AML 和ALL 患者骨髓DNMT1，SFRP1 基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的 检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA 甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secretedfrizzled related protein 1, SFRP1)基因甲基化及 mRNA 表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法 根据FBA (French-American-British classification systems;法- 美- 英分型系统) 标准选取2019 年11 月～ 2020 年11 月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70 例,其中AML 50 例和ALL 20 例;另选取65 例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP) 检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1 和SFRP1 基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML 和ALL 患者临床参数之间的关系;用实时定量 PCR 检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中 DNMT1,SFRP1 和β-catenin mRNA 表达;Pearson 相关分析明确DNMT1,SFRP1 和β-catenin mRNA 水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1 和SFRP1 基因甲基化与预后的关系。结果 AML 和ALL 患者中DNMT1 基因甲基化发生率分别为26.0% 和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ2=47.683,P ＜ 0.001);SFRP1 基因甲基化发生率分别为78.0% 和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ2=55.265,P ＜ 0.001),差异均有统计学意义。AML 组DNMT1 基因甲基化与WBC 水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ2=6.524,5.732,均P ＜ 0.001);SFRP1 基因甲基化与WBC 水平、BM 水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ2=8.115, 5.395, 5.060,均P＜ 0.05)。ALL 组DNMT1 基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ2=4.802,P ＜ 0.05);SFRP1 基因甲基化与WBC 水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ2=4.920, 5.115,均P ＜ 0.05)。与对照组相比,AML 和ALL 患者化疗前DNMT1 和β-catenin mRNA 表达均显著升高(t=4.807 ～ 10.456,均P＜ 0.05),SFRP1 表达显著下降(t=24.791,12.069,均P＜ 0.05)。与化疗前相比,AML 和ALL 患者化疗后DNMT1 和β-catenin mRNA 表达显著下降(t=3.461 ～ 6.374,均P ＜ 0.05),SFRP1 表达显著上升(t=17.076,7.454,P ＜ 0.05)。两组患者DNMT1 与SFRP1 表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P ＜ 0.05);SFRP1 与β-catenin 表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P ＜ 0.05);两组患者DNMT1与β-catenin 表达均无明显相关性。两组患者DNMT1 基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ2=3.862,3.679,均P ＜ 0.05);SFRP1 基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ2=2.927,3.155,均P ＜ 0.05)。结论 DNMT1 和SFRP1 基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1 和SFRP1 基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

Aurora家族基因在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

目的:研究Aurora-A、B、C(AUR-A、B、C)基因mRNA在急性白血病中的表达情况及其与临床指标的相关性。方法:采用荧光定量PCR检测73例初诊急性白血病(AL)患者(初诊组)、20例化疗完全缓解急性白血病患者(缓解组)和骨髓单个核细胞中AUR-A、B、C mRNA表达水平,14例健康志愿者作为对照(健康组),并分析它们分别在不同分组中的表达性差异,与临床指标的相关性及AUR-A、B、C mRNA表达水平之间的相关性。结果:AURA、B、C mRNA表达在初诊组均高于健康组和缓解组(P0.01),健康组和缓解组3种基因mRNA表达水平差异均无统计学意义(P0.05),AUR-A、B、C 3种基因mRNA表达水平在急性淋巴细胞白血病(ALL)组均高于急性髓系白血病(AML)组(P0.01);AUR-A、B、C mRNA表达在高危组均高于低危组(P0.05),在高危组与中危组及中危组与低危组之间差异无统计学意义(P0.05);AUR-A、B、C表达在CD34、CD71、CD56阴性组和阳性组差异无统计学意义(P0.05),在不同性别、染色体、1疗程化疗是否缓解分组中差异无统计学意义(P0.05)。73例初诊AL患者中,AUR-A mRNA表达水平与初诊乳酸脱氢酶(LDH)水平和危险分层呈显著正相关(r=0.279,P=0.017;r=0.314,P=0.007);AUR-B与初诊LDH水平和危险分层呈显著正相关(r=0.277,P=0.018;r=0.349,P=0.002),AUR-A、B均与年龄、初诊白细胞(WBC)水平、初诊骨髓幼稚细胞比例和1疗程是否缓解无显著相关性;AUR-C表达水平与初诊白细胞水平、初诊LDH水平和危险分层显著正相关(r=0.263,P=0.025;r=0.348,P=0.003;r=0.376,P=0.001),与年龄显著负相关(r=-0.241,P=0.040),而与初诊骨髓中幼稚细胞比例和1疗程是否缓解无显著相关性;AUR-A和B(r=0.444,P=0.000)、AUR-B和C(r=0.763,P=0.000)、AUR-A和C(r=0.616,P=0.000)mRNA表达水平均呈显著正相关。结论:AUR-A、B、C mRNA在初诊急性白血病患者中高表达并且三者间表达水平显著正相关,其高表达与白血病类型、危险分层、初诊白细胞和乳酸脱氢酶水平等指标相关,均可作为预后指标和潜在治疗靶点     

成人急性白血病中p73基因的表达及意义

目的:检测并分析p73在急性白血病(AL)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中的表达情况,初步探讨p73与p53的相关性以及p73和细胞抗原表达的相关性,从而分析p73在AL中的临床意义.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AL组和对照组BMMNC p73与p53的表达情况.采用流式细胞术对AL BMMNC细胞表面及浆内分化抗原检测,分析p73与细胞抗原的相关性.结果:ALL初诊组p73阳性表达率低于ALL-CR组和对照组(P＜0.05),AML初诊组p73阳性表达率明显高于AML-CR组和对照组(P＜0.05).30例AML初诊组中p73与p53、CD2呈正相关,与MPO(髓过氧化物酶)呈负相关(r=0.481,P＜0.01;r=0.447,P＜0.05;r=-0.492,P＜0.01).20例ALL初诊组中,p73与p53无相关性(P＞0.05),p73与细胞抗原表达亦无相关性(P＞0.05).结论:p73在AL发生发展和预后中可能发挥重要作用.     

LNK基因在急性白血病患者中的表达及临床意义

目的:探讨LNK基因在急性白血病患者中的表达及其与临床特征的相关性。方法:采用实时荧光定量PCR检测80例AL(ALL 42例,AM L 38例)患者骨髓中LNK m RNA的表达水平,分析其表达水平与临床特征的相关性,应用Western blot检测患者的LNK蛋白表达量。以正常的志愿者(16例)骨髓作为对照组。结果:ALL和AM L组的LNK水平均明显高于正常对照组(P=0.007,P=0.021),ALL组与AM L组之间LNK水平无统计学差异;ALL和AML组中的LNK表达水平均与危险程度呈正相关(P=0.000,P=0.004,r=0.5,r=0.386),且ALL和AML组中高危组的LNK水平均明显高于对照组(P=0.035,P=0.032),AML和ALL组的中危组(P=0.239,P=0.609)及标危组(P=0.974,P=1)LNK水平均高于对照组,但无统计学意义,各组之间危险程度无统计学差异。急性白血病患者LNK蛋白表达量较对照组增加。结论:急性白血病患者LNK基因表达高于正常人,与患者危险度呈正相关。     

β-catenin表达水平与直肠锯齿状癌变的相关性研究

目的探讨β连环蛋白(β-catenin)表达水平与直肠锯齿状癌变的相关性。方法筛选2012年2月至2015年2月直肠锯齿状腺瘤癌变组织50例[包括广基锯齿状腺瘤(SSA)30例和传统锯齿状腺瘤(TSA)20例]、直肠腺癌30例及正常直肠黏膜组织20例。通过免疫组化学染色技术测定所有组织β-catenin表达水平,同时行β-catenin DNA提取及突变检测。比较各组织β-catenin表达异常率及β-catenin表达与腺瘤异型增生程度关系。结果 SSA、SSA、直肠腺瘤β-catenin阳性率分别为63.3%、75.0%、100.0%均显著高于正常直肠黏膜组织的10.0%(χ~2=14.012,17.289,42.188,P0.01)。SSA、TSA均表现出不同程度异型增生。SSA、TSA组织β-catenin阳性表达与腺瘤异型增生程度均呈正相关(r=0.621,0.213,P0.05)。结论β-catenin表达异常参与锯齿状腺瘤癌变过程,且β-catenin异常表达与直肠锯齿状腺瘤癌异型增生程度呈正相关。     

Th22细胞及其细胞因子在急性淋巴细胞白血病表达水平及其意义分析

本研究分析了Th22细胞及其细胞因子在急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达水平及其意义。选取确诊的ALL患者48例。根据治疗情况,将患者分为初诊未治组26例和完全缓解组22例。采用流式细胞术(FCM)检测Th22细胞情况,ELISA法检测血清IL-22、IL-6、TNF-α和TGF-β表达水平,半定量RT-PCR方法检测IL-22 mRNA的表达水平;同时,选取健康体检者30例为对照组,比较3组患者相关参数的差异。结果表明,初诊未治组和完全缓解组患者的Th22细胞水平,IL-22、IL-6、TNF-α、IL-22 mRNA表达水平均显著低于对照组,TGF-β表达水平显著高于对照组(P<0.05)。初诊未治组患者的Th22细胞水平,IL-22、IL-6、TNF-α、IL-22 mRNA表达水平均显著低于完全缓解组,TGF-β表达水平显著高于完全缓解组。初诊未治患者IL-22表达水平与IL-6、TNF-α表达呈正相关,与TGF-β表达呈负相关。结论:ALL患者Th22细胞数量减少,IL-22表达水平下降,可能与ALL发生有关。Th22细胞水平降低是ALL发生的危险因素。     

尾型同源盒基因在成人急性淋巴细胞白血病中表达及临床意义

本研究旨在探讨同源盒基因CDX1,CDX2和CDX4在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及其临床意义.急性淋巴细胞白血病骨髓或外周血标本51份,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CDX1,CDX2和CDX4在成人急性淋巴细胞白血病患者和14例正常对照组中的表达情况.结果表明,在14例健康成人中未见CDX1,CDX2和CDX4表达,15例缓解期急性淋巴细胞白血病患者中未见CDX1,CDX2和CDX4表达,在初治ALL患者中CDX2的表达率为60.8%,而在治疗缓解后其表达率明显下降(p<0.05);在复发组患者中CDX2表达率又升高(81.8%);CDX2表达与疾病危险分组相关,高危组CDX2阳性率为91.7%,高于标危组45.7%(p<0.05);CDX1和CDX4在初治及复发成人ALL中皆无表达.在初治和复发的成人ALL患者中CDX2表达阳性患者的完全缓解率(CR)低于表达阴性的患者(p<0.05);CDX2表达阳性患者的中位生存时间短于阴性表达的患者.结论:CDX2表达和成人ALL的发病、复发相关,CDX1和CDX4表达与成人ALL发病及复发无相关性;CDX2表达阳性的患者完全缓解率低,预后不良;CDX2可作为成人急性淋巴细胞白血病的发病、复发及预后判断的指标之一.     

长链非编码RNA AC002454.1在急性白血病患儿中的表达及临床意义

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)在急性白血病(acute leukemia, AL)患儿和骨髓正常的其它血液病患儿(作为对照)标本中的表达谱的差异,筛选与AL患儿相关的lnc RNA,探讨lnc RNA AC002454.1在AL患儿中的表达及临床意义。方法:采用Microarray基因芯片技术对初诊AL儿童和对照儿童骨髓细胞的lnc RNA进行统计分析。选取差异表达显著的lnc RNA 97个,对急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患儿(21例)、急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia, AML)患儿(22例)和对照儿童(21例)样本采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术进行验证并比较。并选择其中差异最大的lncRNA AC002454.1分析其相对表达量与临床指标的关系。结果:经Microarray基因芯片检测,ALL患儿差异表达的lncRNA 1 884个、AML患儿差异表达的lncRNA 4 289个。采用qRT-PCR对异常表达lncRNA进行验证的结果显示, ALL组中表达显著上调9例、AML组中表达显著上调12例,其中AC002454.1在ALL、AML患儿表达差异最显著(P0.05,P0.01)。AC002454.1的相对表达量在初诊ALL免疫分型T系与B系中有显著差异(P0.01)、ALL和AML组有显著差异(P0.05), AC002454.1相对表达量在患儿性别、年龄、初诊时WBC计数、染色体、融合基因、危险度分层之间无显著差异(P值均 0.05)。结论:用长链非编码RNA芯片分析获得了AL患儿的lncRNA表达谱,AC002454.1在AL患儿中异常高表达,其表达量与AL患儿的免疫分型及判断患者预后有一定相关性。     

冠心病患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2与氧化低密度脂蛋白水平

摘要：目的：分析冠心病(CAD)患者血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。 方法：分别检测100例急性冠脉综合征(ACS)、75例稳定性心绞痛(SAP)患者和50例健康人对照者的血清Lp-PLA2、ox-LDL水平及CAD病变程度,分析其相关关系。 结果：与健康人对照组相比,CAD患者血清Lp-PLA2、ox-LDL水平均显著升高(P<0.01);与SAP组相比,ACS组血清Lp-PLA2、ox-LDL、肌钙蛋白I(TnI)水平及Gensini积分均显著升高(P<0.01)。相关性分析显示,CAD患者Gensini积分分别与血清Lp-PLA2(r=0.426,P<0.01)、ox-LDL(r=0.331,P<0.01)水平呈正相关,Lp-PLA2与ox-LDL之间亦显著正相关(r=0.238,P<0.01)。多元回归分析显示,CAD患者血清Lp-PLA2(β=0.366,P<0.01)和ox-LDL(β=0.253,P<0.01)水平共同决定了22.7%的Gensini积分变化;Gensini积分是血清Lp-PLA2的唯一显著的独立预测因子(β=0.420,P<0.01);LDL胆固醇(LDL-C) (β=0.411,P<0.01)、Gensini积分(β=0.285,P<0.01)共同决定了25.9%的ox-LDL变化。 结论：CAD患者血清Lp-PLA2、ox-LDL水平升高,且与动脉粥样硬化(As)病变程度密切相关。     

Hsa-miR-9在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达及与CDX2基因的相关性研究

目的:探讨人类微小RNA-9(Hsa-miR-9)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达及对尾侧型同源盒基因(CDX2)的调节作用。方法:收集本院近5年诊治的130例初治ALL患儿的临床资料,并选取同时期同年龄段于本院行健康体检的健康人群60例作为对照;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCT)分别测定2组儿童Hsa-miR-9的表达量及ALL患儿不同治疗阶段CDX2基因的表达量,分析Hsa-miR-9的表达与患者临床病理特征及患者生存时间的关系,并探讨Hsa-miR-9与CDX2基因表达之间的关系。结果:Hsa-miR-9在ALL患儿中的表达量较健康对照组显著降低(P 0.001); ALL患儿Hsa-miR-9的表达与血清WBC、浸润淋巴结、脾肿大及危险程度分级有关(P 0.05);高表达Hsa-miR-9的ALL患儿的中位生存时间显著长于低表达组(P 0.001);不同治疗阶段ALL患儿的Hsa-miR-9表达均与CDX2基因的表达呈显著相关(r_(B-ALL初治期)=0.54,r_(B-ALL缓解期)=0.94,r_(T-ALL初治期)=0.74)(P 0.05)。结论:Hsa-miR-9在ALL患儿中表达降低,高表达Hsa-miR-9的ALL患儿可获得更长的总体生存时间,Hsa-miR-9在ALL患儿中的表达与CDX2基因密切相关。     

E-cadherin基因在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的:研究E-cadherin基因在儿童急性白血病(AL)中的表达及其与临床指标的相关性,并探讨其可能的调控机制。方法:采用实时荧光定量PCR检测135例初诊AL患儿骨髓单个核细胞中E-cadherin mRNA的表达水平,并分析其表达水平与临床指标的相关性;应用Western blot法检测E-cadherin、β-catenin、Akt、p-Akt信号通路相关蛋白的表达;同时收集22例非恶性血液病患儿的骨髓作为对照。结果:B-ALL、T-ALL、AML组中E-cadherin mRNA的表达均低于对照组(P0.01)。在B-ALL中,中危组患儿E-cadherin基因表达水平较标危组显著下降(P0.05);伴有脾脏浸润的患儿E-cadherin基因表达水平亦显著降低(P0.01);而在T-ALL、AML患儿各临床指标分组中,E-cadherin基因表达水平均无显著差异。在B-ALL患儿中,免疫分型为Common-BALL的患儿E-cadherin基因表达水平较其他B-ALL患儿显著升高(P0.01)。而在3种AL的FAB分组间均未见E-cadherin表达差异。基于计量资料的相关性分析表明,B-ALL患儿中,随着E-cadherin表达水平的下调,初诊外周血白细胞(WBC)计数、乳酸脱氢酶(LDH)水平有升高趋势(r=-0.419,r=-0.269),而初诊外周血血小板水平呈下降趋势(r=0.335);在T-ALL患儿中,E-cadherin表达水平与LDH、初诊骨髓幼稚细胞比例呈显著负相关(r=-0.567,r=-0.557);而在AML患儿中,随着E-cadherin表达水平下调,初诊WBC计数水平和初诊骨髓幼稚细胞比例呈上升趋势(r=-0.368,r=-0.391)。与对照组比较,3种AL患儿中E-cadherin表达水平下调(P0.001),而β-catenin、Akt则上调(P0.01),p-Akt、p-Akt/Akt表达量在T-ALL中上调(P0.01)。结论:E-cadherin基因表达降低或缺失是儿童急性白血病的预后不良相关因素,可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路,促进肿瘤的发生,并引起细胞的一系列恶性生物学行为,E-cadherin有望成为判断预后和指导个性化治疗的指标。     

胆囊癌、胆囊腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中p53、β-catenin基因的表达及临床意义

目的探讨胆囊癌、胆囊腺瘤性息肉和慢性胆囊炎组织中p53、β-catenin基因的表达及临床意义。方法选取2012年5月到2017年5月收治的60例胆囊癌患者,20例胆囊腺瘤性息肉患者,20例慢性胆囊炎患者,运用免疫组织化学SP法检测三组患者胆囊组织中p53、β-catenin基因的表达和相关性及其与临床病理特征之间的关系。结果胆囊癌组胆囊组织中p53、β-catenin基因的表达阳性率61.7%(37/60)、68.3%(41/60)显著高于胆囊腺瘤性息肉组35.0%(7/20)、40.0%(8/20)和慢性胆囊炎组10.0%(2/20)、5.0%(1/20)(P0.05),而胆囊腺瘤性息肉组胆囊组织中p53、β-catenin基因的表达阳性率又显著高于慢性胆囊炎组(P0.05);胆囊癌组织中p53、β-catenin基因的表达与肿瘤分化程度、Nevin分期、侵犯周围组织均呈显著的正相关关系(P0.05)。结论胆囊癌组织中p53、β-catenin基因的表达较高,与肿瘤分化程度、Nevin分期、侵犯周围组织均呈显著的正相关关系。检测p53、β-catenin基因表达水平可为胆囊癌患者的治疗和预后的判断提供参考。     

多发性骨髓瘤患者循环microRNA-21的表达与意义

摘要：目的：了解多发性骨髓瘤(MM)患者循环microRNA-21（miR-21）的表达情况。 方法：用荧光定量PCR法检测34例MM患者循环miR-21的表达水平,并与血清Ig的总量（IgG+IgA+IgM）、lambda轻链、kappa轻链、Ca²⁺、乳酸脱氢酶（LDH）、清蛋白(Alb)、β2-微球蛋白(β2-MG)、血红蛋白(Hb)作相关性分析。 结果:MM组循环miR-21的相对表达水平为2.01±0.27,显著高于意义不明的单克隆丙种球蛋白病（MGUS）组0.76±0.20(t=15.39,P<0.01)和健康人对照(NC)组0.43±0.11(t=27.74,P<0.01)。MM组Ⅰ期的miR-21水平显著低于Ⅱ期和Ⅲ期（t=-4.16,t=-4.32,P均<0.01）。MM组循环miR-21水平与血kappa轻链(r=0.532, P<0.05)、血lambda轻链(r=0.615,P<0.01)、Ig的总量（IgG+IgM+IgA）(r=0.625,P<0.05) 及血清β2-MG（r=0.491, P<0.05)均呈显著正相关,与血清Alb呈负相关(r=-0.585,P<0.01)。而与LDH（r=0.250,P>0.05)、Hb（r=-0.286,P>0.05)及Ca²⁺（r=-0.227,P>0.05)均无相关性。 结论:MM患者循环miR-21可以反映骨髓瘤细胞的负荷,监测MM病情进展。     

脆性组氨酸三联体和β-连接素在大肠癌中的表达及其意义

目的:探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)和β-连接素(β-catenin)蛋白在大肠癌中的表达及其临床病理学意义。方法:采用免疫组织化学EnVision两步法,检测76例大肠癌及癌周非瘤粘膜组织、30例腺瘤标本的FHIT和β-catenin表达。结果:腺癌组织中FHIT表达降低或缺失率为51.3%,明显高于腺瘤组(6.7%)(P<0.01)。在癌的组织学分级中显示高分化组占10%,与中分化(56%)或低分化组(62.5%)相比差异显著(P<0.05)。大肠癌、大肠腺瘤组织中β-catenin的异常表达率分别为86.8%、73.3%,均显著高于癌旁非瘤黏膜组织(0%)(P<0.01)。在肿瘤的组织学分级中,β-catenin的异常表达率在中、低分化组为90.9%,显著高于高分化组(60%)(P<0.05);在临床分期中,DukesC及D期的β-catenin异常表达率为95.7%,显著高于DukesA及B期(72.4%)(P<0.01);伴淋巴结转移的β-catenin的异常表达率为95.3%,显著高于无淋巴结转移(75.8%)(P<0.05)。β-catenin异常表达与FHIT表达降低或缺失之间呈显著正相关关系(r=0.244,P<0.05)。结论:FHIT表达降低或缺失及其β-catenin的异常表达在大肠癌的发生发展中起重要作用。部分大肠癌组织中β-catenin的异常表达可能由抑癌基因FHIT的表达降低或缺失所致。     

Wnt信号通路对酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的影响以及整合素连接激酶的调节作用

目的:研究Wnt信号通路对酒精性肝纤维化中肝星状细胞活化的影响以及整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)的调节作用。方法:60只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组和模型组,采用白酒辅以玉米油、吡唑混合食料灌胃的方法制备大鼠酒精性肝纤维化模型,于造模12周后,采用免疫组化法检测大鼠肝组织α-SMA、β-catenin蛋白的表达,并进一步通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织ILK mRNA的表达。结果:正常肝组织中有少量β-catenin、α-SMA蛋白和ILK mRNA的表达,模型组大鼠肝组织中β-catenin、α-SMA蛋白和ILKmRNA的表达明显升高(P<0.01)。β-catenin的表达量与α-SMA的表达呈正相关(r=0.913,P<0.01),ILK的表达量与β-catenin的表达亦呈正相关(r=0.880,P<0.01)。结论:酒精性肝纤维化发生发展过程中,Wnt信号通路在肝星状细胞活化的过程中可能发挥了重要的作用,ILK可能通过调节Wnt信号通路间接发挥了促进肝星状细胞活化的作用。     

β-连环蛋白和腺瘤样的结肠息肉病蛋白在宫颈上皮内瘤样变及宫颈鳞癌中的表达及意义

目的探讨β-连环蛋白(β-catenin)和腺瘤样的结肠息肉病(APC)蛋白在宫颈上皮内瘤样变及宫颈鳞癌中的表达及意义。方法采用免疫组化二步法检测β-catenin和APC蛋白在30例宫颈鳞癌、50例宫颈上皮内瘤样变及24例正常宫颈组织中的表达。结果①β-catenin和APC蛋白阳性表达率在正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤样变及宫颈浸润鳞癌3组间均有显著差异(P<0.05)。②β-catenin和APC蛋白阴性表达率在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ三组之间比较无统计学差异(P>0.05),β-catenin在CINⅠ组与CINⅡ-CINⅢ组二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。③β-catenin阴性表达与APC蛋白阴性表达呈显著正相关(P<0.05)。结论联合检测β-catenin与APC蛋白的表达情况可能有助于宫颈癌的诊断和治疗。     

2型糖尿病患者外周血单核细胞血红素氧合酶-1表达水平与氧化应激的相关性

目的:探讨初诊的2型糖尿病患者机体的氧化应激状态,以及患者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达与机体氧化应激状态的关系。方法:应用流式细胞仪检测22例初诊2型糖尿病患者(糖尿病组)细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产量。硫代巴比妥酸比色法检测血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,逆转录聚合酶链反应技术分析PBMC中HO-1mRNA表达水平,并与22名健康对照者(对照组)比较。结果:糖尿病组PBMC中ROS产量测定的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)为50.36±21.69,与对照组28.80±10.14比较,差异有显著性(P<0.01)。糖尿病组血清中MDA含量测定为(14.47±5.21)nmol/mL,与对照组的(5.57±1.21)nmol/mL比较,差异亦有显著性(P<0.01)。糖尿病组PBMC中HO-1/β-actin mRNA基因表达率的平均值为0.98±0.24,与对照组0.48±0.18比较,差异有显著性(P<0.01)。HO-1 mRNA的表达水平与ROS的产量、MDA含量均呈显著正相关(r=0.491、0.745,均P<0.01)。结论:初诊的2型糖尿病患者处于氧化应激状态,其中HO-1表达水平的增高可能参与2型糖尿病的抗氧化应激损伤。     

成人急性淋巴细胞白血病骨髓中miR-34a的表达及其在细胞耐药中的意义

目的:探讨miR-34a在成人急性淋巴细胞白血病(ALL)骨髓中的表达及其与耐药性的关系。方法:47例初诊ALL患者,分别于初诊和复发或完全缓解时留取骨髓样品,初诊-完全缓解组标本26对,初诊-复发组标本21对。利用实时荧光定量PCR对患者骨髓样品、人CCRF-CEM细胞株及其耐药株CEM-C1细胞中miR-34a表达水平进行检测。利用电穿孔转染法抑制CCRF-CEM细胞并上调CEM-C1细胞中miR-34a表达,分别用不同浓度喜树碱进行培养,利用CCK-8法对细胞存活情况进行分析,计算细胞增殖抑制率(%)和耐药指数(RI)。结果:初诊-完全缓解组中,初诊时患者骨髓样品中miR-34a表达水平显著低于完全缓解时和对照组,差异具有统计学意义(P0.05),初诊-复发组中,初诊时和复发时患者骨髓样品中miR-34a相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);miR-34a在CEM-C1细胞中表达水平为(2.64±1.37),显著低于CCRF-CEM细胞中的(5.14±2.06)(P0.05);转染miR-34a抑制物的CCRF-CEM细胞中miR-34a表达水平为(3.14±1.15),显著低于miRNA抑制剂阴性对照CCRF-CEM细胞(P0.05),转染miR-34a抑制物的CCRF-CEM细胞增殖抑制率显著高于转染阴性对照细胞(P0.05),IC_(50)分别为28.73和2167.00 ng/ml,RI=75.43;转染miR-34a模拟物的CEM-C1细胞中miR-34a表达水平(5.06±1.73),显著高于miRNA模拟物阴性对照CEM-C1细胞(P0.05),转染miR-34a模拟物的CCRF-C1细胞增殖抑制率显著低于转染阴性对照细胞(P0.05),IC_(50)分别为112.57 ng/m L和1.27 ng/m L,RI=88.64。结论:miR-34a在成人ALL骨髓样品中呈低表达,可能与ALL复发及耐药性的发生有关。     

PLK1基因及β-catenin-STAT3通路在胃癌患者中的表达及意义

目的检测PLK1基因及β-catenin-STAT3通路在胃癌患者中的表达水平,探讨其与胃癌临床参数的关系。方法用实时荧光定量PCR检测胃癌患者PLK1基因表达水平,免疫组化染色法检测β-catenin-STAT3蛋白的表达水平,对PLK1与β-Catenin及STAT3蛋白进行相关性分析,用Kaplan-Meier曲线分析PLK1的表达量与患者术后生存率的关系,探讨胃癌患者的临床参数与PLK1表达水平的关系。结果实时荧光定量PCR结果表明,与癌旁组织的0.053±0.031比较,PLK1基因在胃癌组织中的表达量为0.380±0.071,差异有统计学意义(t=19.08,P0.01);免疫组化染色结果表明,PLK1、p-STAT3(Y705)、β-catenin蛋白在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织(3 041±1 077 vs 1 431±763,1 852±492 vs 582±163,1 743±562 vs 1 093±224),差异均有统计学意义(t分别为3.57,4.37,3.09,P均0.01)。PLK1的表达水平与肿瘤的大小及浸润深度有关(P均0.01),且PLK1蛋白与p-STAT3及β-catenin蛋白呈正相关(r分别为0.782,0.812,P均0.01),而p-STAT3与β-catenin蛋白间也呈正相关(r=0.821,P0.01)。Kaplan-Meier曲线分析结果表明,PLK1的表达量与胃癌患者术后的生存率呈反比[风险比(HR)=2.246,χ2=27.51,P0.01]。结论 PLK1在胃癌组织中过量表达,且与β-cateninSTAT3通路共同参与了胃癌的进展。     

WT-1 mRNA定量分析在急性白血病移植后微小残留病监测中的意义

目的探讨定量检测Wilms瘤基因1(WT-1)m RNA在急性白血病患者造血干细胞移植后的疗效、预后和预测复发中的价值。方法收集84例经异基因造血干细胞移植的急性白血病患者不同治疗时间的骨髓标本,实时荧光定量聚合酶链反应技术(RQ-PCR)分析WT-1 m RNA表达水平;聚合酶链反应-短串联重复序列法(PCR-STR)分析移植后供体基因嵌合率,并进行统计学分析。结果与AML和ALL治疗前组WT-1表达水平[分别为4.13(0.77,9.26)、0.69(0.16,2.35)]比较,AML和ALL治疗后组[分别为0.51(0.06,0.91)(U=164,P0.01);0.06(0.02,0.10)(U=315,P0.01]、缓解组[分别为0(0,0.06)(U=0,P0.01);0(0,0.03)(U=0,P0.01)]表达水平均明显下降。与缓解组相比,AML复发组[3.35(2.46,5.63)(U=0,P0.01)]、ALL复发组[2.46(2.17,3.31)(U=0,P0.01)]WT-1表达水平均明显上升。15例复发患者,在临床确诊复发前的WT-1水平明显升高。移植患者WT-1水平与供体基因嵌合率呈负相关(r=-0.73,P0.05)。结论 WT-1m RNA定量分析可用于监测经造血干细胞移植急性白血病患者的微小残留病灶,评估疗效、预后及预测疾病复发风险。