siRNA干扰LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭的影响及机制

目的 研究小干扰RNA(siRNA)抑制胃癌细胞中LOXL2的表达情况,并探讨LOXL2基因对人胃癌细胞株BGC823侵袭能力影响及机制.方法 QRTPCR及蛋白印迹(Western blot)技术检测人胃癌细胞株BGC823、正常胃上皮细胞株GES-1中LOXL2表达;合成针对LOXL2的siRNA,并转染胃癌细胞株BGC823;应用Transwell实验检测BGC823细胞侵袭能力;检测转染前后BGC823侵袭相关基因基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达变化.结果 LOXL2在BGC823细胞中的表达明显高于胃上皮细胞株(P<0?.01);与未转染和转染阴性对照质粒组相比转染组胃癌细胞BGC823中LOXL2 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),侵袭实验显示LOXL2-siRNA转染组胃癌细胞BGC823穿膜细胞数显著低于阴性对照质粒组和未转染组(P<0.05);转染后BGC823中MMP-2、MMP-9表达均较转染前降低(均P<0.05).结论 抑制胃癌细胞BGC823 LOXL2表达可降低细胞的侵袭能力.     

EGCG诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡及基因和蛋白谱的变化研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的变化规律,以及EGCG作用后SMMC-7721细胞基因及蛋白谱的变化。方法通过MTT法初步筛选EGCG诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用浓度,流式细胞Annexin V-FITC/PI法检测EGCG对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用和早期凋亡的诱导效应;运用Af-fymetrix U133A2.0人基因组表达谱芯片检测EGCG作用后SMMC-7721细胞基因表达谱的变化,以及SELDI检测EGCG作用后SMMC-7721细胞蛋白图谱的变化,Real-time PCR验证3个表达差异显著基因。结果EGCG诱导SMMC-7721细胞早期凋亡的最佳作用剂量是218.2μmol·L-1,早期凋亡的作用呈剂量依赖性;SMMC-7721细胞经EGCG作用后,表达差异两倍以上的基因共196个,包括上调基因132个和下调基因64个;EGCG作用后表达差异两倍以上的蛋白共43个,包括23个表达上调蛋白,20个表达下调蛋白。Real-time PCR验证DIO2、Id3基因表达与芯片结果一致。结论EGCG有明显的诱导肝癌SMMC-7721细胞早期凋亡的作用,其诱导凋亡作用涉及多基因和多蛋白变化。     

EGCG 对HepG2 肝癌细胞跨内皮迁移的影响及机制研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养的人肝癌细胞系HepG2细胞跨内皮迁移的影响及其机制。方法采用癌细胞与内皮细胞的单层粘附实验检测HepG2细胞与内皮细胞的粘附;利用Transwell小室法分析HepG2细胞的跨内皮迁移;运用real time PCR检测LOX-1mRNA水平,Western Blot分析LOX-1蛋白的表达。结果 EGCG(5,10,20μM)能够浓度依赖性地抑制TNF-α(50ng·mL-1)所诱导的HepG2细胞与内皮细胞的粘附、HepG2细胞的跨内皮迁移以及LOX-1mRNA和蛋白表达的上调。LOX-1中和抗体TS20(10ng·mL-1)也能抑制TNF-α对HepG2细胞的这些效应。结论 EGCG通过减少LOX-1的表达能明显抑制TNF-α诱导的肝癌细胞与内皮细胞的粘附及跨内皮迁移。LOX-1可能作为一种粘附分子,参与介导肝癌细胞与内皮细胞的相互作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠肾衰的治疗研究进展

茶叶富含多酚类化合物，大部分为黄烷醇，通称儿茶素，其混合体称茶多酚。主要为表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子酸酯、表没食子EGCG和表儿茶素等，以EGCG含量最高，占儿茶素80％。大量动物实验和临床实践已证明EGCG具有多种作用．对大鼠肾衰模型的疗效显著，主要治理机制在于：     

大蒜素对胃癌BGC823细胞株PPARγ基因的影响

目的观察大蒜素对胃癌BGC823细胞生长以及对PPARγmRNA表达的影响,探讨大蒜素抑制BGC823细胞增殖的可能作用机制。方法不同浓度的大蒜素处理胃癌BGC823细胞,MTT法观察细胞增殖抑制作用;RT-PCR法检测胃癌BGC823细胞中PPARγmRNA表达的变化。结果大蒜素抑制BGC823细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;大蒜素作用72h后明显抑制胃癌BGC823细胞PPARγmRNA表达,呈浓度依赖性。结论大蒜素可能通过下调PPARγmRNA表达抑制胃癌BGC823细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。     

绿茶成分心血管保护机制研究进展

绿茶的成分很多，但大多报道都集中在对儿茶素的研究。绿茶至少含有四种儿茶素：表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）和表儿茶素（EC）。EGCG作为绿茶的主要成分，且具有最强的抗氧化性，因此成为近年来疾病预防研究的重要对象。     

EGCG对TF/Ⅶa/PAR2促进SW620细胞增殖与迁移的干预作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对组织因子(TF)/凝血因子Ⅶa/蛋白酶激活受体(PAR)2促进结肠癌细胞株SW620细胞增殖与迁移的干预作用.方法 用不同浓度EGCG、蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、Ⅶa刺激SW620细胞,采用MTT法、transwell法分别检测细胞增殖及迁移能力,实时定量PCR检测细胞TF及半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)7 mRNA表达,发色底物法与Western blot分别检测TF活性、Caspase-7蛋白表达.结果 与PAR2-AP或Ⅶa单独处理相比,EGCG+PAR2-AP、EGCG+Ⅶa对SW620细胞增殖、迁移的促进作用明显降低,TFmRNA表达及活性下降,Caspase-7 mRNA及蛋白表达上调(P＜0.05).结论 EGCG可干预SW620细胞TF和Caspase-7的表达,抑制TF/Ⅶa/PAR2对细胞增殖与迁移的促进作用.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对Reh细胞增殖及RUNX3基因甲基化状态的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对白血病细胞系Reh细胞增殖抑制作用及对RUNX3基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨Reh细胞RUNX3基因的失活机制及EGCG对RUNX3基因表达的调控。方法:体外培养Reh细胞,用5、10、15和20μg/mL EGCG与Reh细胞孵育,采用MTT法检测EGCG对Reh细胞增殖活性的影响;采用流式细胞术检测EGCG对Reh细胞凋亡的影响;采用甲基化特异性PCR(MSP)检测RUNX3基因启动子区域的甲基化情况;采用RT-PCR、Western blot法分别检测RUNX3 mRNA、蛋白的表达。结果:EGCG对Reh细胞生长有明显的抑制作用,并有时间及剂量依赖性;EGCG可促进Reh细胞发生凋亡,随着EGCG浓度的增加,细胞凋亡率逐渐增加;MSP法结果显示EGCG处理后RUNX3基因启动子高甲基化的区域发生去甲基化,EGCG能够诱导Reh细胞RUNX3基因mRNA和蛋白的重新表达,具剂量依赖性。结论:EGCG可明显抑制Reh细胞的增殖,并诱导Reh细胞中异常甲基化的RUNX3基因去甲基化,使RUNX3基因恢复表达,这可能是其抗肿瘤的重要机制。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HT-29细胞MMP-9表达的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响.方法:应用RT-PCR法和Western blot法检测EGCG干预前后HT-29结肠癌细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白表达.结果:EGCG 25、50、100 mg/L作用于结肠癌细胞株HT-29 48 h后,与对照组比较,MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达量随着EGCG浓度的增加而下降,且各浓度组间差异也有统计学意义(P<0.05).结论:EGCG可显著抑制HT-29细胞中MMP-9 mRNA及MMP-9蛋白的表达,呈剂量依赖性,可能是其抗癌机制之一.     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过下调GTP结合蛋白RhoA的表达抑制癌细胞的浸润和转移

目的本研究测定了表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-Epigallocatechin-3-gallate ,EGCG)对人肺癌细胞-95-D体外浸润、转移和RhoA表达的影响及对鼠黑色素瘤细胞体内转移能力的影响.方法用"细胞迁移"和"培养小室模型"评价细胞的移动能力和浸润能力;用鼠黑色素瘤细胞肺部转移模型评价细胞体内的转移能力;用RT-PCR和Western blot方法测定RhoA的表达.结果EGCG有效抑制95-D细胞的迁移和浸润,40 μmol·L-1 EGCG对95-D细胞浸润能力的抑制为 79.9%,EGCG 50 mg·kg-1·d-1,给药3周,对黑色素瘤细胞肺部转移能力的抑制为 71.7%.RT-PCR和Western blot的实验结果表明EGCG能有效下调RhoA的表达.结论EGCG能够明显的抑制95-D细胞的浸润和转移,可能的作用机理涉及到它对RhoA表达的抑制.     

抑制ISL1的表达对胃癌干细胞特性影响的研究

目的研究针对胰岛素基因增强结合蛋白1（ISL1）的小干扰RNA（siRNA）对人胃癌干细胞特性的影响。方法体外合成ISL1的siRNA,转染人胃癌细胞系BGC823和BGC-S,逆转录酶链式反应（RT-PCR）和免疫印迹法检测ISL1基因和蛋白表达的变化,MTT比色法测定细胞存活率。结果构建的针对ISL1基因的siRNA能够显著抑制靶基因ISL1 mRNA和ISL1蛋白的表达。转染48h后BGC823和BGC-S细胞的存活率明显下降。结论 siRNA能明显抑制胃癌细胞BGC823和BGC-S的ISL1表达,从而对进一步研究胃癌干细胞奠定了基础。     

力达霉素诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和抑制裸鼠移植瘤生长

观察力达霉素(LDM)对人胃癌BGC823细胞的诱导凋亡作用及体内抗肿瘤活性。采用MTT法观察LDM对人胃癌BGC823细胞增殖的抑制作用。利用Annexin V-FITC/PI双染结合流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测细胞凋亡的改变。采用Western blotting法检测细胞中VEGF蛋白的表达情况。建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型，观察LDM的体内抗肿瘤活性。LDM能够明显抑制BGC823细胞增殖，诱导细胞凋亡，降低细胞VEGF蛋白的表达，抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长。LDM剂量0.02和0.04 mg·kg^-1的抑瘤率分别为57%和72%(P<0.01)。LDM可诱导胃癌细胞凋亡并抑制裸鼠移植肿瘤的生长。     

miR-4795-3p通过靶向EGFR抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨微小RNA（miRNA）-4795-3p通过靶基因表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）抑制胃癌细胞增殖和侵袭。方法:本研究于2020年6月至12月分别转染阴性对照模拟物（阴性对照组）和miR-4795-3p模拟物（miR-4795-3p组）至胃癌BGC...     

Allitridi induces apoptosis by affecting Bcl-2 expression and caspase-3 activity in human gastric cancer cells

INTRODUCTION Gastric cancer is the second leading cause of can-cer mortality in the world and is the leading cause ofcancer mortality in China[1]. Numerous epidemiologicalinvestigations have demonstrated that an inverse corre-lation between gastric cancer incidence and garlic con-sumption[2-8]. For example, Linqu County has gastriccancer rate that was 15 times higher than that of Cang-shan County in Shangdong Province[10], and the deathrate of gastric cancer in Linqu County was 7…     

蚯蚓纤溶酶的抗肿瘤作用

目的　观察蚯蚓纤溶酶 (EFE)对体外人癌细胞株及体内人癌裸鼠移植性肿瘤生长的影响 ,对该药进行临床前抗肿瘤药效学评价。方法　采用MTT法观察蚯蚓纤溶酶对体外人癌细胞的生长抑制作用 ;用人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤模型对蚯蚓纤溶酶进行体内抗肿瘤药效学观察。结果　蚯蚓纤溶酶在体外对人癌细胞的生长无抑制作用 ;灌胃给予蚯蚓纤溶酶 2 0 0～ 10 0 0mg·kg-1,可明显抑制人胃癌BGC82 3和人乳腺癌B37裸鼠移植性肿瘤的生长。结论　蚯蚓纤溶酶具有抗肿瘤作用。     

戊地昔布对人胃癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨选择性环氧化酶 2 (COX 2 )抑制剂戊地昔布对人胃癌BGC 82 3细胞的作用及其作用机制。方法　用MTT法检测戊地昔布对人胃癌BGC 82 3细胞生长的作用 ,用流氏细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布 ,用激光共聚焦显微镜、透射电镜和DNA片段进一步检测细胞凋亡 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试剂盒测定BGC 82 3细胞的LDH含量。结果　戊地昔布 (2 5～ 4 0 0 μmol·L-1 )可时间和浓度依赖性抑制人胃癌BGC 82 3细胞的生长 ,作用 72h后 ,对细胞生长抑制率可达 2 4 0 %～ 92 0 % ,凋亡率由 (2 6± 0 7) %增加到 (7 6±1 5 ) %～ (1 6 5± 1 5 ) %。 1 0 0～ 4 0 0 μmol·L-1 也降低增殖指数 ,减少细胞周期S期细胞 ,增加G0 /G1 期细胞。随浓度增加 ,戊地昔布引起的LDH释放率有增加趋势 ,但只有 4 0 0μmol·L-1 戊地昔布可显著增加LDH释放率。结论　戊地昔布可通过诱导凋亡和细胞周期停滞而抑制人胃癌BGC 82 3细胞生长 ,4 0 0 μmol·L-1 戊地昔布抑制BGC 82 3细胞生长作用与细胞坏死有关     

Matrine inhibits the adhesion and migration of BCG823 gastric cancer cells by affecting the structure and function of the vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP)

Aim:

Vasodilator-stimulated phosphoprotein (VASP) expression is upregulated in human cancers and correlates with more invasive advanced tumor stages. The aim of this study was to elucidate the mechanisms by which matrine, an alkaloid derived from Sophora species plants, acted on the VASP protein in human gastric cancer cells in vitro.

Methods:

VASP was expressed and purified. Intrinsic fluorescence spectroscopy was used to study the binding of matrine to VASP. CD spectroscopy was used to examine the changes in the VASP protein secondary structure. Human gastric carcinoma cell line BGC823 was tested. Scratch wound and cell adhesion assays were used to detect the cell migration and adhesion, respectively. Real-time PCR and Western blotting assays were used to measure mRNA and protein expression of VASP.

Results:

In the fluorescence assay, the dissociation constant for binding of matrine to VASP protein was 0.86 mmol/L, thus the direct binding between the two molecules was weak. However, matrine (50 μg/mL) caused obvious change in the secondary structure of VASP protein shown in CD spectrum. Treatments of BGC823 cells with matrine (50 μg/mL) significantly inhibited the cell migration and adhesion. The alkaloid changed the subcellular distribution of VASP and formation of actin stress fibers in BGC823 cells. The alkaloid caused small but statistically significant decreases in VASP protein expression and phosphorylation, but had no significant effect on VASP mRNA expression.

Conclusion:

Matrine modulates the structure, subcellular distribution, expression and phosphorylation of VASP in human gastric cancer cells, thus inhibiting the cancer cell adhesion and migration.     

靶向Ang-1的siRNA片段逆转人胃腺癌细胞株BGC-823侵袭表型的研究

【摘要】目的 利用RNA干扰技术沉默人胃腺癌细胞株BGC-823中血管生成因子1（Ang-1）的表达,观察其对肿瘤侵袭性的抑制效果。方法 设计靶向Ang-1的siRNA片段并转染人胃腺癌细胞株BGC-823;RT-PCR方法检测Ang-1的mRNA水平;Western Blot和细胞免疫荧光方法检测整合素β1、CD44V6和Ang-1的蛋白表达量和细胞定位;细胞黏附试验检测转染前后细胞黏附能力;Matrigel胶及Transwell双室培养体系检测癌细胞侵袭能力。结果 RTPCR结果显示所设计的siRNA片段可有效沉默Ang-1的mRNA表达;整合素β1、CD44V6和Ang-1蛋白主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞膜,其表达水平较转染siRNA片段前均有不同程度降低;细胞黏附能力和侵袭能力均明显降低（P<0.01）。结论 靶向Ang-1的siRNA技术可有效降低人胃腺癌细胞株BGC-823的侵袭能力,为胃癌基因治疗提供了新的思路。