单个核细胞（PBMC）白细胞介素18（IL-18）mRNA的诱导表达及α干扰素受体1（IFN-α receptor1，IFNAAR1）表达，评价慢性丙肝患者PBMC细胞免疫功能。方法 脂多糖（LPS）体外刺激正常对照组和慢性丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus，HCV）感染组病人PBMC，RT-PCR检测干扰素治疗前后PBMC IL-18mRNA水平的变化。同时RT-PCR检测不同组PBMC IFNAR1mRNA水平的差异。结果 治疗前干扰素应答组病人（n=12）和无应答组病人（n=26）PBMC IL-18mRNA诱导表达水平显著低于正常对照组（P〈0．01；P〈0．01）；治疗后，应答组病人IL-18mRNA水平随治疗时间延长而升高，1个月时显著高于无应答组病人（P〈0．01），无应答组病人IL18mR-NA水平始终较低。IFN-α2b治疗期间，干扰素应答组病人PBMCIFNAR1mRNA水平从治疗前的高表达而逐渐减少，正常对照和干扰素无应答组病人PBMCIFNAR1mRNA的表达始终较低（治疗前与应答组相比P〈0．01）。结论 慢性HCV感染病人的细胞免疫功能受损，不能正常表达IL-18和IFNAR1，但应答组病人经干扰素治疗后表达能力逐渐恢复。慢性丙肝患者PBMCIL18mRNA和IFNAR1mRNA水平检测也许可以作为干扰素治疗预后的判断指标。     

外周血单个核细胞circRNA SLAIN1和PSEN1诊断帕金森病价值

目的 观察帕金森病(Parkinson’s disease, PD)患者外周血单个核细胞circRNA SLAIN1、PSEN1表达变化,探讨二者诊断PD的价值。方法 80例PD患者为PD组,依据Hoehn-Yahr分级分为轻度组28例,中度组28例,重度组24例;同期体检健康者50例为对照组。比较PD组与对照组简易精神状态检查量表(mini-mental state examination, MMSE)评分及合并高血压、糖尿病比率等;采用实时荧光定量PCR法检测外周血单个核细胞circRNA SLAIN1、PSEN1相对表达量;Pearson相关法分析PD患者circRNA SLAIN1、PSEN1表达与帕金森病评定量表(unified Parkinson’s disease rating scale, UPDRS)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ评分的相关性;绘制ROC曲线,评估circRNA SLAIN1、PSEN1单独及联合检测对PD的诊断效能。结果 PD组年龄,MMSE评分,男性及合并高血压、糖尿病比率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。PD组circRNA SLAIN1、PSE...