人参多糖注射液对人乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响及机制研究

目的 探讨人参多糖注射液对人乳腺癌细胞株MCF-7侵袭迁移能力的影响。方法 以不同作用浓度(12.5μL/mL、25μL/mL、50μL/mL、100μL/mL)人参多糖注射液处理MCF-7细胞株,以PBS作为空白对照,分别采用Transwell小室侵袭实验、划痕实验及Western blot检测细胞侵袭能力、迁移能力及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达。结果 人参多糖注射液对MCF-7细胞体外侵袭和迁移能力具有显著的抑制作用,并呈现剂量及时间依赖性。人参多糖注射液处理后,MCF-7细胞MMP-2蛋白表达及MMP-9蛋白表达比值显著降低,并呈现剂量及时间依赖性。结论 人参多糖注射液可显著抑制人乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力和迁移能力,下调MMP-2及MMP-9蛋白表达是其可能的作用机制。     

HIF-1α通过下调TP53INP1促进乳腺癌细胞的迁移及侵袭

目的:探讨HIF-1α通过调节TP53INP1蛋白对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法:通过免疫组化检测60例乳腺癌标本中TP53INP1和HIF-1α的表达情况及分析其临床病理资料。通过体外构建HIF-1α及共转染HIF-1α和TP53INP1细胞模型,迁移侵袭实验和划痕实验检测HIF-1α和TP53INP1对乳腺癌细胞迁移侵袭能力的影响;Western blot实验研究共同下调HIF-1α和 TP53INP1对MMP2、VEGF蛋白表达水平的影响。结果:免疫组化实验显示HIF-1α在人乳腺癌组织中高表达,TP53INP1呈低表达,两者之间具有相关性且均与淋巴结转移有关（P＜0.05）。迁移侵袭实验及划痕实验显示在乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中下调HIF-1α抑制了迁移侵袭及愈合能力,MCF-7细胞中共同转染下调HIF-1α和TP53INP1质粒之后逆转了乳腺癌细胞的迁移侵袭能力及愈合能力（P＜0.05）。Western blot实验显示shHIF-1α和TP53INP1共转染后在MDA-MB-231细胞中MMP2表达水平高于下调HIF-1α表达组。共转染shHIF-1α和shTP53INP1质粒后在MCF-7细胞中,VEGF和MMP2表达高于下调shHIF-1α组（P＜0.05）。结论:HIF-1α可能通过下调TP53INP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移侵袭能力。     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

下调叉头框转录因子3a促进鼻咽癌侵袭转移

目的 探讨下调叉头框转录因子3a（FOXO3a）对促进鼻咽癌侵袭转移的影响。方法 慢病毒shRNA和空载病毒液Mock shRNA按复感染指数（multiplicity of infection,MOI）为50转染鼻咽癌CNE2和HNE1细胞,构建低表达FOXO3a的稳定转染细胞。采用Western blot、Real-time PCR检测其转染效率。划痕实验和Transwell 实验检测下调FOXO3a对诱导鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。Western blot检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白 E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Twist和Snail的表达,免疫荧光检测EMT相关蛋白定位。Western blot和Real-time PCR检测基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的表达。结果 成功构建低表达FOXO3a稳定转染鼻咽癌CNE2和HNE1细胞。划痕实验和Transwell 实验结果显示,与空载体转染鼻咽癌细胞比较,低表达FOXO3a稳定转染鼻咽癌细胞的侵袭和转移能力增强,EMT相关蛋白E-cadherin表达下调,而Vimentin、N-cadherin、Twist和Snail表达显著升高,MMP2和MMP9表达亦升高。结论 下调FOXO3a可促进鼻咽癌的侵袭转移。     

他莫昔芬对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制

目的 探讨他莫昔芬(TAM)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力的影响及其作用机制.方法 采用对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞,以无血清无酚红高糖DMEM培养基对其进行24 h的培养,然后将其分别接种并分为对照组(无血清无酚红高糖DMEM培养基)、TAM组(含有1μmol/L TAM的无血清无酚红高糖DMEM培养基),采用Western blot法、RT-PCR法检测两组MCF-7细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、MMP-2、血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达水平,采用Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力.结果 TAM组MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均明显高于对照组,VEGF、MMP-9、MMP-2 mRNA相对表达水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01);TAM组MCF-7细胞的侵袭能力相对数明显高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.01).结论 TAM可能发挥类雌激素功能,促进乳腺癌MCF-7细胞侵袭能力,这与其提高MCF-7细胞中VEGF、MMP-9、MMP-2表达水平有关.     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

紫花牡荆素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖与侵袭能力的研究

目的观察紫花牡荆素对乳腺癌MCF-7细胞株增殖与侵袭能力的影响并探讨其分子机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法与侵袭实验检测紫花牡荆素对MCF-7细胞增殖与侵袭能力的影响,应用反转录PCR、Western blot法、Tunel法检测紫花牡荆素对基因表达、蛋白表达、细胞凋亡的影响。结果不同浓度紫花牡荆素均抑制MCF-7细胞增殖水平,同未加药对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,5、10、20μmol／L紫花牡荆素作用后,MCF-7细胞迁移数与未处理组相比分别降低20.3％、44．4％和50．3％（P〈0．05）。以10μmol／L紫花牡荆素处理后,凋亡细胞数增多,可以上调Bax与Caspase-3蛋白的表达水平,下调基质金属蛋白酶（MMP）-2与MMP-9的mRNA和蛋白表达水平。结论紫花牡荆素对于乳腺癌细胞恶性增殖与侵袭能力具有显著抑制作用。     

弗林蛋白酶抑制剂对乳腺癌MCF-7细胞生长和迁移的影响

目的 探讨乳腺癌转移的机制,为深入研究乳腺癌发生、发展机制提供理论基础.方法 应用不同浓度的弗林蛋白酶（Furin）抑制剂α1-PDX处理乳腺癌MCF-7细胞.用四甲基偶氮唑蓝（MTT）和克隆形成实验检测Furin抑制剂对MCF-7细胞增殖和克隆形成的影响.单层细胞迁移实验和Transwell实验检测MCF-7细胞迁移和浸润能力.Hoechst 33342/PI双染法检测细胞凋亡.酶联免疫吸附法检测细胞培养液中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和MMP-9蛋白水平.Western blot检测细胞迁移相关蛋白MT1-MMP、血管内皮生长因子（VEGF）-C和VEGF-D水平.结果 不同浓度α1-PDX作用MCF-7细胞48 h以上时,细胞的生长受到抑制,集落形成降低,细胞凋亡率升高.但在低浓度情况下对细胞迁移和侵袭起抑制作用.α1-PDX降低了细胞内MT1-MMP、VEGF-C、VEGF-D的表达,同时细胞培养液上清中MMP-2和MMP-9浓度也低于对照组.结论 Furin抑制剂通过抑制乳腺癌MCF-7细胞MMP及VEGF表达抑制肿瘤的迁移能力.     

TNF-ɑ调控LRG1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究TNF-α对乳腺癌MCF-7细胞中LRG1蛋白表达的调控及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及相关分子机制。方法:MTT实验检测不同浓度TNF-α处理后MCF-7细胞活力;EdU实验、Transwell实验和划痕实验分别检测抑制LRG1表达后细胞增殖、侵袭以及迁移能力;Western blot检测细胞内MAPK信号通路中p-p38蛋白表达。结果:低浓度TNF-α处理乳腺癌MCF-7细胞,细胞活力增强;抑制LRG1表达后细胞增殖能力下降,侵袭细胞数、细胞迁移率以及p-p38蛋白表达均下降。结论:TNF-ɑ通过调控LRG1的表达促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,这一过程可能通过激活p38MAPK信号通路来实现。     

HIF-2α对乳腺癌MCF-7细胞生物学功能的影响

目的 探讨HIF-2α对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭及成瘤能力的影响。方法 利用HIF-2αORF/shRNA慢病毒颗粒分别感染乳腺癌MCF-7细胞,筛选构建MCF-7 HIF-2α上调或下调的稳定细胞株;利用Real-time PCR和Western blot方法分别检测HIF-2α mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8方法检测细胞增殖活力;Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果 HIF-2α shRNA质粒转染MCF-7细胞后HIF-2α的表达水平均显著下降;HIF-2α ORF质粒转染MCF-7细胞后HIF-2α的表达水平显著升高。CCK-8检测结果显示：HIF-2α上调后MCF-7细胞增殖活力增强;Transwell小室实验结果显示：HIF-2α上调后MCF-7细胞侵袭能力增强;平板克隆形成实验结果显示：HIF-2α上调后MCF-7细胞克隆形成能力增强。而HIF-2α下调MCF-7细胞具有相反趋势。结论 HIF-2α过表达能够增强MCF-7细胞增殖活力、促进肿瘤细胞侵袭和克隆形成。